Nghiên cứu lai tạo giống nấm linh chi chủng DT với giống nấm linh chi bản địa tại Gia Lai bằng hệ sợi

ĐẠI HỌC ĐÀ NẴNG TRƯỜNG ĐẠI HỌC BÁCH KHOA  THIỀU THẢO MINH NGHIÊN CỨU LAI TẠO GIỐNG NẤM LINH CHI CHỦNG DT VỚI GIỐNG NẤM LINH CHI BẢN ĐỊA TẠI GIA LAI BẰNG HỆ SỢI Chuyên ngành: Công nghệ sinh học Mã số: 60420201 TÓM TẮT LUẬN VĂN THẠC SĨ CÔNG NGHỆ SINH HỌC Đà Nẵng – Năm 2018 Cơng trình hồn thành TRƯỜNG ĐẠI HỌC BÁCH KHOA Người hướng dẫn khoa học: TS VŨ THỊ BÍCH HẬU Phản biện 1: Lê Lý Thùy Trâm Phản biện 2: Trần Thị Xô Luận văn bảo vệ trước Hội đồng chấm Luận văn tốt nghiệp thạc sĩ công nghệ sinh học họp Trường Đại học Bách khoa vào ngày 13 tháng 10 năm 2018 Có thể tìm hiểu luận văn tại:  Trung tâm Học liệu, Đại học Đà Nẵng Trường Đại học Bách khoa  Thư viện Khoa Hóa, Trường Đại học Bách khoa - ĐHĐN MỞ ĐẦU Tính cấp thiết đề tài Nấm linh chi thảo dược thiên nhiên xếp vào loại thượng dược Giá trị dược liệu nấm linh chi ghi chép thư tịch cổ Trung Quốc cách 4000 năm (Zgao, J.D., 1940) Từ kinh nghiệm lưu truyền dân gian, loài người biết sử dụng nấm linh chi theo nhiều cách khác Gia Lai có nhiều loại nấm mọc hoang dã tự nhiên tỉnh có khí hậu phù hợp để trồng loại công nghiệp Đây nguồn ngun liệu thích hợp làm chất ni trồng nấm nói chung nấm linh chi nói riêng nhằm đáp ứng nhu cầu sử dụng bảo tồn tính đa dạng nấm linh chi tự nhiên Trong năm gần đây, có nhiều nhiệm vụ khoa học công nghệ, nhiều nghiên cứu nhằm hỗ trợ phát triển nghề nấm địa phương sản lượng nấm thấp, chưa đáp ứng đủ nhu cầu thị trường, đặc biệt nấm linh chi Một phần nguyên nhân chưa xác định chủng loại giống thích hợp với điều kiện khí hậu địa phương Hơn nữa, số chủng loại nấm linh chi nuôi trồng phổ biến không nhiều, chủ yếu nhập nội tuyển chọn ngồi tự nhiên Vì việc “Nghiên cứu lai tạo giống nấm linh chi chủng DT với giống nấm linh chi địa Gia Lai hệ sợi” nhằm đa dạng hóa chủng loại nấm linh chi, lai tạo tuyển chọn chủng nấm có nguồn gốc địa, thích nghi tốt với môi trường, cho suất chất lượng cao Mục đích nghiên cứu Thu thập chủng nấm linh chi mọc hoang dã địa Gia Lai Phân lập dòng đơn bội nấm linh chi thu thập tỉnh Gia Lai Lai tạo chủng nấm linh chi địa với giống DT (cơng nhận giống năm 2005) có suất cao lồi để tạo chủng có suất, chất lượng phục vụ cho nuôi trồng nhân tạo địa phương Đối tượng phạm vi nghiên cứu Giống nấm linh chi ký hiệu DT, công nhận giống quốc gia năm 2005 Nhập từ Trung tâm Công nghệ Sinh học thực vật Hà Nội giống nấm linh chi mọc hoang dã thu thập tỉnh Gia Lai Các giống nấm linh chi mọc hoang dã tỉnh Gia Lai thu thập, định danh, phân lồi, ni trồng nhân tạo để khảo sát số đặc điểm suất thể tốc độ lan sợi nguyên liệu mùn cưa gỗ cao su Thu thập bào tử gây nảy mầm để phân lập hệ sợi đơn bội giống nấm nhằm nghiên cứu lai tạo Phương pháp nghiên cứu Phương pháp tách dòng đơn nhân: Phương pháp lai: Cấy hai dòng đơn nhân đĩa petri, sau thời gian quan sát nơi tiếp xúc hai dịng đơn nhân, hình thành gờ rõ tách riêng phần gờ vào ống nghiệm Kiểm tra dòng đơn bội cách quan sát hệ sợi nấm kính hiển vi Sợi nấm đơn bội khơng có mấu liên kết (clamp conection) Kiểm tra phép lai: Các tổ hợp lai kiểm tra diện mấu liên kết (clamp conection) hai dòng đơn nhân lai với hình thành sợi nấm song nhân (thứ cấp) hình thành mấu liên kết Nếu tổ hợp hình thành mấu liên kết chắn lai hai dòng đơn nhân Ý nghĩa khoa học thực tiễn đề tài 5.1 Ý nghĩa khoa học Nghiên cứu thu thập số chủng nấm linh chi mọc tự nhiên tỉnh Gia Lai Nuôi trồng nhân tạo để khảo sát số đặc điểm suất thể tốc độ lan sợi nguyên liệu mùn cưa gỗ cao su Xây dựng sưu tập dòng đơn bội nấm linh chi để từ lai với chủng nấm linh chi ký hiệu DT nhằm tạo chủng nấm linh chi lai có nguồn gốc địa, thích nghi tốt với môi trường, cho suất chất lượng cao giống nấm linh chi ký hiệu DT, công nhận giống quốc gia năm 2005 Góp phần làm phong phú chủng loại nấm ni trồng 5.2 Ý nghĩa thực tiễn Tạo chủng nấm linh chi có khả thích nghi tốt với mơi trường, có suất chất lượng cao nhằm giảm giá thành sản xuất, phục vụ cho nhu cầu cải thiện sức khoẻ người dân, từ góp phần thúc đẩy nghề trồng nấm địa phương phát triển Cấu trúc luận văn Luận văn gồm có chương mục sau: Mở đầu Chương 1: Tổng quan Chương 2: Đối tượng phương pháp nghiên cứu Chương 3: Kết thảo luận Chương 4: Kết luận kiến nghị Tài liệu tham khảo Phụ lục CHƯƠNG TỔNG QUAN 1.1 Đa dạng sinh học hệ thống học nấm linh chi Ganodermataceae Họ nấm Linh Chi Ganodermataceae Donk công nhận rộng rãi khoảng gần 200 loài, bao gồm chi: Ganoderma Karst., Amauroderma Murr., Tomophagus Murr., Humphreya Stey Haddowia Stey (Nhóm Tores-Tores et al., 2006 Mexico đề nghị tới chi) Khu hệ Linh Chi Việt Nam ghi nhận 50 loài thuộc Ganoderma, Amauroderma, Haddowia [3], [7] 1.1.1 Lịch sử tình trạng phân loại Ganodemataceae 1.1.2 Hình thái học lồi họ Ganodermataceae 1.1.2.1 Đặc điểm vĩ mô 1.1.2.2 Đặc điểm vi mô 1.1.3 Sinh thái học phân bố họ Ganodermataceae 1.2 Vịng đời lồi nấm thuộc Basidiomycota Hình 1.1 Vịng đời lồi nấm Basidiomycota [13] 1.3 Di truyền giới tính lồi nấm thuộc Basidiomycota Hình 1.2 Hình thái hệ sợ nấm dị nhân sợi nấm đồng nhân[14] 1.3.1 Đồng tản (Honothallism) 1.3.1.1 Đồng tản sơ cấp (Primary Homothallism) 1.3.1.2 Đồng tản thứ cấp (Secondary Homothallism) 1.3.2 Dị tản (Heterothallism) 1.3.2.1 Dị tản đơn nhân tố (Unifactorial Heterothallism) 1.3.2.2 Dị tản nhị nhân tố (Bifactorial Heterothallism) 1.4 Khái quát phương pháp cải tiến giống nấm Mặc dù, có nhiều phương pháp cải tiến giống sử dụng, phân chúng thành nhóm phương pháp chính, là: phương pháp tuyển chọn, phương pháp lai phương pháp chuyển gen 1.4.1 Phương pháp tuyển chọn Đầu tiên, giống nấm có đặc điểm mong muốn tuyển chọn từ tự nhiên từ môi trường nuôi trồng nhân tạo Các giống nấm bảo quản tiếp tục tuyển chọn q trình ni trồng để giống nấm ngày tốt Phương pháp cải tiến giống chủ yếu dựa đặc điểm hình thái thể hay suất nuôi trồng giống nấm Mặc dù, ứng dụng thời gian dài trước có hiểu biết di truyền giới tính giống nấm nuôi trồng, thành công phương pháp cải tiến lại hạn chế Nguyên nhân khả xuất thường biến mang ưu điểm vượt trội thường thấp Hơn nữa, thường biến hầu hết kết đột biến vài gen đơn lẻ Các gen phục hồi tiếp tục biến đổi có thay đổi nhỏ điều kiện nuôi trồng hay cấy chuyền liên tục sản xuất giống Kết chất lượng suất nuôi trồng giống nấm thường không ổn định [12] 1.4.2 Phương pháp lai Đây phương pháp cải tiến chủ yếu nghành nấm Hầu hết giống nấm cải tiến tạo phương pháp Phương pháp lai chia thành nhóm khác nhau, là: Lai truyền thống dung hợp tế bào trần 1.4.2.1 Phương pháp lai truyền thống Phương pháp dời vào năm 1980, dựa đặc tính bắt cặp hệ sợi nấm áp dụng cho hai nhóm nấm đồng tản dị tản Trong đó, xét nguồn gốc đối tượng lai, phương pháp lai chia làm hai kiểu, Tự lai (self - mating) lai chéo (cross - mating) Tự lai lai hai dòng giống bố mẹ, lai chéo lai hai dòng hai giống bố mẹ khác [12] 1.4.2.2 Phương pháp dung hợp tế bào trần Quy trình lai tạo giống nấm phương pháp dung hợp tế bào trần gồm bước sau: Phân lập tế bào trần đơn nhân, dung hợp tế bào trần, tái tạo sức sống cho tổ hợp lai dị nhân, tuyển chọn đánh giá khả hình thành thể dặc tính mong muốn tổ hợp lai thành cơng Với phương pháp này, tế bào tiếp xúc trao đổi vật chất di truyền với mà hồn tồn khơng bị giới hạn hàng rào di truyền tự nhiên, vấn đề thường hay gặp phương pháp lai truyền thống Kết tỉ lệ dung hợp thành công cao, tự dung hợp tế bào khác chủng loài, đến tế bào khác loài chi, chí tế bào khác chi với [12] 1.4.3 Phương pháp chuyển gen Các phương pháp chuyển gen sử dụng bao gồm chuyển gen trực tiếp chuyển gen gián tiếp Các DNA trần có khả tự nhân lên hay tự chèn vào nhiễm sắc thể tế bào chủ đưa vào sợi nấm phương pháp chuyển gen trực tiếp như: vi tiêm, bắn gen, dung hợp tế bào trần [12], [32] Phương pháp chuyển gen gián tiếp sử dụng vi khuẩn gram âm Agrobacterium tumefaciens chứa T-DNA để đưa gen ngoại lai vào hệ sợi nấm đồng nhân (homokaryon) sợi nấm dị nhân (heterokaryon) [23], [37] 1.5 Phân nhóm dịng đơn bội lồi dị tản tứ cực Để nâng cao hiệu trình lai việc lai tạo sử dụng phương pháp lai truyền thống, dòng đơn bội thường phải phân nhóm kiểu di truyền giới tính (phân nhóm kiểu bắt cặp) trước tiến hành công đoạn lai Các đơn bào tử giống bố mẹ thu nhận, phân tách lai ngẫu nhiên cặp với nhau, kết lai đánh giá dựa hình thành mấu nối hình thái mấu nối [33] Hình 1.4 Vai trị nhân tố bắt cặp hình thành mấu nối [26] 1.6 Các nghiên cứu liên quan đến loài thuộc chi Ganoderma Việt Nam 1.7 Các nghiên cứu liên quan đến lai giống nấm linh chi giới CHƯƠNG VẬT LIỆU VÀ PHƯƠNG PHÁP NGHIÊN CỨU 2.1 Sơ đồ thí nghiệm Thu thập thể nấm linh chi mọc tự nhiên Phân lập mô tạo giống Giải trình tự ITS BLAST trình tự ITS với liệu NCBI Nuôi trồng tạo thể Xây dựng phát sinh lồi Phân tích đặc điểm hình thái Thu nhận bào tử Phân loại giống nấm So sánh với mô tả định danh Gây nảy mầm, tạo dịng đơn bội Khảo sát đặc điểm ni trồng 2.2 Đối tượng nghiên cứu Các giống nấm linh chi mọc tự nhiên thu thập địa bàn tỉnh Gia Lai chủng nấm linh chi ký hiệu DT nhập từ Viện Di truyền Nông nghiệp Hà Nội 10 CHƯƠNG KẾT QUẢ VÀ BIỆN LUẬN 3.1 Thu thập phân loại giống nấm 3.1.1.Thu thập nấm linh chi địa Gia Lai Đã thu thập giống linh chi mọc tự nhiên địa bàn tỉnh Gia lai, bao gồm: 1- Quả thể nấm linh chi, mọc dẻ chết khu bảo tồn thiên nhiên Kon Chư Răng, huyện Kbang tỉnh Gia Lai, đặt tên hồng chi Kbang, ký hiệu G2 Hình 3.1 Nấm linh chi Kbang (G2) 2- Quả thể nấm linh chi mọc lim xẹt chết vườn quốc gia Kon Ka Kinh, thuộc huyện Mang Yang, đặt tên hồng chi Mang Yang, ký hiệu G3 Hình 3.2 Nấm linh chi Mang Yang (G3) 11 Ngoài giống nấm linh chi thu thập từ thiên nhiên, giống hồng chi DT Viện di truyền nông nghiệp Hà Nội, giống thu thập từ Hoành Bồ Quảng Ninh, chủng sử dụng làm giống cho nhiều sở nuôi trồng nấm Gia lai, ký hiệu G1 Hình 3.3 Nấm linh chi DT (G1) 3.1.2 Phân loại đặc điểm hình thái * Phân tích đặc điểm hình thái chủng nấm linh chi DT (G1) Hình 3.4 Đặc điểm hình thái chủng linh chi DT (G1) 12 * Phân tích đặc điểm hình thái chủng nấm linh chi Kbang (G2) Hình 3.5 Đặc điểm hình thái chủng linh chi Kbang (G2) * Phân tích đặc điểm hình thái chủng nấm linh chi Mang Yang (G3) 13 Hình 3.6 Đặc điểm hình thái chủng linh chi Mang Yang (G3) 3.1.3 Phân loại dựa trình tự vùng ITS Kết giải trình tự ITS chủng nấm linh chi DT: (588 bp) GTACTGGCCTTCCGAGGCATGTGCACGCCCTGCTCATC CACTCTACACCTGTGCACTTACTGTGGGCTTCAGATTGCGA GGCACGCTCTTTACCGGGCTTGCGGAGCATATCTGTGCCTG CGTTTATCACAAACTCTATAAAGTAACAGAATGTGTATTGC GATGTAACACATCTATATACAACTTTCAGCAACGGATCTCT TGGCTCTCGCATCGATGAAGAACGCAGCGAAATGCGATAA GTAATGTGAATTGCAGAATTCAGTGAATCATCGAATCTTTG 14 AACGCACCTTGCGCTCCTTGGTATTCCGAGGAGCATGCCTG TTTGAGTGTCATGAAATCTTCAACCTACAAGCTTTTGTGGT TTGTAGGCTTGGACTTGGAGGCTTGTCGGCCGTTATCGGTC GGCTCCTCTTAAATGCATTAGCTTGGTTCCTTGCGGATCGG CTCTCGGTGTGATAATGTCTACGCCGCGACCGTGAAGCGTT TGGCGAGCTTCTAACCGTCTTATAAGACAGCTTTATGACCT CTGACCTCAAATCAGGTAGGACTACCCGCTGAACTTAAGC ATATCAATAAGCGGAGGAA Hình 3.7 Kết BLAST trình tự vùng ITS chủng nấm DT với NCBI Kết so sánh cho thấy, chủng linh chi đỏ DT tương đồng 99% với chủng Ganoderma lingzhi Ganoderma lucidum với độ bao phủ 100% (kết BLAST ngày 26/9/2018) Kết giải trình tự ITS chủng nấm linh chi Kbang: (595 bp) CGGGTTGTAGCTGGCCTTCCGAGGCATGTGCACGCCCT GCTCATCCACTCTACACCTGTGCACTTACTGTGGGCTTCAG ATTGCGAGGCACGCTCTTTACCGGGCTTGCGGAGCATATCT GTGCCTGCGTTTATCACAAACTCTATAAAGTAACAGAATGT GTATTGCGATGTAACACATCTATATACAACTTTCAGCAACG GATCTCTTGGCTCTCGCATCGATGAAGAACGCAGCGAAAT 15 GCGATAAGTAATGTGAATTGCAGAATTCAGTGAATCATCG AATCTTTGAACGCACCTTGCGCTCCTTGGTATTCCGAGGAG CATGCCTGTTTGAGTGTCATGAAATCTTCAACCTACAAGCT TTTGTGGTTTGTAGGCTTGGACTTGGAGGCTTGTCGGCCGT TATCGGTCGGCTCCTCTTAAATGCATTAGCTTGGTTCCTTG CGGATCGGCTCTCGGTGTGATAACGTCTACGCCGCGACCG TGAAGCGTTTGGCGAGCTTCTAACCGTCTTATAAGACAGCT TTATGACCTCTGACCTCAAATCAGGTAGGACTACCCGCTGA ACTTAAGCATATCAATAAGCGGAGGAA Hình 3.8 Kết BLAST trình tự vùng ITS chủng nấm Kbang với NCBI Kết so sánh cho thấy, chủng linh chi đỏ Kbang tương đồng 99% với chủng Ganoderma lingzhi Ganoderma lucidum với độ bao phủ 100% (kết BLAST ngày 26/9/2018) Kết giải trình tự ITS chủng nấm linh chi Mang Yang: (648 bp) GGAAGTAAAAGTCGTAACAAGGTTTCCGTAGGTGAAC CTGCGGAAGGATCATTATCGAGTTTTGACCGGGTTGTAGCT GGCCTTCCGAGGCATGTGCACGCCCTGCTCATCCACTCTAC ACCTGTGCACTTACTGTGGGCTTCAGATTGCGAGGCACGCT CTTTACCGGGCTTGCGGAGCATATCTGTGCCTGCGTTTATC 16 ACAAACTCTATAAAGTAACAGAATGTGTATTGCGATGTAA CACATCTATATACAACTTTCAGCAACGGATCTCTTGGCTCT CGCATCGATGAAGAACGCAGCGAAATGCGATAAGTAATGT GAATTGCAGAATTCAGTGAATCATCGAATCTTTGAACGCA CCTTGCGCTCCTTGGTATTCCGAGGAGCATGCCTGTTTGAG TGTCATGAAATCTTCAACCTACAAGCTTTTGTGGTTTGTAG GCTTGGACTTGGAGGCTTGTCGGCCGTTATCGGTCGGCTCC TCTTAAATGCATTAGCTTGGTTCCTTGCGGATCGGCTCTCG GTGTGATAACGTCTACGCCGCGACCGTGAAGCGTTTGGCG AGCTTCTAACCGTCTTATAAGACAGCTTTATGACCTCTGAC CTCAAATCAGGTAGGACTACCCGCTGAACTTAAGCATATC A Hình 3.9 Kết BLAST trình tự vùng ITS chủng nấm Mang Yang với NCBI Kết so sánh cho thấy, chủng linh chi đỏ Mang Yang tương đồng 99% với chủng Ganoderma lingzhi Ganoderma lucidum với độ bao phủ 100% (kết BLAST ngày 26/9/2018) *Kết dựng phát sinh lồi từ trình tự ITS Kết dựng phát sinh lồi cung cấp nhìn tồn diện xác kết định danh, phản ánh phần quan hệ di truyền giống nấm thu thập 17 Hình 3.10 Cây phát sinh loài chủng Ganoderma phương pháp Maximum likelihood 18 3.2 Khảo sát đặc điểm nuôi trồng 3.2.1 Tốc độ dịng hóa chất 30.00 25.27 23.23 23.13 20.00 10.00 8.65 7.91 8.61 0.00 G1 G2 G3 Thời gian dịng hóa chất (ngày) Hình 3.11 Đồ thị biểu tốc độ dịng hóa chất giống nấm 3.2.2 Hiệu suất chuyển hóa sinh học Hiệu suất chuyển hóa sinh học giống nấm thể hình 3.12 150.00 106.53 50.00 96.03 94.27 100.00 16.93 15.26 14.98 0.00 G1 G2 G3 Lượng nấm tươi trung bình/bịch phơi (g/bịch) Hiệu suất chuyển hóa sinh học (%) Hình 3.12 Đồ thị biểu hiệu suất chuyển hóa sinh học 19 3.3 Phân lập dịng đơn bội Hình 3.13 Ni trồng giống nghiên cứu khu vực riêng để thu bào tử Sau thu thập bào tử nấm linh chi ngâm qua dung dịch H2O2 nồng độ 3% thời gian 10s phương pháp Emel Karadeniz *, Fatma Esen Sarigullu and Isil Untac (2013) có cải tiến cho phù hợp với điều kiện có [16] Rồi pha lỗng nước cất vơ trùng đến nồng độ 10-5; 10-6;10-7 Tiến hành cấy trải phân lập bào tử đơn bội mô tả phần thu kết sau: *Kết ảnh hưởng nồng độ pha loãng đến mật độ thích hợp cho nảy mầm phát triển bào tử nấm Linh chi: +Kết gây nảy mầm giống nấm linh chi G1: 20 100 81 65 53 45 50 15 34 10^-5 10^-6 10^-7 Nồng độ pha loãng bào tử để cấy trải giống G1 Nhiễm Không mọc Mọc khuẩn lạc Hình 3.14 Nồng độ pha lỗng nảy mầm bào tử Linh chi giống G1 Sau cấy trải nồng độ pha loãng Mỗi nồng độ pha loãng cấy trải 100 đĩa petri Thu dòng đơn bội giống nấm linh chi G1 100 50 86 62 41 35 59 0 10^-5 10^-6 10^-7 Nồng độ pha loãng bào tử để cấy trải giống G2 Nhiễm Không mọc Mọc khuẩn lạc Hình 3.15 Nồng độ pha lỗng nảy mầm bào tử Linh chi giống G2 Sau cấy trải nồng độ pha loãng Mỗi nồng độ pha loãng cấy trải 100 đĩa petri Thu dòng đơn bội giống nấm linh chi G2 21 80 76 61 47 49 60 33 40 20 13 11 10^-5 10^-6 10^-7 Nồng độ pha loãng bào tử để cấy trải giống G3 Nhiễm Không mọc Mọc khuẩn lạc Hình 3.16 Nồng độ pha lỗng nảy mầm bào tử nấm Linh chi giống G3 Sau cấy trải nồng độ pha loãng Mỗi nồng độ pha loãng cấy trải 100 đĩa petri Thu 21 dòng đơn bội giống nấm linh chi G3 Hình 3.17 Cấy trải để phân lập hệ sợi đơn nhân 22 Hình 3.18 Soi kính hiển vi tìm bào tử nảy mầm ống kính 4x Hình 3.19 Bào tử nảy mầm chụp kính hiển vi (ống kính 4x) 23 Hình 3.20 Các dịng đơn bội thu thập + Một số đặc điểm dòng đơn bội: - Tốc độ lan sợi môt trường thạch PDA chậm không đồng - Hệ sợi khơng có mấu nối (clamp conection), sợi nấm đơn nhân CHƯƠNG KẾT LUẬN VÀ KIẾN NGHỊ 4.1 Kết luận Đã tuyển chọn, nhân giống nuôi trồng giống linh chi G2 G3 mọc tự nhiên Lim xẹt (Peltophorum tonkinensis) chết Khu bảo tồn thiên nhiên Kon Chư Răng, huyện Kbang Dẻ (Quercus lanata) chết Vườn Quốc Gia Kon Ka Kinh, huyện Mang Yang, tỉnh Gia Lai Đã định danh giống linh chi địa G2, G3 thuộc loài Ganoderma lingzhi dựa vào phương pháp phân tích hình thái trực quang kính hiển vi quang học với phương pháp phân tích giải trình tự vùng ITS Đã khảo sát đặc điểm nuôi trồng môi trường chất mùn cưa gỗ cao su cho kết tốc độ dòng hóa chất giống 24 G1, G2, G3 với tốc độ lan tơ 8,6 mm/ngày, 7,9 mm/ngày 8,6 mm/ngày Năng suất sinh học giống G1, G2, G3 16,93 %, 14,98 % , 15,26 % Đã thu nhận bào tử từ giống nấm linh chi G1, G2, G3 để phân lập gây nảy mầm bào tử đơn bội Đã tách thành cơng dịng đơn bội giống linh chi nghiên cứu, thu 36 dòng đơn bội giống linh chi nghiên cứu hồng linh chi DT (G1), hồng chi Kbang(G2) hồng chi Mang Yang (G3) 4.2 Kiến nghị Thu thập thêm giống linh chi hoang dại địa phương để phân lập tạo thêm dịng đơn bội Phân tích thành phần dược tính đặc trưng nấm linh chi thu thập Gia Lai Phân nhóm di truyền giới tính dòng đơn bội để làm nguyên liệu lai tạo giống sau Các dòng đơn bội sưu tập từ giống nấm linh chi mọc tự nhiên thích nghi tốt với điều kiện mơi trường địa phương nên tổ hợp lai từ chúng có đặc tính phù hợp với điều kiện nuôi trồng ... Nghiên cứu lai tạo giống nấm linh chi DT với giống nấm linh chi địa 10 CHƯƠNG KẾT QUẢ VÀ BIỆN LUẬN 3.1 Thu thập phân loại giống nấm 3.1.1.Thu thập nấm linh chi địa Gia Lai Đã thu thập giống linh. .. chủng loại nấm linh chi nuôi trồng phổ biến không nhiều, chủ yếu nhập nội tuyển chọn ngồi tự nhiên Vì việc ? ?Nghiên cứu lai tạo giống nấm linh chi chủng DT với giống nấm linh chi địa Gia Lai hệ. .. linh chi mọc hoang dã địa Gia Lai Phân lập dòng đơn bội nấm linh chi thu thập tỉnh Gia Lai 2 Lai tạo chủng nấm linh chi địa với giống DT (cơng nhận giống năm 2005) có suất cao lồi để tạo chủng