MỤC LỤC
DANH MỤC CÁC HÌNH
DANH MỤC CÁC BẢNG
BẢNG CÁC KÝ HIỆU VÀ TỪVIẾT TẮT
BẢNG VIẾT TẮT CÁC AXIT AMIN
MỞ ĐẦU
Chương 1. TỔNG QUAN TÀI LIỆU
1.1 CÔNG NGHỆSINH HỌC PHÂN TỬTRONG BIỂU HIỆN THỤTHỂKẾT CẶP G-PROTEIN (GPCR)
1.1.1 Thụ thể kết cặp G-protein và vai trò trong nghiên cứu dược phẩm
1.1.2 Các hệ thống vector
1.1.3 Các hệ thống biểu hiện thụthểkết cặp G-protein
1.2 HỆTHỐNG VECTOR SFV (SEMLIKI FOREST VIRUT)
1.2.1 Virut Semliki Forest (SFV)
1.2.2 Hệvector SFV (Semliki Forest virut) cơ bản
1.2.3 Tiềm năng ứng dụng khác của hệvector SFV
1.2.4 Các yếu tốcần được cải tiến trong hệvector SFV
Chương 2. VẬT LIỆU VÀ PHƯƠNG PHÁP NGHIÊN CỨU
2.1. VẬT LIỆU NGHIÊN CỨU
2.1.1 Các chủng vi khuẩn
2.1.2 Hệvector SFV
2.1.3 Các cặp mồi PCR và các đoạn oligonucleotit dùng đểcải biến vector
2.1.4 Các nhóm hóa chất chính được sửdụng
2.1.5 Trang thiết bịnghiên cứu
2.2 PHƯƠNG PHÁP NGHIÊN CỨU
2.2.1 Chuẩn bịtếbào khảbiến và biến nạp
2.2.2 Phương pháp tách chiết plasmit
2.2.3 Duy trì, bảo quản mẫu sinh phẩm trong quá trình phân lập và nhân dòng
2.2.4 Thiết kếmồi
2.2.5 Khuếch đại ADN nhờphản ứng PCR (polymerase chain reaction)
2.2.6 Cắt giới hạn ADN và chống ADN tự đóng vòng
2.2.7 Tạo các đoạn ADN sợi đôi và các linker từ các đoạn oligonucleotit
2.2.8. Phản ứng nối các đoạn ADN
2.2.9 Sàng lọc khuẩn lạc
Chương 3. KẾT QUẢVÀ THẢO LUẬN
3.1 Chuẩn bị tế bào khả biến và biến nạp
3.2 Cải tiến vector pSFV
3.2.1. Khuếch đại đoạn gen mã vỏ capsit của SFV (đoạn chèn 1)
3.2.2 Thu đoạn chèn số2
3.2.3. Sàng lọc khuẩn lạc mang vector cải biến pSFV-M7, pSFV-M8
3.3 Tạo ADN tái tổ hợp chứa gen NK1 trong hệvector SFV cơbản
3.3.1. Nhân dòng đoạn cADN mã hóa cho thu thểNK1 có đầu bằng bằng phản ứng PCR dùng Pfu DNA polymerase
3.3.2 Mở vòng pSFV bằng SmaI
3.3.3. Nối cADN mã NK1 vào pSFV cơbản
3.4 Tạo ADN tái tổ hợp chứa gen NK1 trong hệvector SFV cải tiến (pSFV- M7, pSFV- M8)
3.4.1 Thu cADN mã hóa NK1 từ vector pJET1.2-NK1
3.4.3 Nối cADN mã NK1 vào pSFV cơbản
3.5 Sàng lọc chủng vi khuẩn mang gen mã hóa NK1
3.5.1 Colony PCR dùng mồi NK1 F/ R1 đểxác định khuẩn lạc tái tổhợp
3.5.2 Tối ưu phản ứng colony PCR để sàng lọc khuẩn lạc mang gen mã cho NK1 đúng chiều
KẾT LUẬN VÀ KIẾN NGHỊ
TÀI LIỆU THAM KHẢO
PHỤLỤC