Xây dựng quy trình phân tích đa hình gen Cyp2c9*3 liên quan đến đáp ứng điều trị thuốc chống đông Acenocoumarol ở người bệnh sau thay van tim

ĐẠI HỌC QUỐC GIA HÀ NỘI ac y an d Ph arm NGUYỄN THỊ NGA ,V NU KHOA Y DƯỢC of M ed ici ne XÂY DỰNG QUY TRÌNH PHÂN TÍCH ĐA HÌNH GEN CYP2C9*3 LIÊN QUAN ĐẾN ĐÁP ỨNG ĐIỀU TRỊ THUỐC CHỐNG ĐÔNG ACENOCOUMAROL Ở NGƯỜI BỆNH SAU THAY VAN TIM NGÀNH Y ĐA KHOA Co py rig ht @ Sc ho ol KHÓA LUẬN TỐT NGHIỆP ĐẠI HỌC Hà Nội - 2019 ĐẠI HỌC QUỐC GIA HÀ NỘI Ph arm ac y ,V NU KHOA Y DƯỢC an d NGUYỄN THỊ NGA ed ici ne XÂY DỰNG QUY TRÌNH PHÂN TÍCH ĐA HÌNH GEN of M CYP2C9*3 LIÊN QUAN ĐẾN ĐÁP ỨNG ĐIỀU TRỊ THUỐC CHỐNG ĐÔNG ACENOCOUMAROL Ở NGƯỜI BỆNH SAU THAY VAN TIM Khóa: QH.2013.Y Người hướng dẫn: ThS Phạm Thị Hồng Nhung Co py rig ht @ Sc ho ol KHÓA LUẬN TỐT NGHIỆP ĐẠI HỌC Hà Nội - 2019 LỜI CẢM ƠN ,V NU Khóa luận tốt nghiệp chuyên ngành Bác sĩ đa khoa không kết ac y cho cố gắng thân mà nhận giúp đỡ, động viên cô thầy, bạn bè người thân Qua trang viết xin gửi lời cảm ơn tới người giúp đỡ thời gian học tập – nghiên cứu vừa qua Lời đầu tiên, xin bày tỏ kính trọng lịng biết ơn tới ThS Phạm Thị Hồng Nhung – người tận tình bảo, đồng hành tơi suốt q trình Ph arm thực đề tài khóa luận Tơi xin gửi lời cảm ơn chân thành tới ThS Đỗ Thị Lệ Hằng trực tiếp hướng dẫn giúp đỡ trình làm việc phịng thí nghiệm Các khơng trang bị cho kiến thức khoa học, kỹ phịng thí nghiệm mà cịn truyền cho tơi niềm cảm hứng, lòng đam mê với nghiên cứu ed ici ne an d Tôi xin chân thành cảm ơn Lãnh đạo Khoa Y Dược Bộ môn Y Dược học sở hết lòng quan tâm, tạo điều kiện tốt cho thực nghiên cứu hồn thành khóa luận tốt nghiệp Tơi xin trân trọng cảm ơn Đại học Quốc gia Hà Nội hỗ trợ kinh phí cho đề tài mã số QG.17.29 PGS.TS Phạm Trung Kiên chủ trì nghiên cứu của tơi phần M Tơi xin cảm ơn tập thể nhân viên Bệnh viện Tim Hà Nội tạo điều kiện để thực đề tài cách thuận lợi Tôi xin gửi lời tri ân tới người of bệnh tham gia vào nhóm nghiên cứu đề tài Sc ho ol Xin gửi lời cảm ơn tốt đẹp tới nhóm sinh viên nghiên cứu thuộc mơn Y Dược học sở hỗ trợ kịp thời giúp đỡ tơi tơi gặp khó khăn q trình thực hành nghiên cứu @ Bên cạnh đó, xin cảm ơn Quỹ học bổng PDG Trust tin tưởng đồng hành thời gian làm khóa luận nghiên cứu bậc đại học Co py rig ht Cuối cùng, xin bày tỏ yêu thương đến gia đình, bạn bè, người ln điểm tựa để tơi n tâm hồn thành tốt khóa luận Hà Nội, ngày 11 tháng 05 năm 2019 Tác giả Nguyễn Thị Nga ,V NU DANH MỤC CHỮ VIẾT TẮT Body Mass Index (Chỉ số khối thể) Bp Base pair (Cặp bazơ nitơ) CYP Cytochrome P450 DNA Deoxyribo Nucleic Acid (Axit Deoxynucleic) dNTP Deoxynucleotit triphosphate EDTA Ethylene Diamine Tetra Acetic acid (Axit ethylene diamine tetra-acetic) INR International normalized ratio (Thời gian prothrombin đo với tỷ Ph arm an d lệ chuẩn hóa quốc tế) ac y BMI Optical density (Mật độ quang học) PCR Polymerase Chain Reaction (Phản ứng chuỗi polymerase) PCR-CTPP Polymerase Chain Reaction with confronting two-pair primers ( Phản ứng chuỗi polymerase với hai cặp mồi kép) RFLP Restriction Fragment Length Polymorphism (Đa hình độ dài đoạn cắt giới hạn) SNP Single nucleotit polymorphism (Đa hình đơn nucleotit) VKORC1 Vitamin K epoxide reductase complex, subunit (Phức hợp reductase vitamin K epoxide, tiểu đơn vị 1) Co py rig ht @ Sc ho ol of M ed ici ne OD ,V NU DANH MỤC CÁC BẢNG Trang Các thuốc kháng vitamin K sử dụng điều trị Bảng 3.1 Kết nồng độ độ tinh DNA tổng số 20 Bảng 3.2 22 Bảng 3.3 Thành phần điều kiện phản ứng khuếch đại đoạn gen CYP2C9*3 Kết tần số alen tần số kiểu gen CYP2C9*3 Bảng 4.1 Mối liên quan đa hình di truyền gen CYP2C9 *3 tới 27 Ph arm ac y Bảng 1.1 23 an d định liều Acenocoumarol nguy chảy máu số nhóm nghiên cứu Hà Lan Các biến thuật tốn tính liều acenocoumarol nhóm ed ici ne Bảng 4.2 27 nghiên cứu người Tây Ban Nha So sánh liều trung bình mg/tuần qua phân tích từ thuật tốn nhóm nghiên cứu khác Co py rig ht @ Sc ho ol of M Bảng 4.3 28 ,V NU DANH MỤC CÁC HÌNH Trang Hình 1.1 Các giai đoạn q trình đơng máu Hình 1.2 Cơ chế tác động chống đơng kháng Vitamin K gan Hình 1.3 Phương pháp giải trình tự tự động Hình 2.1 Sơ đồ nghiên cứu Hình 3.1 Kết điện di DNA tổng số 10 người bệnh nhóm nghiên cứu 20 Hình 3.2 Kết điện di gel agarose 1,5 % thí nghiệm PCR tối 21 Ph arm ac y 12 15 Hình 3.3 an d ưu nhiệt độ gắn mồi nhân dòng alen CYP2C9*3 Kết điện di gel agarose 1,5 % thí nghiệm PCR tối 21 Hình 4.1 Tần số alen C CYP2C9*3 số quần thể người Tần số alen C quần thể khác lấy từ tài liệu số Nguyên lý phương pháp PCR-CTPP 24 Co py rig ht @ Sc ho ol Hình 4.2 22 M Hình 3.5 Kết điện di sản phẩm PCR đoạn gen CYP2C9*3 gel agarose 1,5 % Kiểu gen CYP2C9*3 xác định thơng qua giải trình tự of Hình 3.4 ed ici ne ưu nồng độ mồi nồng độ DNA nhân dòng alen CYP2C9*3 23 25 ,V NU MỤC LỤC ĐẶT VẤN ĐỀ CHƯƠNG TỔNG QUAN TÀI LIỆU ac y 1.1.Khái qt q trình đơng máu bệnh lý van tim 1.1.1 Quá trình đơng máu Ph arm 1.1.2 Bệnh lý van tim 1.2.Thuốc chống đông kháng vitamin K 1.3.Dược động học dược di truyền Acenocoumarol 1.3.1 Dược động học Acenocoumarol an d 1.3.2 Dược di truyền Acenocoumarol ed ici ne 1.4.Tổng quan đa hình CYP2C9*3 1.4.1 Enzym CYP2C9 1.4.2 Đa hình di truyền đơn gen CYP2C9*3 10 1.4.3 Tổng quan phương pháp nghiên cứu 10 M CHƯƠNG ĐỐI TƯỢNG VÀ PHƯƠNG PHÁP NGHIÊN CỨU 14 of 2.1 Đối tượng nghiên cứu 14 2.1.1 Tiêu chuẩn lựa chọn người bệnh 14 ol 2.1.2 Các tiêu chuẩn loại trừ 14 2.1.3 Thời gian địa điểm nghiên cứu 14 Sc ho 2.2 Nguyên liệu phương tiện nghiên cứu 14 2.2.1 Hóa chất 14 2.2.2 Thiết bị 14 Co py rig ht @ 2.3 Phương pháp nghiên cứu 15 2.3.1 Thu thập bảo quản mẫu sinh phẩm 15 2.3.2 Tách chiết DNA tổng số E.Z.N.A blood DNA Mini Kit 16 2.3.3 Khuếch đại đoạn gen đích chứa CYP2C9*3 17 2.3.4 Kiểm tra chất lượng DNA 17 2.3.5 Giải trình tự DNA 18 2.3.6 Phân tích kết xử lý số liệu 18 2.4 Đạo đức nghiên cứu CHƯƠNG KẾT QUẢ NGHIÊN CỨU 20 ,V NU 3.1 Tách chiết DNA tổng số kiểm tra chất lượng DNA 20 3.2 Khuếch đại đoạn gen chứa CYP2C9*3 20 3.2.1 Tối ưu nhiệt độ gắn mồi với enzym Phusion Polymerase 21 ac y 3.2.2 Tối ưu nồng độ mồi nồng độ DNA 21 3.3 Giải trình tự vùng gen chứa CYP2C9*3 23 Ph arm CHƯƠNG BÀN LUẬN 24 4.1 So sánh tần số CYP2C9*3 quần thể khác 24 4.2 Các phương pháp phân tích CYP2C9*3 sử dụng 25 KẾT LUẬN VÀ KIẾN NGHỊ ed ici ne TÀI LIỆU THAM KHẢO py rig ht @ Sc ho ol of M PHỤ LỤC Co an d 4.3 Ứng dụng tính liều điều trị acenocoumarol 26 ĐẶT VẤN ĐỀ ,V NU Bệnh lý van tim bệnh phổ biến giới Việt Nam, nguyên nhân hàng đầu gây suy tim đe dọa tính mạng người bệnh Nguyên nhân chủ yếu gây bệnh van tim di chứng tổn thương van tim bệnh thấp tim [10] Từ có kỹ thuật sửa thay van tim, sống ac y người bệnh mắc bệnh van tim cải thiện đáng kể, mang lại cho họ sống gần bình thường Tuy nhiên, trình hoạt động van tim nhân tạo Ph arm thường sinh cục máu đông dễ gây tắc mạch, huyết khối Do vậy, sau thay van tim người bệnh phải sử dụng thuốc chống đông Tại Việt Nam, thuốc chống đông kháng vitamin K đưa vào sử dụng 25 năm với biệt dược Sintrom (Acenoucomarol) có hiệu phòng điều trị huyết ed ici ne an d khối chứng minh Tuy nhiên q trình sử dụng thuốc chống đơng kháng vitamin K tỷ lệ gặp biến chứng cao, khoảng điều trị hẹp, tác dụng thuốc chịu ảnh hưởng nhiều nhiều yếu tố (chế độ ăn, thuốc khác aspirin, kháng sinh cephalosporin…) nên việc xác định liều lượng điều trị phù hợp gặp nhiều khó khăn Nếu liều dùng thuốc sử dụng thấp khơng đạt hiệu điều trị liều gây biến chứng chảy máu chí gây tử vong M Hiện thầy thuốc lâm sàng điều chỉnh liều thuốc chống đông kháng vitamin K chủ yếu dựa vào xét nghiệm INR (Thời gian Prothrombin đo với tỉ lệ chuẩn hóa quốc tế- International Normalized Ratio) người bệnh INR yêu cầu of phải theo dõi hàng ngày để điều chỉnh liều, điều gây khó khăn việc địi hỏi Sc ho ol phải theo dõi INR hàng ngày để điều chỉnh liều, gây nên khó khăn thời gian kinh tế cho người bệnh tiến hành xét nghiệm Qua q trình theo dõi điều trị, có khác kết điều trị người bệnh nhóm tuân thủ điều trị Vậy điều ảnh hưởng tới kết INR người bệnh @ độ tuổi, giới tính, phác đồ câu hỏi chưa có lời giải thích đầy đủ rig ht Kiểu gen thu từ dự án giải trình tự gen người năm 2000 mở kỷ nguyên cho ngành khoa học sức khỏe Y học cá nhân hóa dựa vào kiểu gen trở thành phương pháp điều trị thực hành lâm sàng Hơn 30 Co py gen tìm thấy tham gia vào hoạt động trao đổi chất thuốc chống đông máu họ Coumarin dạng uống, nhiều nghiên cứu chứng minh đa hình di truyền CYP2C9*3 (c.1075 A > C) yếu tố di truyền quan trọng ảnh hưởng đến đáp ứng thuốc chống đông kháng vitamin K Một số nghiên cứu cho thấy người bệnh mang kiểu gen đồng hợp đột biến CC, dị hợp AC cần ,V NU giảm liều chống đông so với người bệnh đồng hợp kiểu dại AA [25, 42] Do đó, việc xác định kiểu gen đóng vai trị quan trọng tiên lượng đáp ứng thuốc điều trị người bệnh Trong bối cảnh Việt Nam nay, chưa có nghiên cứu mặt di ac y truyền học liên quan tới việc định liều acenocoumarol sử dụng cho người bệnh Chính vậy, tơi tiến hành nghiên cứu: “Xây dựng quy trình phân tích đa hình di truyền gen CYP2C9*3 liên quan đến đáp ứng điều trị thuốc chống đông Ph arm Acenocoumarol người bệnh sau thay van tim” với mục tiêu nội dung nghiên cứu sau: Mục tiêu nghiên cứu Xây dựng quy trình tối ưu để xác định đa hình di truyền CYP2C9*3 - an d mẫu máu người bệnh sau thay van tim Nội dung nghiên cứu ed ici ne Áp dụng quy trình tối ưu để đánh giá mức độ đa hình di truyền CYP2C9*3 100 người bệnh sau thay van tim Việt Nam - - Tối ưu hóa phản ứng PCR nhân dịng đoạn gen chứa đa hình CYP2C9*3 M - Giải trình tự xác định kiểu gen đa hình CYP2C9*3 Áp dụng quy trình phân tích gen để khảo sát tần số kiểu gen tần số alen 100 người bệnh sau thay van tim Việt Nam Co py rig ht @ Sc ho ol of - ,V NU Bảng 4.3 Điều giải thích số lượng biến họ nhiều hơn, mức độ ảnh hưởng yếu tố xem xét kỹ lưỡng, phân loại cẩn thận Khi tiến hành so sánh thuật toán đưa trên, tơi nhận thấy có nhiều yếu tố khác chiều cao, cân nặng, kiểu gen… ảnh hưởng tới liều điều ac y trị acenocoumarol Kết dự báo thuật tốn dược động học cho thấy có khả dự đoán liều nhanh tốt dựa vào đặc điểm lâm sàng hay số cận lâm sàng người bệnh Nghiên cứu thuật tốn dược động học dự đốn Ph arm liều sở y học cá thể hóa, đem lại chất lượng điều trị tốt cho người bệnh Tuy nhiên, nhận thấy mức độ ảnh hưởng biến đến liều điều trị acenocoumarol có khác nhóm Chính vậy, tơi mạnh dạn đề xuất tiến hành nghiên cứu xác lập thuật toán phù hợp cho người bệnh Co py rig ht @ Sc ho ol of M ed ici ne an d Việt Nam, tiến tới định liều thuốc cho người bệnh tương lai 29 KẾT LUẬN VÀ KIẾN NGHỊ ,V NU KẾT LUẬN Dựa vào kết đạt được, đưa số kết luận sau: - Quy trình phân tích kiểu gen CYP2C9*3 sử dụng mẫu máu toàn phần - ac y xây dựng thành công Áp dụng thành công quy trình phân tích gen CYP2C9*3 100 người bệnh sử Ph arm dụng chống đông acenocoumarol sau thay van tim Bệnh viện Tim Hà Nội Số lượng kiểu gen AA, AC 96% 4% Tần số đột biến C 0,02 KIẾN NGHỊ Hướng tới y học cá thể hóa điều trị, cung cấp cho người bệnh chất lượng an d điều trị cao hơn, hạn chế biến chứng xảy ra, tơi có số kiến nghị sau: Mở rộng nghiên cứu xác định kiểu gen CYP2C9*3 với cỡ mẫu lớn tiến hành nghiên cứu xác định mức độ ảnh hưởng kiểu gen tới chuyển hóa acenocoumarol - Tiến hành phân tích thêm tác động yếu tố khác chiều cao, cân nặng, độ tuổi, gen mới… nhằm xây dựng thuật toán giúp định lượng liều acenocoumarol cho người bệnh Việt Nam Co py rig ht @ Sc ho ol of M ed ici ne - 30 TÀI LIỆU THAM KHẢO ,V NU TIẾNG VIỆT Đinh Đoàn Long, Đỗ Lê Thăng (2009), "Phân tích gen sản phẩm gen", Cơ sở di truyền học phân tử tế bào, NXB Đại học Quốc gia Hà Nội Hội Tim mạch (2008), Khuyến cáo 2008 Hội tim mạch Việt Nam chẩn đoán điều trị bệnh van tim Lê Thị Nhiên (2016), “ Nghiên cứu tính đa hình di truyền CYP2C19 người Ph arm ac y bệnh đặt Stent động mạch vành qua da”, Luận văn Thạc sĩ Dược học Đại học Dược Hà Nội Nguyễn Lân Việt (2003), Thực hành bệnh tim mạch, Nhà xuất Y học Phạm Hùng Vân (2009), "Real-time PCR Các vấn đề bản", PCR an d realtime PCR Các vấn đề áp dụng thường gặp, NXB Y học, ed ici ne 34-69 Phạm Thị Minh Đức (2011), “ Sinh lý máu”, Sinh lý học, NXB Y học Tạ Thành Văn (2010), "Realtime PCR PCR định lượng", PCR số kỹ thuật y sinh học phân tử, NXB Y học, 33-66 Võ Thị Thương Lan (2007), "Phản ứng PCR", Một số vấn đề sinh học phân tử, NXB Đại học Quốc gia Hà Nội, 86-88 of M ol TIẾNG ANH Abhijit Trailokya, JS Hiremath, JPS Sawhney cộng (2016), “Acenocoumarol; A Review of Anticoagulant Efficacy and Safety”, Journal of The Association of Physiccian of India, 64 10 Alec Vahanican, Ottavio Alfrieri, Felicita Andreotti cộng (2012), “Guideline onthe management of valvular heart disease”, European Heart Journal, 33, tr 2451-2496 ht @ Sc ho Ansell J, Hirsh J, Hylek E cộng (2008), “ Pharmacology and Co py rig 11 management of the vitamin K antagonists: American College of Chest Physicians Evidence-Based Clinical Practice Guidelines (8th Edition)”, Chest 133, tr 160S– 98S Arant TW Sullivan PW, Ellis SL, Ulrich H (2006), “The cost effectiveness of anticoagulation management services for patients with atrial fibrillation and ,V NU 12 at high risk of stroke in the US”, Pharmacoeconomics 24, tr 1021– 1033 13 Borobia, A M., Lubomirov, R., Ramírez, E., Lorenzo, A., Campos, A., thromboembolic disease” PloS one, 7(7), e41360 Bourguignon T., Bergöend E., Mirza A cộng (2011), “Risk factors Ph arm 14 ac y Muñoz-Romo, R., & Carcas, A J (2012) “An acenocoumarol dosing algorithm using clinical and pharmacogenetic data in Spanish patients with for valve-related complications after mechanical heart valve replacement in 505 patients with long-term follow up”, J Heart Valve Dis, 20(6), tr 673-80 15 Budnitz DS, Pollock DA, Weidenbach KN cộng (2006), “National C Nashimura A., atherin M Otto, Paul Soraja cộng (2014), “Guideline for the Management of Patients With Valvular Heart Disease”, ed ici ne 16 an d surveillance of emergency department visits for outpatient adverse drug events” JAMA, 2006( 296), tr 1858–66 Journal of the Ameriacan College of Cardilogy, 63(22) Camm AJ cộng (2012), “An update of the 2010 ESC Guidelines for the management of atrial fibrillation”, Euro Heart 33, tr 2719–47 18 Cannegieter SC, Rosendaal FR Briet E (1994), “ Thromboembolic and of M 17 bleeding complications in patients with mechanical heart valve prostheses”, ho Connock M, Stevens C, Fry-Smith A cộng (2007), “Clinical effectiveness and cost-effectiveness of different models of managing long- Sc 19 ol Circulation 89, tr 635–41 Chen Jiyang, Cai Yun, Chen Shuyun, & Li Pengyu (2011) “Study on the relationship between CYP2C9 gene polymorphism and warfarin application dose” rig ht 20 @ term oral anticoagulation therapy: a systematic review and economic modelling” Health Technol Assess 11 Co py 21 Drittij MJ Thijssen HH, Vervoort LM, de Vries-Hanje JC (2001), “Altered pharmacokinetics of R- and S-acenocoumarol in a subject heterozygous for CYP2C9*3”, Clin Pharmacol Ther, 70, tr 292–8 ElBardissi AW, Wiegmann DA, Dearani JA cộng (2007), “Application of the human factors analysis and classification system ,V NU 22 methodology to the cardiovascular surgery operating room”, Ann Thorac Surg, 83(4), tr 1412-8; discussion 1418-9 Halfon P, Bourlière M, Pénaranda G, cộng (2006), "Real-Time PCR Assays for Hepatitis C Virus (HCV) RNA Quantitation Are Adequate for ac y 23 Clinical Microbiology 44(7), 2507-2511 24 Ph arm Clinical Management of Patients with Chronic HCV Infection", Journal of Hart RG, Pearce LA Aguilar MI (2007), “Meta-analysis: antithrombotic therapy to prevent stroke in patients who have nonvalvular atrial fibrillation”, Ann Intern Med, 146, tr 857–67 Hermida, J., Zarza, J., Alberca, I., Montes, R., López, M L., Molina, E., & Rocha, E (2002) “Differential effects of 2C9* and 2C9* variants of cytochrome P-450 CYP2C9 on sensitivity to acenocoumarol” Blood, 99(11), 4237-4239 26 Ishtyak Ahmed Mir (2015), “Role of Acenocoumarol In Prothestic Heart Valves”, Journal Of Intenational Medicine and Dentistry, 2(3), tr 180-185 27 JS Hiremath Abhijit Trailokya, JPS Sawhney cộng (2016), “Acenocoumarol: A Review of Anticoagulant Efficacy and Safety”, Journal M ed ici ne an d 25 of of The Association of Physiccian of India, 64 Kalpana S.R., Bharath G., Manjunath C.N., cộng (2016) “Influence of VKORC1 and CYP2C9 Polymorphisms on Daily Acenocoumarol Dose Requirement in South Indian Patients With Mechanical Heart Valves” Clin Appl Thromb, 1-7 29 Leendertse AJ, Egberts AC, Stoker LJ cộng (2008), “ Frequency of and risk factors for preventable medication-related hospital admissions in the Netherlands”, Arch Intern Med 168, tr 1890–6 ht @ Sc ho ol 28 Makeeva, O., Stepanov, V., Puzyrev, V., Goldstein, D B., & Grossman, I Co py rig 30 (2008) “Global pharmacogenetics: genetic substructure of Eurasian populations and its effect on variants of drug-metabolizing enzyms”, Pharmacogenomics, Mok CK, Boey J, Wang R cộng (1985), “Warfarin versus dipyridamoleaspirin and pentoxifylline-aspirin for the prevention of ,V NU 31 prosthetic heart valve thromboembolism: a prospective randomized clinical trial”, Circulation 72, tr 1059–63 Oleastro M, Ménard A, Santos A, cộng (2003), "Real-Time PCR Assay for Rapid and Accurate Detection of Point Mutations Conferring ac y 32 Resistance to Clarithromycin in Helicobacter pylori", Journal of Clinical 33 Ph arm Microbiology 41(1), 397-402 Ozgon, G O., Langaee, T Y., Feng, H., Buyru, N., Ulutin, T., Hatemi, A C., & Johnson, J A (2008) “VKORC1 and CYP2C9 polymorphisms are associated with warfarin dose requirements in Turkish patients” European an d journal of clinical pharmacology, 64(9), 889-894 Phabphal, K., Geater, A., Limapichart, K., Sathirapanya, P., & Setthawatcharawanich, S (2013) “Role of CYP2C9 polymorphism in phenytoin-related metabolic abnormalities and subclinical atherosclerosis in young adult epileptic patients” Seizure, 22(2), 103-108 35 Rathore, S S., Agarwal, S K., Pande, S., Singh, S K., Mittal, T., & Mittal, B (2012) “Therapeutic dosing of acenocoumarol: proposal of a population specific pharmacogenetic dosing algorithm and its validation in north Indians” PLoS One, 7(5), e37844 36 S.R Kalpana, R Christopher, G Bharath cộng (2015), “Association of VKORC1 gene polymorphism (1639G>A and 1173C>T) and acenocoumarol maintenance dosage in patients with mechanical heart valve”, Indian Heart Journal, 67(1), tr S9-S1 37 Sangviroon, A., Panomvana, D., Tassaneeyakul, W., & Namchaisiri, J (2010) “Pharmacokinetic and pharmacodynamic variation associated with VKORC1 and CYP2C9 polymorphisms in Thai patients taking warfarin” Drug metabolism and pharmacokinetics, 25(6), 531-538 rig ht @ Sc ho ol of M ed ici ne 34 py 38 Co 39 Schalekamp T De Boer A (2010), “Pharmacogenetics of oral anticoagulant therapy”, Curr Pharm Des 16, tr 187–203 Schalekamp T, van Geest-Daalderop JH, de Vries-Goldschmeding cộng (2004), “Acenocoumarol stabilization is delayed in CYP2C9 carriers”, Clin Pharmacol Ther 75, tr 394–402 Sun JC, Davidson MJ, Lamy A cộng (2009), “Antithrombotic management of patients with prosthetic heart valves: current evidence and ,V NU 40 future trends”, Lancet, 374: , tr 565–76 41 Tamura, T., Katsuda, N., & Hamajima, N (2014) “A PCR method for 42 ac y VKORC1 G-1639A and CYP2C9 A1075C genotyping useful to warfarin therapy among Japanese” SpringerPlus, 3(1), 499 Tatarūnas, V., Lesauskaitė, V., Veikutienė, A., Jakuška, P., & Benetis, R Ph arm (2011) “The influence of CYP2C9 and VKORC1 gene polymorphisms on optimal warfarin doses after heart valve replacement” Medicina, 47(1), 43 Van Schie RM, Wessels JA, Le Cessie S cộng (2011), “Loading and maintenance dose algorithms for phenprocoumon and acenocoumarol Verhoef TI, Redekop WK, Buikema MM cộng (2012), “Longterm anticoagulant effects of the CYP2C9 and VKORC1 genotypes in ed ici ne 44 an d using patient characteristics and pharmacogenetic data” Euro Heart J 32, tr 1909–17 acenocoumarol users”, J Thromb Haemost 10, tr 606–14 Vignal A, Milan D, SanCristobal M, cộng (2002), "A review on SNP and other types of molecular markers and their use in animal genetics", Genetics, selection, evolution: GSE 34(3), 275-305 46 Visser L E., van Schaik R H et al (2004), "The risk of bleeding of M 45 Visser L E., van Vliet M., van Schaik R H et al (2004) "Allelic variants of Sc 47 ho ol complications in patients with cytochrome P450 CYP2C9*2 or CYP2C9*3 alleles on acenocoumarol or phenprocoumon", Thromb Haemost, 92(1) @ cytochrome P450 2C9 modify the interaction between nonsteroidal antiinflammatory drugs and coumarin anticoagulants", Clin Pharmacol Ther, 77(6), pp 479-85 Wen, M S., Lee, M T M., Chen, J J., Chuang, H P., Lu, L S., Chen, C H., & Kuan, P L (2008) “Prospective study of warfarin dosage requirements Co py rig ht 48 based on CYP2C9 and VKORC1 genotypes” Clinical Pharmacology & Therapeutics, 84(1), 83-89 WEBSITE Website http://asia.ensembl.org/Homo_sapiens/Variation/Population truy cập ,V NU 49 ngày 27/04/2019 50 Website http://www.cnki.com.cn/Article/CJFDTotal-WJYX201105010.htm Co py rig ht @ Sc ho ol of M ed ici ne an d Ph arm ac y truy cập ngày 09/05/2019 PHỤ LỤC Mã số nghiên cứu Mã bệnh án PT163 Nữ Trương Việt Q Đt 02 PT1039 63 Nam Đỗ Thị M Đt 03 PT610 55 Nữ Đỗ Thị M Đt 04 PT1688 60 Nữ Nguyễn Thị L Đt 05 PT 668 59 Nữ Đinh Thị V Đt 06 PT641 58 Nữ Đỗ Thị H Đt 07 PT499 52 Nữ Nguyễn Văn T Đt 08 PT1222 62 Nam Nguyễn Thị T Đt 09 PT126 46 Nữ 10 Nguyễn Văn D Đt 10 PT1480 54 Nam 11 Nguyễn Thị Tường V Đt 11 PT1275 47 Nữ 12 Phan Thị C Đt 12 PT941 56 Nữ 13 Đặng Thị T Đt 16 PT95/15 57 Nam 14 Nguyễn Thị T Đt 17 PT33/15 52 Nữ Nguyễn Văn L Đt 18 PT460 53 Nam M of ol ho @ ht Nguyễn Thị H Đt 19 PT401/15 46 Nữ 17 Nguyễn Văn T Đt 21 PT1298 55 Nam 18 Vũ Thị H Đt 22 PT1390 54 Nữ Co 16 py rig Ph arm 15 52 an d Đt 01 ed ici ne Dương Thị L Giới tính Sc Tuổi theo năm ac y Họ tên STT ,V NU Phụ lục 1: Danh sách người bệnh tham gia nghiên cứu bệnh viện Tim Hà Nội Nguyễn Thị H Đt 23 PT518 32 Nữ 20 Nguyễn Thạc Q Đt 24 PT747/15 51 Nam 21 Nguyễn Thị H Đt 25 PT137 62 Nữ 22 Nguyễn Thị D Đt 26 PT1090 65 Nữ 23 Trịnh Thị H Đt 27 PT1011 24 Nguyễn Văn D Đt 28 25 Nguyễn Công L Đt 31 26 Nguyễn Thị N Đt 32 27 Hoàng Thị M Đt 33 28 Đặng Văn H Đt 34 29 Hà Văn M 30 Trần Thị H 31 Nguyễn Văn N 32 Nguyễn Thị L 33 Vũ Thị D 34 Vũ Thị T 35 36 ac y Nữ PT343 41 Nam PT1405 35 Nam PT295/16 54 Nữ PT1912 49 Nữ PT969 53 Nam Đt 35 PT1198/16 37 Nam Đt 36 PT17 39 Nữ Đt 38 PT419 50 Nam Đt 39 PT 748 62 Nữ Đt 40 PT635 49 Nữ Đt 42 PT1923 42 Nữ Phạm Thị T Đt 44 PT1127 60 Nữ Ngô Thị L Đt 46 PT1683 56 Nữ Vương Thị V Đt 48 ST100 60 Nữ 38 Nguyễn Thị N Đt 49 PT1485 60 Nữ 39 Đặng Văn L Đt 51 PT167 39 Nam 40 Nguyễn Ngọc C Đt 52 PT786 53 Nam an d ed ici ne M of ol ho Sc @ ht rig py Ph arm 52 37 Co ,V NU 19 Đỗ Thị V Đt 53 PT915 33 Nữ 42 Phạm Văn T Đt 58 ST953 31 Nam 43 Nguyễn Huy L Đt 64 PT1173 38 Nam 44 Nguyễn Thị B Đt 65 PT699 62 Nữ 45 Đỗ Minh Đ Đt 67 PT960 46 Lê Văn S Đt 68 47 Trịnh Thị K Đt 69 48 Phạm Khắc X Đt 71 49 Đặng Thanh B Đt 72 50 Nguyễn Văn H Đt 73 51 Nguyễn Gia Q 52 Đỗ Thị V 53 Đặng Thị V 54 Phùng Thị T 55 Nguyễn Văn H 56 ac y Nam PT1048 52 Nam PT882 60 Nữ PT368 62 Nam PT676 37 Nam NT1501 59 Nam Đt 74 PT8152/15 65 Nữ Đt 75 PT573 42 Nữ Đt 78 PT1244/16 53 Nữ Đt 79 PT144 43 Nữ Đt 80 PT1228 64 Nam Hoàng Thị C Đt 82 ST1610 52 Nữ 57 Dương Văn B Đt 84 PT203 61 Nam 58 Nguyễn Thị V Đt 85 PT860/16 62 Nữ Đỗ Trọng T Đt 86 PT1060 59 Nam 60 Trịnh Thị H Đt 87 PT311 54 Nữ 61 Phùng Thế H Đt 88 PT1098/16 59 Nam 62 Nguyễn Thị C Đt 89 PT127 54 Nữ an d ed ici ne M of ol ho Sc @ ht rig py Ph arm 58 59 Co ,V NU 41 Nguyễn Văn D Đt 90 PT1162/17 42 Nam 64 Phạm Văn T Đt 92 PT257 36 Nam 65 Nguyễn Thị H Đt 93 PT684 38 Nữ 66 Đinh Thị V Đt 94 PT880 47 Nữ 67 Bùi Đức C Đt 95 PT928 68 Nguyễn Thị K Đt 96 69 Nguyễn Thị H Đt 97 70 Phùng Thị Đ Đt 98 71 Nguyễn Thị Ư Đt 99 72 Phan Thị Q Đt 100 73 Nguyễn Đức T 74 Nguyễn Thành C 75 Bùi Khánh T 76 Nguyễn Văn N 77 Nguyễn Thị S 78 ac y Nam PT1412 63 Nữ PT245 44 Nữ PT1066 53 Nữ PT525 62 Nữ PT270 34 Nữ Đt 101 PT461 54 Nam Đt 102 PT26 45 Nam Đt 103 PT202 52 Nam Đt 104 PT253 47 Nam Đt 105 PT1630 58 Nữ Phạm Đắc T Đt 107 PT1062 50 Nam 79 Nguyễn Thị N Đt 109 PT776 56 Nữ 80 Đỗ Thị H Đt 110 PT1626 45 Nữ Nguyễn Văn C Đt 113 PT1623 45 Nam 82 Triệu Thị S Đt 114 PT1382 47 Nữ 83 Vũ Đình S Đt 115 PT76 50 Nam 84 Nguyễn Thị N Đt 117 PT1041 56 Nữ an d ed ici ne M of ol ho Sc @ ht rig py Ph arm 46 81 Co ,V NU 63 Dương Thị L Đt 118 PT515 41 Nữ 86 Trần Quốc B Đt 123 PT249/15 66 Nam 87 Phạm Văn L Đt 124 PT193 57 Nam 88 Phùng Thị T Đt 126 PT874 49 Nữ 89 Phạm Thị K Đt 127 PT865 90 Trần Thị L Đt 128 91 Nguyễn Văn Đ Đt 129 92 Hoàng Thế Q Đt 130 93 Nguyễn Thị N Đt 132 94 Kiều Duy T Đt 136 95 Đặng Văn C 96 Vi Thị N 97 Đinh Đăng C 98 Đinh Thị H 99 Phạm Thị H 100 Triệu Hồng L ac y PT38 48 Nữ PT29 52 Nam ST897 32 Nam PTVT1091 47 Nữ PTVT 584 52 Nam Đt 140 PTVT1080 63 Nam Đt 141 PTVT1704 57 Nữ Đt 145 PTVT241 44 Nam Đt 146 PTVT887 35 Nữ Đt 147 PTVT308 42 Nữ Đt 148 PTVT1650 61 Nam an d Ph arm Nữ ed ici ne M of ol ho Sc 56 Xác nhận Chủ nhiệm đề tài Co py rig ht @ ,V NU 85 PGS TS Phạm Trung Kiên Mẫu Nồng độ (ng/μl) OD260/280 Nồng độ (ng/μl) OD260/280 78.85 1.957 51 49.45 ĐT 02 63.35 1.931 ĐT 52 41.80 ĐT 03 80.15 1.964 ĐT 53 46.25 ĐT 04 72.10 1.970 ĐT 54 45.55 ĐT 05 64.40 2.051 ĐT 55 45.15 ĐT 06 89.65 1.960 ĐT 56 ĐT 07 99.55 1.807 ĐT 57 ĐT 08 48.60 1.808 ĐT 58 ĐT 09 54.00 1.983 ĐT 59 ĐT 10 41.15 1.892 ĐT 11 61.50 ĐT 12 2.181 1.922 2.024 1.993 1.980 2.006 65.65 1.934 53.95 2.017 64.65 1.827 ĐT 60 54.65 1.925 2.026 ĐT 61 46.10 1.921 62.25 1.853 ĐT 62 42.50 1.959 ĐT 13 76.65 1.919 ĐT 63 48.85 2.097 ĐT 14 53.85 2.021 ĐT 64 45.75 2.209 ĐT 15 58.85 1.985 ĐT 65 52.85 2.052 ĐT 16 50.90 1.950 ĐT 66 71.60 2.375 ĐT 17 73.40 1.984 ĐT 67 54.10 2.386 ĐT 18 56.15 2.052 ĐT 68 57.50 2.223 ĐT 19 96.15 1.985 ĐT 69 59.45 2.424 ĐT 20 66.90 2.018 ĐT 70 43.65 2.250 ĐT 21 69.20 1.838 ĐT 71 46.25 2.102 ĐT 22 63.20 1.904 ĐT 72 75.85 2.066 ĐT 23 114.95 1.874 ĐT 73 55.20 2.095 ĐT 24 73.65 1.872 ĐT 74 43.10 2.096 ĐT 25 48.90 1.970 ĐT 75 61.90 1.910 ĐT 26 63.55 1.903 ĐT 76 45.80 2.031 ĐT 27 41.75 2.016 ĐT 77 53.60 1.785 ĐT 28 93.65 1.862 ĐT 78 48.80 2.148 ĐT 29 61.45 1.792 ĐT 79 58.15 2.125 ĐT 30 133.90 1.843 ĐT 80 63.25 2.196 ĐT 31 57.55 1.927 ĐT 81 43.65 2.172 ĐT 32 95.85 1.861 ĐT 82 57.75 2.172 ĐT 33 43.00 2.275 ĐT 83 44.85 2.169 59.65 2.138 ĐT 84 46.30 62.50 2.155 ĐT 85 45.45 2.135 48.25 2.271 ĐT 86 46.00 2.162 76.70 2.067 ĐT 87 41.60 2.002 71.85 2.074 ĐT 88 50.70 2.079 101.15 1.940 ĐT 89 45.60 2.027 69.10 2.107 ĐT 90 53.20 2.022 ĐT 41 50.00 1.873 ĐT 91 41.85 2.105 ĐT 42 106.5 1.873 ĐT 92 65.50 2.115 ĐT 43 44.20 1.832 ĐT 93 56.50 2.181 ĐT 44 88.20 1.964 ĐT 94 55.75 2.185 ĐT 45 57.95 1.879 ĐT 95 48.90 1.962 ĐT 46 42.80 1.860 ĐT 96 50.65 1.985 ĐT 47 73.90 1.803 ĐT 97 57.25 2.035 ĐT 48 63.55 2.021 ĐT 98 51.30 2.015 ĐT 49 46.00 1.970 ĐT 99 43.40 2.136 ĐT 50 42.60 1.921 ĐT100 45.56 1.925 ĐT 36 ĐT 39 py rig ht ĐT 40 @ ĐT 37 ĐT 38 ed ici ne M of ol ho Sc ĐT 35 an d 48.25 Ph arm ac y ĐT 01 ĐT 34 Co Mẫu ,V NU Phụ lục Giá trị đo hấp thụ quang mẫu DNA tổng số 2.020 ht rig py Co @ ol ho Sc of ed ici ne M an d Ph arm ,V NU ac y