Nghiên cứu tinh chế albumin trứng sử dụng trong dược phẩm

ĐẠI HỌC QUỐC GIA HÀ NỘI KHOA Y DƯỢC TRẦN THỊ THÚY NGHIÊN CỨU TINH CHẾ ALBUMIN TRỨNG SỬ DỤNG TRONG DƯỢC PHẨM KHÓA LUẬN TỐT NGHIỆP ĐẠI HỌC NGÀNH DƯỢC HỌC Hà Nội – 2017 ĐẠI HỌC QUỐC GIA HÀ NỘI KHOA Y DƯỢC TRẦN THỊ THÚY NGHIÊN CỨU TINH CHẾ ALBUMIN TRỨNG SỬ DỤNG TRONG DƯỢC PHẨM KHÓA LUẬN TỐT NGHIỆP ĐẠI HỌC NGÀNH DƯỢC HỌC Khóa: QH.2012.Y Người hướng dẫn: PGS.TS Nguyễn Thanh Hải ThS Nguyễn Văn Khanh Hà nội – 2017 LỜI CẢM ƠN Đầu tiên, tơi xin bày tỏ lịng biết ơn sâu sắc PGS.TS Nguyễn Thanh Hải Ths Nguyễn Văn Khanh, hai người thầy hết lòng hướng dẫn giúp đỡ tơi thực hồn thành khóa luận Tôi xin chân thành cảm ơn thầy cô anh chị kĩ thuật viên thuộc môn Bào chế Công nghệ dược phẩm nhiệt tình giúp đỡ hỗ trợ tơi q trình học tập thực nghiệm môn Tôi xin chân thành cảm ơn Ban giám hiệu nhà trường, phịng Đào tạo, mơn Bào chế Cơng nghệ dược phẩm, mơn, ban phịng liên quan nhà trường, anh chị viện Dược liệu, viện Hàn lâm Khoa học Công nghệ tạo điều kiện sở vật chất, trang thiết bị hóa chất thí nghiệm q trình tơi thực đề tài Cuối cùng, xin gửi lời cảm ơn sâu sắc tới gia đình bạn bè, người giúp đỡ động viên suốt thời gian học tập hồn thành khóa luận Hà Nội, tháng năm 2017 Sinh viên Trần Thị Thúy DANH MỤC CÁC KÍ HIỆU VÀ CHỮ VIẾT TẮT ABS Aqueous Biphasis System (Hệ pha thân nước) ACE Angiotensin I Converting Enzym (Enzym chuyển hóa angiotensin I) UF BCA BMBC dd Ultra Filtration (Siêu lọc) Bicinchoninic Acid Bộ môn bào chế Dung dịch EDTA Ethylendiamin Tetraacetic Acid HPLC High Performance Liquid Chromatography (Sắc kí lỏng hiệu cao) NSX Nhà sản xuất OVA Ovalbumin PEG Polyethylen Glycol SDS Sodium Dodecyl Sulfat SDS-PAGE Sodium dodecyl sulfat Polyacrylamid gel elecphoresis (Điện di gel polyacrylamid sử dụng natri dodecyl sulfat) v/v Thể tích/Thể tích w/v Khối lượng/Thể tích WHO World Health Organization (Tổ chức Y tế Thế giới) DANH MỤC CÁC BẢNG BIỂU Bảng Nội dung Bảng 1.1 Thành phần tỷ lệ phần trăm khối lượng số protein lòng trắng trứng Bảng 1.2 Thành phần số tính chất protein lịng trắng trứng Bảng 1.3 Hoạt tính sinh học protein lòng trắng trứng Trang Bảng 2.1 Các nguyên vật liệu sử dụng 14 Bảng 2.2 Công thức chuẩn bị mẫu điện di 23 Bảng 3.1 Kết khảo sát phương pháp tinh chế ovalbumin trứng 26 Bảng 3.2 Ảnh hưởng nhiệt độ đến hiệu suất tinh chế ovalbumin 29 Bảng 3.3 Kết đánh giá độ tinh khiết ovalbumin Bảng 3.4 Hiệu suất tinh chế độ tinh khiết ovalbumin với quy mô tinh chế 300 g lòng trắng trứng 31 34 DANH MỤC CÁC HÌNH VẼ VÀ ĐỒ THỊ Hình Nội dung Trang Hình 1.1 Cấu trúc 3-D ovalbumin Hình 2.1 Sơ đồ tinh chế albumin trứng phương pháp điều chỉnh pH 16 Hình 2.2 Sơ đồ tinh chế ovalbumin sử dụng dd muối amoni sulfat bão hịa 17 Hình 2.3 Sơ đồ tinh chế ovalbumin cách loại bước protein có lịng trắng trứng 19 Hình 2.4 SDS phá vỡ cấu trúc dạng cuộn xoắn protein 22 Hình 2.5 DDT đóng vai trị phá vỡ liên kết disulfid 23 Hình 3.1 Sản phẩm đơng khơ thu từ phương pháp tinh chế ovalbumin trứng 25 Hình 3.2 Kết điện di SDS-PAGE mẫu thu từ bước 28 Hình 3.3 Kết đo mật độ hình ảnh băng điện di phần mềm ImageJ 30 Ảnh hưởng nhiệt độ biến tính lên hiệu suất tách độ tinh khiết ovalbumin 31 Hồn thiện quy trình tinh chế ovalbumin từ lịng trắng trứng 33 Hình 3.4 Hình 3.5 MỤC LỤC ĐẶT VẤN ĐỀ……………………………………………… ………………… CHƯƠNG 1: TỔNG QUAN………………………………………………… 1.1 Sơ lược lòng trắng trứng…………………………………………… 1.1.1 Thành phần…………………………………… ……… … …… 1.1.2 Các protein lịng trắng trứng.….………….……….… 1.1.3 Vai trị sinh học giá trị thành phần lòng trắng trứng sức khỏe người…………………………………… …… ………… 1.2 Ovalbumin………………………………………………………………… 1.2.1 Cấu trúc số tính chất đặc trưng ovalbum… ………… 1.2.2 Một số đặc tính ovalbumin có tiềm nghiên cứu sử dụng Dược phẩm……… …….………….………… … … ………… … 1.2.3 Các phương pháp đánh giá ovalbumin…………………….… … 10 1.2.4 Các nghiên cứu tinh chế ovalbumin từ lòng trắng trứng …… … 11 CHƯƠNG 2: ĐỐI TƯỢNG VÀ PHƯƠNG PHÁP NGHIÊN CỨU……… 14 2.1 Nguyên vật liệu, thiết bị……………………………………………… 14 2.1.1 Nguyên vật liệu………….………………………….…….……… 14 2.1.2 Thiết bị, dụng cụ nghiên cứu………… ………….……… …… 14 2.2 Nội dung nghiên cứu………………………………………………… 15 2.3 Phương pháp nghiên cứu……………………………………………… 15 2.3.1 Phương pháp tinh chế albumin trứng………………….…….….…15 2.3.2 Phương pháp đánh giá…………………….…………………… 20 2.3.3 Phương pháp xử lí số liệu…………………………… ………… 24 CHƯƠNG 3: KẾT QUẢ VÀ BÀN LUẬN…… …………………………… 25 3.1 Khảo sát phương pháp tinh chế albumin trứng………………… 25 3.2 Tinh chế ovalbumin cách loại bước protein có lịng trắng trứng đánh giá số tiêu ovalbumin tinh chế được…………………………………………………………………………… 27 3.2.1 Định tính sản phẩm tinh chế……………… …………………… 27 3.2.2 Hiệu suất tinh chế ovalbumin……………….…………………… 29 3.2.3 Độ tinh khiết ovalbumin………… ………………………… 30 3.3 Nâng cấp quy mô……… ………… ………………………………… 34 KẾT LUẬN VÀ KIẾN NGHỊ……………………………………………… 35 TÀI LIỆU THAM KHẢO ĐẶT VẤN ĐỀ Trứng từ lâu trở thành phần thiết yếu chế độ ăn người, số thực phẩm sử dụng phổ biến toàn giới Mặc dù chứa đến 74% nước, trứng nguồn nguyên liệu dồi cung cấp protein, acid béo, sắt, phospho, khoáng chất vitamin quan trọng cho thể Lòng trắng trứng chứa khoảng 9,7-11% protein, gồm protein ovalbumin, ovotransferrin, lysozym ovomucin Ngồi ra, protein lịng trắng trứng cịn chứa đặc tính chức quan trọng tạo gel, tạo bọt, nhũ hóa, đông tụ nhiệt, khiến chúng trở thành phụ gia hữu ích cơng nghiệp thực phẩm [2,18,21-24] Là protein chiếm nửa lượng protein khơ lịng trắng trứng, ovalbumin có hầu hết tính chất đặc tính chức lịng trắng trứng Bên cạnh đó, nhiều nghiên cứu cho thấy vài hoạt tính sinh học có liên quan đến albumin trứng hoạt tính kháng vi sinh vật, điều hòa miễn dịch, tiềm ứng dụng chất mang thuốc, cho thấy cần thiết việc phân lập tinh chế ovalbumin từ phức hệ protein lòng trắng trứng [18,23] Albumin trứng (ovalbumin) phân tách từ lòng trắng trứng phương pháp sử dụng amoni sulfat nồng độ cao Trong nhiều thập kỉ qua, nhiều phương pháp khác sử dụng để tinh chế ovalbumin công nghệ màng lọc UF, sắc kí trao đổi ion, sắc kí rây phân tử, hệ ABS… [2,28] Các phương pháp yêu cầu thiết bị kĩ thuật đắt tiền đồng thời số phương pháp phải tiến hành qua nhiều giai đoạn phức tạp Do vậy, thực đề tài “Tinh chế albumin trứng sử dụng dược phẩm” với mục tiêu chính: - Tinh chế ovalbumin từ lòng trắng trứng - Đánh giá số tiêu ovalbumin tinh chế CHƯƠNG 1: TỔNG QUAN 1.1 Sơ lược lòng trắng trứng 1.1.1 Thành phần Trứng bao gồm khoảng 9,5% vỏ trứng (bao gồm màng vỏ), 63% albumen (lòng trắng) 27,5% lòng đỏ [21] Thành phần trứng nước (75%), protein (12%), lipid (12%), cịn lại carbohydrat, khống chất số vitamin (A, E, K B) [18,23] Protein phân bố lòng đỏ lòng trắng trứng, lipid phân bố chủ yếu lịng đỏ Một vài khống chất tìm thấy vỏ trứng [22] Carbohydrat thành phần thứ yếu khác phân bố khắp phận trứng, tồn dạng tự dạng liên hợp, liên kết với protein lipid [23] Lòng trắng trứng chiếm nửa (khoảng 60-63%) tổng khối lượng trứng Hai thành phần cấu tạo nên lịng trắng trứng bao gồm nước (chiếm khoảng 88%) protein (khoảng 9,7-11%) Carbohydrat chiếm khoảng 0,5-0,6%, lượng lipid có lịng trắng trứng chiếm khoảng 0,01%, không đáng kể so với lượng lipid có lịng đỏ [21] Protein thành phần định đặc tính lý hóa sinh học lòng trắng trứng Trong nhiều thập kỉ qua, nhiều nghiên cứu tiến hành để nhận biết, phân tách định lượng protein có lòng trắng trứng Protein chiếm khối lượng lớn tổng số protein lòng trắng trứng ovalbumin (54%) Cùng với ovalbumin, ovotransferrin (12%), ovomucoid (11%), ovomucin (3,5%) lysozym (3,4%) xem protein lịng trắng trứng Các protein khác nhận biết định lượng bao gồm ovoinhibitor, ovoglycoprotein, ovoflavoprotein, ovomacroglobulin (ovostatin), cystatin, avidin… [18] bão hịa (được mơ tả mục 2.3.1.2) phương pháp phân lập protein bước không dùng màng lọc tiếp tuyến (được mô tả mục 2.3.1.3) xốp hơn, tinh thể có kích thước lớn không đồng Bảng 3.1 Kết khảo sát phương pháp tinh chế ovalbumin trứng Khối lượng Khối lượng Khối lượng ovalbumin sản phẩm ovalbumin có đơng khơ sản lịng trắng thực tế thu phẩm đông trứng (g) (g) khô (g) Mẫu Khối lượng lòng trắng trứng (g) 10,360 0,593 0,216 0,098 16,53 10,138 0,599 2,562 0,445 74,29 10,041 0,593 1,581 0,521 87,86 10,154 0,600 0,592 0,524 87,33 Hiệu suất tách (%) Nhận xét: Kết khảo sát (bảng 3.1) cho thấy, sử dụng phương pháp thay đổi pH dung dịch điểm đẳng điện protein để tách ovalbumin từ lòng trắng trứng cho hiệu suất tách thấp (chỉ 16,52%) Dung dịch HCl 1M dùng để điểu chỉnh pH dễ dàng bay q trình đơng khơ, sản phẩm đơng khơ thu chứa chủ yếu thành phần lòng trắng trứng Như vậy, với hàm lượng 0,098g tổng số 0,216g khối lượng sản phẩm đông khô, ovalbumin tách phương pháp bị lẫn nhiều protein khác lòng trắng trứng Sản phẩm đông khô thu từ hai phương pháp lại chứa lượng muối amoni sulfat cao, đặc biệt phương pháp dùng amoni sulfat bão hòa (protein chiếm khoảng 11% khối lượng lòng trắng trứng, lượng sản phẩm khơ thu lên đến 2,562g) Trên thực tế, protein khác bị kết tụ nồng độ muối khác nhau, mặt khác q trình kết tụ khơng hồn tồn phụ thuộc tuyến tính nồng độ muối thêm vào Do đó, để lựa chọn lượng dung dịch amoni sulfat tối ưu, đảm bảo vừa tách ovalbumin với hiệu suất 26 cao vừa gây kết tụ đồng thời protein khác tương đối khó khăn Hơn nữa, việc loại bỏ hoàn toàn lượng muối lớn lại sản phẩm gặp nhiều trở ngại, khó để đảm bảo protein khơng bị thay đổi sau q trình biến tính Phương pháp tách protein cho hiệu suất thu hồi ovalbumin cao (trên 87%), lượng muối amoni sulfat sử dụng thấp (chỉ 5% w/v để tách ovotransferrin) So sánh khối lượng sản phẩm đông khô khối lượng ovalbumin đo phương pháp đo quang cho thấy khác không nhiều, chứng tỏ hầu hết amoni sulfat loại bỏ qua màng lọc tiếp tuyến Từ kết trên, chúng tơi lựa chọn quy trình 2.3.1.3 để tinh chế ovalbumin từ lòng trắng trứng Dung dịch sau lọc tiếp tuyến cịn có lẫn thành phần protein khác, đồng thời ovalbumin cịn tồn dạng cấu trúc S-ovalbumin có sức đề kháng cao với nhiệt, tiến hành khảo sát biến tính mẫu dung dịch (sau bước loại muối) điểm nhiệt độ khác nhau: 70oC, 75oC , 80oC 85oC 3.2 Tinh chế ovalbumin cách loại bước protein có lịng trắng trứng đánh giá số tiêu ovalbumin tinh chế 3.2.1 Định tính sản phẩm tinh chế Tiến hành tinh chế ovalbumin từ lịng trắng trứng theo phương pháp mơ tả mục 2.3.1.3 Để xác định protein có sản phẩm thu về, tiến hành theo phương pháp mô tả mục 2.3.2.4 với mẫu: - Mẫu 1: Dung dịch LTT pha loãng lần với nước Mẫu 2: Dịch lỏng sau loại ovomucin Mẫu 3: Dịch lỏng (S1) sau loại ovotransferrin Mẫu 4: Dịch lỏng (S2) sau loại ovotransferrin Mẫu 5: Dung dịch sau bước lọc tiếp tuyến Mẫu 6, 7, 8, 9: Dịch lỏng sau biến tính 75oC, 70oC, 80oC 85oC Kết chạy điện di thể hình 3.2: 27 10 Hình 3.2 Kết điện di SDS-PAGE mẫu thu từ bước Giếng 1: mẫu Giếng 2: mẫu Giếng 3: mẫu Giếng 4: mẫu Giếng 5: mẫu Giếng 6, 7, 8, 9: mẫu 6, 7, 8, Giếng 10: marker Nhận xét: So sánh hình ảnh điện di mẫu 1, với mẫu – cho thấy lượng lớn ovotransferrin loại khỏi dung dịch sau bước xử lý với amoni sulfat acid citric Điều việc kết hợp acid citric giúp làm giảm nồng độ muối sử dụng cho hiệu loại bỏ ovotransferrin cao Tuy nhiên, quan sát hình ảnh điện di giếng thấy lượng nhỏ ovalbumin bị kết tủa đồng thời với ovotransferrin Ngoài ovalbumin, protein khác có khả đề kháng tương đối tốt với nhiệt lysozym (biến tính 75oC) ovomucoid (biến tính 77oC) Hai protein có khối lượng phân tử nhỏ (14,3 kDa 28 kDa) bị loại bỏ qua màng lọc tiếp tuyến 30 kDa (so sánh hình ảnh điện di giếng so với giếng 1, 2, 3) 28 Từ giếng số – 9, hình ảnh gel điện di cho thấy khác biệt rõ rệt so với giếng số Các tạp chất (ngoại trừ ovotransferrin) gồm ovomucoid, lysozym, globulin, avidin bị loại khỏi dung dịch Điều chứng tỏ nhiệt độ có tác động lớn việc tinh protein khác khỏi ovalbumin Các giếng 6, 7, cho thấy rõ băng điện di ovalbumin lẫn số lượng tạp chất ovotransferrin Ở nhiệt độ 70oC, hầu hết tạp protein lại đều bị kết tủa hết ngoại trừ ovotransferrin Từ giếng 7, 6, 8, 9, ovotransferrin dần loại bỏ nhờ kết tủa nhiệt Đồng thời băng ovalbumin nhạt dần tăng nhiệt độ, ovalbumin bắt đầu có dấu hiệu kết tủa tăng nhiệt độ lên 75oC, bị kết tủa mạnh nhiệt độ 80oC Ở 85oC, ovalbumin gần bị kết tủa hoàn toàn, băng điện di xuất mờ giếng cấu trúc S-ovalbumin 3.2.2 Hiệu suất tinh chế ovalbumin Tiến hành tinh chế ovalbumin theo phương pháp mô tả mục 2.3.1.3 với khối lượng lòng trắng trứng ban đầu 100 g Định lượng ovalbumin dung dịch sau biến tính nhiệt độ 70oC, 75oC, 80oC, 85oC phương pháp mô tả mục 2.3.2.2 Hiệu suất tinh chế tính tốn theo công thức (3) mô tả mục 2.3.2.3: Bảng 3.2 Ảnh hưởng nhiệt độ đến hiệu suất tinh chế ovalbumin Nhiệt độ (oC) 70 75 80 85 Ovalbumin (g) 0,689 0,416 0,345 0,217 Hiệu suất (%) 87,33 52,79 43,71 16,06 Nhận xét: Kết thực nghiệm cho thấy, hiệu suất tinh chế ovalbumin bắt đầu giảm mạnh tăng nhiệt độ từ 70oC lên 75oC Khi tăng dần nhiệt độ biến tính, khả đề kháng với nhiệt ovalbumin giảm, lượng ovalbumin bị kết tủa đồng thời tạp protein khác tăng, hiệu suất tách ovalbumin từ 29 lòng trắng ắng trứng giảm Khi biến tính nhiệt độ 85oC, hiệu ệu suất tinh chế ovalbumin 16,06%, giảm gi lần ần so sánh với giá trị nhiệt độ o biến tính 70 C (87,33%) (87,33%) 3.2.3 Độ ộ tinh khiết ovalbumin Các mẫu ẫu sau biến tính nhiệt nh mơ tảả mục 2.3.1.3 đđược ly tâm, thu lấy dịch lỏng v đông khô Sản phẩm đông khô ợc tiến hhành đánh giá độ ộ tinh khiết ovalbumin dựa tính tốn mật độ hình ảnh gel phần mềm ImageJ Cơng thức th tính độ tinh khiết mô tảả mục 2.3.2.4 Kết ợc thể hình 3.3 bảng 3.3: Biến ến tính loại tạp 70oC Biến ến tính loại tạp 75 oC Biến ến tính loại tạp 80oC Biến ến tính loại tạp 85 oC Hình 3.3 Kết ết đo mật độ hình h ảnh băng điện bi phần mềm ImageJ 30 Bảng 3.3 Kết đánh giá độ tinh khiết ovalbumin Nhiệt độ (oC) 70 75 80 85 Độ tinh khiết(%) 91,03 91,78 94,28 100 100 120 90 100 80 70 80 60 50 Độ tinh khiết (%) Hiệu suất (%) Nhận xét: Sau loại tạp protein bước biến tính nhiệt, mẫu ovalbumin tinh chế có độ tinh khiết cao (trên 91%) Độ tinh khiết ovalbumin tinh chế tăng theo giá trị nhiệt sử dụng để biến tính, nhiên để lựa chọn nhiệt độ biến tính thích hợp cần xem xét đến hiệu suất thu hồi ovalbumin 60 40 40 30 Hiệu suất 20 20 Độ tinh khiết 10 0 70 75 80 85 Nhiệt độ (oC) Hình 3.4 Ảnh hưởng nhiệt độ biến tính lên hiệu suất tách độ tinh khiết ovalbumin Theo hình 3.4: Độ tinh khiết sản phẩm sau loại tạp biến tính nhiệt độ 70oC 75oC có khác không nhiều (91,03% 91,78%) nhiên hiệu suất thu hồi ovalbumin giảm gần nửa Ovalbumin có độ tinh khiết 94% sau biến tính nhiệt độ 80oC lượng ovalbumin hao phí lớn, đặc biệt sau biến tính 85oC, độ tinh khiết 31 ovalbumin tinh chế gần 100% lượng ovalbumin thu hồi khoảng 16% lượng ovalbumin có ngun liệu thơ Từ kết trên, lựa chọn nhiệt độ 70oC để biến tính loại tạp hồn thiện quy trình tinh chế ovalbumin từ lịng trắng trứng hình 3.5: 32 Lịng trắng trứng + H2O (1:1 v/v) Điều chỉnh pH 4,75 dung dịch HCl 3M, để yên 2h Ly tâm tốc độ 5000 vòng/phút, nhiệt độ 25oC 30 phút Loại bỏ phần kết tủa ovomucin Thu lấy dịch lỏng, thêm amoni sulfat acid citric để có nồng độ tương ứng 5% (w/v) 2,5% (w/v), để qua đêm nhiệt độ 4oC Ly tâm 5000 vòng/phút, 25oC 30 phút Loại bỏ phần kết tủa ovotransferrin Thu dịch lỏng, lọc qua màng lọc tiếp tuyến 30 kDa Loại muối, Thu lấy phần dịch lỏng, biến tính nhiệt độ 70oC 15 phút Ly tâm 5000 vòng/phút, 25oC 30 phút lysozyme protein trọng lượng phân tử thấp Thu lấy dịch lỏng ovalbumin Loại tạp protein cịn sót lại Đơng khơ ovalbumin, bảo quản 4oC Hình 3.5 Hồn thiện quy trình tinh chế ovalbumin từ lịng trắng trứng 33 3.3 Nâng cấp quy mơ Tiến hành tinh chế ovalbumin từ lòng trắng trứng theo quy trình hồn thiện, mơ tả hình 3.5 với khối lượng lòng trắng trứng ban đầu 300g Định lượng ovalbumin sản phẩm đông khô theo phương pháp mô tả mục 2.3.2.2, đánh giá hiệu suất tinh chế theo phương pháp mô tả mục 2.3.2.3, đánh giá độ tinh khiết ovalbumin tinh chế theo phương pháp mô tả mục 2.3.2.4 Kết thể bảng 3.4: Bảng 3.4 Hiệu suất tinh chế độ tinh khiết ovalbumin với quy mơ tinh chế 300 g lịng trắng trứng Khối lượng ovalbumin sản phẩm đông khô (g) Hiệu suất (%) Độ tinh khiết (%) 15,69 88,45 89,67 Nhận xét: Khi nâng cấp quy mô tinh chế với khối lượng nguyên liệu lòng trắng trứng ban đầu 300g, hiệu suất tinh chế ovalbumin tăng từ 87,33% lên 88,45%, độ tinh khiết ovalbumin thu giảm từ 91,03% 89,67% Các giá trị thay đổi không đáng kể 34 KẾT LUẬN VÀ KIẾN NGHỊ KẾT LUẬN Sau trình nghiên cứu làm thực nghiệm, nhóm nghiên cứu thu kết sau: - Tinh chế ovalbumin từ lòng trắng trứng phương pháp loại bước protein có lịng trắng trứng - Ovalbumin tinh chế có độ tinh khiết tương đối cao (trên 89,67%) hiệu suất trình tinh chế 87% KIẾN NGHỊ Do hạn chế thời gian, kết khóa luận bước đầu xây dựng quy trình tinh chế ovalbumin từ lịng trắng trứng, để đánh giá xác hiệu phương pháp, nhóm nghiên cứu đưa số đề xuất sau: - Tiếp tục nghiên cứu hồn thiện quy trình tối ưu tinh chế ovalbumin từ lòng trắng trứng nhằm tăng độ tinh sản phẩm - Tiếp tục xây dựng phương pháp đánh giá định lượng ovalbumin có độ xác cao sắc kí lỏng hiệu cao (HPLC) - Đồng thời, protein khác ovotransferrin, ovomucin lysozym có tiềm cao sử dụng dược phẩm, protein hồn tồn phân lập đồng thời với ovalbumin Do đó, nhóm nghiên cứu chúng tơi đề xuất sử dụng phương pháp để tinh chế kết hợp nhiều protein lịng trắng trứng nhằm mục đích sử dụng dược phẩm 35 TÀI LIỆU THAM KHẢO Tài liệu Tiếng Việt: Lê Ngọc Tú (2002), Hóa sinh cơng nghiệp, Nhà xuất Khoa học Kỹ thuật, Hà Nội Tài liệu Tiếng Anh Abeyrathne E D., Lee H Y., Ahn D U (2013),"Egg white proteins and their potential use in food processing or as nutraceutical and pharmaceutical agents - A review", Poultry Science, 92(12), 3292-3299 Abeyrathne E., Lee H Y., Ahn D U (2013), "Sequential separation of lysozyme, ovomucin, ovotransferrin, and ovalbumin fromm egg white", Poultry Science Association, 93, 1001-1009 Abeyrathne N., Lee H Y., Ahn D U (2013), "Sequential Separation of Lysozyme and Ovalbumin from Chicken Egg White", Korean Journal for Food Science of Animal Resources, 33(1), 501-507 Alleoni A C (2006)"Albumen protein and functional properties of gelation and foaming", Scientia Agricola, 63(3), 291-198 Babini G S., Livermore D M (2000), "Effect of conalbumin on the activity of Syn 2190, a 1,5 dihydroxy-4-pyridon monobactam inhibitor of AmpC beta-lactamase", Journal of Antimicrobial Chemotherapy, 45, 105109 Burley R W., Vadehra D (1989), The Avian Egg, Chemistry and Biology, Wiley-Interscience, New York Chick H., Martin C J (1913), "The Precipitation of egg albumin by ammonium sulfate A contribution to the theory of the “Salting Out” of proteins", Biochemical Journal, 7, 380-398 Cotterill O J., Geiger S., G (1977), "Egg product yield trends from shell eggs", Poultry Science, 56, 1027-1031 10 Datta D., Bhattacharjee S et al (2009), "Separation of ovalbumin from chicken egg white using two-stage ultrafiltration technique", Separation and Purification Technology, 66, 353-361 11 Desert C., Guérin-Dubiard C., Nau F., Val F., Val F., Mallard J (2001), "Comparison of different electrophoretic separations of hen egg white proteins", Journal of Agricultural and Food Chemistry, 49, 4553–4561 12 Fang J., H.Ma M., Qiu N., Wu X (2011), "Analysis of the Low-Molecular Weight Protein Profile of Egg-White and its Changes during Early Chicken Embryological Development", Verlag der Zeitschrift für Naturforschung, 67c, 208-214 13 Geng F., Huang Q et al (2012), "Co-purification of chicken egg white proteins using polyethylene glycol precipitation and anion-exchange chromatography", Separation and Purification Technology, 96, 75-80 14 Hopkins F G (1900), "On the separation of a pure albumin from egg white", The Journal of Physiology, 25, 306-330 15 Hoppe A., Zeece M G (2010), "Examination of egg white proteins and effects of high pressure on select physical and functional properties", Semantic Scholar, 1-112 16 Houpalahti R., Fandino R L., Anton M (2007), Egg White Compounds, Spinger, New York 17 Hungtinton J., Stein P (2001), "Structure and properties of ovalbumin", Journal of Chromatography, 756, 189-198 18 Kovacs-Nolan J., Phillips M., Mine Y (2005), "Review: Advances in the value of eggs and egg components for human health", Journal of Agricultural and Food Chemistry, 53, 8421-8434 19 Littlefield V D, Hills B (1937), Process of Preparing Dried Egg Albumin, United States Patent Office 20 Mann K., Mann M (2011), "In-depth analysis of the chicken egg white proteome using an LTQ Orbitrap Velos", Proteome Science, 9, 21 Mine Y (2002), "Recent advances in egg protein functionality in the food system", World’s Poultry ScienceJournal, 58, 31-39 22 Mine Y., Kovacs-Nolan J (2004), "Biologically Active Hen Egg Components In Human Health and Disease", Journal of Pourtry Science, 41, 1-29 23 Mine Y., Kovacs-Nolan J (2006), "New insights in biologically active proteins and peptides derived from hen egg", World’s Poultry Science Association, 62, 87-97 24 Mine Y., Yang M (2008), "Recent advances in the understanding of egg allergens: Basic, industrial, and clinical perspectives", Journal of Agricultural and Food Chemistry, 56 (13), 4874 25 Nerli B., Espariz M., Picó G (2001), "Thermodynamic study of forces involved in bovine serum albumin and ovalbumin partitioning in aqueous two-phase systems", Biotechnology and Bioengineering, 72, 468-474 26 Ngarize S., Herman H., Adams A., Howell N (2004), "Comparison of changes in the secondary structure of unheated, heated, and high-pressuretreated ss-lactoglobulin and ovalbumin proteins using Fourier transform Raman spectroscopy and self-deconvolution", Journal of Agricultural and Food, 52 (21), 6470-6477 27 Osward N., Kennedy S., Hogan M., Cartwright M (2012), 10 Things Every Molecular Biologist Should Know, Science Square Ltd, Edinburgh 28 Pereira M., Cruz R A., Almeida M R., Lima A S., Coutinho A., Freire M G (2016), "Single-Step Purification of Ovalbumin from Egg White Using Aqueous Biphasic Systems", Process Biochemistr, 16, 1-47 29 Radziejewska R C., Lesnierowski G., Kijowski J (2008), "Properties and application of egg white lysozyme and its modified preparations-A review", Polish Journal of Food and Nutrition Sciences, 58, 5-10 30 Saravana S., Rao I., Nair B., Ramasami T (2008), "Aqueous two-phase poly(ethylene glycol)–poly(acrylic acid) system for protein partitioning: Influence of molecular weight, pH and temperature", Process Biochemistry, 43, 905-911 31 Sethi A., Sher M., et al (2013), "Albumin as a drug deliver and diagnostic tool and its market approved products", Acta Poloniae Pharmaceutical Drug Research, 70 (4), 597-600 32 Stoscheck C M (1990), Guide to Pretein Purification, Academic Press 33 Valenti P., Antonini G., Fanelli M R., et al (1982), "Antibacterial activity of matrix-bound ovotransferrin", Antimicrobial Agents and Chemotherapy, 21, 840-841 34 Watkins B (1995), Egg Science and Technology, CRC Press, New York 35 Zhi W-B., Deng Q.-Y., Song J.-N., Quyang F (2005), "Purification of ovalbumin from hen egg white by high-speed counter-current aqueous twophase chromatography", Chinese Journal of Biotechnology, 21, 129-134