Nghiên cứu chế tạo hệ Doxycycline Nano trên cơ sở hạt Nano Oxit sắt từ (Fe3O4)

ĐẠI HỌC QUỐC GIA HÀ NỘI VN U KHOA Y DƯỢC dP rm ac y,  ed ici ne an TRẦN THỊ NGỌC BÍCH of M NGHIÊN CỨU CHẾ TẠO HỆ DOXYCYCLINE NANO TRÊN CƠ SỞ HẠT NANO OXIT SẮT TỪ (Fe3O4) Co py rig ht @ Sc ho ol KHÓA LUẬN TỐT NGHIỆP ĐẠI HỌC NGÀNH DƯỢC HỌC HÀ NỘI – 2019 VN U ĐẠI HỌC QUỐC GIA HÀ NỘI KHOA Y DƯỢC an dP rm ac y,  ed ici ne Người thực hiện: TRẦN THỊ NGỌC BÍCH of M NGHIÊN CỨU CHẾ TẠO HỆ DOXYCYCLINE NANO TRÊN CỞ SỞ HẠT NANO OXIT SẮT TỪ (Fe 3O4) Sc ho ol KHÓA LUẬN TỐT NGHIỆP ĐẠI HỌC NGÀNH DƯỢC HỌC KHÓA: QHY.2014 @ GIẢNG VIÊN HƯỚNG DẪN 1: TS HÀ PHƯƠNG THƯ Co py rig ht GIẢNG VIÊN HƯỚNG DẪN 2: PGS.TS DƯƠNG THỊ LY HƯƠNG HÀ NỘI – 2019 VN U LỜI CẢM ƠN ac y, Để hoàn thành khóa luận cách hồn chỉnh, tơi xin chân thành cảm ơn hướng dẫn nhiệt tình quý thầy cô, anh chị Viện Khoa học vật liệu – Viện hàn lâm Khoa học Công nghệ dP rm Lời đầu tiên, tơi xin bày tỏ lịng biết ơn sâu sắc đến TS Hà Phương Thư PGS.TS Dương Thị Ly Hương, hai tận tình hướng dẫn, bảo, giúp đỡ tạo điều kiện cho tơi q trình nghiên cứu thực đề tài an Tôi xin gửi lời cảm ơn chân thành đến ThS Nguyễn Hoài Nam, anh ed ici ne đưa cho lời khuyên bổ ích q trình nghiên cứu Tơi xin cảm ơn anh, chị làm việc phòng Vật liệu nano y sinh, Viện Khoa học vật, Viện hàn lâm Khoa học Cơng nghệ nhiệt tình giúp đỡ tơi thời gian thực nghiên cứu M Cuối xin cảm ơn thầy cô Khoa Y Dược tạo điều Hà Nội, ngày 03 tháng 05 năm 2019 Sinh viên Co py rig ht @ Sc ho ol of kiện giúp đỡ tơi q trình nghiên cứu Trần Thị Ngọc Bích VN U DANH MỤC KÝ HIỆU VÀ CHỮ VIẾT TẮT Alginate DLS Dynamics Light Scattering Tán xạ ánh sáng động EDX Energy-dispersive X-ray Phổ tán sắc lượng tia X ac y, Alg Cục quản lý Thực phẩm Dược phẩm Hoa Kỳ FDA Food and Drug Aministration FEG Polyethylene glycol FESEM Field Emission Scanning Electron Microscopy FTIR Fourier-transform infrared spectroscopy Quang phổ chuyển đổi hồng ngoại Fourier HIV Human immunodeficiency Vi rút suy giảm miễn dịch Phổ hồng ngoại Poly vinyl pyrrolidone ho ol PVP @ Sc Reactive oxygen species ht rig py an ed ici ne of M người Infrared radiation XRD Kính hiển vi điện tử quét virus IR ROS Co dP rm spectroscopy X-ray Diffraction Gốc tự oxy hóa Nhiễu xạ tia X DANH MỤC HÌNH VN U Hình 1: Cơ chế kháng khuẩn nano oxit sắt từ Fe 3O4 Hình 2: Cơ chế kháng khuẩn hạt nano bạc (Nano Ag) 11 Hình 3: Cấu trúc phân tử Doxycycline 12 ac y, Hình 4: Quy trình chế tạo hệ mang kháng sinh Doxycycline sở hạt nano oxit sắt từ Fe3O4 17 dP rm Hình 5: Giản đồ nhiễu xạ tia X hạt nano: (a)- Nano bạc, (b)- Nano Fe3O4, (c)-Nano Fe3O4@SiO2, (d)- Nano Fe3O4@SiO2-Ag, 21 (e)-Nano Fe3O4@SiO2-Ag/Doxy/Alg 21 an Hình 6: Phổ hồng ngoại FTIR hợp chất 23 Hình 7: Phổ EDX mẫu Fe3O4@SiO2-Ag với tỉ lệ bạc đầu vào 5% Ag 24 ed ici ne Hình 8: Phổ EDX mẫu Fe3O4@SiO2-Ag với tỉ lệ bạc đầu vào 10% Ag 24 Hình 9: Phổ EDX mẫu Fe3O4@SiO2-Ag với tỉ lệ bạc đầu vào 15% Ag 25 M Hình 10: Hình ảnh FESEM hệ mẫu thu thay đổi nồng độ alginate nồng độ kháng sinh (M1.X, X=1,2,3 M2.Y, Y=1,2,3) 26 Hình 11: Phân bố kích thước hạt hệ mẫu thu thay đổi nồng of độ Alg (M1.X) nồng độ kháng sinh (M2.X) 27 ho ol Hình 12: Ảnh hưởng nồng độ alginate đến kích thước trung bình hệ phân tán Fe3O3@SiO2-Ag/Doxy/Alg 29 Sc Hình 13: Ảnh hưởng nồng độ Doxycycline đến kích thước trung bình Co py rig ht @ hệ phân tán Fe3O4@SiO2-Ag/Doxy/Alg 29 DANH MỤC BẢNG VN U Bảng 1: Tỷ lệ thành phần hệ mẫu thực 19 Bảng 2: Đặc trưng tinh thể hạt nano oxit sắt từ Fe 3O4 nano bạc 22 Bảng 3: Thành phần bạc hạt nano Fe3O4 @SiO2-Ag 25 Co py rig ht @ Sc ho ol of M ed ici ne an dP rm ac y, Bảng 4: Kích thước trung bình hệ mẫu 28 MỤC LỤC VN U MỞ ĐẦU CHƯƠNG 1: TỔNG QUAN ac y, 1.1 Tình trạng kháng kháng sinh 1.2 Các hệ dẫn thuốc nano dP rm 1.3 Đặc tính kháng khuẩn hạt nano kim loại 1.4 Kháng sinh Doxycycline 12 1.5 Kết hợp kháng sinh với nano kháng khuẩn 13 CHƯƠNG 2: ĐỐI TƯỢNG VÀ PHƯƠNG PHÁP NGHIÊN CỨU 15 an 2.1 Đối tượng nghiên cứu 15 ed ici ne 2.2 Nguyên liệu, hóa chất 15 2.3 Thiết bị 16 2.4 Phương pháp nghiên cứu 16 M 2.4.1 Chế tạo hạt nano sắt từ 16 2.4.2 Chế tạo hạt nano oxit sắt từ Fe3O4 bọc SiO2 (Fe3O4@SiO2) 18 of 2.4.3 Chế tạo hạt Fe3O4@SiO2 gắn kết bạc (Fe3O4@SiO2-Ag) 18 ol 2.4.4 Chế tạo hệ Fe3O4@SiO2-Ag mang kháng sinh Doxycycline ho (Fe3O4@SiO2 Ag/Doxy/Alg) 18 Sc 2.5 Phương pháp đánh giá đặc tính hóa lý 19 @ 2.5.1 Phương pháp nhiễu xạ tia X (XRD) 19 2.5.2 Phổ hồng ngoại FTIR 19 rig ht 2.5.3 Phương pháp hiển vi điện tử quét (FESEM) 19 2.5.4 Phương pháp phổ tán sắc lượng tia X (EDX) 20 Co py CHƯƠNG 3: KẾT QUẢ VÀ BÀN LUẬN 21 3.1 Giản đồ nhiễu xạ tia X 21 3.2 Phổ hồng ngoại FTIR 22 3.3 Phổ tán sắc lượng tia X (EDX) 24 VN U 3.4 Ảnh hiển vi điện tử quét (FESEM) 26 3.5 Phân bố kích thước (DLS) 27 ac y, CHƯƠNG 4: KẾT LUẬN VÀ ĐỀ XUẤT 31 Co py rig ht @ Sc ho ol of M ed ici ne an dP rm TÀI LIỆU THAM KHẢO MỞ ĐẦU VN U Lịch sử kháng sinh thương mại tóm tắt ngắn gọn, ac y, với liệu từ Hoa Kì WHO, cho thấy tỷ lệ tử vong giảm bệnh truyền nhiễm kỷ 20, từ nửa số ca tử vong xuống 10% Nửa sau kỷ 20 chứng kiến việc sử dụng kháng sinh làm chất kích thích tăng trưởng cho động vật làm thực phẩm cho người chế độ ăn uống, dP rm cuối kỷ 20 đầu kỷ 21 khởi đầu gia tăng nhanh chóng việc vi khuẩn kháng kháng sinh [11] Kháng kháng sinh vấn đề phức tạp vượt qua ranh giới quốc tế Nó dự đốn giết chết 10 triệu người toàn cầu năm gây thiệt hại cho kinh tế tồn cầu 100 nghìn tỷ la Mỹ vào năm 2050 ed ici ne an [20] Tình trạng kháng kháng sinh ngày gia tăng khắp giới, sở y tế có trang thiết bị đầy đủ đại nhất, việc điều trị khó khăn, phải phối hợp với thuốc có độc tính cao gây nhiều tác dụng phụ chi phí vơ tốn Một số trường hợp có qua khỏi Tuy nhiên, kháng kháng sinh thuận nghịch, sức đề kháng cộng M đồng người điều trị kháng sinh giảm theo cấp số nhân đến năm sau kết thúc điều trị kháng sinh Các nghiên cứu tổng ho ol of quan thực có hệ thống chứng minh kháng sinh mang lại lợi ích nhỏ cho bệnh nhiễm trùng [20] Các chiến dịch y tế công cộng nhiều quốc gia tìm cách xóa bỏ quan niệm cho kháng sinh cần thiết gửi số thơng điệp tình trạng kháng kháng sinh @ Sc Vì vậy, cần có giải pháp việc nâng cao hiệu sử dụng kháng sinh giảm thiểu tình trạng kháng kháng sinh Trong năm gần đây, với phát triển công nghệ nano, ht hệ dẫn thuốc nano cho thấy tiềm to lớn chúng việc py rig vận chuyển phân phối thuốc hiệu tới tác nhân gây bệnh, làm tăng tác dụng hiệu điều trị thuốc Hiệu mà hệ dẫn thuốc nano đem Co lại bắt nguồn từ đặc tính lý hóa đặc biệt chúng Sở hữu kích thước siêu nhỏ, tỉ lệ diện tích bề mặt / thể tích lớn, hạt nano tạo tiếp xúc bề mặt với vi khuẩn lớn tạo điều kiện thuận lợi để thâm nhập vào tế bào vi khuẩn Chúng có khả làm thay đổi chức tế bào tính thấm VN U hơ hấp Ngồi ra, chúng có ảnh hưởng đến phân chia tế bào, ức chế ac y, phá vỡ cấu trúc protein có nitơ, lưu huỳnh ngăn cản chép DNA vi khuẩn cách can thiệp vào nhóm sulfhydryl [15] Ngày nay, việc sử dụng hạt nano kháng khuẩn ngày ý Các loại vật liệu nano có tính kháng khuẩn vàng, niken, bạc, oxit sắt, kẽm oxit, dP rm titan đioxit xuất bạc vật liệu có tính kháng khuẩn mạnh nghiên cứu phổ biến có khả kháng khuẩn tốt với vi khuẩn, vi rút vi sinh vật nhân thực khác Tuy nhiên, việc sử dụng hạt nano kim loại gây số tác dụng phụ không mong muốn tế bào vật chủ Chẳng hạn nano bạc gây tượng da bị ed ici ne an nhuộm màu xanh hay xanh xám (argyria) sử dụng với lượng lớn, nano kẽm gây tổn thương gan, thận [1] Do vậy, nhằm khắc phục tác dụng phụ nano kim loại giảm thiểu tình trạng kháng kháng sinh, nhà nghiên cứu đưa giải pháp tạo hệ dẫn thuốc nano kết hợp kháng sinh với hạt nano kháng khuẩn M Dựa vấn đề trên, với mong muốn tạo hệ dẫn thuốc hiệu quả, tiến hành đề tài “Nghiên cứu chế tạo hệ kháng sinh nano of sở hạt nano oxit sắt từ” với mục tiêu: (i) Bào chế hệ nano sắt từ gắn nano bạc ho ol (ii) Bào chế hệ dẫn thuốc nano sắt từ gắn nano bạc kháng sinh Co py rig ht @ Sc Doxycycline VN U ac y, dP rm an ed ici ne M of ol ho Sc @ ht rig Co py Hình 6: Phổ hồng ngoại FTIR hợp chất 23 3.3 Phổ tán sắc lượng tia X (EDX) VN U Phổ tán sắc lượng tia X (EDX) sử dụng để xác định thành ed ici ne an dP rm ac y, phần Bạc (Ag) bám bề mặt hạt sắt từ Hình 8: Phổ EDX mẫu Fe3O4@SiO2-Ag với tỉ lệ bạc đầu vào 10% Ag Co py rig ht @ Sc ho ol of M Hình 7: Phổ EDX mẫu Fe3O4@SiO2-Ag với tỉ lệ bạc đầu vào 5% Ag 24 VN U ac y, dP rm an Hình 9: Phổ EDX mẫu Fe3O4@SiO2-Ag với tỉ lệ bạc đầu vào 15% Ag ed ici ne Bảng 3: Thành phần bạc hạt nano Fe3O4 @SiO2-Ag Tỉ lệ Ag/Fe3O4 đầu vào (% khối lượng) 5%Ag 10%Ag 15%Ag 3,75 7,50 11,25 0,74 1,86 2,15 19,73 24,80 19,11 M Lượng Ag sử dụng đầu vào (mg) ho Hiệu suất (%) ol of Lượng Ag bám vào hạt sắt từ (mg) (Kết thu phương pháp EDX) @ Sc Bằng cách giữ nguyên khối lượng hạt Fe3O4@SiO2 thay đổi khối lượng Ag đầu vào, thu kết bảng Khi lượng Ag đầu vào tăng lên tăng lượng bạc bám nano Nhưng tăng Ag từ py rig ht 10% lên 15% hiệu suất Ag bám hệ Fe3O4@SiO2 giảm tổng lượng Ag bám hạt nano Fe3O4@SiO2 tăng Điều lý giải q trình gắn kết hạt Ag lên bề mặt hạt nano sắt từ đạt tới trạng thái bão hịa Vì mà lượng Ag tăng hiệu suất gắn bạc lại giảm Để thực lý giải giả thiết này, thí nghiệm chi tiết phải Co thực khoảng đầu vào Ag từ 10-15% 25 M2.1 M1.2 M2.2 dP rm ac y, M1.1 VN U 3.4 Ảnh hiển vi điện tử quét (FESEM) ed ici ne an M2.3 M M1.3 @ Sc ho ol of M2.3 rig ht Hình 10: Hình ảnh FESEM hệ mẫu thu thay đổi nồng độ alginate nồng độ kháng sinh (M1.X, X=1,2,3 M2.Y, Y=1,2,3) py Hình ảnh hiển vi hệ hạt nano sau q trình tải thuốc Doxycycline bền hóa alginate thể hình Các kết Co FESEM sản phẩm thu thay đổi nồng độ Alg (M1.X) kháng sinh (M2.X) Kết cho thấy mẫu có kích thước nhỏ dạng cầu, dao 26 động khoảng 20-30 nm Kích thước có xu hướng tăng lên tăng nồng độ VN U polyme kháng sinh Ở nồng độ kháng sinh alginate nhỏ thu trạng thái phân tán dung dịch dP rm 3.5 Phân bố kích thước (DLS) ac y, mg/ml, hạt phân bố đều, có tượng kết đám xảy Hiện kết đám quan sát rõ ràng mẫu có nồng độ kháng sinh alginat cao (4 mg/ml) Để có kết chi tiết hơn, phương pháp tán xạ laze động sử dụng để nghiên cứu phân bố kích thước kích thước trung bình hệ M1.1 ed ici ne an M2.1 M2.2 M M1.2 M2.3 @ Sc ho ol of M1.3 Hình 11: Phân bố kích thước hạt hệ mẫu thu thay đổi nồng độ Alg ht (M1.X) nồng độ kháng sinh (M2.X) py rig Phương pháp tán xạ laze động (DLS) sử dụng để xác định kích thước thủy động học hạt nano phân tán nước Trong thí Co nghiệm này, nồng độ chuẩn mẫu dựa nồng độ hạt nano Fe3O4 Nồng độ chuẩn giữ cố định tất phép đo mg Fe3O4/ml Các kết thu thể hình 11 27 Bảng 4: Kích thước trung bình hệ mẫu Alg Doxy M1.1 0.5 M1.2 2 M1.3 M2.1 2 M2.2 2 M2.3 2 86 163 0.5 82 86 198 an ed ici ne 63 dP rm Fe3O4 trung bình (nm) ac y, Nồng độ (mg/mL) Kí hiệu mẫu VN U Kích thước M Các giá trị kích thước (bảng 4) thu lớn quan sát từ ảnh FESEM Nguyên nhân trạng thái tồn khác vật ho ol of liệu đo phương pháp khác Đối với phương pháp FESEM, mẫu chụp trạng thái khô, polyme (alginate) tồn trạng thái chặt chẽ Trong đó, phương pháp DLS, hạt tồn Sc môi trường nước, phân tử polyme có tượng trương nở làm cho bán kính động học hạt tăng lên @ Từ kết trên, kích thước hạt trung bình hệ bị ảnh hưởng nồng độ alginate nồng độ kháng sinh Doxycyclin Khi nồng độ Alg tăng từ rig ht 0,5 – mg/ml kích thước trung bình có thay đổi lớn từ 63-163nm (bảng 4, hình 12) Với vai trị chất làm bền không gian, khối lượng Alginate tăng lên, bao bọc quanh hạt rắn có mật độ lớn hơn, py polyme nước trương nở với lượng lớn làm tăng bán kính thủy động Co hạt phân tán mà kích thước trung bình tăng 28 VN U 180 160 120 ac y, D (nm) 140 100 60 0.0 0.5 1.0 1.5 2.0 2.5 dP rm 80 3.0 3.5 4.0 4.5 Nong Alg (mg/ml) Hình 12: Ảnh hưởng nồng độ alginate đến kích thước trung bình hệ phân tán an Fe3O3@SiO2-Ag/Doxy/Alg ed ici ne 200 180 160 120 M D (nm) 140 100 of 80 ol 60 0.5 1.0 1.5 2.0 2.5 3.0 3.5 4.0 4.5 Nong Doxy (mg/ml) ho 0.0 @ Sc Hình 13: Ảnh hưởng nồng độ Doxycycline đến kích thước trung bình hệ phân tán Fe3O4@SiO2-Ag/Doxy/Alg rig ht Khi thay đổi nồng độ kháng sinh xảy thay đổi kích thước trung bình hệ, kích thước tăng lên (bảng 4, hình 13) Các loại muối có ảnh hưởng lớn tới phân bố kích thước hạt hệ phân tán nano, py tăng nồng độ muối hệ phân tán, kích thước trung bình Co hạt hệ phân tán tăng từ đến 100nm [38] Hiện tượng đề cập tới thay đổi giá trị điện tích bề mặt hạt nano Kháng sinh chất tan, tồn dạng ion mang điện dung dịch, nên tăng nồng 29 độ chúng lên tương tác tĩnh điện phân tử kháng sinh bề Co py rig ht @ Sc ho ol of M ed ici ne an dP rm ac y, VN U mặt hạt nano bị thay đổi, làm ảnh hưởng đến độ bền hệ 30 Trong đề này, nghiên cứu thành công: VN U CHƯƠNG 4: KẾT LUẬN VÀ ĐỀ XUẤT ac y, - Hệ nano sắt từ gắn nano bạc - Quy trình chế tạo hệ mang thuốc kháng sinh (Doxycycline) sở hạt nano oxit sắt từ (Fe3O4) gắn bạc làm bền alginate Việc kết hợp nhiều thành phần có tính kháng khuẩn (Nano Fe3O4, bạc dP rm kháng sinh) kì vọng làm tăng hiệu kháng khuẩn hệ dẫn thuốc thu được, đồng thời đối phó với tình trạng kháng kháng sinh ngày trở nên đáng lo ngại Các yếu tố ảnh hưởng đến phân bố kích thước hạt hệ kháng sinh gồm nồng độ alginate nồng độ kháng sinh khảo sát Kết cho ed ici ne an thấy, tăng nồng độ alginate kháng sinh làm tăng kích thước trung bình hệ phân tán Hệ có kích thước trung bình nhỏ 100 nm nồng độ alginate nhỏ mg/ml nồng độ kháng sinh nhỏ mg/ml Để đánh giá hiệu thực tế hệ kháng sinh nano chế tạo, cần nhiều thí nghiệm liên quan tới trình chế tạo vật liệu M thử nghiệm đối tượng vi khuẩn thực tế: định lượng kháng sinh hệ bào chế, xác định đặc tính phóng thích thuốc từ hệ vật liệu Co py rig ht @ Sc ho ol of thử nghiệm khả kháng khuẩn vật liệu số loài vi khuẩn 31 TÀI LIỆU THAM KHẢO VN U TÀI LIỆU TIẾNG VIỆT TÀI LIỆU TIẾNG ANH dP rm ac y, Nguyễn Thanh Hải, Chử Thị Thu Huyền, Nguyễn Thanh Bình Trịnh Ngọc Dương (2014), " Nano tiểu phân bạc triển vọng ứng dụng Dược học", VNU Journal of Science: Natural Sciences and Technology, 30(2), p 23-32 Ahmad Z, Pandey R, Sharma S and Khuller G K (2006), " Alginate nanoparticles as antituberculosis drug carriers: formulation an development, pharmacokinetics and therapeutic potential", Indian J Chest Dis Allied Sci, 48(3), p 171-176 Assa F, Jafarizadeh-Malmiri H, Ajamein H, Vaghari H, Anarjan N, Ahmadi O and Berenjian A (2017), " Chitosan magnetic nanoparticles ed ici ne for drug delivery systems", Crit Rev Biotechnol, 37(4), p 492-509 Atiyeh B S, Costagliola M, Hayek S N and Dibo S A (2007), " Effect of silver on burn wound infection control and healing: review of the M literature", Burns, 33(2), p 139-148 Azhar S L and Lotfipour F (2012), " Magnetic nanoparticles for of ol antimicrobial drug delivery", Pharmazie, 67(10), p 817-821 Banerjee P, Satapathy M, Mukhopahayay A and Das P (2014), " Leaf ho Sc extract mediated green synthesis of silver nanoparticles from widely available Indian plants: synthesis, characterization, antimicrobial @ property and toxicity analysis", Bioresources and Bioprocessing, 1(1), p ht Chaloupka K, Malam Y and Seifalian A M (2010), " Nanosilver as a new generation of nanoproduct in biomedical applications", Trends rig py Biotechnol, 28(11), p 580-588 Co Chandrasekaran R, Gnanasekar S, Seetharaman P, Keppanan R, Arockiaswamy W and Sivaperumal S (2016), " Formulation of Carica papaya latex-functionalized silver nanoparticles for its improved antibacterial and anticancer applications", Journal of Molecular VN U Liquids, 219, p 232-238 Chen X and Schluesener H J (2008), " Nanosilver: a nanoproduct in medical application", Toxicol Lett, 176(1), p 1-12 10 Col N F and O'Connor R W (1987), " Estimating worldwide current antibiotic usage: report of Task Force 1", Rev Infect Dis, 9(3), p S232- ac y, 11 Dodds D R (2017), " Antibiotic resistance: A current epilogue", Biochem Pharmacol, 134, p 139-146 Dos Santos C A, Seckler M M, Ingle A P, Gupta I, Galdiero S, Galdiero M, Gade A and Rai M (2014), " Silver nanoparticles: an 12 dP rm 243 13 ed ici ne therapeutical uses, toxicity, and safety issues", J Pharm Sci, 103(7), p 1931-1944 Gajbhiye M, Kesharwani J, Ingle A, Gade A and Rai M (2009), " Fungus-mediated synthesis of silver nanoparticles and their activity against pathogenic fungi in combination with fluconazole", Gu H, Ho P L, Tong E, Wang L and Xu B (2003), " Presenting of 14 M Nanomedicine, 5(4), p 382-386 15 ho ol Vancomycin on Nanoparticles to Enhance Antimicrobial Activities", Nano Letters, 3(9), p 1261-1263 Kim J S, Kuk E, Yu K N, Kim J H, Park S J, Lee H J, Kim S H, Park Y Sc K, Park Y H, Hwang C Y, Kim Y K, Lee Y S, Jeong D H and Cho M H @ (2007), " Antimicrobial effects of silver nanoparticles", Nanomedicine, 3(1), p 95-101 Krithiga N, Rajalakshmi A and Jayachitra A, Green Synthesis of Silver Nanoparticles Using Leaf Extracts of Clitoria ternatea and Solanum py rig ht 16 Co 17 nigrum and Study of Its Antibacterial Effect against Common Nosocomial Pathogens Vol 2015 2015 Kuppusamy P, Ichwan S J, Parine N R, Yusoff M M, Maniam G P and Govindan N (2015), " Intracellular biosynthesis of Au and Ag nanoparticles using ethanolic extract of Brassica oleracea L and studies VN U on their physicochemical and biological properties", J Environ Sci, 29, p 151-157 Kuppusamy P, Yusoff M M, Maniam G P and Govindan N (2016), " Biosynthesis of metallic nanoparticles using plant derivatives and their new avenues in pharmacological applications - An updated report", ac y, 18 19 dP rm Saudi Pharm J, 24(4), p 473-484 Li P, Li J, Wu C, Wu Q and Li J (2005), " Synergistic antibacterial effects of β-lactam antibiotic combined with silver nanoparticles", Nanotechnology, 16(9), p 1912-1917 20 McCullough A R, Parekh S, Rathbone J, Del Mar C B and Hoffmann T ed ici ne an C, A systematic review of the public's knowledge and beliefs about antibiotic resistance-authors' response J Antimicrob Chemother 2016 Aug;71(8):2366 doi: 10.1093/jac/dkw163 Epub 2016 May 10 Moghimi S M, Hunter A C and Murray J C (2005), " Nanomedicine: current status and future prospects", Faseb J, 19(3), p 311-330 22 Munita J M and Arias C A (2016), " Mechanisms of Antibiotic M 21 Nam G, Rangasamy S, Purushothaman B and Song J M (2015), " The Application of Bactericidal Silver Nanoparticles in Wound Treatment", ol 23 of Resistance", Microbiol Spectr, 4(2), p 0016-2015 Patil M, Anirudh R, Ngabire D and Kim G-D, Green Synthesis of Silver Sc 24 ho Nanomaterials and Nanotechnology, 5, p 23 @ Nanoparticles Using Water Extract from Galls of Rhus Chinensis and Its Antibacterial Activity Vol 27 2016 1737-1750 Patil M P and Kim G D (2017), " Eco-friendly approach for nanoparticles synthesis and mechanism behind antibacterial activity of Co py rig ht 25 silver and anticancer activity of gold nanoparticles", Appl Microbiol Biotechnol, 101(1), p 79-92 26 Poyhonen H, Nurmi M, Peltola V, Alaluusua S, Ruuskanen O and VN U Lahdesmaki T (2017), " Dental staining after doxycycline use in children", J Antimicrob Chemother, 72(10), p 2887-2890 Radzig M A, Nadtochenko V A, Koksharova O A, Kiwi J, Lipasova V A and Khmel I A (2013), " Antibacterial effects of silver nanoparticles on gram-negative bacteria: influence on the growth and biofilms ac y, 27 dP rm formation, mechanisms of action", Colloids Surf B Biointerfaces, 102, p 300-306 28 Salouti M and Ahangari A, Nanoparticle based Drug Delivery Systems for Treatment of Infectious Diseases 2014 29 Schabes-Retchkiman P S, Canizal G, Herrera-Becerra R, Zorrilla C, ed ici ne an Liu H B and Ascencio J A (2006), " Biosynthesis and characterization of Ti/Ni bimetallic nanoparticles", Optical Materials, 29(1), p 95-99 Senthil M and Ramesh C, Biogenic synthesis of Fe3O34 nanoparticles using tridax procumbens leaf extract and its antibacterial activity on Pseudomonas aeruginosa Vol 2012 1655-1661 31 Seth D, Choudhury S R, Pradhan S, Gupta S, Palit D, Das S, Debnath M 30 of N and Goswami A (2011), " Nature-inspired novel drug design Shameli K, Ahmad M B, Jazayeri S D, Shabanzadeh P, Sangpour P, ho 32 ol paradigm using nanosilver: efficacy on multi-drug-resistant clinical isolates of tuberculosis", Curr Microbiol, 62(3), p 715-726 Sc Jahangirian H and Gharayebi Y (2012), " Investigation of antibacterial Shen J M, Gao F Y, Yin T, Zhang H X, Ma M, Yang Y J and Yue F (2013), " cRGD-functionalized polymeric magnetic nanoparticles as a py rig ht 33 @ properties silver nanoparticles prepared via green method", Chem Cent J, 6(1), p 6-73 Co 34 dual-drug delivery system for safe targeted cancer therapy", Pharmacol Res, 70(1), p 102-115 Singh Malik D, Mital N and Kaur G (2016), " Topical drug delivery systems: a patent review", Expert Opin Ther Pat, 26(2), p 213-228 35 Sun C, Lee J S and Zhang M (2008), " Magnetic nanoparticles in MR VN U imaging and drug delivery", Adv Drug Deliv Rev, 60(11), p 12521265 Sun R W, Chen R, Chung N P, Ho C M, Lin C L and Che C M (2005), " Silver nanoparticles fabricated in Hepes buffer exhibit cytoprotective activities toward HIV-1 infected cells", Chem Commun, 28(40), p ac y, 36 37 dP rm 5059-5061 Tang L, Wang X, Guo B, Ma M, Chen B, Zhan S and Yao S, Salttriggered liquid phase separation and facile nanoprecipitation of aqueous colloidal gold dispersion in miscible biofluids for direct chromatographic measurement Vol 2013 15875-15886 an Tang L, Wang X, Guo B, Ma M, Chen B, Zhan S and Yao S (2013), " Salt-triggered liquid phase separation and facile nanoprecipitation of ed ici ne 38 aqueous colloidal gold dispersion in miscible biofluids for direct chromatographic measurement", RSC Advances, 3(36), p 1587515886 Taylor E N and Webster T J (2009), " The use of superparamagnetic M 39 nanoparticles for prosthetic biofilm prevention", Int J Nanomedicine, 4, ol Tran N, Mir A, Mallik D, Sinha A, Nayar S and Webster T J (2010), " Bactericidal effect of iron oxide nanoparticles on Staphylococcus ho 40 of p 145-152 Trefry J C and Wooley D P (2013), " Silver nanoparticles inhibit vaccinia virus infection by preventing viral entry through a @ 41 Sc aureus", Int J Nanomedicine, 5, p 277-283 rig ht macropinocytosis-dependent mechanism", J Biomed Nanotechnol, 9(9), p 1624-1635 Co py 42 Zhang L, Gu F X, Chan J M, Wang A Z, Langer R S and Farokhzad O C (2008), " Nanoparticles in medicine: therapeutic applications and developments", Clin Pharmacol Ther, 83(5), p 761-769 Zhang L, Li Y, Wang Y, Sajid A, Ahmed S and Li X (2018), " Integration of pharmacokinetic-pharmacodynamic for dose VN U 43 Co py rig ht @ Sc ho ol of M ed ici ne an dP rm ac y, optimization of doxycycline against Haemophilus parasuis in pigs", J Vet Pharmacol Ther, 41(5), p 706-718