NGHIÊN CỨU TÍNH ĐA HÌNH DI TRUYỀN VÀ VAI TRÒ TRUYỀN BỆNH CỦA CÁC THÀNH VIÊN TRONG NHÓM LOÀI ANOPHELES MACULATUS Ở VIỆT NAM

Mục lục Trang Trang phụ bìa Lời cam đoan Mục lục Danh mục ký hiệu chữ viết tắt Danh mục bảng Danh mục hình vẽ, đồ thị Mở đầu Ch-ơng : Tổng quan tài liệu 1.1 Đại c-ơng vấn đề nghiên cứu loài đồng hình 1.2 Đa hình di truyền nghiên cứu đa hình di truyền muỗi 1.2.1 Đa hình enzym ứng dụng để nghiên cứu đa hình di truyền muỗi 1.2.2 Di truyền tế bào ứng dụng nghiên cứu đa hình di truyền 13 1.2.3 Đại c-ơng PCR ứng dụng nghiên cứu đa hình di truyền muỗi 19 1.3 Những nghiên cứu vai trò truyền bệnh tính -a vật chủ vectơ 35 1.3.1 Những nghiên cứu vai trò truyền bệnh sốt rét muỗi 35 1.3.2 Xác định tÝnh -a vËt chđ cđa vect¬ 35 1.4 Những nghiên cứu nhóm loµi An maculatus 36 1.4.1 Những nghiên cứu n-ớc 37 1.4.2 Nghiªn cøu n-íc 41 Ch-ơng : Đối t-ợng ph-ơng pháp nghiên cứu 43 2.1 Đối t-ợng nghiên cứu 43 2.2 Thời gian nghiên cứu, địa điểm nghiên cøu 43 2.3 Ph-ơng pháp nghiên cứu 43 2.3.1 Ph-ơng pháp thu thập xử lý mẫu vật thực địa 45 2.3.2 Nghiên cứu phòng thí nghiệm 45 Ch-¬ng : Kết nghiên cứu 60 Đa hình dấu hiệu kiểu hình thành viên nhóm loài An maculatus 60 3.1.1 Đa hình dấu hiệu hình thái thành viên nhóm loµi An maculatus 60 3.1.2 Đa hình di trun c¸c dÊu hiƯu sinh häc, sinh th¸i häc thành viên nhóm loài An maculatus 80 3.2 Đa hình di truyền tế bào dấu hiệu kiểu gen thành viên nhóm loài An maculatus 89 3.2.1 Đa hình dấu hiệu di truyền tế bào thành viên nhóm loài An maculatus 89 3.2.2 Đa hình di truyền đặc điểm điện di enzym thành viên nhãm loµi An maculatus 92 3.2.3 Kết phân tích đa hình dựa vào thị PCR-RFLP nhóm loài An maculatus 112 3.2.4 Kết đánh giá đa hình di truyền thành viên nhóm loài An maculatus dựa vào thị RAPD 116 3.2.5 Định loại thành viên nhóm loài An maculatus PCR đa måi 126 3.2.6 Kết đánh giá đa hình di truyền thành viên nhóm loài An maculatus dựa vào kết giải trình tự đoạn ITS2 128 3.3 Thành phần loài phân bố thành viên nhóm loµi An maculatus 135 3.3.1 Bảng định loại thành viên đà xác định tên nhóm loµi 135 An maculatus 135 3.3.2 Phân bố thành viên nhóm loài An maculatus 137 3.4 Vai trß trun bƯnh thành viên nhóm loài An maculatus 141 Ch-ơng 4: Bàn luận 144 4.1 §a hình di truyền mối quan hệ di truyền thành viên nhóm loài An maculatus 144 4.1.1.Đa hình dấu hiệu kiểu hình thành viên nhóm loài An maculatus 144 4.1.2 Đa hình di truyền dấu hiệu kiểu gen thành viên nhóm loài An maculatus Việt Nam 155 4.2 Thành phần loài phân bố thành viên nhóm loài An maculatus 161 4.2.1 Xây dựng bảng định loại thành viên đà đ-ợc định tên nhóm loài An maculatus Việt Nam 161 4.2.2 Ph©n bố thành viên nhóm loài An maculatus 162 4.3 Vai trß trun bƯnh cđa thành viên nhóm loài An maculatus 163 KÕt luËn 164 Các công trình tác giả liên quan đến luận án đà công bố 167 NHững đóng góp luận ¸n 168 tài liệu tham khảo 169 Phô lôc 189 danh mơc c¸c ký hiệu chữ viết tắt ADN: Acid Deoxyribonucleic ALDOX: aldehyde oxidase An : Anopheles ATP: Adenosine triphosphate bp: cặp bazơ (Base pair) COI: Gen ti thÓ Cytochrome C oxidase I cs: Cộng ctv: Cộng tác viên DN: Khoảng cách di truyÒn (Genetic distance) dATP: deoxyadenosine triphosphate dCTP: deoxycytidine triphosphate dGTP: deoxyguanosine triphosphate dNTP: deoxynucleoside triphosphate dTTP: deoxythymidine triphosphate (E.C): M· sè enzym (Enzym code) (Enzym commission) EC: Céng ®ång Châu Âu (European commission) EDTA: Ethylenediamine tetraacetic acid ELISAs: Thử nghiệm miễn dịch hấp phụ liên kết enzym (enzym linked immunosorbent assay) EST: Esterase et al: ng-ời khác EtBr: Ethidium bromide FUM: Fumerate hydratase GPI: Glucosephosphate isomerase GPDH: glycerophosphate dehydrogenase HAD: D-2- Hydroxy- Acid dehydrogenase HK: Hexokinase IGS: Intergenic space (Vïng ®Ưm néi gen) ITS: Internal transcripbed spacer (Vùng đệm nội phiên mÃ) IDH: Isocitrate dehydrogenase IN : Hệ số t-ơng đồng di truyền (Genetic Identity) KST: Ký sinh trïng LAP: Leucine aminopeptidase LDH: Lactate dehydrogenase Mabs: Kh¸ng thể đơn dòng ( Monoclone antibody) MDH: Malate dehydrogenase ME: Malic enzym MPI: Manosephosphate isomerase NAD: 1-Naphthaleneacetamide NST: NhiƠm s¾c thể ODH: Octanol dehydrogenase P.: Plasmodium PCR: Phản ứng chuỗi trùng hợp (Polymerase chain reaction) PGM: Phosphoglutamutase QT: Quần thể RAPD: Đa hình đoạn nhân ngẫu nhiên (Random Amplified Polymorphic DNA ) RFLP: Đa hình đoạn phân cắt giới hạn (Restriction Fragment Length Polymorphism) PGM: Phosphoglucomutase Rf: Tốc độ chuyển dịch t-ơng đối cấu tử điện di ARN: Acid ribonucleic Ribosome SSCP: Đa hình cấu tạo sợi đơn r ( Single Strand Conformational polymorphism) SDS: Sodium dodecyl sulfate TBE: Tris-Borate-EDTA TE: Tris-EDTA ViƯn SR-KST-CT T¦: ViƯn Sốt rét - Ký sinh trùng-Côn trùng Trung -ơng XDH: xanthine dehydrogenase WHO: Tỉ chøc y tÕ thÕ giíi (World Health organization) danh mục bảng Bảng 2.1: Các enzym giới hạn trình tự giới hạn t-ơng ứng 53 Bảng 2.2: Thành phần chÊt tham gia ph¶n øng PCR 53 Bảng 2.3: Thành phần chất tham gia vào phản ứng giới hạn enzym Cfr131, Alul, XbaI, BamHI 54 Bảng 2.4: Thành phần chất tham gia vào phản ứng giới hạn enzym Msp1 EcoRI, HindII, HaeII, HeaIII, HindIII 54 Bảng 2.5: Trình tự mồi ngẫu nhiên sử dụng cho phản ứng RAPD- PCR 55 Bảng 2.6: Thành phần chất tham gia vào phản ứng RAPD- PCR 55 Bảng 2.7: Trình tự xếp mẫu thử nghiƯm ELISA 57 B¶ng 2.8: Trình tự mồi để xác định thoa trùng muỗi 58 Bảng 3.1: Số l-ợng mẫu vật thu đ-ợc từ dòng gia đình để cung cấp dấu hiệu phân loại thành viên nhãm An maculatus 60 Bảng 3.2: Số l-ợng mẫu vật đà thu thập giai đoạn 2001-2005 61 Bảng 3.3: Số l-ợng bọ gậy thành viên nhóm loài An maculatus thu thập đ-ợc kiểu ổ n-íc kh¸c 81 Bảng 3.4: Số l-ợng tỷ lệ loài muỗi thuộc nhóm loài An maculatus thu thập Quảng Bình giai đoạn 2001-2005 86 Bảng 3.5: Số l-ợng tỷ lệ loài muỗi thuộc nhóm loài An maculatus thu thập Sơn La giai đoạn 2001-2005 87 B¶ng 3.6: Sè l-ợng tỷ lệ loài muỗi thuộc nhóm loài An maculatus thu thập Hoà Bình giai đoạn 2001-2005 88 Bảng 3.7: Tần số alen mà hóa enzym ODH thành viên nhóm An maculatus 93 Bảng 3.8: Tần số alen mà hóa enzym LDH thành viên nhóm An maculatus 94 Bảng 3.9: Tần số alen mà hóa enzym MDH thành viên nhóm An maculatus 96 Bảng 3.10: Tần số alen mà hóa enzym GOT thành viên nhãm An maculatus 97 B¶ng 3.11: Tần số alen mà hóa enzym 6PGD thành viên nhóm An maculatus 100 Bảng 3.12: Tần số alen mà hóa enzym IDH thành viên nhóm An maculatus 101 Bảng 3.13: Tần số alen mà hóa enzym PGM thành viên nhóm An maculatus 103 Bảng 3.14: Tần số alen mà hóa enzym MPI thành viên nhóm An maculatus 103 Bảng 3.15: Tần số alen mà hóa enzym -GPD thành viên nhãm An maculatus 105 B¶ng 3.16: Tần số alen mà hóa enzym MPI thành viên nhóm An maculatus 106 Bảng 3.17: Tần số alen mà hóa enzym HAD thành viên nhóm An maculatus 107 Bảng 3.18: Hệ số t-ơng đồng di truyền (I) khoảng cách di truyền (D) thành viên đà định tên nhóm loài An maculatus dựa số liệu phân tích izozym 108 Bảng 3.19: Hệ số t-ơng đồng di truyền khoảng cách di truyền thành viên toàn nhóm loài An maculatus dựa số liệu phân tích izozym 110 B¶ng 3.20: HƯ sè t-ơng đồng di truyền(I) khoảng cách di truyền (D) thành viên đà định tên nhóm loài An maculatus dùa trªn sè liƯu RAPD-PCR 122 Bảng 3.21: Hệ số t-ơng đồng di truyền khoảng cách di truyền thành viên toàn nhóm loài An maculatus dựa số liệu phân tÝch RAPD-PCR 124 Bảng 3.22: So sánh dấu hiệu đa hình di truyền kiểu hình kiểu gen thành viên nhóm loài An maculatus 134 Bảng 3.23: Phân bố loài thành viên nhóm loài An maculatus 138 Bảng 3.24: Kết thử nghiệm ELISA đánh giá vai trò truyền bệnh muỗi nhóm loài An maculatus Khánh Phú, Khánh Vĩnh, Khánh Hoà 141 Bảng 3.25: Kết thử nghiệm ELISA đánh giá vai trò truyền bệnh muỗi nhóm loài An maculatus Đắc Ơ, Ph-ớc Long, Bình Ph-ớc 141 Danh mục hình vẽ, Đồ thị Hình 1.1 Tháp Babel phát loài đồng hình Hình 1.2: Trình tự hình thái học Hình 1.3: Sơ đồ ph-ơng pháp mô tả đặc điểm loài đồng hình Hình 2.1: Thiết kế nghiên cứu đa hình di truyền vai trò truyền bệnh nhãm loµi An maculatus ë ViƯt Nam 44 Hình 2.2: Hình thái điện di enzym có cấu trúc monomer đ-ợc quy định bëi alen ®ång tréi .49 H×nh 2.3: H×nh thái điện di enzym có cấu trúc monomer đ-ợc quy ®Þnh bëi alen ®ång tréi .50 H×nh 2.4: Hình thái điện di enzym có cấu trúc dimer đ-ợc quy định alen đồng trội 50 Hình 2.5: Hình thái điện di enzym có cấu trúc tetramer đ-ợc quy định alen đồng trội .50 Hình 2.6: Hình thái điện di enzym có cấu trúc monomer đ-ợc quy định alen trội mét lỈn 51 Hình 3.1: Đa hình hình thái muỗi tr-ởng thành thành viên thuộc nhóm loài An maculatus .64 Hình 3.2: Đa hình quan sinh dục đực thành viên thuộc nhóm loài An maculatus 66 Hình 3.3: Hình ảnh số đặc điểm hình thái quăng An maculatus 67 Hình 3.4: Hình ảnh số đặc điểm hình thái quăng An maculatus d¹ng 67 H×nh 3.5: Hình ảnh số đặc điểm hình thái quăng cđa An maculatus d¹ng 68 Hình 3.6: Hình ảnh số đặc điểm hình thái quăng An maculatus dạng 68 Hình 3.7: Hình ảnh số đặc điểm hình thái quăng An dravidicus 69 Hình 3.8: Hình ảnh số đặc điểm hình thái quăng An notanandai 69 Hình 3.9: Hình ảnh số đặc điểm hình thái quăng An.pseudowillmori .70 Hình 3.10: Hình ảnh số đặc điểm hình thái quăng An sawadwongporni d¹ng 70 Hình 3.11: Hình ảnh số đặc điểm hình thái quăng An sawadwongporni dạng 71 H×nh 3.12: Hình ảnh số đặc điểm hình thái quăng cđa An sawadwongporni d¹ng 71 Hình 3.13: Hình ảnh số đặc điểm hình thái quăng An willmori .72 Hình 3.14: Hình ảnh số đặc điểm hình thái bọ gậy An maculatus 73 Hình 3.15: Hình ảnh số đặc điểm hình thái bọ gậy cđa An maculatus d¹ng 73 H×nh 3.16: Hình ảnh số đặc điểm hình thái bọ gËy cđa An maculatus d¹ng 74 Hình 3.17: Hình ảnh số đặc điểm hình thái bä gËy cđa An maculatus d¹ng 74 Hình 3.18: Hình ảnh số đặc điểm hình thái bọ gậy An dravidicus 75 Hình 3.19: Hình ảnh số đặc điểm hình thái bọ gậy An notanandai 75 Hình 3.20: Hình ảnh số đặc điểm hình thái bọ gậy An pseudowillmori 76 Hình 3.21: Hình ảnh số đặc điểm hình thái bọ gậy An sawadwongporni dạng 76 H×nh 3.22: Hình ảnh số đặc điểm hình thái bọ gËy cđa An sawadwongporni d¹ng 77 Hình 3.23: Hình ảnh số đặc điểm hình thái bọ gậy An sawadwongporni d¹ng 77 Hình 3.24: Hình ảnh số đặc điểm hình thái bọ gậy An willmori 78 Hình 3.25: Đa dạng hình thái trứng số thành viên nhóm loài An maculatus 79 H×nh 3.26: ỉ bä gËy cđa An notanandai vµ An sawadwongporni suối lớn .82 Hình 3.27: Vũng n-ớc đáy suối cạn có sỏi ổ bọ gậy thích hợp loài nhóm An maculatus 83 H×nh 3.28: ỉ bä gậy An dravidicus suối có đáy đá lớn 83 H×nh 3.29: ỉ bä gËy thÝch hợp An dirus, An minimus đồng thời bắt ®-ỵc An pseudowillmori .84 Hình 3.30: Hình ảnh nhiễm sắc thể kiểu nhân thành thành viên nhóm loµi An maculatus .91 Hình 3.31: Hình ảnh điện di enzym ODH thành viên nhóm loài An maculatus 93 Hình 3.32: Hình ảnh điện di enzym LDH thành viên phức hợp An maculatus 95 Hình 3.33: Hình ảnh điện di enzym MDH thành viên nhóm loài An maculatus 97 Hình 3.34: Hình ảnh điện di enzym 6PGD thành viên nhóm loài An maculatus 99 H×nh 3.35: : Hình ảnh điện di enzym IDH thành viên nhóm loài An maculatus 101 H×nh 3.36: Hình ảnh điện di enzym GPI thành viên nhóm loài An maculatus 104 H×nh 3.37 Hình ảnh điện di enzym HAD thành viên nhãm loµi An maculatus 106 Hình 3.38: Sơ đồ hình biểu thị mối quan hệ di truyền thành viên đà định tên nhóm loài An maculatus dựa số liệu phân tích izozym 108 Hình 3.39: Sơ đồ hình biểu thị mối quan hệ di truyền thành viên toàn nhóm loài An maculatus dựa số liệu phân tích izozym 111 Hình 3.40: Sản phẩm cắt đoạn ITS2 thành viên nhóm loài An maculatus b»ng enzym HeaIII 112 Hình 3.41: Sản phẩm cắt đoạn ITS2 thành viên nhóm loài An maculatus enzym HindII 113 Hình 3.42: Sản phẩm cắt đoạn ITS2 thành viên nhóm loài An maculatus enzym HeaII 114 H×nh 3.43: Sản phẩm cắt đoạn ITS2 thành viên nhãm loµi An maculatus b»ng enzym MspI 115 Hình 3.44: Sản phẩm cắt đoạn ITS2 thành viên nhóm loµi An maculatus b»ng enzym XbaI 115 Hình 3.45: Sản phẩm cđa ph¶n øng RAPD- PCR sư dơng måi A1 117 Hình 3.46: Sản phẩm phản ứng RAPD- PCR sư dơng måi A5 118 Hình 3.47: Sản phẩm phản ứng RAPD- PCR sử dụng mồi F2 119 Hình 3.48: Sản phẩm cđa ph¶n øng RAPD- PCR sư dơng måi OPL1 120 Hình 3.49: Sản phẩm phản ứng RAPD- PCR sư dơng måi F4 121 H×nh 3.50: Sơ đồ hình biểu thị mối quan hệ di truyền thành viên đà định tên nhóm loài An maculatus dựa vào số liệu RAPD-PCR 123 Hình 3.51: Sơ đồ hình biểu thị mối quan hệ di truyền thành viên nhóm loài An maculatus dùa vµo sè liƯu RAPD-PCR 125 Hình 3.52: Kết định loại thành viên nhóm loài An maculatus ph-ơng pháp PCR đa mồi theo C.Walton 127 H×nh 3.53: Hình ảnh giải trình tự đoạn gen ITS2 An maculatus dạng 128 Hình 3.54: So sánh kết giải trình tự với mẫu đà đ-ợc l-u gi÷ ë Genebank 129 Hình 3.55: Sự khác biệt kết giải trình tự An sawadwongporni thu Vân Nam Trung Quốc với mẫu An sawadwongporni l-u gi÷ ë Genebank 130 H×nh 3.56: KÕt t-ơng đồng trình tự An sawadwongporni thu Vân Nam Trung Quốc với mẫu An maculatus l-u giữ Genebank 130 Hình 57: So sánh kết giải trình tự thành viên đà định tên nhóm loài An maculatus 131 H×nh 3.58: Sơ đồ hình biểu thị mối quan hệ di truyền thành viên đà định tên nhóm loài An maculatus dựa vào số liệu giải trình tự ®o¹n ITS2 131 Hình 3.59: So sánh kết giải trình tự thành viên đà định tên nhóm loài An maculatus với trình tự nhóm loài đ-ợc l-u Genebank 132 Hình 3.60: Sơ đồ hình biểu thị mối quan hệ di truyền thành viên đà định tên nhóm loài An maculatus dựa vào số liệu giải trình tự đoạn ITS2 số liệu đ-ợc l-u giữ Genebank 133 Hình 3.61: Phân bố loài nhóm loài An maculatus 140 Hình 3.62: Kết thử nghiệm ELISA xác định thoa trùng P.vivax muỗi An maculatus Khánh Phú, Khánh Vĩnh, Khánh Hoà 142 Hình 3.63: Kết kiểm tra mẫu muỗi nhiễm P.falciparum Đắc Ơ, Ph-ớc Long, Bình Ph-ớc kü thuËt PCR lång 142 An sawadwongporni d¹ng 2, Locut : Idh1 ================================================== KiĨu gen Obs (O) Exp (E) (O-E)²/E 2*O*Ln(O/E) ================================================== bb 19 19.2787 0.0040 -0.5533 bc 11 10.4426 0.0298 1.1440 cc 1.2787 0.0607 -0.4917 ================================================== 2 : 0.094519 BËc tù do: P: 0.758509 An pseudowillmori d¹ng 2, Locut : Idh1 ================================================== KiÓu gen Obs (O) Exp (E) (O-E)²/E 2*O*Ln(O/E) ================================================== aa 21 21.1351 0.0009 -0.2694 ab 17 16.7838 0.0028 0.4352 bb 3.1622 0.0083 -0.3159 ad 10 9.9459 0.0003 0.1084 bd 3.8919 0.0030 0.2192 dd 1.0811 0.0061 -0.1559 ================================================== 2 : 0.021343 BËc tù do: P: 0.999176 An willmori d¹ng 2, Locut : Idh1 ================================================== KiĨu gen Obs (O) Exp (E) (O-E)²/E 2*O*Ln(O/E) ================================================== aa 1.1224 0.0134 -0.2310 ab 4.0408 0.2681 -1.7870 bb 3.1224 0.2466 1.9814 ac 4.7143 0.3506 2.8939 bc 7.7143 0.0661 -1.3603 cc 4.2857 0.0190 -0.5519 ================================================== 2 : 0.963914 BËc tù do: P: 0.809983 An maculatus d¹ng 3, Locut : Idh1 ================================================== KiÓu gen Obs (O) Exp (E) (O-E)²/E 2*O*Ln(O/E) ================================================== bb 18 17.8491 0.0013 0.3032 bc 8.3019 0.0110 -0.5927 cc 0.8491 0.0268 0.3273 ================================================== 2 : 0.039089 BËc tù do: P: 0.843273 An maculatus d¹ng 6, Locut : Idh1 ================================================== KiĨu gen Obs (O) Exp (E) (O-E)²/E 2*O*Ln(O/E) ================================================== bb 26 26.1639 0.0010 -0.3268 bc 4.6721 0.0230 0.6782 cc 0.1639 0.1639 0.0000 ====================================================== 2 : 0.187970 BËc tù do: P: 0.664612 An maculatus, Locut: Idh2 ================================================== KiÓu gen Obs (O) Exp (E) (O-E)²/E 2*O*Ln(O/E) ================================================== aa 0.3562 0.3562 0.0000 ab 11 10.6849 0.0093 0.6393 bb 73 73.5616 0.0043 -1.1190 ac 1.6027 0.0985 0.8857 bc 23 22.1918 0.0294 1.6455 cc 1.6027 0.2267 -0.9434 ================================================== 2: 0.724316 BËc tù do: P: 0.867470 An sawadwongporni, Locut: Idh2 ================================================== KiÓu gen Obs (O) Exp (E) (O-E)²/E 2*O*Ln(O/E) ================================================== aa 72 72.0497 0.0000 -0.0994 ab 18 17.9006 0.0006 0.1994 bb 1.0497 0.0024 -0.0971 ================================================== 2 : 0.002942 BËc tù do: P: 0.956743 An pseudowillmori, Locut: Idh2 ================================================== KiÓu gen Obs (O) Exp (E) (O-E)²/E 2*O*Ln(O/E) ================================================== aa 32 32.0435 0.0001 -0.0869 ab 2.9130 0.0026 0.1765 bb 0.0435 0.0435 0.0000 ================================================== 2 : 0.046133 BËc tù do: P: 0.829934 An willmori, Locut: Idh2 ================================================== KiÓu gen Obs (O) Exp (E) (O-E)²/E 2*O*Ln(O/E) ================================================== aa 0.9296 0.0053 0.1461 ab 10 10.1408 0.0020 -0.2797 bb 25 24.9296 0.0002 0.1410 ================================================== 2 : 0.007490 BËc tù do: P: 0.931033 An maculatus d¹ng 5, Locut : Idh2 ================================================== KiĨu gen Obs (O) Exp (E) (O-E)²/E 2*O*Ln(O/E) ================================================== aa 0.0061 0.0061 0.0000 ab 1.9030 0.0049 0.1988 bb 74 74.2182 0.0006 -0.4357 ac 0.0848 0.0848 0.0000 bc 6.6606 0.0173 0.6958 cc 0.1273 0.1273 0.0000 ================================================== 2 : 0.241058 BËc tù do: P: 0.970704 An maculatus d¹ng 4, Locut : Idh2 ================================================== KiÓu gen Obs (O) Exp (E) (O-E)²/E 2*O*Ln(O/E) ================================================== aa 0.0196 0.0196 0.0000 ab 1.9608 0.0008 0.0792 bb 24 24.0196 0.0000 -0.0392 ================================================== 2 : 0.020408 BËc tù do: P: 0.886403 An sawadwongporni d¹ng 3, Locut : Idh2 ================================================== KiĨu gen Obs (O) Exp (E) (O-E)²/E 2*O*Ln(O/E) ================================================== aa 12 12.0976 0.0008 -0.1943 ab 7.8049 0.0049 0.3951 bb 1.0976 0.0087 -0.1862 ================================================== 2 : 0.014337 BËc tù do: P: 0.904692 An sawadwongporni d¹ng 2, Locut : Idh2 ================================================== KiĨu gen Obs (O) Exp (E) (O-E)²/E 2*O*Ln(O/E) ================================================== aa 19 19.2787 0.0040 -0.5533 ab 11 10.4426 0.0298 1.1440 bb 1.2787 0.0607 -0.4917 ================================================== 2 : 0.094519 BËc tù do: P: 0.758509 An pseudowillmori d¹ng 2, Locut : Idh2 ================================================== KiÓu gen Obs (O) Exp (E) (O-E)²/E 2*O*Ln(O/E) ================================================== aa 35 35.2793 0.0022 -0.5563 ab 19 18.4414 0.0169 1.1339 bb 2.2793 0.0342 -0.5228 ================================================== 2 : 0.053349 BËc tù do: P: 0.867509 An maculatus d¹ng 6, Locut : Idh2 ================================================== KiÓu gen Obs (O) Exp (E) (O-E)²/E 2*O*Ln(O/E) ================================================== aa 0.0000 0.0000 0.0000 ab 0.9836 0.0003 0.0331 bb 29 29.0164 0.0000 -0.0328 ac 0.0164 0.0164 0.0000 bc 0.9836 0.0003 0.0331 cc 0.0000 0.0000 0.0000 ================================================== 2 : 0.016949 BËc tù do: P: 0.999416 Bảng 7: Kiểm định 2cân quần thể hệ enzym PGM thành viên nhóm loài An maculatus An maculatus ================================================== KiÓu gen Obs (O) Exp (E) (O-E)²/E 2*O*Ln(O/E) ================================================== aa 0.4795 0.5652 1.4702 ab 12 12.7397 0.0430 -1.4356 bb 79 78.5616 0.0024 0.8792 ac 1.3014 0.0698 -0.5268 bc 16 16.1370 0.0012 -0.2728 cc 0.7808 0.0615 0.4948 ================================================== 2 : 0.743042 BËc tù do: P: 0.863036 An notanandai ================================================== KiÓu gen Obs (O) Exp (E) (O-E)²/E 2*O*Ln(O/E) ================================================== aa 1.7910 0.0244 0.4414 ab 12 12.4179 0.0141 -0.8216 bb 20 19.7910 0.0022 0.4201 ================================================== 2 : 0.040649 BËc tù do: P: 0.840218 An sawadwongporni ================================================== KiÓu gen Obs (O) Exp (E) (O-E)²/E 2*O*Ln(O/E) ================================================== aa 7.0442 0.0003 -0.0881 ab 18 18.3149 0.0054 -0.6244 bb 11 11.4917 0.0210 -0.9621 ac 19 18.5967 0.0087 0.8153 bc 25 23.7017 0.0711 2.6665 cc 11 11.8508 0.0611 -1.6391 ================================================== 2 : 0.167685 BËc tù do: P: 0.982629 An pseudowillmori ================================================== KiÓu gen Obs (O) Exp (E) (O-E)²/E 2*O*Ln(O/E) ================================================== bb 8.6232 0.0165 0.7699 bc 17 17.7536 0.0320 -1.4748 cc 8.6232 0.0165 0.7699 ================================================== 2 : 0.064922 BËc tù do: P: 0.798879 An willmori ================================================== KiÓu gen Obs (O) Exp (E) (O-E)²/E 2*O*Ln(O/E) ================================================== bb 5.3239 0.0197 -0.6278 bc 18 17.3521 0.0242 1.3197 cc 13 13.3239 0.0079 -0.6399 ================================================== 2 : 0.051777 BËc tù do: P: 0.819999 An dravidicus ================================================== KiÓu gen Obs (O) Exp (E) (O-E)²/E 2*O*Ln(O/E) ================================================== aa 0.7746 0.0656 0.5107 ab 9.4507 0.0215 -0.8796 bb 26 25.7746 0.0020 0.4527 ================================================== 2 : 0.089021 BËc tù do: P: 0.765425 An maculatus d¹ng ================================================== KiĨu gen Obs (O) Exp (E) (O-E)²/E 2*O*Ln(O/E) ================================================== aa 1.2941 0.0668 -0.5157 ab 10 9.4118 0.0368 1.2125 bb 15 15.2941 0.0057 -0.5825 ================================================== 2 : 0.109266 BËc tù do: P: 0.740982 An sawadwongporni d¹ng ================================================== KiĨu gen Obs (O) Exp (E) (O-E)²/E 2*O*Ln(O/E) ================================================== aa 1.9024 0.0050 0.2000 ab 9.1951 0.0041 -0.3861 bb 10 9.9024 0.0010 0.1961 ================================================== 2 : 0.010105 BËc tù do: P: 0.919929 An sawadwongporni d¹ng ================================================== KiĨu gen Obs (O) Exp (E) (O-E)²/E 2*O*Ln(O/E) ================================================== bb 21 20.9016 0.0005 0.1972 bc 9.1967 0.0042 -0.3892 cc 0.9016 0.0107 0.2071 ================================================== 2 : 0.015401 BËc tù do: P: 0.901235 An pseudowillmori d¹ng ================================================== KiĨu gen Obs (O) Exp (E) (O-E)²/E 2*O*Ln(O/E) ================================================== bb 28 27.7568 0.0021 0.4886 bc 23 23.4865 0.0101 -0.9628 cc 4.7568 0.0124 0.4987 ================================================== 2 : 0.024647 BËc tù do: P: 0.875250 An willmori d¹ng ================================================== KiĨu gen Obs (O) Exp (E) (O-E)²/E 2*O*Ln(O/E) ================================================== bb 1.8571 0.0110 0.2964 bc 10 10.2857 0.0079 -0.5634 cc 13 12.8571 0.0016 0.2873 ================================================== 2 : 0.020513 BËc tù do: P: 0.886114 An maculatus d¹ng ================================================== KiĨu gen Obs (O) Exp (E) (O-E)²/E 2*O*Ln(O/E) ================================================== bb 0.8491 0.0268 0.3273 bc 8.3019 0.0110 -0.5927 cc 18 17.8491 0.0013 0.3032 ================================================== 2 : 0.039089 BËc tù do: P: 0.843273 An maculatus d¹ng ================================================== KiĨu gen Obs (O) Exp (E) (O-E)²/E 2*O*Ln(O/E) ================================================== bb 22 21.7377 0.0032 0.5277 bc 8.5246 0.0323 -1.0162 cc 0.7377 0.0933 0.6084 ================================================== 2 : 0.128708 BËc tù do: P: 0.719776 B¶ng 8: KiĨm định 2cân quần thể hệ enzym GPI thành viên nhóm loài An maculatus An maculatus ================================================== KiÓu gen Obs (O) Exp (E) (O-E)²/E 2*O*Ln(O/E) ================================================== aa 2.2648 0.0310 -0.4974 ab 28 27.4703 0.0102 1.0695 bb 80 80.2648 0.0009 -0.5288 ================================================== 2 : 0.042056 BËc tù do: P: 0.837512 An pseudowillmori ================================================== KiÓu gen Obs (O) Exp (E) (O-E)²/E 2*O*Ln(O/E) ================================================== bb 34 34.0000 0.0000 0.0000 bc 1.0000 0.0000 0.0000 ================================================== 2 : 0.00000 BËc tù do: P: 1.00000 An dravidicus ================================================== KiÓu gen Obs (O) Exp (E) (O-E)²/E 2*O*Ln(O/E) ================================================== aa 1.0986 0.0088 -0.1881 ab 11 10.8028 0.0036 0.3979 bb 24 24.0986 0.0004 -0.1968 ================================================== 2 : 0.012850 BËc tù do: P: 0.909745 An maculatus d¹ng ================================================== KiĨu gen Obs (O) Exp (E) (O-E)²/E 2*O*Ln(O/E) ================================================== aa 1.0364 0.0013 -0.0714 ab 17 16.9273 0.0003 0.1458 bb 65 65.0364 0.0000 -0.0727 ================================================== 2 : 0.001609 BËc tù do: P: 0.968006 An maculatus d¹ng ================================================== KiĨu gen Obs (O) Exp (E) (O-E)²/E 2*O*Ln(O/E) ================================================== aa 0.8824 0.0157 0.2503 ab 8.2353 0.0067 -0.4638 bb 17 16.8824 0.0008 0.2361 ================================================== 2 : 0.023229 BËc tù do: P: 0.878864 An sawadwongporni d¹ng ================================================== KiĨu gen Obs (O) Exp (E) (O-E)²/E 2*O*Ln(O/E) ================================================== aa 0.9016 0.0107 0.2071 ab 9.1967 0.0042 -0.3892 bb 21 20.9016 0.0005 0.1972 ================================================== 2 : 0.015401 BËc tù do: P: 0.901235 An maculatus d¹ng ================================================== KiĨu gen Obs (O) Exp (E) (O-E)²/E 2*O*Ln(O/E) ================================================== ab 1.0000 0.0000 0.0000 bb 30 30.0000 0.0000 0.0000 ================================================== 2 : 0.000000 BËc tù do: P: 1.000000 Bảng 9: Kiểm định 2cân quần thể hệ enzym -GPD thành viên nhãm loµi An maculatus An maculatus ================================================== KiĨu gen Obs (O) Exp (E) (O-E)²/E 2*O*Ln(O/E) ================================================== aa 10 9.4977 0.0266 1.0307 ab 4.4521 0.0459 -0.8566 bb 0.4795 0.5652 1.4702 ac 2.0776 0.0029 -0.1523 bc 0.4795 0.4795 0.0000 cc 0.0959 0.0959 0.0000 ad 37 37.3973 0.0042 -0.7903 bd 8.6301 0.0460 -1.2131 cd 4.0274 0.2349 2.1632 dd 36 35.9589 0.0000 0.0822 ea 2.0776 0.0029 -0.1523 be 0.4795 0.5652 1.4702 ce 0.2237 0.2237 0.0000 de 4.0274 0.0002 -0.0546 ee 0.0959 0.0959 0.0000 ================================================== 2 : 2.388918 BËc tù do: 10 P: 0.992397 An notanandai ================================================== KiÓu gen Obs (O) Exp (E) (O-E)²/E 2*O*Ln(O/E) ================================================== bb 0.9851 0.0002 0.0301 bc 5.9104 0.0014 0.1805 cc 7.8806 0.0018 0.2406 be 4.1194 0.0035 -0.2353 ce 11 11.3284 0.0095 -0.6471 ee 3.7761 0.0133 0.4608 ================================================== 2 : 0.029644 BËc tù do: P: 0.998655 An sawadwongporni ================================================== KiÓu gen Obs (O) Exp (E) (O-E)²/E 2*O*Ln(O/E) ================================================== aa 7.9061 0.0011 0.1890 ab 3.2818 0.0242 -0.5386 bb 0.3039 0.3039 0.0000 ad 35 34.9061 0.0003 0.1881 bd 7.1105 0.1113 1.8859 dd 37 37.4917 0.0064 -0.9769 ================================================== 2 : 0.447151 BËc tù do: P: 0.930339 An pseudowillmori ================================================== KiÓu gen Obs (O) Exp (E) (O-E)²/E 2*O*Ln(O/E) ================================================== aa 0.7971 0.0516 0.4535 ab 1.7536 0.0346 0.5259 bb 0.7971 0.0516 0.4535 ad 7.6522 0.0556 -1.2471 bd 7.6522 0.0556 -1.2471 dd 17 16.3478 0.0260 1.3300 ================================================== 2 : 0.275092 BËc tù do: P: 0.964643 An willmori ================================================== KiÓu gen Obs (O) Exp (E) (O-E)²/E 2*O*Ln(O/E) ================================================== bb 5.3239 0.0197 -0.6278 bd 18 17.3521 0.0242 1.3197 dd 13 13.3239 0.0079 -0.6399 ================================================== 2 : 0.051777 BËc tù do: P: 0.819999 An dravidicus ================================================== KiÓu gen Obs (O) Exp (E) (O-E)²/E 2*O*Ln(O/E) ================================================== bb 3.2535 0.0198 -0.4868 bc 4.9577 0.2191 2.2897 cc 1.6901 1.6901 0.0000 bd 7.1268 0.0023 -0.2513 cd 5.1831 0.6369 4.2071 dd 3.5634 0.0891 -1.0326 be 3.4085 0.0489 -0.7659 ce 2.4789 0.1096 1.1448 de 3.5634 0.0891 -1.0326 ee 0.7746 0.0656 0.5107 ================================================== 2 : 2.970366 BËc tù do: P: 0.812557 An maculatus d¹ng ================================================== KiÓu gen Obs (O) Exp (E) (O-E)²/E 2*O*Ln(O/E) ================================================== aa 5.2182 0.0091 -0.4271 ac 3.0545 0.0010 -0.1081 ad 27 26.7273 0.0028 0.5482 cd 7.6364 0.0173 0.7443 dd 33 33.0909 0.0002 -0.1816 ea 1.7818 0.0267 0.4621 ce 0.5091 0.4734 1.3503 de 4.4545 0.0464 -0.8610 ee 0.1273 0.1273 0.0000 ================================================== 2 : 1.104193 BËc tù do: P: 0.981352 An maculatus d¹ng ================================================== KiÓu gen Obs (O) Exp (E) (O-E)²/E 2*O*Ln(O/E) ================================================== aa 1.0784 0.0057 -0.1510 ab 2.1569 0.0114 -0.3020 bb 0.8824 0.0157 0.2503 ac 3.2353 0.1807 1.6974 bc 2.9412 0.0012 0.1188 cc 2.0588 0.0017 -0.1160 ad 3.4510 0.0589 -0.8403 bd 3.1373 0.0060 -0.2684 cd 4.7059 0.1059 -1.3002 dd 2.3529 0.1779 1.4577 ================================================== 2 : 0.565168 BËc tù do: P: 0.996953 An sawadwongporni d¹ng ================================================== KiĨu gen Obs (O) Exp (E) (O-E)²/E 2*O*Ln(O/E) ================================================== aa 0.2439 0.2439 0.0000 ab 0.9756 0.0006 0.0494 bb 0.6829 0.1472 0.7627 ac 2.4390 0.1290 1.2421 bc 3.9024 0.0024 0.1975 cc 4.6341 0.0868 -1.1773 ad 1.0976 0.0087 -0.1862 bd 1.7561 0.3255 -1.1262 cd 4.3902 0.0847 1.3005 dd 0.8780 0.0169 0.2601 ================================================== 2 : 1.045806 BËc tù do: P: 0.983816 An sawadwongporni d¹ng ================================================== KiĨu gen Obs (O) Exp (E) (O-E)²/E 2*O*Ln(O/E) ================================================== cc 8.1311 0.0021 -0.2602 cd 12 12.0656 0.0004 -0.1308 dd 4.1475 0.0052 -0.2898 ce 3.6721 0.0293 0.6842 de 2.6393 0.0493 0.7685 ee 0.3443 0.3443 0.0000 ================================================== 2 : 0.430539 BËc tù do: P: 0.933864 An pseudowillmori d¹ng ================================================== KiÓu gen Obs (O) Exp (E) (O-E)²/E 2*O*Ln(O/E) ================================================== aa 10 10.5946 0.0334 -1.1552 ab 1.7658 0.0311 0.4983 bb 0.0541 0.0541 0.0000 ad 27 26.0450 0.0350 1.9445 bd 2.1261 0.0075 -0.2446 dd 15 15.4144 0.0111 -0.8176 ================================================== 2 : 0.172133 BËc tù do: P: 0.981957 An willmori d¹ng ================================================== KiĨu gen Obs (O) Exp (E) (O-E)²/E 2*O*Ln(O/E) ================================================== bb 2.7755 0.0182 0.4667 bd 11 11.4490 0.0176 -0.8801 dd 11 10.7755 0.0047 0.4536 ================================================== 2 : 0.040441 BËc tù do: P: 0.840620 An maculatus d¹ng ================================================== KiĨu gen Obs (O) Exp (E) (O-E)²/E 2*O*Ln(O/E) ================================================== bb 2.5660 0.0734 0.9375 bc 4.4906 0.0536 -0.9255 cc 1.7170 0.2994 -1.0811 bd 3.8491 0.0059 0.3077 cd 3.1698 0.2174 1.8610 dd 1.2453 0.0483 -0.4387 be 3.5283 0.0791 -0.9732 ce 2.9057 0.4122 2.5571 de 2.4906 0.0966 -0.8775 ee 1.0377 0.0014 -0.0741 ================================================== 2 : 1.287300 BËc tù do: P: 0.972353 An maculatus d¹ng ================================================== KiĨu gen Obs (O) Exp (E) (O-E)²/E 2*O*Ln(O/E) ================================================== cc 11 11.5246 0.0239 -1.0249 cd 14 13.7049 0.0064 0.5965 dd 3.7869 0.0120 0.4380 ce 1.2459 0.4564 1.8932 de 0.7213 0.7213 0.0000 ee 0.0164 0.0164 0.0000 ================================================== 2 : 1.236359 BËc tù do: P: 0.744298 B¶ng 10: Kiểm định 2cân quần thể hệ enzym MPI thành viên nhóm loài An maculatus An maculatus ================================================== KiÓu gen Obs (O) Exp (E) (O-E)²/E 2*O*Ln(O/E) ================================================== aa 2.1233 0.0072 -0.2393 ab 2.9726 0.0003 0.0550 bb 0.9589 0.0018 0.0839 ac 6.6530 0.0181 0.7119 bc 4.5068 0.0570 -0.9544 cc 4.9361 0.0008 0.1287 ad 17 17.1279 0.0010 -0.2548 bd 12 11.6027 0.0136 0.8080 cd 26 25.9680 0.0000 0.0640 dd 33 33.1507 0.0007 -0.3007 ================================================== 2 : 0.100384 BËc tù do: P: 0.999980 An notanandai ================================================== KiÓu gen Obs (O) Exp (E) (O-E)²/E 2*O*Ln(O/E) ================================================== cc 15 14.7761 0.0034 0.4511 cd 15 15.4478 0.0130 -0.8824 dd 3.7761 0.0133 0.4608 ================================================== 2 : 0.029644 BËc tù do: P: 0.863300 An sawadwongporni ================================================== KiÓu gen Obs (O) Exp (E) (O-E)²/E 2*O*Ln(O/E) ================================================== cc 0.9448 0.0032 0.1137 cd 17 17.1105 0.0007 -0.2203 dd 73 72.9448 0.0000 0.1105 ================================================== 2 : 0.003986 BËc tù do: P: 0.949657 An pseudowillmori ================================================== KiÓu gen Obs (O) Exp (E) (O-E)²/E 2*O*Ln(O/E) ================================================== cd 1.0000 0.0000 0.0000 dd 34 34.0000 0.0000 0.0000 ================================================== 2 : 0.000000 BËc tù do: P: 1.000000 An willmori ================================================== KiÓu gen Obs (O) Exp (E) (O-E)²/E 2*O*Ln(O/E) ================================================== aa 1.2817 0.0619 -0.4964 ac 12 11.4366 0.0278 1.1541 cc 23 23.2817 0.0034 -0.5600 ================================================== 2 : 0.093071 BËc tù do: P: 0.760309 An dravidicus ================================================== KiÓu gen Obs (O) Exp (E) (O-E)²/E 2*O*Ln(O/E) ================================================== aa 21 20.1549 0.0354 1.7251 ab 5.3239 0.0197 -0.6278 bb 0.2958 0.2958 0.0000 ac 0.7606 0.0754 0.5474 bc 0.0986 0.0986 0.0000 ad 7.6056 0.3390 -2.8456 bd 0.9859 1.0431 2.8293 cd 0.1408 0.1408 0.0000 dd 0.6338 0.2116 0.9120 ================================================== 2 : 2.259339 BËc tù do: P: 0.894370 An maculatus d¹ng ================================================== KiĨu gen Obs (O) Exp (E) (O-E)²/E 2*O*Ln(O/E) ================================================== aa 0.7273 0.1023 0.6369 ab 0.0970 0.0970 0.0000 ac 3.9758 0.2395 -1.6896 bc 0.2485 0.2485 0.0000 cc 4.9697 0.2136 2.2608 ad 11 10.4727 0.0265 1.0807 bd 0.6545 0.1823 0.8476 cd 26 26.8364 0.0261 -1.6464 dd 35 35.0182 0.0000 -0.0364 ================================================== 2 : 1.135749 BËc tù do: P: 0.979939 An maculatus d¹ng ================================================== KiĨu gen Obs (O) Exp (E) (O-E)²/E 2*O*Ln(O/E) ================================================== aa 17 16.8824 0.0008 0.2361 ac 8.2353 0.0067 -0.4638 cc 0.8824 0.0157 0.2503 ================================================== 2 : 0.023229 BËc tù do: P: 0.878864 An sawadwongporni ================================================== KiÓu gen Obs (O) Exp (E) (O-E)²/E 2*O*Ln(O/E) ================================================== aa 14 14.1148 0.0009 -0.2286 ac 14 13.7705 0.0038 0.4628 cc 3.1148 0.0042 -0.2252 ================================================== 2 : 0.008986 BËc tù do: P: 0.924479 An pseudowillmori d¹ng ================================================== KiÓu gen Obs (O) Exp (E) (O-E)²/E 2*O*Ln(O/E) ================================================== ac 0.1351 0.1351 0.0000 cc 0.9459 0.0031 0.1111 ad 0.8649 0.0211 0.2904 cd 13 12.9730 0.0001 0.0541 dd 41 41.0811 0.0002 -0.1620 ================================================== 2 : 0.159555 BËc tù do: P: 0.983838