Nghiên cứu sự lưu hành của một số virus gây bệnh cho người trên dơi ở Việt Nam : Luận án TS. Sinh học: 62 42 40 01

ĐẠI HỌC QUỐC GIA HÀ NỘI TRƢỜNG ĐẠI HỌC KHOA HỌC TỰ NHIÊN NGUYỄN THỊ THU THỦY NGHIÊN CỨU SỰ LƢU HÀNH CỦA MỘT SỐ VIRUS GÂY BỆNH CHO NGƢỜI TRÊN DƠI Ở VIỆT NAM LUẬN ÁN TIẾN SĨ SINH HỌC HÀ NỘI – 2013 ĐẠI HỌC QUỐC GIA HÀ NỘI TRƢỜNG ĐẠI HỌC KHOA HỌC TỰ NHIÊN NGUYỄN THỊ THU THỦY NGHIÊN CỨU SỰ LƢU HÀNH CỦA MỘT SỐ VIRUS GÂY BỆNH CHO NGƢỜI TRÊN DƠI Ở VIỆT NAM CHUYÊN NGÀNH MÃ SỐ : VI SINH VẬT HỌC : 62 42 40 01 LUẬN ÁN TIẾN SĨ SINH HỌC Người hướng dẫn khoa học: PGS.TS LÊ THỊ QUỲNH MAI GS.TS PHẠM VĂN TY HÀ NỘI – 2013 MỤC LỤC Trang phụ bìa Lời cam đoan Mục lục Danh mục chữ viết tắt Danh mục bảng Danh mục hình MỞ ĐẦU CHƢƠNG I: TỔNG QUAN 1.1 Bệnh có nguồn gốc từ động vật 1.1.1 Định nghĩa 1.1.2 Giả thiết xuất lây truyền bệnh 1.1.3 Các bệnh lây truyền từ động vật 1.2 Dơi vai trò truyền bệnh 1.2.1 Sinh thái, phân loại, phân bố lồi dơi 9 1.2.2 Một số thơng tin khu hệ dơi Việt Nam 10 1.2.3 Vai trò dơi truyền bệnh 18 1.3 Mốt số bệnh nhiễm trùng xuất liên quan đến dơi 19 1.3.1 Nhóm Henipavirus 19 1.3.2 Nhóm Coronavirus 24 1.3.3 Nhóm Coltivirus 28 1.3.4 Nhóm Arbovirus 30 Biện pháp phịng chống bệnh lây truyền từ động vật sang ngƣời 1.4.1 Chủ động giám sát bệnh 37 1.4.2 Kiểm soát vật chủ, vectơ, ổ chứa tác nhân truyền bệnh 38 1.4 1.5 Các phƣơng pháp phát xác định virus loài dơi 37 39 1.5.1 RT- PCR 39 1.5.2 Phân lập virus 39 1.5.3 Huyết học 40 CHƢƠNG II: ĐỐI TƢỢNG VÀ PHƢƠNG PHÁP NGHIÊN CỨU 42 2.1 Đối tƣợng, cỡ mẫu, địa điểm, thời gian nghiên cứu 42 2.1.1 Mẫu dơi thu thập nghiên cứu 42 2.1.2 Mẫu máu ngƣời khỏe mạnh tham gia nghiên cứu 43 2.2 Vật liệu 43 2.2.1 Mẫu nghiên cứu 43 2.2.2 Sinh phẩm 44 2.2.3 Trang thiết bị dụng cụ 44 2.3 Phƣơng pháp 48 2.3.1 Định loại dơi thực địa 48 2.3.2 Kỹ thuật hấp phụ miễn dịch liên kết enzym (ELISA) tóm bắt IgG 2.3.3 Kỹ thuật xác định kháng thể trung hòa 49 2.3.4 Phương pháp xác định số yếu tố liên quan đến khả 59 55 lây truyền virus từ dơi sang người 2.3.5.Phương pháp xử lý số liệu 59 2.4 Đạo đức nghiên cứu 59 CHƢƠNG III: KẾT QUẢ VÀ BÀN LUẬN 61 3.1 Dấu vết kháng thể kháng virus Nipah, SARS-CoV, 61 Banna, Viêm não Nhật Bản, Chikungunya loài Dơi Việt Nam 3.1.1 Thời gian, địa điểm thu thập mẫu dơi 61 3.1.2 Các loài dơi thu thập nghiên cứu 63 3.1.3 Kết xác định số tác nhân gây bệnh cho ngƣời liên 69 quan đến dơi phƣơng pháp huyết học 3.1.4 Mối liên quan virus gây bệnh truyền nhiễm cho ngƣời 90 với họ/ loài dơi 3.2 Khả phơi nhiễm virus có vật chủ lồi dơi 98 số nhóm ngƣời có yếu tố liên quan dịch tễ 3.2.1 Phát kháng thể kháng virus Nipah mẫu huyết 99 nguời phƣơng pháp huyết học 3.2.2 Phát kháng thể kháng SARS –CoV mẫu huyết 102 nguời phƣơng pháp huyết học 3.2.3 Một số yếu tố nguy liên quan đến khả truyền virus Nipah sang ngƣời Tây Nguyên KẾT LUẬN 104 KIẾN NGHỊ 114 DANH MỤC CÁC CƠNG TRÌNH CỦA TÁC GIẢ ĐÃ CƠNG BỐ CĨ LIÊN QUAN ĐẾN LUẬN ÁN TÀI LIỆU THAM KHẢO PHỤ LỤC 112 CHỮ VIẾT TẮT TRONG LUẬN ÁN ARN Acid ribonucleic ATSH An toàn sinh học BSL – Biosafety level III (Phịng thí nghiệm an toàn sinh học cấp độ 3) CDC The US Center of Diseases Control and Prevention (Trung tâm kiểm sốt phịng ngừa dịch bệnh Mỹ) CPE Cytopathic effects (Hiệu ứng hủy hoại tế bào) DMEM Dulbecco's Modified Eagle Medium (Môi trường nuôi cấy tế bào) ELISA Enzyme linked Immunosorbent Assay (Kỹ thuật miễn dịch hấp phụ gắn enzym) FBS Fetal Bovine Serum (Huyết bào thai bê) HEV Hendra Virus IFA Immunofluorescent Assay (Kỹ thuật miễn dịch huỳnh quang) NiV Nipah virus NT50 50% CPE Neutralization test (Phản ứng trung hòa gây hủy hoại 50% tế bào) PBS Phosphate Buffered Saline (Dung dịch đệm PBS) RT- PCR Reverse transcriptase – Polymerase chain reaction (Phản ứng chuỗi polymeraza phiên mã ngược) SARS Severe acute respiratory syndrome (Hôi chứng viêm đường hô hấp nặng) SXH Sốt xuất huyết SHPT Sinh học phân tử TCID50 Tissue culture infectious dose (liều gây nhiễm 50% tế bào nuôi cấy) TTYTDP Trung tâm Y tế dự phòng VNNB Viêm não Nhật Bản VSDTTU Viện Vệ sinh Dịch tễ Trung ƣơng WB Western Blot WHO World Health Organization (Tổ chức Y tế giới) DANH MỤC CÁC BẢNG Bảng Tên bảng Trang 1.1 Hệ thống phân loại dơi giới Việt Nam 11 1.2 Các loại dơi - Pteropodidae lƣu hành Việt Nam 12 1.3 Các loài dơi muỗi- Vespertilionidae lƣu hành Việt Nam 15 3.1 Số lƣợng mẫu dơi thu thập: 2006-2009 61 3.2 Các họ/loài dơi (Chiroptera) nghiên cứu 66 3.3 Các loài dơi lƣu hành điểm nghiên cứu 67 3.4 Kết xác định kháng thể IgG kháng virus Nipah kỹ 72 thuật ELISA 3.5 Kết xác định kháng thể IgG kháng Nipah phản ứng 74 trung hòa (NT50) 3.6 Kết xác định kháng thể IgG kháng virus SARS-CoV 79 kỹ thuật ELISA 3.7 Kết xác định kháng thể IgG kháng SARS – CoV 80 phản ứng trung hòa (NT50) 3.8 Kết xác định kháng thể IgG kháng virus Banna kỹ 83 thuật ELISA 3.9 Kết xác định kháng thể IgG kháng virus Banna 85 phản ứng trung hòa (NT50) 3.10 Kết xác định kháng thể IgG kháng virus VNNB 87 Chikungunya kỹ thuật ELISA 3.11 Kết xác định kháng thể IgG kháng virus VNNB 88 phản ứng trung hòa (NT50) 3.12 Kết xác định kháng thể IgG kháng virus Chikungunya 88 phản ứng trung hòa (NT50) 3.13 Bảng tổng hợp kết mẫu huyết dơi chứa kháng 94 thể IgG kháng virus Nipah, SARS - CoV, Banna, JE Chikungunya 3.14 Kết xác định kháng thể IgG kháng virus Nipah ngƣời 99 tình nguyện khu vực Tây Nguyên kỹ thuật ELISA 3.15 Kết xác định kháng thể IgG kháng virus Nipah ngƣời 100 tình nguyện khu vực Tây Nguyên phản ứng trung hòa 3.16 Kết xác định kháng thể IgG kháng SARS-CoV ngƣời 101 tình nguyện khu vực Tây Nguyên kỹ thuật ELISA 3.17 Kết xác định kháng thể IgG kháng virus SARS-CoV 103 ngƣời tình nguyện khu vực Tây Nguyên phản ứng trung hòa 3.18 Kết khảo sát câu hỏi in sẵn nhóm ngƣời tình nguyện 106 DANH MỤC CÁC HÌNH Hình Tên hình Trang 1.1 Cây phát sinh chủng loại Bộ Dơi 1.2 Bản đồ phân bố dơi giới 1.3 Rousettus leschenaultia - Dơi cáo nâu 12 1.4 Cynopterus sphinx- Dơi chó cánh dài 12 1.5 Scotophilus kuhlii- Dơi nâu 17 1.6 Chaerephon plicata – Dơi thị 18 1.7 Phân nhóm Henipah dựa phân tích vật liệu di truyền 22 1.8 Mơ hình cấu trúc virion virus Niv 23 1.9 Phân nhóm Corona dựa phân tích Vật liệu di truyền 25 1.10 Mơ hình cấu trúc virion virus SARS – CoV 27 1.11 Mơ hình cấu trúc hạt virion virus Banna, nhóm 29 Coltivirus 1.12 Mơ hình cấu trúc hạt virion nhóm Flavivirus 33 1.13 Mơ hình cấu trúc hạt virion nhóm Alphavirus 36 2.1 42 2.2 Các địa điểm thu thập bệnh phẩm dơi nghiên cứu 2006-2009 Lƣới mờ sử dụng để bắt dơi khu vực nông trƣờng 2.3 Bẫy thụ cầm kết hợp với lƣới mờ thu mẫu dơi khu vực 46 45 hang 2.4 Sử dụng vợt cầm tay để thu mẫu dơi tán 47 2.5 Hình thái thể dơi 48 2.6 Nguyên lý phản ứng ELISA phát kháng thể IgG 49 White, Peter Daniels, Aziz Jamaluddin, and T.K (2001), "Nipah virus infection in bats (order Chiroptera) in peninsular Malaysia", Emerging infectious diseases 7(3), pp 439–41 101 N J Cox and K Subbarao (2000), "GLOBAL epidemiology of influenza", Annual Review of Medicine 51pp 407–21 102 Nancy B.Simmons (2005), "An Eocene Big Bang for Bats Malaria Vaccines", Science 307(4), pp 4–5 103 Nathan D Wolfe, Peter Daszak, A Marm Kilpatrick, and D.S.B (2005), "Bushmeat Hunting, Deforestation, and Prediction of Zoonotic Disease Emergence", Emerging infectious diseases 11(12), pp 1822–1827 104 Nguyen Thi Thu Thuy, Nguyen Bao Ngoc, Le Thi Quynh Mai, Nguyen Hoang Quan, Vu Thi Que Huong, F.H and K.M (2010), “Dengue fever(DF)/Dengue Haemorrhagic Fever (DHF) situation in Viet nam from 2000-2010”, In Asian- African Research Forum on Emerging and Reemerging Infectious, pp 62 105 Nicholas H Acheson (2007), “Fundamentals of Molecular Virology”, Pharmazie in unserer Zeit John Willey & Sons 106 P Grivard, K Le Roux, P Laurent, A Fianu, J Perrau, J Gigan, G Hoarau, N Grondin, F Staikowsky, F Favier, A Michault (2007), "Molecular and serological diagnosis of Chikungunya virus infection.", Pathologie-biologie 55(10), pp 490–494 107 Peter Daniels (2001), "Arboviruses of verterinary significance in the Asia - Western Pacific region, such as Japanese Encephalitis virus", South Asia, pp 167–180 108 Peter Daniels, Thomas Ksiazek, B.T.E (2001), "Laboratory diagnosis of Nipah and Hendra virus infections", Microbes and Infection 109 Peter Daszak, Andrew A Cunningham, A.D.H (2000), "Emerging infectious diseases of wildlife threats to biodiversity and human health", Science (New York, N.Y.) 287(5452), pp 443–449 110 Pierce K H Chow, Eng-Eong Ooi, Hiang-Khoon Tan, Kong-Wee Ong, Bijon Kumar Sil, Melissa Teo, Timothy Ng, and K.-C.S (2004), 126 "Healthcare worker seroconversion in SARS outbreak", Emerging infectious diseases 10(2), pp 249–250 111 Platt KB, Mangiafico JA, Rocha OJ, Zaldivar ME, Mora J, Trueba G, R.W (2000), "Detection of dengue virus neutralizing antibodies in bats from Costa Rica and Ecuador", Journal of medical entomology 37(6), pp 965–967 112 Poel, W.H.M Van der and Lina PH, K.J (2006), "Public health awareness of emerging zoonotic viruses of bats: a European perspective", Vector Borne Zoonotic Dis 6(4), pp 315–324 113 Prabakaran, P (2010), "Potent Human Monoclonal Antibodies against SARS CoV, Nipah and Hendra Viruses", NIH Public Access 9(3), pp 355– 368 114 Price JL (1978), "Serological evidence of infection of Tacaribe virus and arboviruses in Trinidadian bats", The American journal of tropical medicine and hygiene 27(1 Pt 1), pp 162–167 115 Rosen L (1986), "The natural history of Japanese encephalitis virus", Annu Rev Microbiology, 40pp 395–414 116 Samson Wong, Susanna Lau, P.W and K.-Y.Y (2006), "Bats as a continuing source of emerging infections in humans", Reviews in Medical Virology 17(2), pp 67–91 117 Sazaly AbuBakar, Li-Yen Chang, A.R Mohd Ali, S.H Sharifah, Khatijah Yusoff, Z.Z (2004), "Isolation and Molecular Identification of Nipah Virus from Pigs", Emerging Infectious Diseases 10(12), pp 10– 12 118 Sohayati A Rahman, Sharifah S Hassan, Kevin J Olival, Maizan Mohamed, Li-Yen Chang, Latiffah Hassan, Norsharina M Saad, Syamsiah A Shohaimi, Zaini C Mamat, M.S Naim, Jonathan H Epstein, Arshad S Suri, Hume E Field, P.D (2010), "Characterization of Nipah Virus from Naturally Infected Pteropus vampyrus Bats, Malaysia", Emerging Infectious Diseases 16(12), pp 16–19 119 Sohayati AR, Hassan L, Sharifah SH, Lazarus K, Zaini CM, Epstein JH, Shamsyul Naim N, Field HE, Arshad SS, Abdul Aziz J, D.P (2011), "Evidence for Nipah virus recrudescence and serological patterns of 127 captive Pteropus vampyrus", Epidemiology and infection 139(10), pp 1570–1579 120 Stephen P Luby, Mahmudur Rahman, M Jahangir Hossain, L.S.B (2006), "Foodborne Transmission of Nipah Virus, Bangladesh", Emerging Infectious Diseases 12(12), pp 14–16 121 Susanna K P Lau, Patrick C Y Woo, Cyril C Y Yip, Herman Tse, Hoi-wah Tsoi, Vincent C C Cheng, Paul Lee, Bone S F Tang, Chris H Y Cheung, Rodney A Lee, Lok-yee So, Yu-lung Lau, Kwok-hung Chan, and K.Y (2006), "Coronavirus HKU1 and other coronavirus infections in Hong Kong", Journal of clinical microbiology 44(6), pp 2063–2071 122 Susanna K P Lau, Patrick C Y Woo, Kenneth S M Li, Yi Huang, Hoi-Wah Tsoi, Beatrice H L Wong, Samson S Y Wong, Suet-Yi Leung, Kwok-Hung Chan, and K.-Y.Y (2005), "Severe acute respiratory syndrome coronavirus-like virus in Chinese horseshoe bats", Proceedings of the National Academy of Sciences of the United States of America 102(39), pp 14040–14045 123 T.F Wild (2009), "Henipaviruses: a new family of emerging Paramyxoviruses", Pathologie-biologie 57(2), pp 188–196 124 Takeshi Nabeshima, Phan Thi Nga, Posadas Guillermo, Maria del Carmen Parquet, Fuxun Yu, Nguyen Thanh Thuy, Bui Minh Trang, N.T.H and Vu Sinh Nam, Shingo Inoue, Futoshi Hasebe, and K.M (2008), "Isolation and Molecular Characterization of Banna Virus from Mosquitoes, Vietnam", Emerging Infectious Diseases 14(8), pp 1276– 1279 125 Tamin, A (2010), "Development of a neutralization assay for Nipah virus using pseudotype particles", J Virol Methods 160(1-2), pp 1–16 126 Tao SJ, C.B (2005), "Studies of coltivirus in China", Chin Med J (Engl), 118(7) pp 581–586 127 Tchoyoson Lim, Kim En Lee, Wei Ling Lee, Paul A Tambyah, Cheng Chuan Lee, Yih Yian Sitoh, Alexandra P Auchus, B K Michael Lin, F.H (2002), "Nipah Virus Encephalitis : Serial MR Study of an Emerging Disease 1", Image (Rochester, N.Y.) (2), pp 219–226 128 128 The European parliament and the council of the european union (2000), "Directive 2000/54/EC of the European parliament and of the council of 18 September 2000 on the protection of workers from risks related to exposure to biological agents at work", Official Journal of the European Communities, pp 262/1–262/45 129 Tom Blanchard (2004), "Rabies and other lyssavirus diseases", Lancet 363(9424), pp 1906–1907 130 Tsutomu Omatsua, Shumpei Watanabe, Hiroomi Akashi, Y.Y (2007), "Biological characters of bats in relation to natural reservoir of emerging viruses", Comparative immunology, microbiology and infectious diseases 30(5-6), pp 357–374 131 Ute Pieper, Jan-Gerd Kuhling, R.S (2000), "Code of practice Laboratory Biosafety", Infection Prevention - Healthcare Sector 132 Vidya A Arankalle, Shubham Shrivastava, Sarah Cherian, Rashmi S Gunjikar, Atul M Walimbe, Santosh M Jadhav, A.B.S and A.C.M (2007), "Genetic divergence of Chikungunya viruses in India (19632006) with special reference to the 2005-2006 explosive epidemic", The Journal of general virology 88, pp 1967–1976 133 Vidya Shankar, Richard A Bowen, T.J.O and April D Davis, C.E.R (2004), "Rabies in a captive colony of big brown bats (Eptesicus fuscus).", Journal of wildlife diseases 40(3), pp 403–413 134 Vincent P Hsu, Mohammed Jahangir Hossain, Umesh D Parashar, Mohammed Monsur Ali, Thomas G Ksiazek, Ivan Kuzmin, Michael Niezgoda, Charles Rupprecht, Joseph Bresee, R.F.B (2004), "Nipah virus encephalitis reemergence, Bangladesh", Emerging infectious diseases 10(12), pp 2082–2087 135 W H M Van der Poel, R Van der Heide, G Van Amerongen, L.J.M.Van Keulen, G J.Wellenberg, H Bourhy, W Schaftenaar, J Groen, and A.D.M.E.O (2000), "Characterisation of a recently isolated lyssavirus in frugivorous zoo bats.", Archives of virology 145(9), pp 1919–1931 136 WHO (2011), "Ebola haemorrhagic fever" 137 WHO (2011), "Global HIV/AIDS response", Progress report 2011 129 138 WHO (2004), "WHO guidelines for the global surveillance of severe acute respiratory syndrome ( SARS )", Department of Communicable Disease 139 WHO guidelines for the global surveillance of severe acute respiratory syndrome: (2004) 140 Woo, P.C.Y (2005), "Differential Sensitivities of Severe Acute Respiratory Syndrome ( SARS ) Coronavirus Spike Polypeptide Enzyme-Linked Immunosorbent Assay ( ELISA ) and SARS Coronavirus Nucleocapsid Protein ELISA for Serodiagnosis of SARS Coronavirus Pneumonia Differential", Society 43(7), pp 3054–3058 141 X C Tang, J X Zhang, S Y Zhang, P Wang, X H Fan, L F Li, G Li, B Q Dong, W Liu, C L Cheung, K M Xu, W J Song, D Vijaykrishna, L L M Poon, J S M Peiris, G J D Smith, H Chen, and Y.G (2006), "Prevalence and genetic diversity of coronaviruses in bats from China", Journal of virology 80(15), pp 7481–7490 142 Xingtai Wang, Barbara G Werner, Raimond Konomi, Dennis Hennigan, David Fadden, Evan Caten, Susan Soliva, and A.D (2009), "Animal rabies in Massachusetts, 1985-2006", Journal of wildlife diseases 45(2), pp 375–387 143 Yan Li, J.W (2008), "Antibodies to Nipah or Nipah-like Viruses in Bats , China", Emerging Infectious Diseases 14(12), pp 1974–1976 144 Yoshihito Kashiwazakia, Yeoh No Na, Nobuhiko Tanimura, T.I (2004), "Short communication A solid-phase blocking ELISA for detection of antibodies to Nipah virus", Journal of virological methods 121pp 259– 261 145 Zhang H, Yang X, L.G (1998), Detection of dengue virus genome RNA in some kinds of animals caught from dengue fever endemic areas in Hainan Island with reverse transcription-polymerase chain reaction Zhonghua shi yan he lin chuang bing du xue za zhi = Zhonghua shiyan he linchuang bingduxue zazhi = Chinese journal of experimental and clinical virology 146 (2005), "Chiroptera", http://tolweb.org/Chiroptera 130 147 (2009), "The significance of zoonostic transmission of virus in human disease", Microbiology today, (2008), pp 213–214 131 PHỤ LỤC BỘ CÂU HỎI Ngày vấn (ngày/tháng/năm) Họ tên Giới tính Nam Nữ Ngày sinh (ngày/tháng/năm) Nơi sinh: Địa chỉ: Số điện thoại liên lạc 1) Bạn ăn thịt Dơi chưa? Có Không /Tuần /Tháng /Năm Tại nhà Nhà hàng Nơi khác Có Khơng /Tuần /Tháng /Năm Chợ Thợ săn Khác Có Khơng 9) Nếu có, có thường xun khơng? /Tuần /Tháng /Năm 10) Tại bạn lại ăn thịt Dơi? Ngon Thuốc Tăng sức khoẻ 11) Tại bạn lại uống máu Dơi? Ngon Thuốc Tăng sức khoẻ Có Khơng 2) Nếu có, bạn có ăn thường xun khơng? 3) Bạn ăn thịt Dơi đâu? 4) Lượng Dơi tiêu thụ nhiều nào? 5) Bạn tự chế biến thịt Dơi chưa? 6) Nếu có, có thường xuyên không? 7) Bạn mua thịt Dơi từ đâu? 8) Bạn uống máu Dơi chưa? 12) Bạn bị Dơi cắn chưa? 13) Bạn có sử dụng phân Dơi làm phân bón hay khơng? 14) Nếu có, bạn sử dụng nào? Ruộng 15) Bạn có biết Dơi lồi truyền nhiều bệnh nguy hiểm hay không? 16) Bạn ăn thịt thú rừng chưa? 132 Khơng Vườn Bán Có Có 17) Nếu có, loại thú nào? Có Khơng Khơng PHỤ LỤC Cơng thức tính TCID50 theo phƣơng pháp Reed-Muench: Pha loãng 10-1 10-2 10-3 10-4 10-5 10-6 10-7 10-8 CPE(+) 4 4 0 CPE(-) 0 0 4 19 15 11 0 0 0 13 Tỷ lệ 19/19 15/15 11/11 7/7 3/4 0/5 0/9 0/13 (%) 100 100 100 100 75 0 virut ∑ CPE(+) ∑ (-) TCID50 -5- (75-50)/(75-0) = -5-25/75 = -5-0.33 =-5.33 105.33 TCID50/0.1mL = 106.33 TCID50/mL 105.33 TCID50/0.1mL † 200 TCID50/0.1mL = x 102.33 = x 213.8 = 1069 x độ pha loãng Trong trƣờng hợp virut gốc là: 106.33 TCID50/mL (=105.33 TCID50/0.1mL ) độ pha lỗng virut 1069x để đạt đƣợc 200 TCID50/0.1mL) cho NT50 133 1:10 1:20 1:40 1:80 1:160 1:320 1:640 1:1280 (-) (-) (-) CPE (+) CPE (+) CPE (+) CPE (+) CPE (+) (-) (-) (-) CPE (+) CPE (+) CPE (+) CPE (+) CPE (+) (-) (-) CPE (+) CPE (+) CPE (+) CPE (+) CPE (+) CPE (+) Cơng thức tính NT50 theo phƣơng pháp Reed-Muench: Pha loãng 1:10 1:20 1:40 1:80 1:160 1:320 1:640 1:1280 CPE(+) 0 3 3 (-) 3 0 0 0 10 13 16 0 0 Tỷ lệ 8/8 5/5 2/3 0/4 0/4 0/10 0/13 0/16 (%) 100 100 66.7 0 0 huyết ∑ CPE(+) ∑ (-) 40 = 10 x 22 80 = 10 x 23 -2- (66.7-50)/(66.7-0) = -2-16.7/66.7 = -2-0.25 = -2.25 10 x 22.25 NT50 = 10 x (100.3)2.25 = 10 x 100.675 = 101.675 = 47.3 134 Phụ lục Một số hình ảnh lồi dơi thu thập nghiên cứu Dơi vách mũi dài Pipistrellus cadornae thuộc Họ Dơi muỗi Dơi nâu Scotophilus kuhli thuộc Họ Dơi muỗi 135 Dơi ma nam Megaderma spasma thuộc Họ Dơi ma Dơi thị Charephone plicata thuộc Họ Dơi thị 136 Dơi nếp mũi quạ Hipposideros armiger thuộc Họ Dơi nếp mũi Dơi nếp mũi Hipposideros cineraceus thuộc Họ Dơi nếp mũi 137 Dơi cáo nâu Rousettus leschenaulti thuộc Họ Dơi ăn Dơi chó cánh dài Cynoterus sphinx thuộc Họ Dơi ăn 138 Thu thập mẫu máu dơi thực địa Mẫu huyết dơi dƣơng tính với ELISA 139 140 ... THU THỦY NGHIÊN CỨU SỰ LƢU HÀNH CỦA MỘT SỐ VIRUS GÂY BỆNH CHO NGƢỜI TRÊN DƠI Ở VIỆT NAM CHUYÊN NGÀNH MÃ SỐ : VI SINH VẬT HỌC : 62 42 40 01 LUẬN ÁN TIẾN SĨ SINH HỌC Người hướng dẫn khoa học: PGS .TS.. . vai trị truyền bệnh lồi dơi, góp phần định hƣớng phƣơng pháp phòng chống bệnh nhiễm trùng nguyên virus Việt Nam thực đề tài ? ?Nghiên cứu lƣu hành số virus gây bệnh cho ngƣời dơi Việt Nam? ?? Với mục... họ dơi Ở Việt Nam, loài dơi phân bố chủ yếu khu vực miền núi phía Bắc [13] Virus gây bệnh cho ngƣời tìm thấy nhóm dơi chủ yếu virus Lyssa bao gồm số genotype: virus dại (rabbies virus) , virus dơi