Nghiên cứu mối liên hệ giữa một số đa hình đơn nucleotide của gen CYP19 và nguy cơ mắc ung thư vú ở phụ nữ Việt Nam

ĐẠI HỌC QUỐC GIA HÀ NỘI TRƯỜNG ĐẠI HỌC KHOA HỌC TỰ NHIÊN Phạm Thị Huyền NGHIÊN CỨU MỐI LIÊN HỆ GIỮA MỘT SỐ ĐA HÌNH ĐƠN NUCLEOTIDE CỦA GEN CYP19A1 VÀ NGUY CƠ MẮC UNG THƯ VÚ Ở PHỤ NỮ VIỆT NAM LUẬN VĂN THẠC SĨ KHOA HỌC SINH HỌC Hà Nô ̣i – 2017 ĐẠI HỌC QUỐC GIA HÀ NỘI TRƯỜNG ĐẠI HỌC KHOA HỌC TỰ NHIÊN Phạm Thị Huyền NGHIÊN CỨU MỐI LIÊN HỆ GIỮA MỘT SỐ ĐA HÌNH ĐƠN NUCLEOTIDE CỦA GEN CYP19A1 VÀ NGUY CƠ MẮC UNG THƯ VÚ Ở PHỤ NỮ VIỆT NAM Chuyên ngành Di truyền học Mã số: 60420121 LUẬN VĂN THẠC SĨ KHOA HỌC SINH HỌC Cán hướng dẫn: PGS TS Nguyễn Thị Hồng Vân Hà Nô ̣i – 2017 Trường Đại học Khoa học Tự nhiên – Đại học Quốc gia Hà Nội Phạm Thị Huyền – Cao học K24 LỜI CẢM ƠN Tôi xin trân trọng cảm ơn thầy giáo, cô giáo Khoa Sinh học trường Đại học Khoa học Tự nhiên, Đại học Quốc gia Hà Nội tận tình giảng dạy, tạo điều kiện thuận lợi cho học tập thực hành kỹ thuật thí nghiệm suốt q trình nghiên cứu trường Để thực hồn thành luận văn tơi xin bày tỏ lịng biết ơn PGS TS Nguyễn Thị Hồng Vân hướng dẫn nghiên cứu, tạo điều kiện thuận lợi động viên tơi thời gian nghiên cứu làm thí nghiệm phịng thí nghiệm Bộ mơn Di truyền học, trường Đại học Khoa học Tự nhiên, Đại học Quốc gia Hà Nội Tôi xin gửi lời cảm ơn chân thành tới anh, chị, bạn làm việc Phịng thí nghiệm Di truyền học chia sẻ kinh nghiệm, kiến thức giúp đỡ trình học tập thực luận văn phịng Bên cạnh đó, tơi xin gửi lời cảm ơn chân thành đến cán Bệnh viện Đa khoa Phú Thọ, Viện Huyết học Truyền máu Trung ương tận tình giúp đỡ tơi q trình thu mẫu nghiên cứu Cuối cùng, tơi xin bày tỏ lòng biết ơn sâu sắc tới cha mẹ sinh thành nuôi dưỡng Xin cám ơn người thân gia đình bạn bè, người ln bên cạnh khích lệ động viên, giúp đỡ tơi suốt trình học tập nghiên cứu Hà Nội, ngày 28 tháng 12 năm 2017 Học viên i Trường Đại học Khoa học Tự nhiên – Đại học Quốc gia Hà Nội Phạm Thị Huyền – Cao học K24 MỤC LỤC LỜI CẢM ƠN i CÁC CHỮ VIẾT TẮT iv DANH MỤC CÁC HÌNH v DANH MỤC CÁC BẢNG vi ĐẶT VẤN ĐỀ CHƯƠNG I: TỔNG QUAN TÀI LIỆU 1.1 Ung thư vú 1.1.1 Tình hình ung thư vú 1.1.2 Các yếu tố nguy 1.1.3 Các giai đoạn ung thư vú 1.1.4 Phân độ mô học ung thư vú 1.1.5 Phân loại ung thư vú .10 1.1.6 Chẩn đoán ung thư vú 11 1.2 Đa hình đơn nucleotide (SNP) 13 1.2.1 Giới thiệu SNP 13 1.2.2 Ứng dụng triển vọng SNP 18 1.3 Gen CYP19A1 ung thư vú .19 1.3.1 Gen CYP19A1 19 1.3.2 Enzyme aromatase trình sinh tổng hợp estrogen .21 1.3.3 Estrogen ung thư vú 22 1.4 Đa hình đơn nucleotide gen CYP19A1 ung thư vú 23 CHƯƠNG II: VẬT LIỆU VÀ PHƯƠNG PHÁP NGHIÊN CỨU 29 2.1 Vật liệu nghiên cứu 29 2.1.1 Mẫu sinh phẩm .29 2.1.2 Hoá chất .30 2.1.3 Trang thiết bị 30 ii Trường Đại học Khoa học Tự nhiên – Đại học Quốc gia Hà Nội 2.2 Phạm Thị Huyền – Cao học K24 Phương pháp nghiên cứu 30 2.2.1 Sơ đồ nghiên cứu 30 2.2.2 Tách ADN từ mẫu máu 31 2.2.3 Phương pháp đo mật độ quang học 32 2.2.4 Kỹ thuật PCR .33 2.2.5 Kỹ thuật PCR–RFLP 34 2.2.6 Kỹ thuật PCR–CTPP 35 2.2.7 Phương pháp điện di .36 2.2.8 Giải trình tự 37 2.2.9 Phương pháp phân tích thống kê 37 CHƯƠNG III: KẾT QUẢ VÀ THẢO LUẬN 39 3.1 Tách chiết ADN tổng số .39 3.2 Kết PCR nhân đoạn gen CYP19A1 40 3.3 Kết PCR–RFLP để xác định kiểu gen SNP rs10046 41 3.4 Kết PCR–CTPP để xác định kiểu gen SNP rs223672 .43 3.5 Kết phân tích thống kê 44 3.5.1 Phân tích ảnh hưởng SNP rs10046 gen CYP19A1 nguy mắc ung thư vú 44 3.5.2 Phân tích ảnh hưởng SNP rs2236722 (Trp39Arg) gen CYP19A1 nguy mắc ung thư vú 46 3.6 Thảo luận .48 KẾT LUẬN VÀ KIẾN NGHỊ 52 TÀI LIỆU THAM KHẢO 53 PHỤ LỤC 63 iii Trường Đại học Khoa học Tự nhiên – Đại học Quốc gia Hà Nội Phạm Thị Huyền – Cao học K24 CÁC CHỮ VIẾT TẮT ADN Axit Deoxyribo Nucleic bp base pair C Cytosine cs cộng CTPP Confronting Two – Pair Primer CYP19 Cytochrome P450 family 19 DDW Deionized Distilled Water DCIS Ductal Carcinoma In Situ DBD DNA Binding Domain ER Estrogen Receptor ERE Estrogen Response Elements Her–2/neu Human Epidermal growth factor Receptor HW Hardy-Weinberg IBC Inflammatory Breast Cancer IDC Invasive Ductal Carcinoma ILC Invasive Lobular Carcinoma OR Odd Ratio (Tỷ suất chênh) PR Progesterone Receptor LCIS Lobular Cancer In Situ NST Nhiễm sắc thể PCR Polymerase Chain Reaction (Phản ứng chuỗi trùng hợp) RFLP Restriction Fragment Lenghth Polymorphism (Đa hình chiều dài đoạn cắt giới hạn) SNP Single Nucleotide Polymorphism (Đa hình đơn nucleotide) SSCP Single Strand Conformation Polymorphism TAE Tris – Acetate – EDTA T Thymine iv Trường Đại học Khoa học Tự nhiên – Đại học Quốc gia Hà Nội Phạm Thị Huyền – Cao học K24 DANH MỤC CÁC HÌNH Hình Đa hình đơn nucleotide (SNP) Hình Phân loại SNP Hình Phản ứng enzyme cắt giới hạn Hình Nguyên lý phản ứng PCR–CTPP Hình Cấu trúc vị trí gen CYP19A1 NST 15 Hình Vai trị aromatase q trình tổng hợp estrogen Hình Estrogen điều hồ hoạt động gen Hình Vị trí SNP rs2236722 SNP rs10046 gen CYP19A1 Hình Sơ đồ thí nghiệm Hình 10 Kiểu gen vị trí SNP rs10046 gen CYP19A1 Hình 11 Kiểu gen vị trí SNP rs2236722 gen CYP19A1 Hình 12 Kết điện di ADN tổng số đại diện số mẫu nghiên cứu Hình 13 Sản phẩm PCR đại diện số mẫu nghiên cứu Hình 14 Kết phản ứng cắt với enzyme giới hạn đại diện số mẫu nghiên cứu Hình 15 Kết giải trình tự đoạn gen CYP19A1 dài 202 bp có vị trí SNP rs10046 đại diện số mẫu nghiên cứu Hình 16 Kết phản ứng PCR–CTPP đại diện số mẫu nghiên cứu Hình 17 Kết giải trình tự đoạn gen CYP19A1 dài 427 bp có vị trí SNP rs2236722 đại diện số mẫu nghiên cứu v Trường Đại học Khoa học Tự nhiên – Đại học Quốc gia Hà Nội Phạm Thị Huyền – Cao học K24 DANH MỤC CÁC BẢNG Bảng 1: Tỷ lệ mắ c tử vong ung thư vú ở chủng tộc khác Bảng 2: Cách tích điểm phân độ mơ học theo tiêu chuẩn Elson Bảng 3: Một số nghiên cứu mối liên hệ SNP gen CYP19A1 bệnh ung thư vú Bảng 4: Tiêu chuẩn lựa chọn loại trừ mẫu nghiên cứu Bảng 5: Trình tự mồi cho phản ứng PCR Bảng 6: Thành phần điều kiện phản ứng PCR Bảng 7: Thành phần điều kiện phản ứng cắt với enzyme giới hạn Bảng 8: Trình tự cặp mồi phản ứng PCR–CTPP Bảng 9: Thành phần điều kiện phản ứng PCR–CTPP Bảng 10: Kết OD đại diện số mẫu ADN tách chiết Bảng 11: Phân bố kiểu gen tần số alen gen CYP19A1 SNP rs10046 Bảng 12: Sự phù hợp số liệu quan sát SNP rs10046 với cân HW nhóm bệnh nhóm đối chứng Bảng 13: Mối liên hệ alen, kiểu gen SNP rs10046 gen CYP19A1 với nguy mắc ung thư vú Bảng 14: Phân bố kiểu gen tần số alen gen CYP19A1 SNP rs2236722 Bảng 15: Sự phù hợp số liệu quan sát SNP rs2236722 với cân HW nhóm bệnh nhóm đối chứng Bảng 16: Mối liên hệ alen, kiểu gen SNP rs2236722 gen CYP19A1 với nguy mắc ung thư vú vi Trường Đại học Khoa học Tự nhiên – Đại học Quốc gia Hà Nội Phạm Thị Huyền – Cao học K24 ĐẶT VẤN ĐỀ Ung thư vú một căn bệnh hay gặp chiếm tỷ lệ tử vong hàng đầu số bệnh ung thư nữ giới Tính trung bình cứ 10 bệnh nhân chẩn đốn bị ung thư có người bị ung thư vú, bệnh nhân mắc ung thư vú người bị tử vong Trên thế giới, xét riêng nữ giới, ung thư vú dẫn đầu về số ca mắc mới với tỉ lệ 28% đứng thứ hai về số ca tử vong với 15%, chỉ sau ung thư phổi [3] Ở Mỹ, theo ước tính của tở chức Ung thư Hoa Kỳ, vào năm 2017 có khoảng 40.610 phụ nữ 460 nam giới chết ung thư vú [77] Ở Việt Nam, xác định được 11.060 trường hợp ung thư vú phụ nữ được chẩn đoán với 64,7% trường hợp phụ nữ dưới 50 tuổi vào năm 2012 [51] Hiện nay, phương pháp chẩn đoán ung thư vú gồm chụp X–quang, siêu âm, chụp cắt lớp, hóa mơ miễn dịch được áp dụng hầu hết nước phát triển Còn Việt Nam, bệnh nhân thường được chẩn đoán ung thư giai đoạn 2, nước phát triển từ giai đoạn hoặc Vì vậy, tỉ lệ tử vong ung thư vú phụ nữ Việt Nam cao nhiều so với nước phát triển Từ cho thấy việc tìm kiếm chỉ thị góp phần chẩn đốn sớm nguy mắc ung thư vú người Việt Nam hết sức cần thiết Có nhiều ́u tớ liên quan đến hình thành phát triển ung thư vú như t̉i tác, lối sống, môi trường, yếu tố di truyền, đột biến gen…Trong sớ đó, mặc dù chỉ chiếm từ 5–10% số trường hợp mắc ung thư vú nhưng yếu tố di truyền lại sử dụng cho việc chẩn đốn phát hiện bệnh từ sớm, góp phần giảm tỉ lệ tử vong định hướng cho điều trị đích Các đa hình đơn nucleotit (SNP–Single Nucleotide Polymorphism) thuộc gen tham gia vào điều hoà phát triển của ung thư vú đối tượng được quan tâm tác động của haplotype giữa SNP đối với phát triển ung thư vú [3] Trong số những SNP nhạy cảm với ung thư vú được quan tâm hiện kể đến SNP rs10046 (C>T) SNP 2236722 (Trp39Arg) (T>C) Trường Đại học Khoa học Tự nhiên – Đại học Quốc gia Hà Nội Phạm Thị Huyền – Cao học K24 thuộc gen CYP19A1 Nhiều nghiên cứu trước cho thấy mối liên quan giữa SNP với bệnh ung thư vú khác quần thể, dân tộc [10, 16, 19, 21, 23, 29, 36, 43, 52, 53] Ở Việt Nam, hiện chưa có nghiên cứu về mới liên quan giữa đa hình với nguy mắc ung thư vú Do đó, chúng tơi thực hiện đề tài: “Nghiên cứu mối liên hệ số đa hình đơn nucleotide gen CYP19A1 nguy mắc ung thư vú phụ nữ Việt Nam” Mục tiêu nghiên cứu của đề tài - Xác định tần số alen hai locus SNP rs10046 (C>T) SNP rs2236722 (Trp39Arg) (T>C) thuộc gen CYP19A1 nhóm bệnh nhân ung thư vú nhóm đới chứng - Xác định mới liên quan giữa hai SNP rs10046 (C>T) rs2236722 (T>C) gen CYP19A1 nguy mắc ung thư vú phụ nữ Việt Nam Trường Đại học Khoa học Tự nhiên – Đại học Quốc gia Hà Nội Phạm Thị Huyền – Cao học K24 KẾT LUẬN VÀ KIẾN NGHỊ Kết luận Nghiên cứu mối liên hệ giữa SNP rs10046, SNP rs2236722 của gen CYP19A1 với nguy mắc ung thư vú phụ nữ Việt Nam cho kết như sau: Tần số alen C T SNP rs10046 của gen CYP19A1 tương ứng 38% 62% nhóm đới chứng; tỷ lệ nhóm mắc bệnh tương ứng 47,50% 52,50% Tần số alen T C SNP rs2236722 của gen CYP19A1 tương ứng 97% 3% nhóm đới chứng; tỷ lệ nhóm mắc bệnh tương ứng 95% 5% Chưa thấy được mối liên quan giữa SNP rs10046, SNP rs2236722 của gen CYP19A1 nguy mắc ung thư vú phụ nữ Việt Nam Kiến nghị Dựa những kết đạt được, xin đưa một số kiến nghị cho hướng nghiên cứu tiếp theo như sau: Mở rộng nghiên cứu phạm vi với số lượng mẫu bệnh phẩm đối chứng lớn Tiếp tục nghiên cứu về đa hình đơn nucleotide gen CYP19A1 để xác định mối liên quan giữa SNP với biểu hiện lâm sàng khác 52 Trường Đại học Khoa học Tự nhiên – Đại học Quốc gia Hà Nội Phạm Thị Huyền – Cao học K24 TÀI LIỆU THAM KHẢO TIẾNG VIỆT Bùi Diệu, (2011), “Tình hình mắc ung thư phụ nữ Hà Nội giai đoạn 2005 – 2008”, Hội nghị Ung bướu 2011, Tổng quát Đặng Thế Căn, Tạ Văn Tờ, Lê Đình Roanh, Phạm Thị Luyền, (2000), “Nghiên cứu thụ thể estrogen progesteron ung thư biểu mô tún vú nhuộm hóa mơ miễn dịch”, Tạp chí Y học TP Hồ Chí Minh, 5, tr.22–26 Ngơ Thu Thoa, Ngũn Hồng Như Nga (2007), “Chẩn đốn tế bào học Bệnh viện K”, Y Học TP Hồ Chí Minh, 11, tr.28–30 
 TIẾNG ANH Ali A B., (2009), “Genetic and epigenetic alteration in the BRCA1 gene in Singapore breast and/or ovarian cancer: A popular based study”, A thesis submitted for the degree of doctor of philosophy department of surgegy Yong Loo Lin School of Medicine National University of Singapore, pp.40–41 Artigalás O., Vanni T., Hu M H., Ashton-Prolla P., Schwar I V., (2015), “Influence of CYP19A1 polymorphisms on the treatment of breast cancer with aromatase inhibitors: A systematic review and meta-analysis”, BMC Medicine, 13, pp.139 Baghaei F., Rosmond R., Westberg L., Hellstrand M., Eriksson E., (2003), “The CYP19 gene and associations with androgens and abdominal obesity in premenopausal women”, Obes Res, 11(4), pp.578–585 Bampali K., Grassos C., Mouzarou A., Liakos C., Mertzanos G., Lamnissou K., and Babalis D., (2015), “Genetic Variant in the CYP19A1 Gene Associated with Coronary Artery Disease”, Genetic Research International, pp.15–20 53 Trường Đại học Khoa học Tự nhiên – Đại học Quốc gia Hà Nội Phạm Thị Huyền – Cao học K24 Bloom H J., Richarson W W., (1957), “Histological grading and prognosis in breast carcinoma: a study of 1049 cases of which 359 have been followed for 15 years”, Br J Cancer, 11, pp.359–377 Boone S D., Baumgartner K B., Baumgartner R N., Connor A E., Pinkston C M., Rai S N., (2014), “Associations between CYP19A1 polymorphisms, Native American ancestry, and breast cancer risk and mortality: The Breast Cancer Health Disparities Study”, Cancer Causes & Control, 25(11), pp.1461–1471 10 Bora M T., Tülin Ö., Halil I K., Sennur I., Calay Z., Oğuz Ö., Turgay I., (2010), “CYP17 (T-34C) and CYP19 (Trp39Arg) Polymorphisms and their Cooperative Effects on Breast Cancer Susceptibility”, in vivo, 24, pp.71–74 11.Brody J., Moysich K., Humblet O., Attfield K R., Beehler G P., Rudel R A., (2007), “Environmental pollutants and breast cancer: epidemiologic studies”, Cancer, 109, pp.2667–2711 12 Cai Q., Kataoka N., Li C., Wen W., Smith J R., Gao Y T., Xiao O S., Zheng W., (2008), ”Haplotype analyses of CYP19A1 gene variants and breast cancer risk: Results from the Shanghai Breast Cancer Study”, Cancer Epidemiol Biomarkers Prev, 17(1), pp.27–32 13.Chattopadhyay S., Siddiqui S., Akhtar M S., Najm M Z., Deo S V., Shukla N K., (2014), “Genetic polymorphisms of ESR1, ESR2, CYP17A1, and CYP19A1 and the risk of breast cancer: A case control study from North India”, Tumour Biology, 35(5), pp.4517–4527 14 Chen S A., Besman M J., Sparkes R S., Zollman S., Klisak I., Mohandas T., Hall P F., Shively J E., (1988), “Human aromatase: cDNA cloning, southern blot analysis, and assignment of the gene to chromosome 15”, DNA, 7, pp.27–38 15.Chen S., Itoh T., Wu K., Zhou D., Yang C., (2002), “Transcriptional 54 Trường Đại học Khoa học Tự nhiên – Đại học Quốc gia Hà Nội Phạm Thị Huyền – Cao học K24 regulation of aromatase expression in human breast tissue”, Journal of Steroid Biochemistry and Molecular Biology, 83, pp.93–99 16.Chen C., Sakoda L C., Doherty J A., Loomis M M., Fish S., Ray R M., (2008), “Genetic variation in CYP19A1 and risk of breast cancer and brocystic breast conditions among women in Shanghai, China”, Cancer Epidemiology Biomarkers Prevention, 17(12), pp.3457–3466 17 Christopher, (2003), “Differences in breast cancer stage, treatment, and 
survival by race and ethnicity”, Arch Intern Med, 20 (163), pp 49–56 18.Darabi H., Czene K., Wedrén S., Li Y., Liu J., Hall P., (2011), “Genetic variation in the androgen estrogen conversion pathway in relation to breast cancer prognosticators”, Breast Cancer Research and Treatment, 127(2), pp.503–509 19.Dunning A M., Dowsett M., Healey C S., Tee L., Luben R N., Folkerd E., Novik K L., Kelemen L., Ogata S., Pharoah P D., Easton D F., Day N E., Ponder B A., (2004), “Polymorphisms associated with circulating sex hormone levels in postmenopausal women”, J Natl Cancer Inst, 96(12), pp.936–945 20.Elston C W., (1993), “Method for grading breast cancer”, J Clin Pathol, 46, pp.189–190 21.Farzaneh F., Noghabaei G., Barouti E., Pouresmaili F., Jamshidi J., Fazeli A., (2016), “Analysis of CYP17, CYP19 and CYP1A1 gene polymorphisms in Iranian women with breast cancer”, Asian Pacific Journal of Cancer Prevention, 17, pp.23–26 22.Feigelson H S., Henderson B E., (1996), “Estrogens and breast cancer”, Carcinogenesis, 17(11), pp.2279–2284 23.Ghisari M., Eiberg H., Long M., Bonefeld-Jørgensen E C., (2014), “Polymorphisms in phase I and phase II genes and breast cancer risk and 55 Trường Đại học Khoa học Tự nhiên – Đại học Quốc gia Hà Nội Phạm Thị Huyền – Cao học K24 relations to persistent organic pollutant exposure: A case-control study in Inuit women”, Environmental Health, 13(1), pp.19 24.Hamaguchi M., Nishio M., Toyama T., Sugiura H., Kondo N., Fujii Y., (2008), “Possible difference in frequencies of genetic polymorphisms of estrogen receptor alpha, estrogen metabolism and P53 genes between estrogen receptor-positive and negative breast cancers”, Japanese Journal of Clinical Oncology, 38(11), pp.734–742 25.Harada N., Sasano H., Murakami H., Ohkuma T., Nagura H., Takagi Y., (1999), “Localized expression of aromatase in human vascular tissues”, Circulation Research, 84, pp.1285–1291 26.Harada N., Utsumi T., Takagi Y., (1993), “Tissue-specific expression of the human aromatase cytochrome P450 gene by alternative use of multiple exons and promoters, and switching of tissue-specific exons in carcinogenesis”, Proceedings of the National Academy of Sciences of the United States of America, 90, pp.11312–11316 27.Henderson B E., Ross R., Bernstein L., (1988), “Estrogens as a cause of human cancer: The Richard and Hinda Rosenthal Foundation award lecture”, Cancer Research, 48, pp.246–253 28.Henry N L., Chan H P., Dantzer J., Goswami C P., Li L., Skaar T C., (2013), “Aromatase inhibitor induced modulation of breast density: Clinical and genetic effects”, British Journal of Cancer, 109(9), pp.2331–2339 29 Hirose K., Matsuo K., Toyama T., (2004), “The CYP19 gene codon 39 Trp/Arg polymorphism increases breast cancer risk in subsets of premenopausal Japanese”, Cancer Epidemiol Biomark Prev, 13, pp.1407–1411 30.Hortobagyi G.N., (2005), “Introduction and Background in Molecular Oncology of Breast Cancer”, Molecular Oncology of Breast Cancer, 1, pp.1–11 56 Trường Đại học Khoa học Tự nhiên – Đại học Quốc gia Hà Nội Phạm Thị Huyền – Cao học K24 31.Hulka B S., Stark A T., (1995), “Breast cancer: cause and prevention”, The Lancet, 346(8979), pp.883–887 32.Hu Z., Song C G., Lu J S., Luo J M., Shen Z Z., Huang W., (2007), “A multigenic study on breast cancer risk associated with genetic polymorphisms of ER Alpha, COMT and CYP19 gene in BRCA1/BRCA2 negative Shanghai women with early onset breast cancer or a ected relatives”, Journal of Cancer Research and Clinical Oncology, 133(12), pp.969–978 33.Jemal A., Murray T., Ward E., Samuels A., Tiwari R C., Ghafoor A., Feuer E.J., (2005), “Cancer statistics 2005”, Cancer journal for clinicians, 55, pp.10–30 34.Jemal A., Siegel R., Xu I., Ward E., (2010), “Cancer statistics 2010”, CA Cancer J Clin, 60, pp.277–300 35.Karin Z., Maurice M., Christian S., Dietmar A., Martin S., (2014), “Analysis of the rs10046 Polymorphism of Aromatase (CYP19) in Premenopausal Onset of Human Breast Cancer”, International Journal of Molecular Sciences, 3(1), pp.720 36.Kristensen V N., Harada N., Yoshimura N., Haraldsen E., Lonning P E., (2000), “Genetic variants of CYP19 (aromatase) and breast cancer risk”, Oncogene, 19, pp.1329–1333 37.Kuo S H., Yang S Y., Lien H C., Lo C., Lin C H., Lu Y S., (2013), “CYP19 genetic polymorphism haplotype AASA is associated with a poor prognosis in premenopausal women with lymph node-negative, hormone receptor-positive breast cancer”, BioMed Research International, 2013, pp.562197 
 38 Lee K M., Abel J., Ko Y., Harth V., Park W Y., Seo J S., (2003), “Genetic polymorphisms of cytochrome P450 19 and 1B1, alcohol use, and breast cancer 57 Trường Đại học Khoa học Tự nhiên – Đại học Quốc gia Hà Nội Phạm Thị Huyền – Cao học K24 risk in Korean women”, British Journal of Cancer, 88(5), pp.675–678 
 39.Liu L., Bai Y X., Zhou J H., Sun X W., Sui H., (2013), “A polymorphism at the 3′-UTR region of the aromatase gene is associated with the efficacy of the aromatase inhibitor, anastrozole, in metastatic breast carcinoma”, International Journal of Molecular Sciences, 14(9), pp.18973–18988 40 Lunardi G., Piccioli P., Bruzzi P., Notaro R., Lastraioli S., Serra M., (2013), “Plasma estrone sulfate concentrations and genetic variation at the CYP19A1 locus in postmenopausal women with early breast cancer treated with letrozole”, Breast Cancer Research and Treatment, 137(1), pp.167–174 41 McPhaul M.J., Herbst M A., Matsumine H., Young M., Lephart E D., (1993), “Diverse mechanisms of control of aromatase gene expression”, Journal of Steroid Biochemistry and Molecular Biology, 44(4-6), pp.341–346 42.Means G.D., Mahendroo M.S., Corbin C.J., Mathis J.M., Powell F.E., Mendelson C.R., Simpson E.R., (1989), “Structural analysis of the gene encoding human aromatase cytochrome P-450, the enzyme responsible for estrogen biosynthesis”, J Biol Chem, 264(5), pp.19385–19391 43.Miyoshi Y., Iwao K., Ikeda N., Egawa C., Noguchi S., (2000), “Breast cancer risk associated with polymorphism in CYP19 in Japanese women”, Int J Cancer, 89, pp.325–328 44.Napoli N., Rastelli A., Ma C., Colleluori G., Vattikuti S., ArmamentoVillareal R., (2015), “Genetic polymorphism at Val80 (rs700518) of the CYP19A1 gene is associated with body composition changes in women on aromatase inhibitors for ER (+) breast cancer”, Pharmacogenetics and Genomics, 25(8), pp.377–381 45.Nobuyuki H., Toshiko S., Keitaro M., Kenichi K., Takashi T., Kazuo T., (2000), “Polymerase Chain Reaction with Confronting Two-pair Primers for Polymorphism Genotyping”, Jpn J Cancer Res, 91, pp.865–868 58 Trường Đại học Khoa học Tự nhiên – Đại học Quốc gia Hà Nội Phạm Thị Huyền – Cao học K24 46.O’Neill J S., Miller W R., (1987), “Aromatase activity in breast adipose tissue from women with benign and malignant breast diseases”, British Journal of Cancer, 56(5), pp.601–604 47.Page D L., Dupont W D., Rogers L W., Landenberger M., (1982), “Intraductal carcinoma of the breast: follow-up after biopsy only”, Cancer, 49, pp.751–758 48.Parkin D M., (2011), “Cancer attributable to reproductive factors in the UK in 2010”, Br J Cancer, 105, pp.73–76 49 Park I H., Lee Y S., Lee K S., Kim S Y., Hong S H., Jeong J., (2011), “Single nucleotide polymorphisms of CYP19A1 predict clinical outcomes and adverse events associated with letrozole in patients with metastatic breast cancer”, Cancer Chemotherapy and Pharmacology, 68(5), pp.1263–1271 50.Pherson K M., Steel C M., Dixon J M., (2000), “Breast cancerepidermiology, risk factors, and genetics”, BMJ, 321(7261), pp.624–628 51.Phuong Dung (Yun) Trieu; Claudia Mello-Thoms; Patrick C., Brennan., (2015), “Female breast cancer in Vietnam: a comparison across Asian speci c regions”, Cancer Biol Med, 12, pp.238–245 52.Pineda B., García-Pérez M Á., Cano A., Lluch A., Eroles P., (2013), “Associations between Aromatase CYP19 rs10046 Polymorphism and Breast Cancer Risk: From a Case–Control to a Meta–Analysis of 20.098 Subjects”, PLos One, 8(1), pp.1–9 53.Ralph D A., Zhao L P., Aston C E., Manjeshwar S., Pugh T W., (2007), “Age-specific association of steroid hormone pathway gene polymorphisms with breast cancer risk”, Cancer, 109, pp.1940–1948 54.Rapidus, (1998), “Mapping of ER gene CpG island methylation by Methylation-specific Polymerase Chain Reaction”, Cancer Research, 58, pp.2515–2519 59 Trường Đại học Khoa học Tự nhiên – Đại học Quốc gia Hà Nội Phạm Thị Huyền – Cao học K24 55.Reis L A G., Harkins D., Krapscho M., Mariotto A., Miller B A., Feuer E J., Clegg L., Eisner M P., Horner M J., (2007), “Cancer statistics review 1975-2003”, Cancer, 11, pp.62–74 56.Samson M., Rama R., Swaminathan R., Sridevi V., Nancy K N., Rajkumar T., (2009), “CYP17 (T-34C), CYP19 (Trp39Arg), and FGFR2 (C-906T) polymorphisms and the risk of breast cancer in South Indian women”, Asian Pacific J Cancer Prev, 10, pp.111–116 57.Santa Maria C A., Blackford A., Nguyen A T, Skaar T C., Philips S., Oesterreich S., (2016), “Association of variants in candidate genes with lipid profiles in women with early breast cancer on adjuvant aromatase inhibitor therapy”, Clinical Cancer Research, 22(6), pp.1395–1402 58 Sasano H., Harada N., (1998), “Intratumoral aromatase in human breast, endometrial, and ovarian malignancies”, Endocrine Reviews, 19, pp.593–607 59.Sasano H., Uzuki M., Sawai T., Nagura H., Matsunaga G., Kashimoto O., Harada N., (1997), “Aromatase in human bone tissue”, Journal of Bone and Mineral Research, 12, pp.1416–1423 60.Simpson E R., Davis S R., (2001), “Minireview: Aromatase and the regulation of estrogen biosynthesis – Some new perspectives”, Endocrinology, 142 (11), pp.4589–4594 61.Simpson E., Rubin G., Clyne C., Robertson K., O’Donnell L., Davis S., Jones M., (1999), “Local estrogen biosynthesis in males and females endocrine-related”, Cancer, 6, pp.131–137 62.Shao X., Guo Y., Xu X., Zheng Y., Wang J., Chen Z., (2015), “The CYP19 RS4646 polymorphism IS related to the prognosis of stage I-II and operable stage III breast cancer”, PLoS One, 10(3) 63.Song C G., Hu Z., Yuan W T., Di G H., Shen Z Z., Huang W., (2006), “Effect of R264C polymorphism in CYP19A1 gene on BRCA1/2-negative 60 Trường Đại học Khoa học Tự nhiên – Đại học Quốc gia Hà Nội Phạm Thị Huyền – Cao học K24 hereditary breast cancer from Shanghai population of China”, Chinese Journal of Medical Genetics, 23(2), pp.181–183 64.Surekha D., Sailaja K., Rao D N., Padma T., Raghunadharao D., (2014), “Vishnupriya S Association of CYP19 polymorphisms with breast cancer risk: A case-control study”, J Nat Sc Biol Med, 5, pp.250–254 65.Szyłło K., Smolarz B., Romanowicz-Makowska H., and Kulig A., (2006), “The polymorphisms of the CYP17 and CYP19 genes in endometrial cancer patients”, Polish J Pathol, 57(1), pp.35–40 66.Talbo K.E., Gammon M.D., Kibriya M.G., Chen Y., Teitelbaum S.L., Long C.M., (2008), “A CYP19 (aromatase) polymorphism is associated with increased premenopausal breast cancer risk”, Breast Cancer Research and Treatment, 111(3), pp.481–487 67.Thompson D J., O’Mara T A., Glubb D M., Painter J N., Cheng T., Folkerd E., (2016), “CYP19A1 fine-mapping and Mendelian randomization: Estradiol is causal for endometrial cancer”, EndocrineRelated Cancer, 23(2), pp.77–91 68.Thyagarajan B., Bro M., Mink P., Folsom A R., Anderson K E., Oeing W S., (2004), “CYP1B1 and CYP19 gene polymorphisms and breast cancer incidence: No association in the ARIC study”, Cancer Le ers, 207(2), pp.183–189 69.Xu, (2009), “BRCA1 promoter methylation is associated with increased mortality among women with breast cancer”, Breast Cancer Res Treat, 115, pp.397–404 70.Yang L., Wang X Y., Li Y T., Wang H L., Wu T., Wang B., (2015), “CYP19 gene polymorphisms and the susceptibility to breast cancer in Xinjiang Uigur women”, Genetics and Molecular Research, 14(3), pp.8473–8482 61 Trường Đại học Khoa học Tự nhiên – Đại học Quốc gia Hà Nội Phạm Thị Huyền – Cao học K24 71 Yoshimoto N., Nishiyama T., Toyama T., Takahashi S., Shiraki N., Sugiura H., (2011), “Genetic and environmental predictors, endogenous hormones and growth factors, and risk of estrogen receptor positive breast cancer in Japanese women”, Cancer Science, 102(11), pp.2065–2072 72.Ziegler R G., Hoover R N., Pike M C., Hildesheim A., Nomura A M., West D W., Williams A H., (1993), “Migration patterns and breast cancer risk in Asian – American women”, J Natl Cancer Inst, 85, pp.1819–1827 73.Zins K., Mogg M., Schneeberger C., Abraham D., Schreiber M., (2014), “Analysis of the rs10046 polymorphism of aromatase (CYP19) in premenopausal onset of human breast cancer”, International Journal of Molecular Sciences, 15(1), pp.712–724 TRANG WEB 74.http://www.benhvienk.com/index 75.http://www.breast-cancer.ca 76.https://vi.scribd.com/doc/131750913/BAI-BAO-CAO-NHOM-5-SNP-doc 77.https://www.cancer.org/content/dam/cancer-org/research/cancer-facts-andstatistics/breast-cancer-facts-and-figures/breast-cancer-facts-and-figures2017-2018.pdf 78.https://nccd.cdc.gov/uscs/toptencancers.aspx 79.https://www.ncbi.nlm.nih.gov/clinvar/RCV000323501/ 62 Trường Đại học Khoa học Tự nhiên – Đại học Quốc gia Hà Nội Phạm Thị Huyền – Cao học K24 PHỤ LỤC Thơng tin chẩn đốn lâm sàng 60 mẫu bệnh phẩm ung thư vú Chẩn đoán lâm sàng STT Mã số Ký hiệu Tuổi 62731 1B 57 62604 2B 27 60362 3B 55 UTV: biểu mô tuỷ, chưa di 60953 4B 61 UTV: biểu mô ống xâm lấn, độ II 60106 5B 69 61192 6B 87 62839 7B 62 60687 8B 57 UTV: biểu mô ống xâm lấn, độ I 59908 9B 55 UTV: biểu mô ống xâm lấn, độ II 10 61460 10B 43 11 60803 11B 49 12 60264 12B 37 13 60377 13B 34 UTV: biểu mô thuỳ, chưa di hạch 14 63371 14B 53 UTV: biểu mô ống xâm lấn, độ II 15 61477 15B 69 16 59909 16B 57 UTV: biểu mô ống xâm lấn độ II, di hạch UTV: biểu mô ống xâm lấn độ II, di hạch UTV: biểu mô ống xâm lấn độ II, di hạch UTV: biểu mô ống xâm lấn, độ III UTV: biểu mô ống xâm lấn, độ II, chưa di UTV: biểu mô ống xâm lấn độ II, di hạch UTV: biểu mô ống xâm lấn, độ III UTV: biểu mô ống xâm lấn độ II, di hạch UTV: biểu mô ống xâm lấn độ II, di hạch UTV: biểu mô ống xâm lấn, độ II 63 Trường Đại học Khoa học Tự nhiên – Đại học Quốc gia Hà Nội Phạm Thị Huyền – Cao học K24 STT Mã số Ký hiệu Tuổi Chẩn đoán lâm sàng 17 60251 17B 40 UTV: biểu mô ống xâm lấn, độ II 18 61851 18B 50 UTV: biểu mô nội ống không xâm nhập 19 62866 19B 50 UTV: biểu mô ống xâm lấn, độ II, chưa di 20 61077 20B 39 UTV: biểu mô thuỳ, di hạch 21 61078 21B 54 UTV: biểu mô ống xâm lấn, độ II 22 61593 22B 36 UTV: biểu mô ống xâm lấn, độ I, chưa di 23 61348 23B 50 UTV: biểu mô thuỳ, di hạch nách 24 61719 24B 39 UTV: biểu mô ống xâm lấn, di hạch 25 32993 25B 31 UTV: biểu mô ống xâm lấn, độ II 26 39082 26B 50 UTV: biểu mô ống xâm lấn, độ II 27 39485 27B 63 UTV: biểu mô ống xâm lấn, độ II 28 40209 28B 70 UTV: biểu mô ống xâm lấn, độ II 29 60000 29B 35 UTV: biểu mô ống xâm lấn, di hạch 30 60001 30B 38 UTV: biểu mô ống xâm lấn, độ III 31 60013 31B 41 UTV: biểu mô ống xâm lấn, độ III 32 60014 32B 35 UTV: biểu mô ống xâm lấn, chưa di 33 64732 33B 51 UTV: biểu mô ống xâm lấn, di hạch 34 60109 34B 56 UTV: biểu mô ống xâm lấn, di hạch 35 62733 35B 67 UTV: biểu mô thuỳ, di hạch nách 36 62606 36B 51 UTV: biểu mô nội ống không xâm nhập 37 62841 37B 31 UTV: biểu mô ống xâm lấn, chưa di 38 62868 38B 64 UTV: biểu mô tuỷ, chưa di 39 60252 39B 50 UTV: biểu mô ống xâm lấn, độ II 64 Trường Đại học Khoa học Tự nhiên – Đại học Quốc gia Hà Nội Phạm Thị Huyền – Cao học K24 Chẩn đoán lâm sàng STT Mã số Ký hiệu Tuổi 40 60378 40B 38 UTV: biểu mô ống xâm lấn, độ II 41 60265 41B 34 UTV: biểu mô ống xâm lấn, độ III 42 60804 42B 39 UTV: biểu mô ống xâm lấn, di hạch 43 60688 43B 39 UTV: biểu mô ống xâm lấn, chưa di 44 61194 44B 50 UTV: biểu mô thuỳ, di hạch nách 45 61720 45B 56 UTV: biểu mô ống xâm lấn, độ III 46 61349 46B 42 UTV: biểu mô ống xâm lấn, độ II 47 61594 47B 48 UTV: biểu mô ống xâm lấn, độ II 48 61079 48B 60 UTV: biểu mô tuỷ, chưa di 49 61852 49B 39 UTV: biểu mô ống xâm lấn, chưa di 50 63373 50B 46 UTV: biểu mô ống xâm lấn, độ III 51 63372 51B 61 UTV: biểu mô ống xâm lấn, độ II 52 62867 52B 51 UTV: biểu mô thuỳ, di hạch nách 53 62840 53B 57 UTV: biểu mô ống xâm lấn, độ III 54 62605 54B 53 UTV: biểu mô nội ống không xâm nhập 55 62732 55B 32 UTV: biểu mô ống xâm lấn, độ II 56 61478 56B 47 UTV: biểu mô nội ống không xâm nhập 57 61193 57B 49 UTV: biểu mô ống xâm lấn, độ II 58 61461 58B 48 UTV: biểu mô tuỷ, chưa di 59 60108 59B 53 UTV: biểu mô thuỳ, di hạch nách 60 60102 60B 50 UTV: biểu mô ống xâm lấn, độ III 65 Trường Đại học Khoa học Tự nhiên – Đại học Quốc gia Hà Nội Phạm Thị Huyền – Cao học K24 Thông tin 50 mẫu đối chứng STT Ký hiệu Tuổi STT Ký hiệu Tuổi 1C 65 26 26C 38 2C 62 27 27C 44 3C 62 28 28C 68 4C 59 29 29C 67 5C 36 30 30C 67 6C 37 31 31C 55 7C 26 32 32C 39 8C 49 33 33C 36 9C 49 34 34C 35 10 10C 68 35 35C 32 11 11C 25 36 36C 43 12 12C 32 37 37C 67 13 13C 34 38 38C 69 14 14C 37 39 39C 50 15 15C 39 40 40C 66 16 16C 55 41 41C 60 17 17C 54 42 42C 55 18 18C 67 43 43C 67 19 19C 55 44 44C 54 20 20C 67 45 45C 39 21 21C 37 46 46C 39 22 22C 44 47 47C 36 23 23C 38 48 48C 34 24 24C 66 49 49C 32 25 25C 69 50 50C 68 66 ... NHIÊN Phạm Thị Huyền NGHIÊN CỨU MỐI LIÊN HỆ GIỮA MỘT SỐ ĐA HÌNH ĐƠN NUCLEOTIDE CỦA GEN CYP19A1 VÀ NGUY CƠ MẮC UNG THƯ VÚ Ở PHỤ NỮ VIỆT NAM Chuyên ngành Di truyền học Mã số: 60420121 LUẬN VĂN... mới liên quan giữa đa hình với nguy mắc ung thư vú Do đó, chúng tơi thực hiện đề tài: ? ?Nghiên cứu mối liên hệ số đa hình đơn nucleotide gen CYP19A1 nguy mắc ung thư vú phụ nữ Việt Nam? ??... 1.3 Gen CYP19A1 ung thư vú .19 1.3.1 Gen CYP19A1 19 1.3.2 Enzyme aromatase trình sinh tổng hợp estrogen .21 1.3.3 Estrogen ung thư vú 22 1.4 Đa hình đơn nucleotide gen CYP19A1