Bước đầu nghiên cứu thành phần hóa học của cây cỏ rươi lá bắc (murdannia bracteata j k morton ex d y hong)

ĐẠI HỌC QUỐC GIA HÀ NỘI KHOA Y DƯỢC  - - LÊ PHƯƠNG THẢO BƯỚC ĐẦU NGHIÊN CỨU THÀNH PHẦN HÓA HỌC CỦA CÂY CỎ RƯƠI LÁ BẮC (Murdannia bracteata J.K.Morton ex D.Y.Hong) KHÓA LUẬN TỐT NGHIỆP ĐẠI HỌC NGÀNH DƯỢC HỌC HÀ NỘI – 2020 DANH MỤC CHỮ VIẾT TẮT Chữ viết tắt (ppm) Tên tiếng Anh (ppm = part per million) ALT Alanine transaminase AST Aspartate transaminase d doublet dd double doublet 13 C-NMR DEPT D-GalN dLGG 13 C Nuclear Magnetic Tên tiếng Việt Độ dịch chuyển hóa học Phổ cộng hưởng từ hạt nhân Resonance Spectroscopy cacbon-13 Distortionless Enhancement by Polarization Transfer Phổ DEPT D-galactosamine N 1,2-di-O-α-linolenoyl-3-O- galactopyranosyl-sn-glycerol EC50 Half Maximal Effective Concentration Nồng độ cho 50% tác dụng tối đa ESI-MS Electrospray Ionization Mass Khối phổ đo phương pháp Spectrometry ion hóa phun điện tử EtOAc Ethyl acetate EtOH Ethanol FTIR Fourier Transform Infrared Spectroscopy Phổ hồng ngoại biến đổi Fourier GC-MS Gas Chromatography-Mass Spectrometry Sắc ký khí ghép khối phổ Galactolipids-enriched Extract of M bracteata Dịch chiết giàu galactolipid Murdannia bracteata GLE Chữ viết tắt H-NMR HE Tên tiếng Anh H Nuclear Magnetic Tên tiếng Việt Phổ cộng hưởng từ hạt nhân Resonance Spectroscopy proton Hexane Extract of M bracteata Dịch chiết hexan M bracteata HMBC Heteronuclear Multiple Bond Phổ tương tác dị hạt nhân qua Correlation nhiều liên kết HPLC High Performance Liquid Chromatography Sắc ký lỏng hiệu cao HSQC Heteronuclear Single Quantum Coherence Phổ tương tác dị hạt nhân qua liên kết Half Maximal Inhibitory Concentration Nồng độ ức chế tối đa nửa iNOS Inducible Nitric Oxide Synthase NO synthase cảm ứng IR Infrared Spectroscopy Phổ hồng ngoại J (Hz) J coupling constant Hằng số ghép LPS Lipopolysaccharide ME Methanol Extract of Murdannia bracteata IC50 MeOH MIC Dịch chiết methanol M bracteata Methanol Minimun Inhibitory Concentration Nồng độ ức chế tối thiểu chất có hoạt tính kháng sinh s singlet SI Selective Index Hệ số chọn lọc Ultra Performance Liquid Chromatography Sắc ký lỏng siêu hiệu UPLC DANH MỤC HÌNH ẢNH STT Tên hình Hình 1.1 Đặc điểm thực vật số loài thuộc chi Murdannia Việt Nam Trang 5- Hình 1.2 Hoa số lồi thuộc chi Murdannia Hình 1.3 Đặc điểm quan sinh dưỡng Murdannia bracteata Hình 1.4 Đặc điểm quan sinh sản Murdannia bracteata Hình 3.1 Sơ đồ chiết xuất phân đoạn từ Cỏ rươi bắc 26 Hình 3.2 Sơ đồ phân lập hai hợp chất từ phân đoạn ethyl acetat 27 Hình 3.3 Cấu trúc hóa học hợp chất CT1 29 Hình 3.4 Cấu trúc hóa học hợp chất CT2 30 DANH MỤC BẢNG BIỂU STT Tên bảng Bảng 1.1 Phân bố loài thuộc chi Murdannia Việt Nam Trang 4- Bảng 1.2 Một số hợp chất phân lập từ Murdannia bracteata 11 - 12 Bảng 3.1 Kết định tính nhóm chất hữu phương pháp hóa học 24 - 25 Bảng 3.2 Số liệu phổ DEPT, 1H- 13C-NMR CT1 chất 28 tham khảo đo DMSO Bảng 3.3 Số liệu phổ DEPT, 1H- 13C-NMR CT2 chất tham khảo đo DMSO 29 - 30 MỤC LỤC MỞ ĐẦU CHƯƠNG 1: TỔNG QUAN .3 1.1 Tổng quan chi Murdannia 1.1.1 Vị trí phân loại chi Murdannia 1.1.2 Số lượng loài phân bố loài thuộc chi Murdannia 1.1.3 Đặc điểm thực vật chi Murdannia 1.2 Tổng quan loài Murdannia bracteata 1.2.1 Đặc điểm hình thái lồi Murdannia bracteata 1.2.2 Đặc điểm phân bố loài Murdannia bracteata 1.2.3 Thành phần hóa học Murdannia bracteata 1.2.4 Tác dụng sinh học Murdannia bracteata 13 1.2.5 Công dụng Murdannia bracteata theo y học cổ truyền 16 1.2.6 Sản phẩm có thành phần Murdannia bracteata thị trường 16 CHƯƠNG 2: ĐỐI TƯỢNG VÀ PHƯƠNG PHÁP NGHIÊN CỨU 17 2.1 Đối tượng nghiên cứu .17 2.1.1 Nguyên liệu 17 2.1.2 Hóa chất, trang thiết bị 17 2.2 Phương pháp nghiên cứu 18 2.2.1 Phương pháp định tính nhóm chất hữu có Cỏ rươi bắc 18 2.2.2 Phương pháp chiết xuất, phân lập xác định cấu trúc số hợp chất có Cỏ rươi bắc 22 CHƯƠNG 3: KẾT QUẢ VÀ BÀN LUẬN .24 3.1 Kết định tính nhóm chất phương pháp hóa học 24 3.2 Kết chiết xuất, phân lập số hợp chất Cỏ rươi bắc 25 3.2.1 Chiết phân đoạn từ Cỏ rươi bắc 25 3.2.2 Phân lập hợp chất sắc ký cột 26 3.2.3 Xác định cấu trúc hợp chất phân lập .27 3.3 Bàn luận 31 3.3.1 Về định tính nhóm chất 31 3.3.2 Về chiết xuất phân lập 32 KẾT LUẬN VÀ KIẾN NGHỊ 36 MỞ ĐẦU Nhờ có vị trí địa lý thuận lợi, khí hậu nhiệt đới độ ẩm cao, Việt Nam sở hữu hệ sinh thái vô phong phú đa dạng Cây cối sinh trưởng, phát triển mạnh, nguồn tài nguyên quan trọng cho tiềm dược liệu Theo ước tính nước ta có 12000 lồi thực vật bậc cao, số có khoảng 4000 loài sử dụng làm thuốc [5] Ngày nay, nhu cầu thuốc có nguồn gốc dược liệu ngày tăng, việc sâu vào nghiên cứu, xác minh kinh nghiệm y học cổ truyền tìm kiếm hợp chất tự nhiên có hoạt tính sinh học cao giới quan tâm [1] Đặc biệt Việt Nam, đất nước giàu tài nguyên dược liệu, xu hướng phát triển sản phẩm từ tự nhiên hướng đắn Thảo dược đối tượng lý tưởng để nhà khoa học sàng lọc tìm hoạt chất cho tác dụng mạnh, độc tính thấp, giảm thiểu chi phí nghiên cứu phát triển so với tổng hợp hóa học Mỗi thuốc có chứa hỗn hợp hợp chất khác nhau, nhiên trường hợp hầu hết chưa xác định rõ hợp chất cho tác dụng điều trị Chính vậy, việc nghiên cứu thành phần hóa học lồi đem lại ý nghĩa khoa học giá trị thực tiễn cao Những tiến định tính định lượng phân tử thuốc từ thực vật giúp hiểu rõ mối quan hệ thành phần tác dụng chúng Cây Cỏ rươi bắc thuộc chi Murdannia, chi lớn họ Thài lài (Commelinaceae) Chi phân bố chủ yếu vùng nhiệt đới ôn đới ấm [18], thích hợp với khí hậu nóng ẩm; Việt Nam có 16 lồi, lồi sử dụng làm thuốc [2] Cỏ rươi bắc, tên khoa học Murdannia bracteata J.K.Morton ex D.Y.Hong, tìm thấy Trung Quốc, Lào, Thái Lan, Việt Nam [48] Một số nghiên cứu giới ghi nhận lồi có tác dụng kháng khuẩn [47], chống viêm [46], bảo vệ gan [49], hỗ trợ điều trị ung thư gan tiểu đường [39] Trong y học cổ truyền số nước, Murdannia bracteata dùng để trị ho [30], kháng viêm [2], chữa bệnh gan, thận [39] Tuy nhiên, nghiên cứu cụ thể thành phần hóa học tác dụng sinh học Cỏ rươi bắc Việt Nam hạn chế Để góp phần xây dựng sở khoa học cho việc ứng dụng Cỏ rươi bắc điều trị bệnh, lựa chọn thực đề tài: “Bước đầu nghiên cứu thành phần hóa học Cỏ rươi bắc (Murdannia bracteata J.K.Morton ex D.Y.Hong)” với mục tiêu sau: Định tính sơ thành phần hóa học Cỏ rươi bắc Chiết xuất, phân lập xác định cấu trúc 02 hợp chất từ Cỏ rươi bắc CT1-DMSO-HMBC ppm 10 20 30 40 50 60 70 80 90 100 110 120 130 140 150 160 170 180 190 200 210 13 12 11 10 ppm CT1-DMSO-HMBC ppm 95 100 105 110 115 120 125 130 135 140 145 150 155 160 165 170 175 180 185 13 12 11 10 ppm CT1-DMSO-HMBC ppm 95 100 105 110 115 120 125 130 135 140 145 150 155 160 165 170 175 180 8.0 7.8 7.6 7.4 7.2 7.0 6.8 6.6 6.4 6.2 ppm Display Report - Selected Window Selected Analysis Analysis Name: Method: Sample Name: Analysis Info: CT2.d Cot150x3mm.m CT2 Column Eclipse XDB-C18, 4.6 x150mm MSD Trap Report v (A4-Opt2) Instrument: LC-MSD-Trap-SL Operator: 2195410AE0000515 Page of Print Date: 14/4/2020 Acq Date: 14/4/2020 1:36:14 PM 1:36:01 PM 14 13 12 11 10 ppm 12.501 10.802 1.00 9.539 0.81 9.305 7.676 0.94 2.00 1HDMS O 2.508 2.503 2.500 2.495 2.492 CT 7.670 7.549 7.543 7.532 7.526 6.894 6.875 6.406 6.401 6.188 6.183 3.297 1.00 1.03 1.02 1.04 1.02 1PROCNO10EXPNOCT2MAINAMEParametersDataCurre nt sec000 00000.1D1K2.304TEusec50.6D Eusec0 00.50DW09.111RGsec2767999 3AQHz1 52588.0FIDRESHz000.10000SW H2DS16 NSDMSOSOLVENT65536TDzg30PU LPROGB B/PABBOmm5PROBHDspectINSTR UM14.1 6Time20200409DateParameter W00000000.22PLW1usec20.10P11HNUC1MHz1920889.500SFO1==== ====f1CHANNEL======== 00.1PC0GB Hz30.0LB0SSBEMWDWMHz1890051.500SF65536SIpar ametersProcessing-F2 1.00 7.7 6.7 1.03 7.676 7.670 5.7 7.549 7.543 7.532 7.526 4.7 3.7 1.7 CT2-DMSO -1H 2.7 0.7 1.02 9.6 6.894 6.875 8.6 7.6 6.6 5.6 1.04 4.6 6.406 6.401 3.6 1.02 2.6 ppm 6.188 6.183 220 200 180 160 140 120 100 80 60 40 20 ppm 175.79 163.83 135.67 119.93 115.56 115.04 102.97 98.14 93.30 40.00 39.83 39.66 39.50 39.33 39.16 39.00 DMS C13CP DO 160.68 156.10 147.65 146.77 145.01 121.92 1PROCNO2EXPNOCT2LOINAMEParametersDataCurre nt sec0 300 000 0.0D11sec00 000 000 2D1 K7 304 TEusec50.6DEus ec00 0.1 6DW5 7.1 98R Gsec0485760.1A QHz 476 837 0FI DRE SHz0 00.3 125 0SW H4DS256NSDM SOS OLV ENT6 553 6TD zgpg30PULPROGB B/PA BBO mm5P ROB HDs pectINSTRUM19 6Ti me2 0200 410 Dat ePar W00000000.88PLW1usec00.10P113CNUC1MHz7864591.125SFO1=== =====f1CHANNEL======== W17989001.0PLW13W35764000.0PLW12W00000000.22PLW2usec00.80PCPD2waltz 16CPDPRG[2NUC21HMHz1910008.500SFO2========f2CHANNEL======== 40.1PC0GB Hz00.1LB0SSBEMWDWMHz7726885.125SF32768SIpara metersProcessing-F2 175 175.79 170 165 163.83 155 156.10 150 147.65 145 146.77 145.01 140 135 135.67 130 125 120 121.92 119.93 115 115.56 115.04 110 105 102.97 100 98.14 95 ppm 93.30 CT2- DMSO-C13CPD 160 160.68 CT2-DMSO-C13CPD&DEPT DEPT90 210 200 190 180 170 160 150 140 130 120 110 100 90 80 70 60 50 40 30 20 10 ppm 190 180 170 160 150 140 130 120 110 100 90 80 70 60 50 40 30 20 10 ppm 190 180 170 160 150 140 130 120 110 100 90 80 70 60 50 40 30 20 10 ppm DEPT135 CH&CH3 CH2 210 200 C13CPD 210 200 CT2-DMSO-C13CPD&DEPT DEPT90 DEPT135 120 115 110 105 100 95 ppm 120 115 110 105 100 95 ppm 120 115 110 105 100 95 ppm CH&CH3 CH2 C13CPD CT2-DMSO-HSQC ppm 35 40 45 50 55 60 65 70 75 80 85 90 95 100 105 110 115 120 125 130 ppm CT2-DMSO-HSQC ppm 92 94 96 98 100 102 104 106 108 110 112 114 116 118 120 7.6 7.4 7.2 7.0 6.8 6.6 6.4 6.2 ppm CT2-DMSO-HMBC ppm 30 40 50 60 70 80 90 100 110 120 130 140 150 160 170 180 190 200 13 12 11 10 ppm CT2-DMSO-HMBC ppm 90 95 100 105 110 115 120 125 130 135 140 145 150 155 160 165 170 175 180 12 11 10 ppm CT2-DMSO-HMBC ppm 95 100 105 110 115 120 125 130 135 140 145 150 155 160 165 170 175 7.8 7.6 7.4 7.2 7.0 6.8 6.6 6.4 6.2 6.0 ppm ... chọn thực đề tài: ? ?Bước đầu nghiên cứu thành phần hóa học Cỏ rươi bắc (Murdannia bracteata J. K. Morton ex D. Y. Hong)? ?? với mục tiêu sau: Định tính sơ thành phần hóa học Cỏ rươi bắc Chiết xuất, phân... gan, thận [39] Tuy nhiên, nghiên cứu cụ thể thành phần hóa học tác d? ??ng sinh học Cỏ rươi bắc Việt Nam cịn hạn chế Để góp phần x? ?y d? ??ng sở khoa học cho việc ứng d? ??ng Cỏ rươi bắc điều trị bệnh,... 1.2.3 Thành phần hóa học Murdannia bracteata 1.2.4 Tác d? ??ng sinh học Murdannia bracteata 13 1.2.5 Công d? ??ng Murdannia bracteata theo y học cổ truyền 16 1.2.6 Sản phẩm có thành phần Murdannia