B1-TN1-N3-LDLTTC-ĐH11E

TRƯỜNG ĐẠI HỌC TÂY ĐÔ BỘ MÔN DƯỢC LIỆU – DƯỢC HỌC CỔ TRUYỀN - BÀI BÁO CÁO THỰC HÀNH DƯỢC LIỆU GVHD: ThS Trì Kim Ngọc Sinh viên thực hành: Tiểu nhóm – Nhóm – Liên Thông TC- ĐH DƯỢC 11E THỊ HẰNG ( 039.254.254 ) PHAN THANH TRANG (0946.183.941) NGUYỄN VŨ CA (0975.000.815) PHAN THANH NHUNG ( 0944.993.055) NGUYỄN THỊ THÙY TRANG (0982.545.030) TP CẦN THƠ, NĂM HỌC 2019 – 2020 ►B1- Tiểu Nhóm 1-Nhóm 3-Liên Thơng TC-ĐH DƯỢC 11E Bài 1: ĐỊNH TÍNH ALKALOID BẰNG PHẢN ỨNG HĨA HỌC – SẮC KÝ LỚP MỎNG TÂM SEN Tên khoa học: Embryo Nelumbinis Thuộc họ Sen: Nelumbonaceae A.CỞ SỞ LÝ THUYẾT ĐỊNH NGHĨA ALKALOID -Các alkaloid (alkaloid) bazo hữu th ường dễ tan dung môi hữu (như ether, benzen, cloroform, aceton, methanol ethanol) -Đa số alkaloid base thực tế không tan nước -Một vài alkaloid có cấu trúc amonium bậc IV tan n ước tan dung mơi hữu -Một số Alkaloid khơng có oxy tồn trạng thái lỏng có th ể tan nước -Một số Alkaloid dạng lỏng bay lôi theo h nước -Một số Alkaloid khơng có oxy dạng rắn thăng hoa áp suất thường -Một số Alkaloid có OH phenol tan phần dung dịch kiềm mạnh -Dưới dạng muối, alkaloid thường tan nước, cồn (ethanol, methanol), hay hỗn hợp cồn nước, chúng không tan r ất tan dung môi hữu phân cực (ether, benzen, cloroform TÍNH CHẤT CHUNG CỦA ALKALOID -Alkaloid thường bazo yếu, tan dung môi h ữu c ơ, không tan nước Khi cho alkaloid tác dụng với acid thu đ ược alkaloid dạng muối -Các muối alkaloid thường dễ tan nước Các muối dễ bị chất kiềm vô (NH4OH, NaOH) chí muối khác (Na2CO3, đơi NAHCO3) đẩy khỏi muối cho lại alkaloid base ban đầu -Alkaloid phản ứng với thuốc thử chung (thuốc thử tạo tủa) tạo thành muối khó tan (dạng kết tinh hay dạng vơ định hình) đ ược ứng dụng định tính alkaloid CHẾT XUẤT CÁC ALKALOID -Trong cây, alkaloid thường tồn dạng muối hòa tan v ới acid hữu vô hay dạng kết hợp với Tanin Người ta có th ể chi ếc alkaloid khỏi nguyên liệu thực vật nhiều cách nhìn chung quy cách là: -Chiếc alkaloid khỏi dược liệu dạng alkaloid base dung môi hữu -Chiếc alkaloid khỏi dược liệu dạng muối dung môi phân cực (nước, cồn, hỗn hợp cồn nước bị acid hóa) -Với vài alkaloid đặc biệt, người ta bằng: -Phương pháp cất kéo lôi theo nước ( xuất nicotin t thuốc lá) -Phương pháp thăng hoa (chiếc xuất cafein từ trà) -Dựa vào tính tan khác dạng bazo dạng muối alkaloid dung mơi, người ta laoij phần tạp ch ất khỏi dịch chiết trước định tính, định lượng hay phân lập alkaloid tinh ết -Các quy trình thường sử dụng chiết xuất alkaloid từ nguyên liệu thực vật dùng cho định tính alkaloid B NỘI DUNG THỰC HÀNH Nguyên liệu a.1 Dung môi thuốc thử -Dung dịch Benzen, cloroform, aceton, methanol -Thuốc thử Dragendorff -Thuốc thử valse- Mayer -Thuốc thử Bertrand -Thuốc thử Bouchardat a.2 Dược liệu: Tâm Sen Thực Hành a) Chiết suất alkaloid Cân gam tâm sen + cồn acid 5% Đun cách th ủy 10 phút Lọc qua Thu đ ược dịch c ồn Bay h c ồn đ ến c ắn Hịa tan cắn v ới n ước nóng 10ml X l ần L ọc qua gi l ọc Thu đ ược d ịch n ước acid b Định tính Alkaloid thuốc thử chung ** Từ dịch chiết acid chia làm phần + Phần chia đ ều vào ống nghi ệm : ĐỊNH TÍNH BẰNG THUỐC THỬ CHUNG  Chia ống nghiệm ống 2ml dịch chiết nước acid DỊCH CHIẾT 1 Ống 1: Thuốc thử Dragendorff Ống : Thuốc thử Valse- Mayer Ống : Thuốc thử Bouchardat, Ống 4: Ống chứng Nhỏ 1-3 giọt thuốc thử Dragendorff, Valse- Mayer, Bouchardat vào ống nghiệm 1,2,3….sau quan sát tượng so sánh v ới ống chứng( ống 4) Kết luận: ỐNG ỐNG ỐNG ỐNG Dragendorff Valse- Mayer Bouchardat ++++ ++++ ++++ ỐNG (Ơ.CHỨNG) Kết quả: Dịch chiết có chứa hợp chất dương tính (++++) với thuốc th ử.DL có chứa Alkaloid + Phần Nhỏ vài giọt dd NH4OH đđ thử đến pH = 10 1-3 giọt - Cho dịch chiết vào bình lắng gạn Lắc với 10 ml CHCL3 với bình lắng gạn ( Lắc lần) Thu dịch chiết CHCl phần bình lắng gạn, Sau đem đun cắn cịn 1/3 thể tích bếp cách th ủy c Định tính alkaloid phương pháp sắc ký l ớp m ỏng - Chuẩn bị mỏng - Dịch CHCL3 cô/ chén sứ => 1/3 thể tích * Chuẩn bị : +Dung mơi +Bình sắc ký +Hệ dung mơi : CHCl3 – MeOH – NH4OH 20 3,6 0,4  Đặt mỏng vào bình sắc ký , đậy nắp kín để n Khi dung mơi chạy cịn cách mép khoản 0,5 cm  Gấp mỏng để nhiệt độ phịng chuẩn bị soi đèn UV v ới bước sóng 254nm bước sóng 365 nm Ánh sáng bước sóng UV 254 nm có phát quang tối sáng Ánh sáng bước sóng UV 365 nm có phát quang sang tối Phát vết sắc đồ cách: Soi đèn UV 254 365nm Ánh sáng bước sóng UV 254nm có phát quang tối sáng Ánh sáng bước sóng UV 365nm có phát quang sáng tối Nhúng mỏng soi đèn UV 365 với thuốc th Dragendorff - Tính Rf vết lên màu với thuốc thử Dragendorff RfA= lA / l0 - Trong :( l0 ) đoạn đường di chuyển dung môi (lA ) đoạn đường di chuyển chất Rf1= 7,4 / 8,3 = 0,89 Rf2= 5,6 / 8,3 = 0,67 - Kết quả: Khơng nhìn rõ màu vết ** Biện pháp khắc phục: + Chiết dịch CHCl3 lẫn tạp + Vết chấm sắc ký cịn mờ khơng rõ ràng : Các vết UV 365 có màu cam => Tâm sen có alkaloid