Đánh giá khả năng gây chết bọ phấn trắng bemisia tabaci và rệp aphis gossypii của nấm paecilomyces lilacinus​

BỘ GIÁO DỤC VÀ ĐÀO TẠO TRƯỜNG ĐẠI HỌC CÔNG NGHỆ TP HỒ CHÍ MINH ĐỒ ÁN TỐT NGHIỆP ĐÁNH GIÁ KHẢ NĂNG GÂY CHẾT BỌ PHẤN TRẮNG BEMISIA TABACI VÀ RỆP APHIS GOSSYPII CỦA NẤM PAECILOMYCES LILACINUS Ngành: CÔNG NGHỆ SINH HỌC Chuyên ngành: CÔNG NGHỆ SINH HỌC Giảng viên hướng dẫn : TS NGUYỄN THỊ HAI Sinh viên thực MSSV: 1151110153 : NGUYỄN THỊ XUÂN HƯƠNG Lớp: 11DSH04 TP Hồ Chí Minh, 2015 LỜI CAM ĐOAN Tơi cam đoan cơng trình nghiên cứu tơi Các số liệu kết Đồ án trung thực Mọi thơng tin trích dẫn Đồ án ghi rõ nguồn gốc Tơi xin hồn tồn chịu trách nhiệm lời cam đoan Tp Hồ Chí Minh, ngày 20 tháng năm 2015 Sinh viên thực Nguyễn Thị Xuân Hương LỜI CẢM ƠN Đầu tiên, em xin gửi lời cảm ơn sâu sắc đến Ban Giám hiệu Trường Đại học Công Nghệ Tp Hồ Chí Minh tạo điều kiện thuận lợi để em học tập hồn thành tốt khóa học 2011 – 2015 Em xin bày tỏ lời cảm ơn sâu sắc đến thầy cô khoa Công nghệ sinh học, Thực phẩm Môi trường giảng dạy em bốn năm qua, kiến thức mà em nhận giảng đường đại học hành trang giúp em vững bước tương lai Em xin gửi lời cảm ơn sâu sắc đến TS Nguyễn Thị Hai người tận tình hướng dẫn, bảo, truyền đạt nhiều kinh nghiệm quý báu suốt trình thực đồ án tốt nghiệp Em xin gửi lời cảm ơn đến thầy Huỳnh Văn Thành, cán phòng thí nghiệm Trường Đại học Cơng Nghệ TP.HCM tạo điều kiện thuận lợi để em hồn thành tốt đồ án Em xin cảm ơn anh chị phịng vi sinh Khu Nơng Nghiệp Cơng Nghệ Cao TPHCM giúp đỡ em trình thực đồ án Và em gửi lời cảm ơn đến bạn phịng thí nghiệm vi sinh, đặc biệt bạn Huỳnh Thị Ngọc Trâm tận tình hỗ trợ, giúp đỡ em trải qua khó khăn trình thực đồ án Cuối cùng, xin bày tỏ lòng biết ơn sâu sắc đến gia đình đặc biệt ba mẹ ln bên cạnh, cổ vũ, động viên tinh thần, tạo điều kiện để hồn thành tốt Đồ án tốt nghiệp Tp Hồ Chí Minh, ngày 20 tháng năm 2015 Sinh viên thực Nguyễn Thị Xuân Hương Đồ án tốt nghiệp MỤC LỤC MỤC LỤC i DANH MỤC TỪ VIẾT TẮT iv DANH MỤC BẢNG v DANH MỤC HÌNH ẢNH vi LỜI MỞ ĐẦU CHƯƠNG TỔNG QUAN 1 Giới thiệu nấm thuộc chi Paecilomyces 1.1.1 Phân loại khoa học 1.1.2 Đặc điểm sinh thái 1.1.3 Đặc điểm hình thái 1.1.4 Độc tố nấm Paecilomyces spp .6 1.1.5 Chu kỳ sống chế tác động Paecilomyces spp ký chủ 1.2 Các chủng nấm Paecilomyces phân lập 1.3 Một số thành tựu ứng dụng nấm Paecilomyces spp vào thực tiễn đời sống 13 1.3.1 Sản xuất enzyme .14 1.3.2 Sản xuất kháng sinh hợp chất thứ cấp 15 1.3.3 Sản xuất thuốc bảo vệ thực vật .16 1.3.4 Xứ lý môi trường 16 1.4 Một số sản phẩm Paecilomyces spp 17 1.5 Các yếu tố ảnh hưởng đến phát triển nấm Paecilomyces spp 17 1.6 Các nghiên cứu sử dụng Paecilomyces spp phịng trừ bọ phấn trùng chích hút khác 19 i Đồ án tốt nghiệp 1.6.1 Tổng quan bọ phấn trắng 19 1.6.2 Tổng quan rệp 25 CHƯƠNG VẬT LIỆU VÀ PHƯƠNG PHÁP NGHIÊN CỨU .30 2.1 Thời gian địa điểm nghiên cứu 30 2.2 Thiết bị - hóa chất - vật liệu nghiên cứu 30 2.2.1 Thiết bị - hóa chất 30 2.2.2 Vật liệu 31 2.2.3 Các môi trường sử dụng 31 2.3 Phương pháp nghiên cứu 34 2.3.1 Phân lập nấm Paecilomyces lilacinus .34 2.3.2 Phương pháp nghiên cứu khả sinh tổng hợp enyme chitinase nấm Paecilomyces lilacinus 37 2.3.3 Định tính khả sinh enzyme protease nấm Paecilomyces lilacinus 41 2.3.4 Đánh giá khả gây chết bọ phấn rệp nấm Paecilomyces lilacinus 41 2.3.5 Khảo sát ảnh hưởng yếu tố môi trường đến phát triển nấm Paecilomyces lilacinus 43 2.4 Phương pháp xử lý số liệu 47 CHƯƠNG KẾT QUẢ VÀ THẢO LUẬN 48 3.1 Phân lập nấm Paecilomyces lilacinus 48 3.2 Phương pháp nghiên cứu khả sinh tổng hợp enyme chitinase nấm Paecilomyces lilacinus 51 3.2.1 Khả sinh tổng hợp chitinase nấm Paecilomyces lilacinus môi trường thạch 51 ii Đồ án tốt nghiệp 3.2.2 Hoạt tính Chitinase nấm Paecilomyces lilacinus 53 3.3 Khả tổng hợp enzyme protease nấm Paecilomyces lilacinus 55 3.4 Đánh giá khả gây chết trùng chích hút nấm Paecilomyces lilacinus .58 3.4.1 Đánh giá khả gây chết bọ phấn Bemisia tabaci nấm Paecilomyces lilacinus 58 3.4.2 Đánh giá khả gây chết rệp Aphis gossypii nấm Paecilomyces lilacinus 60 3.5 Khảo sát ảnh hưởng yếu tố môi trường đến phát triển nấm Paecilomyces lilacinus 62 3.5.1 Khảo sát ảnh hưởng pH đến phát triển nấm Paecilomyces lilacinus .62 3.5.2 Khảo sát ảnh hưởng môi trường nuôi cấy khác đến phát triển nấm Paecilomyces lilacinus 65 3.5.3 Khảo sát ảnh hưởng điều kiện chiếu sáng đến phát triển nấm Paecilomyces lilacinus 68 3.5.4 Khảo sát ảnh hưởng nguồn Cacbon đến phát triển nấm Paecilomyces lilacinus 70 3.5.5 Ảnh hưởng loại thuốc trừ nấm đến phát triển nấm Paecilomyces lilacinus 72 CHƯƠNG KẾT LUẬN VÀ ĐỀ NGHỊ 75 4.1 Kết luận 75 4.2 Đề nghị 75 TÀI LIỆU THAM KHẢO 76 iii Đồ án tốt nghiệp DANH MỤC TỪ VIẾT TẮT CZ: Czapeck - Dox ĐC: Đối chứng MA: Malt NT: Nghiệm thức PDA: Potato D - Glucose Agar SA: Sabouraud + KC iv Đồ án tốt nghiệp DANH MỤC BẢNG Bảng 3.1 Đặc điểm hình thái chủng nấm Paecilomyces lilacinus phân lập lại sau lây nhiễm bọ phấn .49 Bảng 3.2 Đường kính vịng phân giải chitinase nấm Paecilomyces lilacinus 51 Bảng 3.3 Hoạt tính enzyme chitinase sau 1,2,3,4,5 ngày ni cấy 54 Bảng 3.4 Khả tổng hợp enzyme protease nấm Paecilomyces lilacinus 56 Bảng 3.5 Số bọ phấn Bemisia tabaci chết ngày sau chủng 58 Bảng 3.6 Hiệu lực diệt bọ phấn nấm Paecilomyces lilacinus 59 Bảng 3.7 Số rệp Aphis gossypii chết ngày sau chủng .61 Bảng 3.8 Hiệu lực diệt rệp nấm Pacilomyces lilacinus .61 Bảng 3.9 Ảnh hưởng pH môi trường đến phát triển nấm Paecilomyces lilacinus 64 Bảng 3.10 Ảnh hưởng môi trường ni cấy đến phát triển đường kính nấm Paecilomyces lilacinus qua ngày 66 Bảng 3.11 Ảnh hưởng điều kiện chiếu sáng đến phát triển đường kính Paecilomyces lilacinus 68 Bảng 3.12 Ảnh hưởng nguồn Cacbon đến phát triển đường kính Paecilomyces lilacinus 71 Bảng 3.13 Ảnh hưởng loại thuốc trừ nấm đến phát triển nấm Paecilomyces lilacinus 73 Bảng 3.14 Tỷ lệ ức chế nấm Paecilomyces lilacinus số loại thuốc hóa học .73 v Đồ án tốt nghiệp DANH MỤC HÌNH ẢNH Hình 1.1 Đặc điểm đại thể Paecilomyces spp Hình 1.2 Đặc điểm vi thể Paecilomyces spp Hình 1.3 Cấu tạo hóa học độc tố paecilotoxin Hình 1.4 Cành bào đài, thể bình, bào tử nấm Paecilomyces variotii 10 Hình 1.5 Cành bào đài, thể bình, bào tử nấm Paecilomyces lilacinus 12 Hình 1.6 Cành bào đài, bào tử nấm Paecilomyces fumosoroseus .12 Hình 1.7 Cành bào đài, bào tử nấm Paecilomyces amoeneroseus 13 Hình 1.8 Các giai đoạn vòng đời bọ phấn trắng .20 Hình 1.9 Cấu tạo ngồi rệp 25 Hình 1.10 Cấu tạo ngồi rệp 26 Hình 2.1 Hộp dùng để bố trí thí nghiệm………………………………………… 35 Hình 2.2 Các hộp dùng để đựng rệp bố trí thí nghiệm .42 Hình Nấm phân lập lại từ bọ phấn Bemisia tabaci……………………………48 Hình 3.2 Khả sinh tổng hợp enzyme chitinase nấm Paecilomyces lilacinus (a, b, c, d vòng phân giải chitinase nấm Paecilomyces lilacinus qua 1, 2, 3, NSC) 52 Hình 3.3 Biểu đồ thể khả sinh tổng hợp enzyme chitinase nấm Paecilomyces lilacinus qua 1,2,3,4 NSC 52 Hình Hoạt độ enzyme chitinase sau ngày nuôi cấy 54 Hình 3.5 Sự phân giải casein nấm Paecilomyces lilacinus (a, b, c, d vòng phân giải protease nấm Paecilomyces lilacinus qua 1, 2, 3, ngày) 56 Hình 3.6 Biểu đồ thể phân giải casein nấm Paecilomyces lilacinus qua 1,2,3,4 ngày nuôi cấy 57 Hình 3.7 Mẫu bọ phấn khơng bị kí sinh (a) mẫu bọ phấn bị kí sinh (b) soi kính lúp soi 59 Hình Mẫu bọ phấn khơng bị ký sinh soi kính hiển vi quang học 60 Hình Mẫu rệp khơng bị ký sinh soi kính hiển vi quang học 62 vi Đồ án tốt nghiệp Hình 3.10 Sự phát triển Paecilomyces lilacinus mơi trường có pH khác 14 NSC (a: pH5, b: pH6, c: pH7, d: pH8) .63 Hình 3.11 Đường kính nấm Paecilomyces lilacinus pH môi trường 5, 6, 7, qua ngày nuôi cấy 64 Hình 3.12 Nấm Paecilomyces lilacinus ngày thứ 14 NSC 65 Hình 3.13 Nấm Paecilomyces lilacinus ngày thứ 14 sau cấy 66 Hình 3.14 Tản nấm Paecilomyces lilacinus ngày thứ 14 sau nuôi cấy 68 Hình 3.15 Sự phát triển nấm Paecilomyces lilacinus điều kiện chiếu sáng khác 69 Hình 3.16 Tản nấm Paecilomyces lilacinus ngày thứ 14 NSC .70 Hình 3.17 Sự phát triển đường kính nấm Paecilomyces lilacinus nguồn Cacbon khác .71 Hình 3.18 Nấm Paecilomyces lilacinus ngày thứ 14 sau cấy 72 vii Đồ án tốt nghiệp  Sau 2NSC The ANOVA Procedure Dependent Variable: N Sum of DF Squares Source Model Error Corrected Total Mean Square 0.00000000 0.00000000 0.01333333 F Value 0.00 Pr > F 1.0000 0.00333333 0.01333333 R-Square Coeff Var Root MSE 0.000000 4.224514 0.057735 N Mean 1.366667 The ANOVA Procedure t Tests (LSD) for N NOTE: This test controls the Type I comparisonwise error rate, not the experimentwise error rate Alpha 0.05 Error Degrees of Freedom Error Mean Square 0.003333 Critical Value of t 2.77645 Least Significant Difference 0.1309 Means with the same letter are not significantly different t Grouping Mean N T A 1.36667 PSA A 1.36667 PDA 25 Đồ án tốt nghiệp  Sau 6NSC The ANOVA Procedure Dependent Variable: N Sum of DF Squares Source Model Error Corrected Total Mean Square 0.01500000 0.01500000 0.00333333 F Value Pr > F 18.00 0.0132 0.00083333 0.01833333 R-Square Coeff Var Root MSE 0.818182 0.776704 0.028868 N Mean 3.716667 The ANOVA Procedure t Tests (LSD) for N NOTE: This test controls the Type I comparisonwise error rate, not the experimentwise error rate Alpha 0.05 Error Degrees of Freedom Error Mean Square 0.000833 Critical Value of t 2.77645 Least Significant Difference 0.0654 t Grouping A A A Mean N T 3.76667 PDA 3.66667 PSA  Sau 10NSC The ANOVA Procedure Dependent Variable: N 26 Đồ án tốt nghiệp Sum of DF Squares Source Model Error Mean Square 0.13500000 0.13500000 0.00833333 Corrected Total F Value Pr > F 64.80 0.0013 0.00208333 0.14333333 R-Square Coeff Var Root MSE 0.941860 0.775811 0.045644 N Mean 5.883333 The ANOVA Procedure t Tests (LSD) for N NOTE: This test controls the Type I comparisonwise error rate, not the experimentwise error rate Alpha 0.05 Error Degrees of Freedom Error Mean Square 0.002083 Critical Value of t 2.77645 Least Significant Difference 0.1035 Means with the same letter are not significantly different t Grouping Mean N T A 6.03333 PDA B 5.73333 PSA  Sau 14NSC The ANOVA Procedure Dependent Variable: N Source Model Sum of DF Squares Mean Square 0.06000000 27 0.06000000 F Value Pr > F 18.00 0.0132 Đồ án tốt nghiệp Error 0.01333333 Corrected Total 0.00333333 0.07333333 R-Square Coeff Var Root MSE 0.818182 0.766394 0.057735 N Mean 7.533333 The ANOVA Procedure t Tests (LSD) for N NOTE: This test controls the Type I comparisonwise error rate, not the experimentwise error rate Alpha 0.05 Error Degrees of Freedom Error Mean Square 0.003333 Critical Value of t 2.77645 Least Significant Difference 0.1309 Means with the same letter are not significantly different t Grouping Mean N T A 7.63333 PDA B 7.43333 PSA A.16 Ảnh hưởng loại thuốc trừ nấm đến phát triển nấm Paecilomyces lilacinus  Sau NSC The ANOVA Procedure Class Level Information Source Model Sum of DF Squares Mean Square F Value Pr > F 1.56066667 2341.00 F F F F F F F F Đồ án tốt nghiệp Model Error 19325.17023 Corrected Total 6441.72341 1.04667 11 49236.1 0.13083 19326.21689 R-Square Coeff Var Root MSE 0.999946 0.470786 0.361709 N Mean 76.83083 \ t Tests (LSD) for N NOTE: This test controls the Type I comparisonwise error rate, not the experimentwise error rate Alpha 0.01 Error Degrees of Freedom Error Mean Square 0.130833 Critical Value of t 3.35539 Least Significant Difference 0.991 Means with the same letter are not significantly different t Grouping Mean N T A 100.0000 An A 100.0000 Sa A 100.0000 Ca B 7.3233 C 36