Bài viết tiến hành phân lập trên môi trường thạch nước có bổ sung streptomycin, các kiểm tra hình thái, bệnh học in vitro, in vivo và sinh học phân tử bằng cách giải trình tự các gen ITS1 và ITS4 đã thu nhận được hai chủng N. dimidiatum NdGV và NdBT.
Tạp chí Phát triển Khoa học Cơng nghệ – Khoa học Tự nhiên, 3(4):286-293 Bài Nghiên cứu Open Access Full Text Article Phân lập nấm bệnh Neoscytalidium dimidiatum Thanh long nghiên cứu kiểm soát vi sinh vật Nguyễn Như Nhứt1,* , Nguyễn Thị Ngọc Bích1 , Nguyễn Thanh Trường1 , Võ Thị Xuyến2 TÓM TẮT Use your smartphone to scan this QR code and download this article Trong năm gần đây, nấm Neoscytalidium dimidiatum gây dịch bệnh đốm trắng nghiêm trọng Thanh long chưa có biện pháp kiểm sốt hiệu Trong nghiên cứu này, cách phân lập mơi trường thạch nước có bổ sung streptomycin, kiểm tra hình thái, bệnh học in vitro, in vivo sinh học phân tử cách giải trình tự gen ITS1 ITS4 thu nhận hai chủng N dimidiatum NdGV NdBT Bằng kỹ thuật nuôi cấy kép môi trường thạch khoai tây cho thấy 100% chủng Trichoderma spp., 75% chủng Bacillus spp 20% chủng Streptomyces spp có khả đối kháng với N dimidiatum Hiệu đối kháng trung bình với N dimidiatum chủng Trichoderma spp cao Bacillus spp thấp Streptomyces spp tương ứng 56,8 %, 55,3% 54,3% Đặc biệt chủng Trichoderma sp 8.3.5, 8.3.7, 8.3.14, 8.3.19 8.3.20 có hiệu đối kháng 60% Tiềm ứng dụng chủng Trichoderma để kiểm soát bệnh N dimidiatum củng cố thêm hiệu đối kháng chúng tương đối ổn định môi trường thạch Thanh long tất chủng Bacillus sp Streptomyces sp bị khả đối kháng Đáng ý bốn năm chủng Trichoderma có khả tương thích cao nên cho thấy cần có nghiên cứu sâu để ứng dụng tiềm phối hợp chúng việc tăng cường khả kiểm soát bệnh nấm N dimidiatum NdGV NdBT Thanh long Từ khoá: Thanh long, Neoscytalidium dimidiatum, Streptomyces, Bacillus, Trichoderma MỞ ĐẦU Công ty TNHH Gia Tường Trường Đại học Văn Lang Liên hệ Nguyễn Như Nhứt, Công ty TNHH Gia Tường Email: nhunhutnguyen@yahoo.co.uk Lịch sử • Ngày nhận: 04-12-2018 • Ngày chấp nhận: 7-10-2019 • Ngày đăng: 31-12-2019 DOI : 10.32508/stdjns.v3i4.585 Bản quyền © ĐHQG Tp.HCM Đây báo công bố mở phát hành theo điều khoản the Creative Commons Attribution 4.0 International license Cây Thanh long loại ăn mà năm gần có tiềm xuất mang lại lợi ích kinh tế cao Thanh long loại trái quan trọng cấp quốc gia mà lẫn quốc tế Tuy nhiên, năm gần dịch hại nguyên nhân làm giảm xuất chất lượng quả, đặc biệt bệnh đốm trắng nấm Neoscytalidium dimidiatum (thuộc họ Botryosphaeriaceae; Botryosphaeriales; lớp nấm túi Ascomycetes) gây Loài nấm có khả lây lan nhanh kháng với nhiều loại thuốc hóa học đặc trị nấm Do đó, vi sinh vật hy vọng hướng tiếp cận tiềm để góp phần phịng trừ bệnh hại nấm N.dimidiatum nâng cao chất lượng Thanh long Gần đây, số nghiên cứu chứng minh nhiều vi sinh vật khác Bacillus spp , Streptomyces spp Trichoderma sp … có hoạt tính đối kháng với N dimidiatum Mặc dù vậy, nghiên cứu dừng lại bước phân lập, định danh vi sinh vật có khả đối kháng với N dimidiatum đánh giá hiệu đối kháng điều kiện in vitro Thêm vào đó, nghiên cứu thực số chủng vi sinh vật phân lập chưa có nghiên cứu đánh giá so sánh hiệu đối kháng vi sinh vật với Mục tiêu nghiên cứu đánh giá khả kiểm soát in vitro tiềm ứng dụng chủng nấm bệnh phân lập nhiều chủng Bacillus, Streptomyces Trichoderma kiểm soát nấm N dimidiatum PHƯƠNG PHÁP NGHIÊN CỨU Vật liệu Chủng vi sinh vật Hai mươi chủng Trichoderma spp., hai mươi chủng Bacillus spp hai mươi chủng Streptomyces spp cung cấp Chi nhánh công ty TNHH Gia Tường tỉnh Bình Dương Các chủng vi sinh vật nuôi cấy bảo quản tương ứng môi trường thạch nghiêng nước chiết khoai tây (PGA), cao thịt – peptone Gause Mẫu Thanh long in vitro in vivo Các mẫu Thanh long bị bệnh đốm trắng thu vườn trồng Hàm Thuận Nam (Bình Thuận) Gị Vấp (Tp Hồ Chí Minh) dùng để phân lập nấm bệnh N.dimidiatum Các mẫu đoạn cành Thanh long in vitro (5 – 10 cm) Thanh long in vivo Trích dẫn báo này: Như Nhứt N, Ngọc Bích N T, Thanh Trường N, Xuyến V T Phân lập nấm bệnh Neoscytalidium dimidiatum Thanh long nghiên cứu kiểm soát vi sinh vật Sci Tech Dev J - Nat Sci.; 3(4):286-293 286 Tạp chí Phát triển Khoa học Cơng nghệ – Khoa học Tự nhiên, 3(4):286-293 (mang cành non dài 40 – 50 cm) không bị bệnh dùng để kiểm tra bệnh học tương ứng in vitro in vivo Phương pháp Phân lập nấm Neoscytalidium dimidiatum Nấm bệnh N.dimidiatum phân lập từ mẫu Thanh long bị bệnh đốm trắng theo phương pháp Thongkham Soytong 2,7 Sau - ngày đặt mẫu bệnh (0,5 - cm) môi trường thạch nước (water agar) có bổ sung streptomycin sulfate 50 mM, tách sợi nấm mọc lên mẫu lan môi trường để làm Các chủng nấm thu được kiểm tra đặc điểm hình thái khuẩn lạc mơi trường PGA khuẩn ty kính hiển vi theo Thongkham, Soytong , Yi cộng Kiểm tra bệnh học in vitro in vivo thực cách dùng que cấy kim tiêm tạo vết thương bơi sinh khối chủng nấm tương ứng đoạn cành Thanh long (đã khử trùng bề mặt cồn 70% giây trước rửa lại nước vô trùng để khô) cành non nhà lưới Triệu chứng bệnh ghi nhận theo thời gian sau gây nhiễm Đồng thời, chủng nấm gởi phân tích trình tự gen ITS1 ITS4 Trung tâm Khoa học Công nghệ Sinh học (Trường Đại học Khoa học Tự nhiên, ĐHQG-HCM) Xác định hiệu đối kháng chủng vi sinh vật với nấm bệnh Kỹ thuật nuôi cấy kép môi trường PGA ứng dụng để xác định hiệu đối kháng in vitro chủng vi sinh vật với nấm bệnh Hiệu đối kháng chủng Trichoderma xác định cách cấy điểm theo kiểu đối xứng với nấm bệnh qua tâm đĩa petri điểm cấy cách mép đĩa khoảng 1,5 cm 10 Với Streptomyces Bacillus, cấy sinh khối Bacillus sp (hoặc Streptomyces) thành vệt dài cm, đối xứng với điểm cấy nấm bệnh tâm đĩa petri, vệt cấy cách mép đĩa 1,5 cm 11 Đĩa đối chứng đĩa cấy nấm bệnh mà khơng có Trichoderma, Bacillus hay Streptomyces Các đĩa sau cấy ủ tối đến nấm bệnh đĩa đối chứng phát triển đến mép đĩa Cách tính hiệu đối kháng chủng vi sinh vật với nấm bệnh Ferreira cộng (1991) 10 : H (%) = ((A – B)/A) x 100 Trong đó: H: Hiệu ức chế (%); A: Đường kính nấm bệnh đĩa đối chứng (mm); B: Đường kính nấm bệnh đĩa đối kháng (mm) 287 Đánh giá tiềm ứng dụng Thanh long Các chủng vi sinh vật có hiệu đối kháng cao đánh giá tiềm kiểm soát nấm bệnh N.dimidiatum Thanh long cách xác định hiệu đối kháng in vitro môi trường thạch Thanh long (chứa 20 g agar lít nước chiết sau đun sôi 30 phút 200 g cành Thanh long) Các chủng có khả đối kháng mơi trường thạch Thanh long tiếp tục xác định khả tương thích theo Ilham cộng 10 để đánh giá tiềm ứng dụng phối hợp kiểm soát N dimidiatum Xử lý số liệu Số liệu thu từ kết thí nghiệm xử lý thống kê phần mềm SPSS version 20.0 theo phép thử Duncan, p = 0,05 trình bày dạng số trung bình lần lặp lại KẾT QUẢ Phân lập nấm bệnh N dimidiatum Từ mẫu Thanh long bị bệnh đốm trắng thu từ Hàm Thuận Nam Gị Vấp (Hình 1a b) phân lập dịng nấm mơi trường thạch nước có bổ sung streptomycine sulfate 50 mM (Hình 1c d) Trong đó, dịng nấm NdBT phân lập từ mẫu bệnh thu Bình Thuận NdGV từ mẫu bệnh thu Gò Vấp Các đặc điểm hình thái khuẩn lạc hai dịng nấm NdBT NdGV (Hình 1e f) tương tự với báo cáo trước 1,2,7 Dưới kính hiển vi quang học vật kính 40X, hai dịng NdBT NdGV có quan sinh dưỡng dạng sợi đa bào có vách ngăn phân nhánh phức tạp (Hình 1g h) Sợi nấm sinh sản có dạng chuỗi mang bào tử hay gọi bào tử đốt Các bào tử có hình trịn bầu dục Kiểm tra bệnh học đoạn cành Thanh long in vitro cho thấy mẫu đối chứng không gây nhiễm với hai dòng nấm NdBT NdGV vào vết thương không xuất triệu chứng bệnh đốm trắng có tượng vết thương lành lại (Hình 2) Đối với mẫu gây nhiễm với nấm vào vết thương, vết nhiễm lan rộng, chuyển sang màu xám đen, vùng xung quanh mơ có màu vàng (biểu hoại tử) lan rộng vùng lân cận theo thời gian tương tự triệu chứng mô tả Mohd cộng Các kết thu tương tự Thanh long in vivo (Hình 3) Hai dịng nấm NdBT NdGV có khả gây bệnh trở lại cành Thanh long in vivo với triệu chứng giống với mẫu Thanh long in vitro Ngoài ra, sau ngày gây nhiễm, cành Thanh long xuất đốm trắng tương tự Tạp chí Phát triển Khoa học Cơng nghệ – Khoa học Tự nhiên, 3(4):286-293 Hình 1: Kết phân lập nấm bệnh N dimidiatum a b: mẫu Thanh long bị bệnh đốm trắng Hàm Thuận Nam Gò Vấp; c d: sợi nấm bệnh phát triển xung quanh mẫu bệnh môi trường thạch nước (mũi tên màu đen); e f: khuẩn lạc nấm bệnh NdBT NdGV môi trường PGA sau ngày ni cấy; g h: hình thái khuẩn ty nấm bệnh NdBT NdGV kính hiển vi quang học (X40, mũi tên màu đỏ vị trí phân nhánh, mũi tên nét đứt vị trí vách ngăn); ngang = cm Hình 2: Triệu chứng bệnh dòng nấm NdBT (trái) NdGV (phải) gây mô Thanh long in vitro (a), (b) (c): Sau 3, ngày gây nhiễm; Đối chứng sau ngày tạo vết thương không gây nhiễm mẫu dùng để phân lập ban đầu Dựa vào nguồn gốc mẫu phân lập, đặc điểm hình thái kiểm tra bệnh học cho thấy hai dịng nấm thu hai chủng thuộc lồi N dimidiatum Kết giải trình tự đoạn gen ITS1 ITS4 hai chủng NdBT NdGV có độ tương đồng cao so với trình tự đoạn gen tương ứng N dimidiatum công bố Ngân hàng liệu gen NCBI Điều giúp lần khẳng định hai chủng nấm bệnh NdBT NdGV thuộc lồi N dimidiatum khơng khả gây bệnh sau phân lập Sàng lọc chủng vi sinh vật có khả đối kháng với chủng nấm bệnh in vitro Sàng lọc chủng vi sinh có khả đối kháng với hai chủng nấm bệnh Hình 3: Triệu chứng nấm NdBT (trên, trái) NdGV (trên, phải) gây Thanh long in vivo Mẫu đối chứng (dưới) tạo vết thương không gây nhiễm; (a), (b) (c): Sau 3, ngày gây nhiễm Trong số 20 chủng Streptomyces spp có bốn chủng Streptomyces sp 9.0.1, 9.0.6, 9.0.9 9.0.16 có hiệu đối kháng với hai chủng NdBT NdGV (Hình 4) Trong đó, có đến 14 15 chủng số 20 chủng Bacillus spp có khả đối kháng tương ứng với chủng nấm bệnh NdGV NdBT Với Trichoderma spp., tất 20 chủng khảo sát có khả đối kháng với chủng nấm bệnh Trong số chủng có khả đối kháng với nấm bệnh, hai chủng Streptomyces sp (gồm 9.0.1 9.0.9), ba chủng Bacillus sp (gồm 5.3.44, 5.3.54 5.3.68) năm chủng Trichoderma sp (gồm 8.3.5, 8.3.7, 8.3.14, 8.3.19 8.3.20) (Hình 5) cho hiệu đối kháng tốt với hai chủng nấm NdBT NdGV (theo mức phân hạng Nwankiti Gwa 12 chọn lọc để tiếp tục nghiên cứu Tiềm ứng dụng chủng vi sinh vật đối kháng kiểm soát nấm bệnh N Dimiditatum Thanh long Hiệu đối kháng chủng vi sinh vật chọn lọc với hai chủng nấm bệnh môi trường thạch Thanh long Trên môi trường trường thạch Thanh long, chủng Bacillus sp Streptomyces sp chọn lọc khả đối kháng với hai chủng nấm bệnh NdBT NdGV (Hình 6) Ngược lại, mơi trường này, chủng Trichoderma sp chọn lọc thể khả đối kháng với hai chủng nấm bệnh (Hình 8) Ngoại trừ chủng Trichoderma sp 8.3.5 có hiệu đối kháng tăng lên mơi trường thạch Thanh long so với môi trường thạch khoai tây, hiệu đối kháng bốn chủng Trichoderma sp chọn 288 Tạp chí Phát triển Khoa học Cơng nghệ – Khoa học Tự nhiên, 3(4):286-293 Hình 7: Hiệu đối kháng năm chủng Trichoderma sp chọn lọc NdBT (trái) NdGV (phải) môi trường thạch Thanh long sau ngày cấy Hình 4: Hiệu đối kháng chủng Streptomyces spp., Bacillus spp Trichoderma spp NdBT (trái) NdGV (phải) mơi trường PGA sau ngày ni cấy Hình 8: Khả đối kháng năm chủng Trichoderma chọn lọc với nấm bệnh môi trường thạch Thanh long sau ngày ni cấy Hình 5: Khả đối kháng chủng Trichoderma sp có hiệu đối kháng cao với chủng nấm N dimidiatum NdBT môi trường PGA sau ngày ni cấy lọc cịn lại có xu hướng giảm từ mức tốt mơi trường thạch khoai tây xuống mức trung bình mơi trường thạch Thanh long (Bảng 1) Bảng 1: So sánh hiệu đối kháng chủng Trichoderma sp chọn lọc môi trường PGA môi trường thạch Thanh long Chủng Trichoderma sp H (%) môi trường PGA H (%) môi trường MTTL 8.3.5 63,02b 69,44a 8.3.7 62,59a 52,72b 8.3.14 59,94a 53,30b 8.3.19 62,28a 54,94b 8.3.20 61,36a 52,47b Trong dịng, số có chữ theo sau giống khơng khác biệt mức ý nghĩa p = 0,05 PGA : thạch khoai tây ; MTTL: thạch Thanh long Hình 6: Hiện tượng hoạt tính đối kháng chủng Bacillus sp 5.3.44 (trái) Streptomyces sp 9.0.9 (phải) với nấm bệnh NdBT mơi trường thạch Thanh long Khả tương thích chủng Trichoderma sp chọn lọc Bốn năm chủng Trichoderma sp chọn lọc nuôi cấy đồng thời có khả tương thích với phần hay hoàn toàn, ngoại trừ tổ hợp từ chủng 8.3.5 (gồm tổ hợp chủng 8.3.5 – 8.3.7, 8.3.5 – 8.3.14, 8.3.5 – 8.3.19 8.3.5 – 8.3.20) có tượng ức chế từ xa (Bảng Hình 9) 289 Hình 9: Khả tương thích số tổ hợp chủng Trichoderma sp (a) Mặt trước (trái) mặt sau (phải) tổ hợp chủng Trichoderma sp 8.3.7 8.3.19 tương thích phần; (b) Mặt trước (trái) mặt sau (phải) tổ hợp chủng Trichoderma sp 8.3.19 8.3.20 tương thích tồn phần; (c) Mặt trước (trái) mặt sau (phải) tổ hợp chủng Trichoderma sp 8.3.5 8.3.20 ức chế từ xa Tạp chí Phát triển Khoa học Cơng nghệ – Khoa học Tự nhiên, 3(4):286-293 Bảng 2: Khả tương thíchcủa chủng Trichoderma sp chọn lọc Chủng sp Trichoderma 8.3.5 8.3.7 8.3.14 8.3.19 8.3.20 8.3.5 ++ −– −– −– −– 8.3.7 −– ++ ++ ++ + 8.3.14 −– ++ ++ + + 8.3.19 −– ++ + ++ + 8.3.20 −– + + + ++ Quy ước ức chế theo Ilham cộng (2013) : ++: tương thích hồn tồn; +: tương thích khơng hồn tồn; − – − : thay thế; − – : ức chế từ xa; − : ức chế nơi tiếp xúc THẢO LUẬN Mặc dù bệnh đốm trắng N dimidiatum Thanh long xuất từ nhiều năm qua nhiều nước giới Việt Nam, Trung Quốc, Mỹ, Thái Lan , nhiên, nay, có số lượng nghiên cứu phân lập nhận diện tác nhân gây bệnh báo cáo Mohd cộng , Thongkham, Soytong , Yi cộng Trong nghiên cứu này, chủng nấm N dimidiatum NdBT NdGV phân lập từ mẫu Thanh long bị bệnh đốm trắng thu từ Hàm Thuận Nam Gị Vấp nhận diện dựa trình tự gen ITS1 ITS4 Cả chủng nấm có hình thái tương tự mơ tả Thongkhamvà Soytong, Yi cộng 1,2 , có khả gây bệnh cành Thanh long in vitro in vivo với triệu chứng tương tự báo cáo Mohd cộng Việc phân lập N dimidiatum giúp chủ động nguồn nấm cho nghiên cứu biện pháp kiểm soát bệnh chúng gây Trước đây, nghiên cứu Luis cộng , Luong cộng , Wan cộng cho thấy tiềm ứng dụng Bacillus, Trichoderma Streptomyces kiểm soát nấm bệnh N dimidiatum in vitro Trong nghiên cứu này, 20 chủng Trichoderma spp., 20 chủng Bacillus spp 20 chủng Streptomyces spp khảo sát hiệu đối kháng in vitro với hai chủng nấm bệnh N dimidiatum NbBT NdGV Tuy nhiên, kết cho thấy có 20% chủng thuộc chi Streptomyces có khả đối kháng Tỷ lệ chủng vi khuẩn thuộc chi Bacillus có khả đối kháng 75%, cao nhiều so với Streptomyces Trong đó, tất 20 chủng (100%) thuộc chi Trichoderma có khả đối kháng Hiệu đối kháng trung bình Trichoderma spp cao so với Bacillus spp Streptomyces spp (tương ứng 56,8 %, 55,3% 54,3%) Sự khác khả đối kháng chủng vi sinh vật không chi chủng chi cho khả tiết loại kháng sinh, enzyme thủy phân vách nấm bệnh khả tăng trưởng để cạnh tranh không gian sống cạnh tranh dinh dưỡng khác chủng 13 Kết cho thấy khả tiết hợp chất kháng sinh hay enzyme Bacillus Streptomyces, chủng Trichoderma cịn có ưu phát triển hệ sợi nhanh giúp chúng tăng cường hiệu ức chế nấm bệnh nhờ vào khả cạnh tranh không gian sống dinh dưỡng Ngoài ra, tiếp xúc trực tiếp hệ sợi có lẽ giúp Trichoderma tăng cường khả đối kháng thông qua khả ký sinh vào hệ sợi nấm N dimidiatum 12 Tiềm ứng dụng vào thực tế nghiên cứu cách ni cấy kép chủng có hiệu đối kháng cao với nấm bệnh môi trường thạch chứa nước chiết từ cành Thanh long Trên môi trường này, chủng vi sinh vật chọn lọc nấm bệnh phát triển, nhiên, kết quan sát cho thấy Trichoderma nấm bệnh có hệ khuẩn ty với sợi mãnh mọc sát mặt thạch Điều nước chiết Thanh long có thành phần dinh dưỡng thấp so với nước chiết khoai tây làm hạn chế tăng trưởng chủng vi sinh vật nói chung Ngồi ra, nước chiết Thanh long có chứa hợp chất gây ức chế phát triển Trichoderma hai chủng nấm bệnh NdBT NdGV Đáng ý hơn, nuôi cấy môi trường thạch nước chiết Thanh long, khả đối kháng với nấm bệnh chủng Bacillus sp Streptomyces sp chọn lọc bị hoàn toàn hiệu đối kháng chủng Trichoderma sp không thay đổi đáng kể Khả đối kháng nấm bệnh Bacillus Streptomyces chủ yếu dựa khả sinh kháng sinh 5,6 Hiện tượng khả đối kháng chủng Bacillus sp Streptomyces sp bị khả tiết kháng sinh nuôi cấy mơi trường thạch nước chiết Thanh long Trong đó, có tiếp xúc trực tiếp hệ sợi, chủng Trichoderma sp ký sinh nấm bệnh 12 Khả 290 Tạp chí Phát triển Khoa học Công nghệ – Khoa học Tự nhiên, 3(4):286-293 ký sinh nấm bệnh Trichoderma nhờ chúng tiết enzyme có khả phân hủy vách tế bào để sử dụng chất dinh dưỡng bên nấm bệnh, qua giữ khả đối kháng chúng với nấm bệnh Các kết cho thấy chủng Trichoderma chọn lọc có tiềm ứng dụng vào thực tế so với chủng Bacillus Streptomyces nghiên cứu Tuy nhiên, kết khảo sát khả tương thích cho thấy chủng Trichoderma sp 8.3.5 chủng có hiệu đối kháng cao lại khơng có khả tương thích với chủng cịn lại Điều phù hợp chủng 8.3.5 có hoạt tính đối kháng mạnh (trong có khả chủng 8.3.5 tổng hợp hợp chất kháng sinh mạnh hơn) nên dẫn đến ức chế chủng lại Tuy nhiên, khó xác định xác tương thích loài dựa vào biểu bên khuẩn lạc Vì chủng Trichoderma sp có đặc điểm hình thái gần giống màu sắc, hình dạng khuẩn ty bào tử Do đó, đánh giá mức tương thích hồn tồn tương thích phần mang tính chất tương đối cần nghiên cứu sâu KẾT LUẬN Đã phân lập hai chủng nấm N dimidiatum NdBT NdGV từ mẫu Thanh long bị bệnh đốm trắng Hàm Thuận Nam (Bình Thuận) Gị Vấp (Thành phố Hồ Chí Minh) Tỷ lệ chủng có khả đối kháng với N dimidiatum số 20 chủng Trichoderma spp., 20 chủng Bacillus spp 20 chủng Streptomyces spp khảo sát tương ứng 100%, 75% 20% Trichoderma spp có hiệu đối kháng trung bình cao nhất, đến Bacillus spp Streptomyces spp Các kết thực nghiệm cho thấy năm chủng Trichoderma sp (gồm 8.3.5, 8.3.7, 8.3.14, 8.3.19 8.3.20) có khả đối kháng tốt với hai chủng nấm N dimidiatum NdBT NdGV (hơn 60%) Đặc biệt, năm chủng chọn lọc giữ hoạt tính đối kháng mơi trường thạch nước chiết Thanh long cho thấy tiềm ứng dụng chủng để kiểm soát bệnh đốm trắng nấm N dimidiatum Thanh long đồng ruộng Ngồi ra, khả tương thích chủng Trichoderma sp 8.3.7, 8.3.14, 8.3.19 8.3.20 cho thấy tiềm sử dụng phối hợp với để tăng cường khả kiểm soát bệnh nấm N dimidiatum DANH MỤC CÁC TỪ VIẾT TẮT CT : Môi trường thạch cao - thịt pepton ITS : Internal Transcribed Spacer 291 MTTL : Môi trường thạch nước chiết Thanh long NdBT : Chủng nấm Neoscytalidium dimidiatum NdBT NdGV : Chủng nấm Neoscytalidium dimidiatum NdGV PGA : Môi trường thạch nước chiết khoai tây XUNG ĐỘT LỢI ÍCH Bài báo dựa kết nghiên cứu thực nghiệm hoàn tồn trung thực nhóm tác giả thống đồng ý cơng bố mà khơng có tác động xung đột lợi ích ĐĨNG GĨP CỦA CÁC TÁC GIẢ Nguyễn Như Nhứt: tư vấn, thực nghiệm thu thập số liệu, tổng hợp số liệu; viết, trình chỉnh sửa báo Nguyễn Thị Ngọc Bích, Nguyễn Thanh Trường: thực nghiệm thu thập số liệu Võ Thị Xuyến : tư vấn TÀI LIỆU THAM KHẢO Yi RH, Lin QL, Mo J, Wu F, Chen J Fruit internal brown rot caused by Neoscytalidium dimidiatum on pitahaya in Guangdong province China Australasian Plant Disease Notes 2015;10(13):1–4 Thongkham D, Soytong K Isolation, identification, and pathogenicity test from Neoscytalidium dimidiatum causing stem canker of dragon fruit International Journal of Agricultural Technology 2016;12(7.2):2187–2190 Bakhshizadeh M, Hashemian HR, Najafzadeh MJ, Dolatabadi S, Zarrinfar H First report of rhinosinusitis caused by Neoscytalidium dimidiatum in Iran Journal of Medical Microbiology 2014;63:1017–1019 Wan Z, Wan R, Shah M, Kalsom U, Mohd P, Hun G Identification of Trichoderma harzianum T3.13 and its interaction with Neoscytalidium dimidiatum U1, a pathogenic fungus isolated from dragon fruit (Hylocereus polyrhizus) in Malaysia International Journal of Agriculture and Environmental Research 2017;3(3):3205–3228 Luis G, Tomas RG, Mirella RB, Csar J, Francisco H, Roberto G Antagonistic potential of bacteria and marine yeasts for the control of phytopathogenic fungi Revista Mexicana de Ciencias Agrícolas 2018;20:4311–4321 Luong HT, Nguyen K, Vu TN, Ha TT, Tong HV, Hua TS, et al Study on the possibility of using microorganisms as biological agents to control fungal pathogens Neoscytalidium dimidiatum causing disease of brown spots on the dragon fruit Journal of Vietnamese Environment 2016;8(1):41–44 Masratul HM, Baharuddin S, Latiffah Z Identification and molecular characterizations of Neoscytalidium dimidiatum causing stem canker of red-fleshed dragon fruit (Hylocereus polyrhizus) in Malaysia Journal of Phytopathology 2013;161:841–849 Mohd MH, Salleh B, Zakaria L Identification and molecular characterizations of Neoscytalidium dimidiatum causing stem canker of red-fleshed dragon fruit (Hylocereus polyrhizus) in Malaysia Journal of Phytopathology 2014;161:841–849 Le BF, Vaillant F, Pitahaya IE Pitahaya (Hylocereus spp.): A new fruit crop, a market with a future Fruits 2006;61:237–250 10 Ilham M, Amer MS, Assawah M, Draz SM Vegetative compatibility and strain improvement of some Egyptian Trichoderma isolates Life Science Journal 2013;10(3):187–197 Tạp chí Phát triển Khoa học Công nghệ – Khoa học Tự nhiên, 3(4):286-293 11 Andhare AP, Subramanian B Compatibility of Azospirillum brasilense and Pseudomonas fluorescens in growth promotion of groundnut (Arachis hypogea L.) Anais da Academia Brasileira de Ciências 2017;89(2):1027–1040 12 Nwankiti AO, Gwa VI Evaluation of antagonistic effect of Trichoderma harzianum against Fusarium oxysporum causal agent of white yam (Dioscorearotundata poir) tuber rot Trends in Technical & Scientific Research 2018;1(1):001–007 13 Lân DN, Nguyễn QD, Pham TV Vi sinh vật học NXB Giáo dục Việt Nam; 2010 292 Science & Technology Development Journal – Natural Sciences, 3(4):286-293 Research Article Open Access Full Text Article Isolate Neoscytalidium dimidiatum fungal pathogens from pytaya (Hylocereus undatus) and research controlling by microorganisms Nguyen Nhu Nhut1,* , Nguyen Thi Ngoc Bich1 , Nguyen Thanh Truong1 , Vo Thi Xuyen2 ABSTRACT Use your smartphone to scan this QR code and download this article In recent years, Neoscytalidium dimidiatum has caused severe white spot disease in Pytaya, while no effective controls have been taken In this study, two strains of N dimidiatum NdGV and NdBT were obtained by isolation on water agar medium containing streptomycin, morphological tests, in vitro and in vivo pathogenical tests, and molecular biology tests by sequencing the genes ITS1 and ITS4 By using dual culture technique on potato-glucose agar medium, 100% of Trichoderma spp., 75% of Bacillus spp and 20% of Streptomyces spp were able to antagonize N dimidiatum The mean antagonistic effect with N dimidiatum of Trichoderma spp was higher than Bacillus spp and the lowest was Streptomyces spp 56.8%, 55.3% and 54.3% respectively Especially strains Trichoderma sp 8.3.5, 8.3.7, 8.3.14, 8.3.19, and 8.3.20 had antagonistic effects of over 60% The application potential of the selected Trichoderma strains to control N dimidiatum disease was further strengthened when their antagonistic effect was relatively stable on Pitaya juice agar medium while all Bacillus sp and Streptomyces sp were lost the ability to antagonize It was noteworthy that four of the five strains of Trichoderma sp were highly compatible, suggesting further studies are needed to apply their combined potency in enhancing the control of N dimidiatum NdBT and NdGV on Pitaya Key words: Bacillus, Neoscytalidium dimidiatum, Pitaya, Streptomyces, Trichoderma Giatuong Company Ltd Van Lang University Correspondence Nguyen Nhu Nhut, Giatuong Company Ltd Email: nhunhutnguyen@yahoo.co.uk History • Received: 04-12-2018 • Accepted: 7-10-2019 • Published: 31-12-2019 DOI : 0.32508/stdjns.v3i4.585 Copyright © VNU-HCM Press This is an openaccess article distributed under the terms of the Creative Commons Attribution 4.0 International license Cite this article : Nhu Nhut N, Thi Ngoc Bich N, Thanh Truong N, Thi Xuyen V Isolate Neoscytalidium dimidiatum fungal pathogens from pytaya (Hylocereus undatus) and research controlling by microorganisms Sci Tech Dev J - Nat Sci.; 3(4):286-293 293 ... 50 cm) không bị bệnh dùng để kiểm tra bệnh học tương ứng in vitro in vivo Phương pháp Phân lập nấm Neoscytalidium dimidiatum Nấm bệnh N .dimidiatum phân lập từ mẫu Thanh long bị bệnh đốm trắng... kính nấm bệnh đĩa đối chứng (mm); B: Đường kính nấm bệnh đĩa đối kháng (mm) 287 Đánh giá tiềm ứng dụng Thanh long Các chủng vi sinh vật có hiệu đối kháng cao đánh giá tiềm kiểm soát nấm bệnh N .dimidiatum. .. chủng nấm NdBT NdGV (theo mức phân hạng Nwankiti Gwa 12 chọn lọc để tiếp tục nghiên cứu Tiềm ứng dụng chủng vi sinh vật đối kháng kiểm soát nấm bệnh N Dimiditatum Thanh long Hiệu đối kháng chủng vi