Phát triển sinh khối vi rút nhân đa diện (NPV) trên tế bào sâu khoang phục vụ sản xuất thuốc trừ sâu sinh học

LỜI CAM ĐOAN Tôi xin cam đoan số liệu kết nghiên cứu nêu luận án trung thực, không trùng lặp với đề tài luận án khác chưa tác giả khác công bố Hà Nội, ngày tháng năm 2020 Tác giả i MỤC LỤC Diễn giải Trang LỜI CAM ĐOAN i LỜI CẢM ƠN ii MỤC LỤC iii DANH MỤC CÁC KÝ HIỆU, CÁC CHỮ VIẾT TẮT v DANH MỤC BẢNG vi DANH MỤC HÌNH ix MỞ ĐẦU 1.Tính cấp thiết đề tài nghiên cứu Mục đích, yêu cầu cần đạt đề tài 3 Ý nghĩa khoa học thực tiễn Đối tượng phạm vi nghiên cứu Những đóng góp luận án CHƯƠNG CƠ SỞ KHOA HỌC VÀ TỔNG QUAN TÀI LIỆU 1.1.Cơ sở khoa học đề tài nghiên cứu 1.2 Tổng quan tài liệu 1.2.1 Tình hình nghiên cứu nước ngồi 1.2.1.1 Nghiên cứu sâu khoang hại trồng 1.2.1.2 Nghiên cứu NPV sâu hại 1.2.1.3 Nghiên cứu phát triển sinh khối tế bào côn trùng 12 1.2.1.4 Nghiên cứu điều kiện phát triển sinh khối tế bào côn trùng 18 1.2.1.5 Nghiên cứu lây nhiễm NPV tế bào nhân nuôi 28 1.2.1.6 Nghiên cứu tinh thể vùi tạo dạng sử dụng chế phẩm NPV 32 1.2.2 Tình hình nghiên cứu nước 35 1.2.2.1 Nghiên cứu sâu khoang hại trồng 35 1.2.2.2 Nghiên cứu NPV sâu hại 36 1.2.2.3 Nghiên cứu nuôi nhân tế bào côn trùng 37 ii 1.2.2.4 Nghiên cứu phát triển sinh khối NPV 38 CHƯƠNG VẬT LIỆU, NỘI DUNG VÀ PHƯƠNG PHÁP NGHIÊN CỨU 2.1 Vật liệu dụng cụ, thiết bị nghiên cứu 43 2.1.1 Vật liệu nghiên cứu 43 2.1.2 Dụng cụ thiết bị nghiên cứu 43 2.2 Địa điểm thời gian nghiên cứu 44 2.2.1 Địa điểm nghiên cứu 44 2.2.2 Thời gian nghiên cứu 44 2.3 Nội dung nghiên cứu 44 2.4 Phương pháp nghiên cứu 44 2.4.1 Điều tra, đánh giá thu thập, tuyển chọn NPV sâu khoang 44 2.4.2 Nghiên cứu điều kiện thích hợp phát triển sinh khối tế bào sâu khoang lây nhiễm NPV tế bào nuôi nhân 48 2.4.2 Nghiên cứu điều kiện thích hợp để nhân sinh khối tế bào sâu khoang 50 2.4.2.2 Nghiên cứu lây nhiễm NPV sâu khoang tế bào nhân nuôi 54 2.4.3 Nghiên cứu tinh thể vùi tạo chế phẩm NPV dạng bột thấm nước 60 2.4.3.1 Nghiên cứu tinh thể vùi NPV sau lây nhiễm tế bào 60 2.4.3.2 Nghiên cứu phát triển chế phẩm NPV dạng bột thấm nước 61 2.4.3.3 Đánh giá hiệu lực phòng trừ sâu khoang chế phẩm tạo 2.4.4 Phương pháp tính tốn, xử lý số liệu 65 CHƯƠNG KẾT QUẢ NGHIÊN CỨU VÀ THẢO LUẬN 3.1 Điều tra, đánh giá thu thập, tuyển chọn virus nhân đa diện (NPV) sâu khoang 66 3.1.1 Mức độ phổ biến khả gây chết sâu khoang virus nhân đa diện (NPV) đồng ruộng 66 3.1.2 Phân lập, tuyển chọn chủng NPV có hoạt lực cao 70 3.2 Nghiên cứu phát triển sinh khối tế bào sâu khoang lây nhiễm NPV tế bào nhân nuôi 77 3.2.1 Nghiên cứu phát triển sinh khối tế bào sâu khoang iii 78 3.2.1.1 Nghiên cứu điều kiện thích hợp phát triển sinh khối tế bào sâu khoang 78 3.2.1.2 Phát triển sinh khối tế bào sâu khoang qui mơ phịng thí nghiệm 88 3.2.2 Nghiên cứu phát triển sinh khối NPV sâu khoang tế bào nuôi nhân 92 3.2.2.1 Xác định điều kiện thích hợp cho lây nhiễm virus nhân đa diện ( NPV) 93 3.2.2.2 Mức độ phát triển sinh khối tế bào hình thành thể vùi trình lây nhiễm virus nhân đa diện (NPV) 101 3.2.2.3 Mức độ gây chết sâu khoang hình thành thể vùi NPV nhân tế bào sâu 105 3.2.2.4 Hiệu lực trừ sâu khoang chủng virus TL.1a nhân tế bào 107 3.3 Nghiên cứu tinh thể vùi NPV sâu khoang tạo chế phẩm dạng bột thấm nước 109 3.3.1 Tinh thể vùi NPV sâu khoang 109 3.3.2 Thử nghiệm tạo chế phẩm NPV sâu khoang dạng bột thấm nước 114 3.3.3 Đánh giá hiệu lưc phòng trừ sâu khoang chế phẩm tạo 117 3.3.3.1 Đánh giá hiệu lưc phòng trừ sâu khoang điều kiện phịng thí nghiệm 117 3.3.3.2 Đánh giá hiệu lưc phịng trừ sâu khoang bắp cải nhà lưới 117 3.3.3.3 Đánh giá hiệu lưc phịng trừ sâu khoang ngồi đồng ruộng 120 KẾT LUẬN VÀ ĐỀ NGHỊ Kết luận 126 Đề nghị 127 DANH MỤC CƠNG TRÌNH ĐÃ CƠNG BỐ CĨ LIÊN QUAN ĐẾN LUẬN ÁN 128 TÀI LIỆU THAM KHẢO 129 PHỤ LỤC iv DANH MỤC CÁC KÝ HIỆU, CÁC CHỮ VIẾT TẮT Ký hiệu, Diễn giải chữ viết tắt ADN Axit Deroxyribo Nucleic CT Công thức CV Coefficient of Variation (Hệ số biến động) FBS Fetal Bovin Serum (Huyết thanh) et al Những người khác MOI Multiplicity of Infection (Chỉ số lây nhiễm) nnk Những người khác NSNN Ngày sau nuôi nhân NSLN Ngày sau lây nhiễm NPV Nuclear Polyhedrosis Virus (Virus nhân đa diện) OB Occlusion Bodies (Thể vùi) PBS Photphatse Buffer Saline PIB Polyhedral shaped inclusion Bodies (Thể vùi nhân đa diện) QCVN Qui chuẩn Việt Nam TCVN Tiêu chuẩn Việt Nam SDS Sodium Dodecyl Sulfate TB Trung bình v DANH MỤC BẢNG Diễn giải Trang Bảng 3.1 Mật độ sâu khoang phát sinh tỷ lệ sâu chết NPV trồng đồng ruộng (2014- 2015) 68 Bảng 3.2 Mức độ phổ biến NPV ký sinh sâu khoang trồng đồng ruộng (2014- 2105) 69 Bảng 3.3 Số thể vùi hình thành hiệu gây chết sâu khoang ngày sau lây nhiễm chủng NPV sau phân lập lần 72 Bảng 3.4 Số thể vùi hình thành hiệu gây chết sâu khoang sau lây nhiễm chủng NPV sau phân lập lần 74 Bảng 3.5 Số thể vùi hình thành hiệu gây chết sâu khoang chủng NPV điển hình sau phân lập lần thứ 75 Bảng 3.6 Số thể vùi hình thành hiệu gây chết sâu khoang chủng NPV lựa chọn 76 Bảng 3.7 Mật độ tế bào sâu khoang ngày sau nuôi nhân môi trường khác 79 Bảng 3.8 Mật độ tế bào sâu khoang nuôi nhân mức nhiệt độ khác 81 Bảng 3.9 Mật độ tế bào sâu khoang nuôi nhân mức pH môi trường khác 83 Bảng 3.10 Mật độ tế bào sâu khoang nuôi nhân môi trường có bổ sung huyết FBS với tỷ lệ khác 85 Bảng 3.11 Mật độ tế bào sâu khoang ni nhân in vitro điều kiện thích hợp 86 Bảng 3.12 Mật độ tế bào sâu khoang nuôi nhân theo phương pháp tĩnh lắc bình lọc khuẩn 250ml 89 Bảng 3.13 Mật độ tế bào sâu khoang nuôi nhân với lượng 750ml môi trường bình lọc khuẩn 1000ml theo phương pháp tĩnh lắc 91 Bảng 3.14 Số lượng thể vùi hình thành nhiễm NPV tế bào có mật độ khác 94 vi Bảng 3.15 Số lượng thể vùi hình thành nhiễm NPV tế bào theo số MOI khác 95 Bảng 3.16 Số lượng thể vùi hình thành sau thời gian ủ lây nhiễm NPV khác 97 Bảng 3.17 Số lượng thể vùi hình thành lây nhiễm NPV tế bào sâu khoang với loại môi trường khác 98 Bảng 3.18 Số lượng thể vùi hình thành lây nhiễm NPV tế bào sâu khoang nhiệt độ khác 99 Bảng 3.19 Số lượng thể vùi hình thành lây nhiễm NPV tế bào sâu khoang mức pH môi trường khác 101 Bảng 3.20 Mật độ tế bào sâu khoang số thể vùi hình thành sau ngày lây nhiễm NPV theo số MOI khác 104 Bảng 3.21 Hiệu lực trừ sâu khoang nguồn NPV tạo từ lây nhiễm tế bào sâu khoang 105 Bảng 3.22 Số lượng thể vùi hình thành từ nguồn NPV tạo từ lây nhiễm tế bào sâu khoang 106 Bảng 3.23 Hiệu lực trừ sâu khoang chủng NPV nhân sinh khối tế bào sâu khoang 108 Bảng 3.24 Số lượng thể vùi sâu khoang tỷ lệ thu hồi sau tinh theo phương pháp khác 111 Bảng 3.25 Các chủng NPV sâu khoang sử dụng phân tích phả hệ 113 Bảng 3.26 Thành phần phụ gia, chất lượng liều lượng sử dụng chế phẩm NPV dạng bột thấm nước 116 Bảng 3.27 Hiệu lực phòng trừ sâu khoang chế phẩm NPV sau ngày phun điều kiện phịng thí nghiệm 117 Bảng 3.28 Hiệu lực phòng trừ sâu khoang bắp cải chế phẩm NPV điều kiện nhà lưới 118 Bảng 3.29 Số lượng thể vùi hình thành sâu khoang bắp cải sau sử dụng chế phẩm NPV nhà lưới 119 vii Bảng 3.30 Hiệu lực trừ sâu khoang chế phẩm NPV-1 WP bắp cải đồng ruộng Vân Nội (Hà Nội) 121 Bảng 3.31 Hiệu lực trừ sâu khoang chế phẩm NPV-1 WP phun với liều lượng khác bắp cải đồng ruộng Vân Nội (Hà Nội) 122 Bảng 3.32 Hiệu lực trừ sâu khoang chế phẩm NPV-1 WP phun với liều lượng khác đậu tương đồng ruộng Mỹ Thành (Hà Nội) 124 Bảng 3.33 Hiệu lực trừ sâu khoang chế phẩm NPV-1 WP đậu tương Mỹ Thành (Hà Nội) 124 viii DANH MỤC HÌNH Diễn giải Trang Hình 1.1 Các giai đoạn phát dục sâu khoang Hình 1.2 Các dạng Baculovirus (A), thể chồi (B) thể vùi NPV (C, D) Hình 2.3 Buồng đếm hồng cầu Neubauer 54 Hình 3.1 Triệu chứng sâu non sâu khoang chết NPV lạc bắp cải 67 Hình 3.2 Thể vùi NPV màu trắng đục hình thành lắng đọng 69 Hình 3.3 Lây nhiễm NPV sâu non sâu khoang phịng thí nghiệm 72 Hình 3.4 Thể thể vùi (OB) thể hoạt động (virion) chủng TL.1a 77 Hình 3.5 Thí nghiệm xác định mơi trường ni nhân tế bào thích hợp A: Ban đầu; B: Sau nuôi nhân ngày 80 Hình 3.6 Tế bào sâu khoang sau ngày nuôi nhân mức nhiệt độ khác A: 240C; B: 260C, C: 280C D: 290C 81 Hình 3.7 Tế bào sâu khoang sau ngày nuôi nhân đợt tháng 11/2016 quan sát kính với độ phóng đại 100X 86 Hình 3.8 Tế bào sâu khoang sau ni nhân ngày quan sát kính hiển vi có độ phóng đại 600X 200X 87 Hình 3.9 Nhân tế bào theo phương pháp lắc (A) theo phương pháp tĩnh (B) 90 Hình 3.10 Thể vùi NPV sâu khoang sau tinh quan sát kính hiển vi với độ phóng đại 200X 600X 111 Hình 3.11 Kết phân tích PCR mẫu NPV tế bào sâu 112 Hình 3.12 Thể vùi sau tinh (A), đưa vào lọ bảo quản (B) 113 Hình 3.13 Cây phả hệ dựng theo phương pháp Neighbor-joining 114 Hình 3.14 Đóng gói chế phẩm NPV sau tạo dạng sử dụng 116 ix MỞ ĐẦU Tính cấp thiết đề tài nghiên cứu Sâu khoang (Spodoptera litura Fabr.) loài sâu ăn tạp thường gây hại đối tượng trồng cạn, phân bố rộng nhiều nước thuộc khu vực nhiệt đới nhiệt đới Theo Kumari Singh (2009); Hong (2002), sâu khoang sống gây hại 290 loài thuộc 90 họ thực vật khác [1, 2] Ở Việt Nam, sâu khoang thường phát sinh phá hại nặng nhiều loại trồng, điển loại rau họ Thập tự, nho, đậu đỗ, cà chua, dưa chuột, rau muống, khoai sọ, thuốc lá, đậu tương, lạc, bông, đay, v.v (Viện Bảo vệ thực vật, 2003, 2006) [3, 98] Theo kết điều tra Viện Bảo vệ thực vật (2001), để bảo vệ trồng khỏi tác hại sâu khoang, nông dân thường phải sử dụng nhiều loại thuốc hóa học bảo vệ thực vật với liều lượng cao [4] Sự lệ thuộc vào thuốc bảo vệ thực vật hóa học làm tăng mức độ kháng thuốc sâu khoang, gây khó khăn cho cơng tác phịng trừ gây nhiễm bẩn thực phẩm, gây độc hại đáng kể sức khỏe người sản xuất tiêu dùng sản phẩm, ô nhiễm môi trường làm tổn hại đến quần thể lồi sinh vật có ích đồng ruộng Trên đồng ruộng, lồi trùng thuộc Cánh phấn khác, sâu khoang thường bị chết nhiễm NPV Theo kết điều tra Viện Bảo vệ thực vật (2001), sâu khoang phát sinh mật độ cao, tỷ lệ sâu chết bị nhiễm NPV (Nuclear Polyhedrosis Virus) từ 0,2- 1,5% rau bắp cải, từ 0,9- 1,6% đậu tương 0,3- 1,9% lạc [4] Rohrmann George (2011), Kitajima (1989); Kamakoff Ward (2007) xác định NPV lây nhiễm, gây chết sâu khoang loài vi rút nhân đa diện (Nuclear Polyhedrosis Virus- NPV) thuộc họ Baculoviridae thuộc nhóm vi rút sinh thể vùi (Oclusion Bodies - OB), thể vùi chứa tới 200 thể vi rút hoạt động (virion) hình que có vỏ ngồi protein bao bọc phân tử ADN (nhân) dạng vịng xoắn kép Thể vùi NPV trùng có hình khối đa diện với kích thước từ 0,1515µm NPV sâu khoang chun tính có hiệu gây chết cao sâu khoang, không lây nhiễm lồi khơng phải ký chủ [5, 6, 7] DANH MỤC CƠNG TRÌNH ĐÃ CÔNG BỐ CỦA LUẬN ÁN Lê Thanh Hải Hà, Lê Văn Trịnh, Hà Thị Thu Thuỷ (2017) Nghiên cứu kỹ thuật nuôi nhân Invitro tế bào sâu khoang (S litura) phục vụ sản xuất chế phẩm virus NPV Tạp chí Khoa học Viện Đại học Mở Hà Nội Số 33 (07/2017) 32- 38 Lê Thanh Hải Hà, Lê Văn Trịnh, Nguyễn Thị Nga (2017) Phân lập đánh giá hiệu lực gây chết sâu khoang vi rút NPV (Nucleo polyhedrosis virus) Tạp chí Nơng nghiệp Phát triển Nông thôn Số 23/2017 58- 63 Lê Thanh Hải Hà, Lê Văn Trịnh (2019) Nghiên cứu tinh thể vùi Nucleo polyhedrosis virus (NPV) tạo dạng chế phẩm Tạp chí khoa học Đại học Mở thành phố Hồ Chí Minh Số 14 (2) 12- 20 Lê Thanh Hải Hà, Hồng Đình Hồ, Lê Văn Trịnh, Nguyễn Thị Như Quỳnh (2020) Hiệu phòng trừ sâu khoang chế phẩm NPV phát triển từ tế bào nhân ni Tạp chí Bảo vệ thực vật Số 1/2020 5-11 128 TÀI LIỆU THAM KHẢO Kumari V and Singh N P (2009) Spodoptera litura nuclear polyhedrosis virus (NPV-S) as a component in integrated pest management (IPM) of Spodoptera litura (Fab.) on cabbage Jounal of Biopesticides Volume No.1 84- 86 Hong L W (2002) Characterization of granulovirus and nucleopolyherovirus isolated from Spodoptera litura PhD Thesis Univ Putra Malaysia 168 pps Viện Bảo vệ thực vật (2003) Atlat côn trùng hại trồng nông nghiệp Việt Nam NXB Nông nghiệp, Hà Nội Trang 41- 49 Viện Bảo vệ thực vật (2001) Báo cáo tổng kết đề tài khoa học cấp nhà nước KHCN.02.07B (1996-2000): Nghiên cứu áp dụng công nghệ vi sinh (vi khuẩn, vi nấm, virut) để sản xuất chế phẩm sinh học BVTV phòng trừ sâu hại trồng 134 trang Rohrmann, George F (2011) Baculovirus Molecular Biology (2nd ed.) Bethesda: National Center for Biotechnology Information.154 pps Kitajima E W (1989) Classification, identification and characterization of insect viruses Institute of Oswaldo Cruz Volume 84 Suplement III 9- 15 Kamakoff D.A and Ward K.I (2007) Baculovirues Techniques Practical Manual University of Otago pages Nguyễn Văn Cảm, Hoàng Thị Việt; Nguyễn Văn Hoa Lương Thanh Cù a (1996 ) Một số yếu tố ảnh hưởng trình pha chế chế phẩm NPV sâu xanh khả sử dụng chúng phòng trừ sâu xanh (Helicoverpa armigera Hubner) hại thuốc Tuyển tập cơng trình nghiên cứu biện pháp sinh học phòng trừ dịch hại trồng (1990- 1995) NXB Nông nghiệp Trang 24-33 Granados R.R., Li G and Blissard G.W (2007) Insect cell culture and biotechnology Virologica Sinica Vol 22 No April (2007) 83- 93 10 Goodman C.L., Mclntosh A.H., Sayed G.N.E., Grasel J.J and Stiles B (2001) Production of selected Baculoviruses in newly established Lepidopteran cell lines J In Vitro Cell Development and Biology No 37 (2001) 374- 379 129 11 Elanchezyan K (2009) Insect cell culture and biotechnology Current Biotica Vol.3 No.3 2009 Tamil Nadu Agricultural University Publising House 458489 12 Grzywacz D., Rabindra R.J., Brown M., Jones A.K and Parnell M (1996) The Helicoverpa armigera NPV production manual Book of Instruction manual Academic Press, New York 66 pgs 13 Arayya, Jaba J Sajeesh P.K and Vinod U (2013) Nuclear polyhedrosis virus (NPV), a potential biopesticide: A review Research Jounal of Agriculture and Forestry Sciences Vol 1(8) 30-33 14 Sajap A S., Kotulap J R., Bakir M A., Hong L W., Samad N.A and Kadir H A (2000) Pathogenicity and characteristis of Spodoptera litura Nucleo polyhedrovirus from Peninsular Malaysia Journal of Tropical Agricultural Sciences Volum 23 No 23- 28 15 Pourmirza A.A (2000) Relationship between nuclear polyhedrosis virus susceptibility and larval weight in Heliothis armigera Journal of Sciences and Technologies Vollum 291- 298 16 Agathos S.N (2007) Development of serum- free media for Lepidoteran for insect cell lines In: Baculovirus and insect cell expression protocol Second edition, Edited by D.W Murhammer Humana Press Totowa, New Jersey 155185 17 Kuldeep S., Devinder S., Anal A K D., Sonika S (2018) Integrated Management of Spodoptera litura: A Review International Journal Life Sciences and Scientific Resouces Vol 2/2018 226- 235 18 Alfred D.J and Samiayyan K (2017) Growth parameter indices of cutworm larva on various host plants International Journal of Agriculture Sciences Vol 9, Issue 29 4372- 4376 19 Nagamandla R S and Shantanu J (2018) Biology and morphometry Spodoptera litura Fabricius on tomato Jounal of Entomologies and Zoology Studies Vol 6(5) 80- 82 130 20 Jadhav R S.; Yaday D S.; Amala U.; Ghule S and Sawant I S (2015) Morphological, biological and molecular description of Spodoptera litura infesting grapevines in tropical climate of Maharashtra, India Current Biotica 9(3): 207- 220 21 Patil R.A., Mehta D.M and Jat B.L (2014) Studies on life fecundity tables of Spodoptera litura Fabricius on Tobacco nicotiana tabacum Linnaeus Journal of Entomology, Ornithology & Herpetology Vol 3(1) 1-5 22 Alfred D J and Samiayyan (2017) Growth parameter indices of Cut Worm lavar on various host plants International Journal of Agriculture Sciences, Volume 9, Issue 29, 2017, 4372- 4376 23 Liu SS, Brough E.J and Norton G.A (1995) Integrated pest management in brassica vegetable crops ACIAR workshop report Hangzhou, China CRCTPM, 24/6/1995 69- 194 24 Muniappan R and Marutani M (1992) Pest management for head cabbage production in Guam Proc 1992 541- 550 nd International Worshop Tainan, Taiwan AVRDC 25 Jat G.C., Swaminathan R., Yadav P.C., Swati, Deshwal H.L., Suman C and Yadav S K (2017) Relative efficacy and economics of bio-pesticides against Spodoptera litura (Fab.) on cabbage International Journal of Current Microbiology and Applied Sciences Vol (6) 1853-1866 26 Srivastava K., Sharma D., Anal A.K.D, Sharma S (2018) Integrated Management of Spodoptera litura: A Review International Journal of Life Sciences and Scientific Resources Vol 4(1):1536-1538 27 Evans H F (1986) Ecology and Epizootiology of baculoviruses, The Biology of Baculovirutes, 2nd Editor, 89-132 28 Summer M.D., Smith G.E (1987) A manual of methods for Baculovirus vectors and insect cell culture procedures The Texas Agricultural Experiment Station Texas A & M University 56 pages 131 29 Erayya, Jaba J., Sajeesh P.K and Vinod U (2013) Nuclear Polyhedrosis Virus (NPV), a potential biopesticide: A Review Research Journal of Agriculture and Forestry Sciences Vol 1(8), 30- 33 30 Lynn D.E (2002) Routine maintenanced storage of Lepidopteran insect cell lines and Baculoviruses Methods in Molecular Biology: Baculovirus and insect cell expression protocol Ed by D.W Murhammer Murhammer Press Totowa New York Vol 338 187- 208 31 Harrap K A (1972) The structure of nuclear polyhedrosis viruses: Virut assembly and Virology International Journal of Virology Vol 50(3) 133-139 32 Farrar R.R., Ridgway R.L (1999) Relative potency of selected nuclear polyhedrosis viruses against five species of Lepidoptera Journal of Agriculture and Entomology Vol.16 No.3 187-196 33.Jat G.C., Swaminathan R., Yadav P.C., Swati, Deshwat H.L Choudhary S and Suresh K.Y (2017) Relative Efficacy and Economics of Bio-pesticides against Spodoptera litura (Fab.) on Cabbage International Journal of Current Microbiology and Applied Sciences Vol 6, No 1853- 1866 34 Grzywacz D., Mushobozi W L., Parnell M., Jolliffe F., Wilson K (2008) Evaluation of Spodoptera exempta nucleopolyhedrosis (SpexNPV) for field control of African armyworm (Spodoptera exempta) in Tanzania Crop Protection No 27 (2008), 17- 24 35 Bedjo (2017) The potential of various isolates of Spodoptera litura nuclear polyhedrosis viruses from East Java (Indonesia) to control Spodoptera litura on Soybean Biodiversitas Vol 18, No 2, April 2017 582- 588 36 Maqsood S., Afzal M., Aqueet M.A., Raza A.B.M., Wakil W and Babar M.H (2017) Effcacy of nuclear polyhedrosis virus and flubendiamide alone and in combination against Spodoptera litura F Pakistan Jounal of Zoology Vol 49(5) 1783- 1788 37.Sumaira M., Muhammad A., Anjum M A., Abu Bakar M R., Waqas W and Babar M H (2017) Efficacy of Nuclear Polyhedrosis Virus and Flubendiamide 132 Alone and in Combination against Spodoptera litura F Pakistan Journal Zoology Vol 49(5), pp 1783-1788 38 Devi E B., Elangbam P D and Deepshikha, (2016) An Overview on Nuclear Polyhedrosis Virus (NPV) as a Valuable Biopesticide in Enhancing Ecofriendly Management of Insect Pests International Journal of Current Research in Biosciences and Plant Biology Vol 3(8) 97- 106 39 Escribano A., Williamst, Goulson, Ronald D.C Chapman J.W and Caballero J.W., (1999) Selection of a Nucleopolyhedrovirus for Control of Spodoptera frugiperda (Lepidoptera: Noctuidae): Structural, Genetic, and Biological Comparison of Four Isolates from the Americas Journal of Economycal Entomology 92(5): 1079-1085 40 Salama M.S., Abd El-Salam, A.M.E., Dalia M Mahmoud and Samah M.M.A (2017) Effect of ultra violet radiations on insecticidal activity of Spodoptera littoralis multinucleocapsid nuclear polyhedrosis virus against Spodoptera littoralis Boisd (Lepidoptera: Noctuidae) Biocience Research Vol 14(3), 645652 41 Sills E.S., Takeuchi T., Tanaka N., Neri Q.V and Palermo G.D (2005) Indentification and isolation of embryonic stem cells in reproductive endocrinology: Theoretical protocols for conservation of human embryos derived from in vitro fertilization Training manual of BioMed Centre Co LTD 10 pps 42 Sudeep A.B., Mourya D.T and Mishra A.C (2005) Insect cell culture in research: Indian scenario Indian Journal of Medicin Research, No 121, 2005 725- 738 43 Lynn D.E (1998) Lepidopteran insect cell line isolation from insect tissue Volume 338: Baculovirus and Insect Cell Expression Protocol Section 139154 Books: Methods in Molecular Biology Edited by: Murhammer D.W Humana Press Inc Totowa New York 44 Freshney R (1987) Culture of animal cell Manual of basic technique Second edited; Wiley- Liss, New York 397 pps 133 45 Grace T.D.C (1982) Development of insect cell culture Journal of Invertebrate Cell Culture, Application by Editors: Maramorosch K and Mitsuhashi J Academic Press, New York 1-8 46 Guy S C L., Goodman D.S (2008) Insect cell culture and applications to research and pest management Journal of In Vitro Cell Development and Biology Animal No 10 84- 89 47 Weiss S.A., Smith G.C., Kalter S.S and Vaughn J.L (1981) Improved method for the production of insect cell cultures in large volume In Vitro Jounal No 17 495- 502 48 Hurton L.V., Berkson J.M and Amith S A (2005) Selection of a standard culture medium for primary culture of Limulus polyphemus amebocytes In Vitro Cell Dev and Biology of Animal Society for In Vitro Biology No 41 325329 49 Lynn D.E., (1996) Development and characterization of insect cell lines Kluwer Academic Publishers Cytotechnology No 20 3- 11 50 Invitrogen Life Technologies (2002) Guide to Baculovirus expression vector systems (BEVS) and insect cell culture techniques Instruction Manual 34 pps 51 Murhammer (2007) Baculovirus and insect cell expression protocol In: Methods in molecular biology Second Edition 470pps 52 Agathos (2010) Insect cell culture American Society for Microbiology No.25 212- 222 53 Mishuhashi J (1976) Primary cultures of the cells from ovaries of the Cabbage Armyworm, Mamestra brassicae L (Lepidoptera: Noctuidae) Journal of Development, Growth and Differentiation Volume 18 No 163- 166 54 Bhutia K.C.; Chakravathy A K.; Doddabasappa B.; Narabenchi B.; Lingaraj V.K (2012) Evaluation and production of improved formulation of nucleopolyhedrosis virus of Spodoptera litura Bulletin of Insectology Vol 65 No.2 247- 256 134 55 Segura Nidya A, Felio Bello J (2012) Establishment and characterisation of a new cell line derived from Culex quinquefasciatus (Diptera: Culicidae) Mem Inst Oswaldo Cruz, Rio de Janeiro, Vol 107(1): 89-95 56 Lynn D E., C Goodman, G Caputo (2005) Technique for the development of new insect cell lines Report in In vitro biology annual meeting 2005 Society for in Vitro Biology Murhammer Press Totowa New York 57 Toprak U and Gurkan M O (2004) First record of a NPV isolation from Spodoptera litoralis (Boisd) (Lepidoptera: Noctuidae) in Turkey and its molecular identification according to the partial lef-8 gene Turkis Journal of Biology No 28 71- 77 58 Knudson D L and Tinsley T W (1974) Replication of a nuclear polyhedrosis virus in a continous cell culture of Spodoptera frugiperda: Purification, assay of infectivity and growth cheracterristics of the virus Journal of virology No Volum 14 934- 944 59 Petchprakob P., Mekvichitsaeng P., Akeprathumchai S., Dechmahikl W and Poomputsa K (2007) Improvement of Baculovirus NPV production from cell in Bioreactor for use as insecticides Agricultural Scientific Journal No 38(6) 7982 60 McAteer J., Davis J (1994) Basic cell culture technique and the maintenance of cell lines Basic Cell Culture - A Practical Approach Editor: Davis Oxford University Press Inc., New York Pg 93- 148 61 Mishuhashi J (1995) A continuous cell line from pupal ovaries of theo common cutworm Spodoptera litura (Lepidoptera: Noctuidae) Applied entomology and zoology 30(1) 75-82 62 Mishuhashi J and Goodwin A (1976) Primary cultures of the cells from ovaries of the Cabbage Armyworm, Mamestra brassicae L (Lepidoptera: Noctuidae) Journal of Development, Growth and Differentiation Volume 18 No Page 163- 166 135 63 Agathos S.N (1994) Large scale insect cell production Book: Inscet Cell Biotechnology by Editors: Maramorosch K and Mclntosh CRC Press, Tokyo 89- 103 64 Demir I., Gorel N., Naloacioglu R., Demirbag Z (2009) Comparative susceptibilities of six insect cell lines to infection by Malacosoma neustria nucleopolyhedrovirus (ManeNPV) Turkey Journal of Biology No 33 (2009), Page 259-273 65 Felio J.B G., Jorge B., Gloria R., Alberto M and Olano V.A (1995) Initiation of primary cell culture from embryos of the mosquitoes Anopheles albimanus and Aedestaeniorhynchus (Diptera: Culicidae) Journal ff Mem Institute of Oswaldo Cruz Rio de Janeiro Volume 90 No Page 547- 551 66 Yeh S.C., Lee S T., Wu C.Y, Wang C.H (2007) A cell line (NTU- MV) established from Maruca vitrata (Lepidoptera: Pyralidae): Characterrization, viral susceptibility and polyhedra production Journal of Invertebrate Pathology No 96 (2007) 138- 146 67 Lynn D.E and Shapiro M (1998) New cell lines from Heliothis virescens: Characterization and susceptibility to baculoviruses Journal of Invertebrate Pathogology No 72 Page 276- 280 68 Trang T.T.K, Chaudhari S and Gautam R.D (2003) A note on the spread of nuclear polyhedrosis virus through Cotesia (Apanteles) angaleti Muesbeck (Hymenoptera: Braconidae) Omonrice No.11 151- 152 (2003) 69 Jakubowska A., Ferre J., Herrero S (2009) Enhancing the multiplication of nucleopolyhedrosis virus in vitro by manipulation of the pH Journal of Viological methods No 161(2009) 254- 258 70 Rey G.J., Ferro C., Bello F.J (2000) Establishment and characterization of new continuous cell line from Lutzomya longipalpis (Diptera: Psychodidae) and its susceptibility to infections with Arboviruses and Leishmania chagasi Inst of Oswaldo, Colombia Vol.95 (1) 103-110 71 Petcharawan O.; Mongkopoch K and Belloncik S (2006) Establishment of cell line devived from embryonic tissue of the Diamondback Moth, Plutella 136 xylostella (L.) KMITL Science Technological Journal Vol.6 No Dec 2006 56- 66 72 Phan Kim Ngọc Phạm Văn Phúc (2010) Công nghệ sinh học người động vật NXB Giáo dục Việt nam 895 trang 73.Maeda S., Mukohara Y and Kondo A (1990) Characteristically distinct isolates of the nuclear polyhedrosis virus from Spodoptera litura Journal of General Virology (1990) No 71 2631- 2639 74 Mclntosh A.h., Grasela J.J., Kariuki C.W., Goodman C.L., Brennan L.A and Dierks P.M (2003) Evaluation of recombinant diamondback moth baculvirus in selected Lepidopteran cell lines and larvae Journal of Insect Biochemistry and Molecular Biology Vol 33 (2003) 927- 931 75 Popham H J.R., Grasela J.J., Goodman C L and Mclntosh A.H (2010) Baculovirus infection influences host protein expression in two established insect cell lines Journal of Insect Physiology No.56 (2010) 1237- 1245 76 Woo S D., Jong Y R., Choi J Y and Jin B R (2007) Propagation of Bombyx mori nucleopolyhedrovirus in nonpermissive insect cell lines The journal of microbiology April 2007 Page 133- 138 77.Lery X., Zeddam J L., Giannotti J., Fedriere G and Ela S.A (1995) Establishment of a cell line derived from embryos of the potato tuber moth Phthorimaea opercurella (Zeller) Journal of In Vitro Cell Development and Biology of Animal No 31 836-839 78 Vaughn J.L., Goodwin R.H and others (1977) The establishment of two cell lines from the insect Spodoptera frugiperda (Lepidoptera; Noctuidae) Vitro Journal Vol 13, No 213- 219 79 Kanokwan P., Kathariya P., Phenjun M and Uthai K (2003) Pilot scale production of baculovirus using insect cell culture for biopesticides Proceeding of The 13th annual meeting of the Thai society for biotechnology 2003 Page 148- 155 137 80 Maiorella B., Inlow D., Shauger A and Harano D (1988) Large scale insect cell culture for recombinant protein production Biotechnology Journal No (1988) 1406-1410 81 Miranda E.A., Murcia G.D and Murcia M.D (1997) Large- scale production and purification of recombinant protein from an insect cell/ baculovirus system in Erlenmeyer flasks: application to the chiken poly (ADP- ribose) polymerase catalytic domain Barzillian Jounal of Medical and Biological Research No.30 (1997) 923- 928 82 Cynthia B.E., Barbara J and Kamine K (2007) Recombinant protein production in large- scale agitated bioreactor using the Baculovirus expression vector system In: Baculovirus and insect cell expression protocol Second edition, Edited by D W Murhammer Humana Press Totowa, New Jersey 224245 83 Tipvadee A., Sudawan C., Suvalux C., Supat A and Pissawan C (1988) Characterization of the nuclear polyhedrosis virus of the Cotton Bollworm, Heliothis armigera Kaseart Jounal (Natural Science) Vol 22 No 14- 23 84 Zitzmann J., Sprick G., Weidner T., Schreiber C and Peter C (2017) Process optimization for recombinant protein expression in insect cells The Hessen State Ministry of Higher Education 110 pages 85 Lynn D.E (2003) Comparative susceptibilities of twenlve insect cell lines to infection by three Baculovirus Journal of Invertebrate Pathogology No 82 129- 131 86 Barbara J K., Linda A.K and Robert D.P (2007) Introduction to baculovirus molecular biology In: Baculovirus and insect cell expression protocol Second Ed., Edited by D.W Murhammer Humana Press Totowa, New Jersey 25- 54 87 Bryony C.B and Nusawadany T (2007) Introduction to the use of Baculoviruses as biological insecticides In: Baculovirus and insect cell expression protocol Second edition, Edited by D.W Murhammer Humana Press Totowa, New Jersey Page 359- 366 138 88 King L.A., Hitchman R., and Posee R.D (2007) Recombinant baculovirus isolation In: Baculovirus and insect cell expression protocol Second edition, Edited by D.W Murhammer Humana Press Totowa, New Jersey 76- 93 89 Kanokwan P., Kathariya P., Phenjun M and Uthai K (2004) Pilot scale production of baculovirus using insect cell culture for biopesticides Proceeding of The 13th annual meeting of the Thai society for biotechnology 2003 148155 90 Shapiro M and Shepard B.M., (2008) Evaluation of clays and fluorescent brightener upon the activities of the Gypsy Moth (Lepidoptera: Lymantriidae) nuleopolyhedrovirus Jounal of agricultural uban entomology 24(4) 165- 175 91 Patricia T G., McGuire R., Behle R W., Shasha B S and Pingel R L (2002) Storage stability of Anagrapha falcifera nucleopolyhedrovirus in spray- dried formulations Journal of Invertebrate Pathology Vol 79 Page 7- 16 92 Mushobozi W., Grzywacz D., Moscardi F and Wilson K (2004) The African Armyworm Spodoptera exempta nucleopolyhedrovirus (NPV) production and application manual Project Report Natural Resources Institute United Kingdom 116 pps 93 Goulson D.; Martinez A M.; Hughes W O H and Williams T (2000) Effects of optical brighteners used in biopesticide formulations on the behavior of pollinators Journal of Biological Control No 19 232- 236 94 Cisneros J., Perez J A., Penagos D I., Ruiz J V Cabellero P Cave R D and Williams T (2002) Formulation of a nucleopolyhedrosis with Boric acid for control of Spodoptera frugiperda (Lepidoptera: Noctuidae) in maize J of Biological Control Vol 23 87- 95 95 Javier G O., Sudawan C Barbara L.C., Motoko I And Michihiro K (2008) Susceptibility of the cell line Hv-AM1 from Heliothis virescens to eight selected Nucleopolyhedroviruses Journal of insect biotechnology and Sericology No 77 Page 141- 150 96 Inst of Zoology, Chinese Academy of Sciences 2006 Introduction of biopesticides products based biotechnological application 12 pgs 139 97 Cục BVTV, Viện BVTV, Trường ĐH Tổng hợp Hà Nội (1995) Báo cáo khoa học cải tiến công tác BVTV Việt Nam (VNM-8910-030) giai đoạn 19901995 NXB Nông nghiệp 154 trang 98 Viện Bảo vệ thực vật (2006) Nghiên cứu chế phẩm sinh học đa chức công nghệ sinh học Báo cáo tổng kết đề tài khoa học công nghệ cấp Nhà nước KC.04-12 (2001- 2005) 119 trang 99 Nguyễn Duy Nhất (1970) Đặc tính sinh vật học, qui luật phát sinh yếu tố ảnh hưởng đến mật độ sâu khoang đồng ruộng vùng Hà Nội Tạp chí KHKT Nơng nghiệp Số 6, 1970 674- 679 100 Lê Văn Trịnh (1996) Nghiên cứu đặc điểm sinh học, sinh thái số sâu hại rau họ Thập tự vùng đồng sông Hồng biện pháp phòng trừ Luận án Tiến sỹ 181 trang 101 Nguyễn Văn Cảm, Hoàng Thị Việt; Nguyễn Văn Hoa Lương Thanh Cù; b Trần Quang Tấn; Nguyễn Đậu Toàn Huỳnh Thị Huệ (1996 ) Bệnh thối nhũn sâu đo xanh (Anomis falava Fabr.) khả sử dụng chúng việc phòng trừ sâu đo xanh hại đay Tuyển tập cơng trình nghiên cứu bảo vệ thực vật 19901995 NXB Nơng nghiệp, Hà Nội Trang 173- 181 102 Hồng Thị Việt, Nguyễn Văn Cảm et al (2002) Một số kết nghiên cứu NPV (Nuclear Polyhedrosis Virus) khả sử dụng phòng trừ sâu hại trồng Tuyển tập cơng trình nghiên cứu bảo vệ thực vật 2000- 2002 NXB Nông nghiệp, Hà Nội, Trang 113- 130 103 Trịnh Thị Xuân, Trương Thanh Xuân Liên, Dương Thị Thu Nhi Trần Văn Hai (2016) Tiềm vi rút SeNPV (Spodoptera exigua nucleopolyhedrovirus) sâu keo da láng Spodoptera exigua Hübner (Lepidoptera: Noctuidae) đồng sơng Cửu Long Tạp chí Bảo vệ thực vật Số 5/2016 19- 26 104 Trần Văn Hai, Trần Thị Xuân, Nguyễn Thị Minh Hạnh, Trần Thị Ánh Tuyết CTV (2010) So sánh dòng Nucleopolyhedrosis Virus đồng sông Cửu Long phương pháp PCR tiềm phòng trừ sâu ăn 140 tạp (Spodoptera litura Fabr.) Báo cáo Hội nghị khoa học cơng nghệ tồn quốc BVTV lần thứ Trang 481- 487 105 Lê Văn Trịnh, Lê Thanh Hải Hà (2011) Tạo dòng tế bào sâu khoang Spodoptera litura từ mô phôi mơ mỡ Tạp chí Bảo vệ thực vật Số 17- 20 106 Nguyễn Thị Hai (2005) Sử dụng virus Nucleopolyhedrosis phòng trừ sâu keo da láng (Spodoptera exigua) hại trồng Báo cáo Hội nghị: Các biện pháp sinh học phòng chống sâu bệnh hại trồng nông nghiệp NXB Nông nghiệp Trang 175- 181 107 Trương Thanh Giản; Lê Văn Thuyết; Trần Quang Tấn; Nguyễn Đậu Toàn CTV (1996) Bước đầu nghiên cứu sử dụng NPV sâu róm thơng (Dendrolimus punctatus Walker) rừng thơng Thanh Hóa Tuyển tập cơng trình nghiên cứu bảo vệ thực vật 90- 95 NXB Nông nghiệp, Hà Nội Trang 173181 108 Viện Bảo vệ thực vật (1997) Phương pháp nghiên cứu bảo vệ thực vậtPhương pháp điều tra dịch hại nông nghiệp thiên địch chúng Tập NXB Nông nghiệp, Hà Nội 99 trang 109 Viện Bảo vệ thực vật (2000) Phương pháp nghiên cứu bảo vệ thực vậtPhương pháp điều tra, đánh giá sâu, bệnh, cỏ dại, chuột hại trồng cạn Tập III NXB Nông nghiệp, Hà Nội 80 trang 110 Bộ Nông nghiệp PTNT (2018) Tiêu chuẩn Việt Nam TCVN 12561:2018 Khảo nghiệm hiệu lực thuốc bảo vệ thực vật 111 Viện Bảo vệ thực vật (1976) Kết điều tra côn trùng 1967- 1968 NXB Nông thôn, Hà Nội 415 trang 112 Khattab M (2013) Isolation of Nucleopolyhedrovirus (NPV) from the Beet armyworm Spodoptera exigua (Hübner) (SpexNPV) International Journal of Environmental Science and Engineering Vol 4: 75-83 (2013) 113 Senthil Kumar C.M.; Sathiah N and Rabindra R.J (2005) Optimizing the time of harvest of Nucleopolyhedrovirus infected Spodoptera litura (Farbricius) larvae under in vivo production systems Current Science, Vol 88 No 10 16821684 141 114 Sireesha K., Kumar Ch S., Rao G.V R, Arjuna R P and Lava P.K (2010) Effect of different storage conditions on the virulence of Helicoverpa armigera nuclea polyhedrosisvirus (HaNPV) Journal of Entomology and Resources Vol 34.No 65-69 115 Goodman C.L., Mclntosh A.H., Sayed G.N.E., Grasel J.J and Stiles B (2001) Production of selected Baculoviruses in newly established Lepidopteran cell lines Journal of In Vitro Cell Development and Biology No 37 (2001) Pg 374- 379 116 Hink W F., Strauss E M and Ramoska W.A (1977) Propagation of Autographa californica nuclear polyhedrosis virus in cell culture: Method for infection cells Journal of Invertebrate Pathology No 30 185- 191 117 Phejun M Kanokwan P., Lertwerawat Y., Ketunuti U And Morakot T (2003) Production of baculovirus for biopesticide in insect cell culture Proceeding of The 13th annual meeting of the Thai society for biotechnology 2003 252- 260 118 Huda N.; Sajap A S and Lau W H (2012) Stability of Spodoptera litura nucleopolyhedrosis virus in Sodium Dodecyl Sulphate African Journal of Biotechnology Vollume 11 No 16 3877- 3881 119 Nazli H., Sajap A.S and Lau W.H (2012) Stability of Spodoptera litura nucleo polyhedrosis virus in sodium dodecyl sulphate African Journal of Biotechnology Volume 11 No 16 3877- 3881 120 Salama, M.S., A El-Salam, A.M.E., D M Mahmoud and Samah M.M.A (2017) Effect of ultra violet radiations on insecticidal activity of Spodoptera littoralis multinucleocapsid nuclear polyhedrosis virus against Spodoptera littoralis Boisd (Lepidoptera: Noctuidae) Bioscience Research Vol 14(3): 645652 121 Winardo D and Soebandrijo (2006) Effectiveness of NPV formulated with different carriers to Spodoptera litura F and Helicoverpa armigera Hubner on coton Annual Reports of Indonesian Tobacco and Fiber Crops Research Institute Page 214- 234 142 ... liệu khoa học có hệ thống khả phát triển sinh khối tế bào sâu khoang lây nhiễm virus nhân đa diện (NPV) tế bào, phục vụ sản xuất thuốc trừ sâu sinh học Vi? ??t Nam - Bổ sung dẫn liệu khoa học mức... nhân tế bào trùng vấn đề cịn mới, kết thu dừng lại bước khởi đầu hạn chế Vi? ??c thực đề tài: ? ?Phát triển sinh khối virus nhân đa diện (NPV) tế bào sâu khoang phục vụ sản xuất thuốc trừ sâu sinh học? ??được... điều kiện thích hợp phát triển sinh khối tế bào sâu khoang lây nhiễm, phát triển sinh khối NPV tế bào nuôi nhân - Thử nghiệm phát triển chế phẩm virus nhân đa diện (NPV) sâu khoang dạng bột thấm