Luận án trình bày các yếu tố nguy cơ liên quan đến ung thư đầu cổ; cơ chế bệnh phân tử của ung thư biểu mô tế bào vảy đầu và cổ; các phương pháp điều trị ung thư đầu cổ; các phương pháp điều trị ung thư đầu cổ; virus vaccine sởi trong liệu pháp virus ly giải tế bào ung thư.
BỘ GIÁO DỤC VÀ ĐÀO TẠO BỘ QUỐC PHỊNG HỌC VIỆN QN Y NGƠ THU HẰNG NGHIÊN CỨU TÁC DỤNG KHÁNG UNG THƯ ĐẦU CỔ CỦA VIRUS VACCINE SỞI PHỐI HỢP VỚI NIMOTUZUMAB TRÊN THỰC NGHIỆM LUẬN ÁN TIẾN SĨ Y HỌC HÀ NỘI 2020 \ BỘ GIÁO DỤC VÀ ĐÀO TẠO BỘ QUỐC PHỊNG HỌC VIỆN QN Y NGƠ THU HẰNG NGHIÊN CỨU TÁC DỤNG KHÁNG UNG THƯ ĐẦU CỔ CỦA VIRUS VACCINE SỞI PHỐI HỢP VỚI NIMOTUZUMAB TRÊN THỰC NGHIỆM Chun nganh: Khoa h ̀ ọc y sinh Ma sơ: ̃ ́ 9720101 LUẬN ÁN TIẾN SĨ Y HỌC CÁN BỘ HƯỚNG DẪN: GS. TS. NGUYỄN LĨNH TOÀN PGS. TS. HỒ ANH SƠN HÀ NỘI– 2020 LỜI CẢM ƠN Sau thời gian học tập tại Học viện Quân Y, được sự giúp đỡ của Nhà trường và các Phịng, Ban, Bộ mơn của Học viện, đến nay tơi đã hồn thành chương trình học tập Tơi xin gửi lời cảm ơn chân thành tới Đảng ủy Ban Giám đốc, Phịng Sau đại học, Bộ mơn Sinh lý bệnh Học viện Qn Y và Đảng ủy, Ban Giám hiệu Trường Cao đẳng Y tế Hà Đơng đã tạo mọi điều kiện thuận lợi cho tơi thực hiện và hồn thành luận án Tơi xin bày tỏ lịng kính trọng và biết ơn sâu sắc đến Giáo sư, Tiến sỹ Nguyễn Lĩnh Tồn, Phó Giáo sư, Tiến sỹ Hồ Anh Sơn, người Thầy kính mến đã hết lịng giúp đỡ, chỉ dạy, động viên, hướng dẫn và tạo mọi điều kiện thuận lợi cho tơi trong suốt q trình học tập và hồn thành luận án Tơi xin bày tỏ lịng biết ơn đến Phó Giáo sư, Tiến sỹ Cấn Văn Mão – chủ nhiệm Bộ mơn, các thầy giáo cùng tồn thể cán bộ nhân viên Bộ mơn Sinh lý bệnh, Học viên Qn Y đã ln giúp đỡ, hướng dẫn và tạo mọi điều kiện thuận lợi cho tơi trong q trình học tập, nghiên cứu để tơi hồn thành luận án Tơi xin trân trọng cảm ơn các Giáo sư, Phó Giáo sư, Tiến sỹ, các Nhà khoa học trong Hội đồng chấm luận văn đã dành thời gian để cho tơi những ý kiến q báu trong q trình hồn thiện và bảo vệ luận án Tơi vơ cùng biết ơn sự chăm sóc, động viên của Gia đình, Cha Mẹ, Chồng và hai con thân u của tơi, ln ln bên cạnh chia sẻ với tơi mọi điều trong cuộc sống. Tơi trân trọng cảm ơn sự quan tâm giúp đỡ và tình cảm q báu của bạn bè, đồng nghiệp đã dành cho tơi. Hà Nội, ngày tháng năm 2020 Ngơ Thu Hằng LỜI CAM ĐOAN Tơi xin cam đoan đây là cơng trình nghiên cứu của tơi với sự hướng dẫn khoa học của tập thể cán bộ hướng dẫn. Các kết quả nêu trong luận án là trung thực và được cơng bố một phần trong các bài báo khoa học. Luận án chưa từng được cơng bố. Nếu có điều gì sai tơi xin hồn tồn chịu trách nhiệm Hà Nội, ngày tháng năm Tác giả luận án Ngơ Thu Hằng 2020 MỤC LỤC Trang phụ bìa Lời cam đoan Mục lục Danh mục chữ viết tắt Danh mục các bảng Danh mục các hình LỜI CẢM ƠN i Phospholipase C xii DANH MỤC CÁC BẢNG xiv DANH MỤC HÌNH xv ĐẶT VẤN ĐỀ 1 CHƯƠNG 1: 4 TỔNG QUAN TÀI LIỆU 4 1.1. ĐẠI CƯƠNG VỀ UNG THƯ ĐẦU CỔ 4 1.1.1. Khái niệm ung thư đầu cổ 4 1.1.2. Tỷ lệ mắc ung thư đầu cổ 5 1.2. CÁC YẾU TỐ NGUY CƠ LIÊN QUAN ĐẾN UNG THƯ ĐẦU CỔ 5 1.2.1. Khói thuốc lá và ung thư 6 1.2.2. Rượu liên quan đến ung thư 7 1.2.3. HPV và ung thư biểu mô tế bào vảy họng miệng 9 1.2.4. EBV và ung thư biểu mô họng mũi 11 1.3. CƠ CHẾ BỆNH PHÂN TỬ CỦA UNG THƯ BIỂU MÔ TẾ BÀO VẢY ĐẦU VÀ CỔ 11 1.3.1. Đột biến gen liên quan đến sự tăng sinh tế bào 12 1.3.1.1. Đột biến gen P53 12 1.3.1.2. Đột biến gen mã hóa Retinoblastoma 13 1.3.1.3. Đột biến gen mã hóa CDKN2A 14 1.3.1.4. Đột biến gen CCND1 15 1.3.2. Đột biến gen Notch/p63 15 1.3.3.1. Vai trị của thụ thể yếu tố tăng trưởng biểu bì 16 Thụ thể yếu tố tăng trưởng biểu bì (Epidermal growth factor receptor EGFR) là thành viên của họ thụ thể ErbB (Erythroblastic B), bao gồm 4 thành viên: EGFR (ErbB1), HER2/neu (ErbB2), HER3 (ErbB3) và HER4 (ErbB4). Protein EGFR gồm 1210 acid amin có trọng lượng phân tử 170 kiloDaltons (kDa), có cấu trúc gồm 3 vùng: vùng ngoại bào chứa miền tương tác với yếu tố tăng trưởng, vùng xuyên màng và vùng nội bào chứa miền kinase có thể phosphoryl hóa tyrosine của protein (nên được gọi là thụ thể tyrosine kinase). 16 1.3.3.2. Vai trò của RAS 19 1.3.3.3. Vai trò của PIK3CA/PTEN 20 1.3.4. Vai trị của tín hiệu TGFβ/SMAD đối với sự kết dính và xâm lấn 21 1.4. CÁC PHƯƠNG PHÁP ĐIỀU TRỊ UNG THƯ ĐẦU CỔ 21 1.4.1. Các phương pháp điều trị kinh điển 21 1.4.2. Các liệu pháp điều trị đích trong ung thư tế bào vảy vùng đầu và cổ 23 1.4.2.1. Liệu pháp hướng đích thụ thể yếu tố phát triển biểu bì 24 1.4.2.2. Liệu pháp chất ức chế tyrosine kinase 26 1.4.2.3. Liệu pháp hướng đích thụ thể tăng sinh biểu mơ mạch máu 26 Thụ thể tăng sinh biểu mơ mạch máu (VEGF) là protein tín hiệu được tạo ra bởi các tế bào mà có vai trị kích thích tăng sinh mạch . Sự thiếu oxy mơ là một yếu tố mà tạo ra biểu hiện q mức VEGF. Vấn đề này xảy ra ở vùng hoại tử và thiếu oxy của tổ chức khối u. Do đó, biểu hiện q mức VEGF xuất hiện phổ biến ở HNSCC, sự tăng biểu hiện VEGF sẽ kích thích tăng trưởng khối u bằng cách thay đổi mật độ vi mạch trong vùng lân cận của các tế bào, sự di cư tế bào và sự hình thành di căn xa của tế bào ung thư . Có một bằng chứng ngày càng rõ là giảm sự nhạy cảm với bức xạ và sự tiến triển của HNSCC có liên quan đến sự kích thích sự hình thành mạch máu bởi các tế bào khối u đã trải qua xạ trị . 26 1.4.2.4. Liệu pháp hướng đích con đường tín hiệu PI3K/AKT/mTOR 27 1.4.2.5. Liệu pháp hướng đích thụ thể chết tế bào theo chương trình 27 1.5. KHÁNG THỂ ĐƠN DỊNG NIMOTUZUMAB TRONG LIỆU PHÁP ĐIỀU TRỊ ĐÍCH UNG THƯ ĐẦU CỔ 28 1.5.1. Khái niệm kháng thể đơn dòng 28 1.5.2. Cơ chế tác dụng của Nimotuzumab trong điều trị ung thư đầu cổ . 28 1.6. VIRUS VACCINE SỞI TRONG LIỆU PHÁP VIRUS LY GIẢI TẾ BÀO UNG THƯ 31 1.6.1. Virus sởi 31 1.6.1.1. Virus sởi hoang dại 31 1.6.1.2. Chủng virus vaccine sởi giảm độc lực 33 1.6.2. Thụ thể của virus sởi 34 1.6.3. Hiệu lực vaccine sởi giảm độc lực và tính an tồn 35 1.6.4. Virus vaccine sởi và các phản ứng miễn dịch chống ung thư 36 1.6.4.1. Tế bào ung thư đầu cổ có các thụ cảm thể đặc hiệu với virus vaccine sởi 36 1.6.4.2. MeV ly giải tế bào ung thư thông qua protease đặc hiệu 37 1.6.4.3. Sự khiếm khuyết trong phản ứng Interferon 37 1.6.5. Các cơ chế gây ly giải tế bào ung thư 38 1.6.5.1. MeV trực tiếp giết chết tế bào u qua hình thành hợp bào 38 1.6.5.2. Ly giải tế bào u qua trung gian kích thích miễn dịch đặc hiệu kháng u 39 1.6.5.3. Nhiễm MeV kích hoạt tế bào đi gai 39 1.6.5.4. Ảnh hưởng của MeV đối với các loại tế bào miễn dịch khác 40 1.6.6. Các thử nghiệm lâm sàng 41 1.7. SỬ DỤNG PHỐI HỢP VIRUS VACCINE SỞI VÀ KHÁNG THỂ ĐƠN DÒNG NIMOTUZUMAB TRONG ĐIỀU TRỊ UNG THƯ 43 CHƯƠNG 2: 44 ĐỐI TƯỢNG VÀ PHƯƠNG PHÁP NGHIÊN CỨU 44 2.1. ĐỐI TƯỢNG VÀ VẬT LIỆU NGHIÊN CỨU 44 2.1.1. Động vật 44 2.1.2. Vaccine sởi 44 2.1.3. Các dòng tế bào 44 2.1.4. Kháng thể đơn dòng Nimotuzumab 45 2.1.5. Trang thiết bị sử dụng cho nghiên cứu 45 2.1.5.1. Thiết bị sử dụng 45 2.1.5.2. Các dụng cụ thí nghiệm tiêu hao 46 2.1.5.3. Hóa chất 46 Môi trường nuôi cấy tế bào Vero M199, môi trường nuôi cấy tế bào ung thư EMEM mã No.302004 được cung cấp bởi công ty ATCC được bổ sung thêm 10% huyết thanh bê (FBS fetal bovine serum) và kháng sinh (100 U/ml penicillin và 100 µg/ml streptomycin). 46 2.2. PHƯƠNG PHÁP NGHIÊN CỨU 46 2.2.1. Đánh giá khả năng ức chế tế bào và chết theo chương trình của virus vaccine sởi phối hợp Nimotuzumab trên dịng tế bào ung thư đầu cổ người Hep2 47 2.2.1.1. Các chỉ tiêu đánh giá 47 2.2.1.2. Các kỹ thuật thực hiện 47 2.2.2. Đánh giá tác dụng kháng ung thư của MeV phối hợp Nimotuzumab trên mơ hình chuột thiếu hụt miễn dịch mang khối u đầu cổ người Hep2 64 2.2.2.1. Chỉ tiêu đánh giá 64 2.2.2.2. Các kỹ thuật thực hiện 65 ... lý? ?luận? ?và? ?thực? ?tiễn trên. Chúng tôi? ?tiến? ?hành đề tài ? ?Nghiên? ?cứu? ?tác? ?dụng? ?kháng? ?ung? ?thư? ?đầu cổ ? ?của? ?virus? ?vaccine? ?sởi? ?phối? ?hợp? ?với? ?Nimotuzumab? ?trên? ?thực? ?nghiệm? ?? nhằm 2 mục tiêu: Đánh giá? ?tác? ?dụng? ?kháng? ?ung? ?thư? ?của? ?virus? ?vaccine? ?sởi? ?phối? ?hợp? ?với. .. HỌC VIỆN QN? ?Y NGƠ THU HẰNG NGHIÊN CỨU TÁC DỤNG KHÁNG? ?UNG? ?THƯ ĐẦU CỔ CỦA? ?VIRUS? ?VACCINE? ?SỞI PHỐI HỢP VỚI? ?NIMOTUZUMAB? ?TRÊN THỰC NGHIỆM Chun nganh: Khoa h ̀ ọc? ?y? ?sinh Ma sơ: ̃ ́ 9720101 LUẬN? ?ÁN? ?TIẾN SĨ? ?Y? ?HỌC... chưa có bất kỳ ? ?nghiên? ?cứu? ? nào trong và ngồi nước đánh giá hiệu quả kháng? ?ung? ?thư? ?của? ?virus? ?vaccine? ?sởi? ?phối? ?hợp? ?với? ?Nimotuzumab. Chính vì v? ?y, ? ?nghiên? ?cứu? ?sử ? ?dụng? ?virus? ?vaccine? ?sởi? ?phối? ?hợp? ?với kháng? ?thể