Luận văn sư phạm Nghiên cứu một số đặc điểm sinh lý, sinh hóa của đậu xanh trong giai đoạn nảy mầm

Trường ĐHSP Hà Nội Khóa luận tốt nghiệp TRƯỜNG ĐẠI HỌC SƯ PHẠM HÀ NỘI KHOA HÓA HỌC ************************** PHẠM THANH BÌNH NGHIÊN CỨU THÀNH PHẦN HĨA HỌC PHÂN ĐOẠN CHIẾT HEXAN CỦA CÂY MẦN TƯỚI (EUPATOLRIUM FORTUNEI) Trường ĐHSP Hà Nội Khóa luận tốt nghiệp KHĨA LUẬN TỐT NGHIỆP ĐẠI HỌC Chun ngành: Hóa hữu Giảng viên hướng dẫn khoa học: Ts Nguyễn Tiến Đạt Hà Nội, - 2011 MỞ ĐẦU Xã hội ngày phát triển, kinh tế ngày phát triển, cải vật chất làm nhiều bên cạnh mặt tốt làm cho mơi trường ngày bị ô nhiễm, tài nguyên cạn kiệt, sinh nhiều bệnh tật Việc tìm kiếm sử dụng hợp lí, có hiệu nguồn tài ngun thiên nhiên yêu cầu trở nên cấp bách Việt Nam nước nằm khu vực nhiệt đới có khí hậu nóng ẩm, độ ẩm cao 80%, lượng mưa lớn, nhiệt độ trung bình 15-270C Điều kiện khí Trường ĐHSP Hà Nội Khóa luận tốt nghiệp hậu thuận lợi khiến Việt Nam có hệ thực vật phong phú đa dạng với 10585 loài, thuộc 2342 chi, 337 họ (trong có 24 họ có từ 100 lồi trở lên) Thực vật có vai trò quan trọng: Cung cấp thức ăn cho người, động vật, điều tiết khí hậu, cung cấp nguyên vật liệu cho ngành xây dựng, sản xuất giấy…và đặc biệt nhiều loại có tác dụng trị bệnh tốt dùng làm thuốc Thực tế cho thấy nguồn tài nguyên thực vật phong phú kể có tới khoảng 4000 loài nhân dân sử dụng làm thuốc Các thuốc có nguồn gốc thảo dược thể nhiều ưu điểm vượt trội điều trị bệnh là: độc tính, tác dụng phụ ảnh hưởng đến mơi sinh Vì nhà khoa học ngồi nước đã, tích cực nghiên cứu, tìm hiểu thành phần hóa học dược lí loại thuốc tìm thuốc giúp điều trị bệnh hiểm nghèo cho người, cải thiện chất lượng sống kéo dài tuổi thọ Ngày nay, khoa học kĩ thuật ngày phát triển mạnh mẽ, việc nghiên cứu ngày gặp nhiều thuận lợi Lá, Mần tưới từ lâu nhân dân sử dụng nhiều thuốc giải nhiệt, giải cảm, sát trùng, lợi tiểu, kích thích tiêu hóa, mụn nhọt, sang lở, kinh nguyệt khơng đều, chứng sản hậu (chóng mặt, sốt, ho, mệt mỏi, ăn, suy nhược, đau bụng, ứ huyết, rong huyết, bế kinh, hãn thương…) Ngồi phụ nữ dùng để gội đầu cho tóc, dùng để trừ mạt gà, bọ chó Tuy nhiên việc nghiên cứu lá, thân Mần tưới hạn chế định Vì tơi chọn đề tài: “ Nghiên cứu thành phần hóa học phân đoạn chiết hexane Mần tưới” nhằm góp phần tìm kiếm hợp chất thiên nhiên, tạo sở cho nghiên cứu tiếp theo, từ tìm ứng dụng hợp lí cho Mần tưới, góp phần phát triển y học cổ truyền dân tộc Nội dung khóa luận gồm: Trường ĐHSP Hà Nội Khóa luận tốt nghiệp 1.Nghiên cứu tổng quan thành phần hóa học hoạt tính sinh học có Mần tưới Phân lập số hợp chất từ Mần tưới phương pháp chiết, sắc kí Xác định cấu trúc hóa học hợp chất phân lập phương pháp phổ Chương : TỔNG QUAN 1.1 Sơ lược họ cúc Họ cúc (Asteraceae) bao gồm chủ yếu thân cỏ, bụi số thân gỗ với 1100 giống gần 20.000 loài Lá họ mọc đối, so le phổ biến kiểu mọc vòng Lá đơn hình lơng chim kép hình chân vịt khơng có kèm Trường ĐHSP Hà Nội Khóa luận tốt nghiệp Họ cúc chia làm ba lớn: - Heliantheceae - Lactuceae - Senecionceae Chi Eupatorium có khoảng 400 lồi giới, phân bố tập trung vùng nhiệt đới châu Mỹ Ở Việt Nam có khoảng 10 lồi Có 10 lồi chi [2]: * Eupatorium cannabinum: Yên bạch gai, Hoa nốt, Trạch lan gai mèo, Thạch lam, Bạch sơn * Eupatorium capillifolium: Yên bạch kim * Eupatorium chinense: Tổ mạ, Trạch lan Trung Quốc, Yên bạch Trung Quốc * Eupatorium coelestinum: Mỹ sơn, cỏ lào tím * Eupatorium fortunei: Mần tưới, lan, hương thảo * Eupatorium heterophyllum: Thạch lam, Trạch lan khác * Eupatorium japonicum: Sơn lan, Trạch lan, Yên bạch nhật * Eupatorium lindleyanum: Bội lan, Yên bạch, lindley * Eupatorium odoratum: Cỏ lào, Chó đẻ, Bớp bớp, Yên bạch * Eupatorium triplinerve: Bả dột, Mần tưới, cà dốt, ba dót 1.2 Sơ lược mần tưới 1.2.1 Giới thiệu chung Tên khoa học : Eupatorium fortunei Turcz Tên đồng nghĩa : Eupatorium staechadosmum Hance Phân lớp thực vật : Ngành : Magnoliophyta Lớp Magnoliopsida Trường ĐHSP Hà Nội Khóa luận tốt nghiệp Bộ Asterales Họ Asteraceae Chi Eupatorium Tên khác : Trạch lan, Lan thảo, Co phất phử (Thái), Eupatoire (Pháp) 1.2.2 Hình thái thực vật phân bố [1],[4],[5] Mần tưới: Mơ tả: Cây thuộc thảo, cao trung bình 50cm đến 1m Thân trụ tròn, thân cành nhẵn, cành phân nhiều nhánh Lá mọc đối thn, hình dải rộng, dài 7-11 cm, rộng 1,2-2,5 cm, nhọn đầu, thon hẹp gốc, mép có cưa nhỏ, gân hình lơng chim, gân giữa, có nhiều gân phụ phân nhánh vò có mùi thơm đặc biệt Tồn thân: cành, cây, cuống có màu tím, bắc nhỏ, tù tròn; cụm hoa ngù kép, hoa tím hồng, đơi có màu trắng hồng, màu đầu cành hay kẽ lá, tràng hoa loe dần phía đầu, mào lơng dài 3cm, bao phấn khơng có tai gốc Quả bế, màu đen, có năm cánh lồi Mùa hoa vào tháng 711, mùa vào khoảng tháng 9-12 Phân bố: Cây mọc hoang nhiều nơi, trồng rải rác số vườn nông thôn tỉnh Miền Bắc Ở Trung Quốc Mần tưới mọc nhiều tỉnh: Giang Tô, Tô Châu, Nam Kinh, Phúc Kiến Trường ĐHSP Hà Nội Khóa luận tốt nghiệp Hình 1.1: Cây Mần tưới Eupatorium fortunei Bộ phận sử dụng: Toàn thân, hay dùng cành lá, chủ yếu dùng tươi tốt dùng khơ Có thể thu tồn hoa, loại bỏ tạp chất cắt 3-4 cm phơi khô bóng râm sấy 45-500C đến khơ dùng dần Cách trồng: + Cây mọc hoang rộng khắp nơi cánh hoa bay mang theo hạt + Cách trồng đơn giản, cắt đoạn dài khoảng 20-30cm cắm xuống đất, để 2-3 đốt chìm đất, cành nghiêng Sau tuần bén rễ Trường ĐHSP Hà Nội Khóa luận tốt nghiệp 1.2.3 Công dụng y học dân tộc - Công năng: Vị cay, tính bình, ấm, vào hai kinh: can, tì tác dụng hoạt huyết, phá ứ huyết, thơng kinh, lợi tiểu, sát trùng - Công dụng: + Chữa sốt, chữa mụn nhọt lở ngứa + Nhân dân ta thường dùng Mần tưới non ăn sống, ăn gỏi loại rau thơm Cũng dùng nấu canh ăn cho mát, giải cảm, giải nhiệt Lá dùng hãm nước uống lợi tiêu hóa, kích thích ăn ngon miệng làm rau thơm + Người ta dùng Mần tưới để trừ ho gà, mạt gà, rệp, bọ chó Đặt cành Mần tưới vào hũ đựng đậu xanh, đậu đen, cau khô để trừ mọt sâu, hái cành Mần tưới cho vào ổ gà, ổ chó sau làm vệ sinh trừ bọ gà, bọ chó có ổ, vài ngày lại làm vệ sinh thay lần Giường có rệp sau giũ diệt rệp, rải cành Mần tưới vài lần diệt hết rệp + Người ta dùng Mần tưới giã nhỏ cho vào túi vải xát trực tiếp lên tay hay chân để xoa muỗi dĩn (con mát) có hiệu tốt vòng hai ba Phụ nữ nơng thơn dùng Mần tưới nấu nước gội đầu cho tóc [1],[5] -Bài thuốc [2]: + Chữa máu hôi không sau đẻ: Mần tưới (cả gốc lá), Ngải tím, Quế chi, Tán thành bột, lấy chừng 80g, chia làm lần uống với rượu + Chữa phù thũng sau đẻ: Mần tưới, Phòng kỉ, tán nhỏ, lần uống 8g với giấm làm thang + Chữa mụn nhọt, vết thương ứ huyết: Mần tưới, Huyết giác 20g Sắc uống Ngồi dùng Mần tưới giã nhỏ đắp lên vết thương Trường ĐHSP Hà Nội Khóa luận tốt nghiệp + Chữa sốt, tiêu hóa kém: Mần tưới khơ 20g, sắc với 600ml 200ml, chia làm lần uống 15 phút trước hai bữa ăn + Chữa bệnh phụ nữ (thiếu máu, suy nhược, đau bụng kinh, kinh nguyệt không đều): Mần tưới phối hợp với củ Gấu, Ích mẫu, Ngải cứu, Nhọ nồi (mỗi thứ 120g) phơi khô, tán nhỏ, rây thành bột min, trộn với bột gạo đường kính (nấu thành sirơ), làm thành viên to hạt ngô Ngày uống hai lần, lần 25-30 viên + Chữa rong huyết: Mần tưới, Ké hoa vàng, Chỉ thiên, Mã đề loại 20g thái nhỏ vàng sắc với 400ml lại 100ml, uống làm hai lần ngày, dùng 3-5 ngày + Chữa bệnh phụ nữ sau đẻ (bị sốt, ho, ăn, mệt mỏi): Mần tưới 20g, Mạch môn 20g, Ngải cứu 10g, Nhân trần 6g, Rẻ quạt 4g, vỏ bưởi đào khô 4g, sắc uống ngày, dùng 10 ngày liền + Chữa bệnh máu sau đẻ: Đan sâm, Mần tưới thứ 9gam, Xuyên khung 12gam, Kinh giới 6gam Sắc uống + Đẻ xong huyết hư: Mần tưới 9gam, Ngải (sao) 6gam, đường đỏ 30gam Sắc đặc, uống hết tuần + Đau bụng sau đẻ: Diên hồ sách, Mần tưới thứ 9gam Sắc thêm rượu vào uống + Trúng phong sau đẻ: Kinh giới, Mần tưới thứ 9gam, Xuyên khung 4,5gam, Đẳng sâm 18gam Sắc uống 1.3 Thành phần hóa học hoạt tính sinh học có Mần tưới 1.3.1 Vài nét hợp chất Phenolic 1.3.1.1 Giới thiệu chung Phenolic nhóm hợp chất mà chứa vòng thơm bị nhóm hydroxyl, nhóm tự hay liên kết với nhóm chức khác như: este, ester glycoside Các hợp chất phenol có màu sắc tự Trường ĐHSP Hà Nội Khóa luận tốt nghiệp nhiên nên lợi dụng màu sắc chúng để theo dõi trình chiết suất phân lập Có hai hướng thơm hóa để sinh phenolic thực vật: - Hướng phổ biến qua Shikimate (axit Shikimic), từ monosaccarit tạo thành aminoaxit (Phenyl amin Tyrosime), sau loại nhóm amin cho axit Cinnamic dẫn xuất chúng gồm: Axit benzoic, Acetophenone, Lignan, Lignin Caumarin - Con đường thứ hai từ axetat dẫn đến tạo thành Poly-βketoester Polyketit dài phản ứng đóng vòng (phản ứng ngưng tụ Claisen Andol) Các sản phẩm thường polycyclic gồm: Choromen, Isocaumarin, Orcinol, Depside, Depsidoen, Xanthone, Quinone Cấu trúc đa dạng hợp chất phenol có trình sinh tổng hợp tăng dần tần số kết hợp hai đường Shikimate acetate hợp chất tạo thành hỗn hợp Khả tham gia thành tố thứ ba hồn tồn với tần số thấp Sự kết hợp tạo thành tố tạo hai đường Shikimate Mevalonate, ví dụ số loại Quinone khung Furano Polycoumarin 1.3.1.2 Một vài đặc điểm hợp chất Phenol Một vài hợp chất Phenol dễ dàng nhận biết mắt thường Anthocyanin từ hoa, hợp chất khác nhận biết ánh sáng đèn UV phản ứng màu đặc trưng Các phản ứng màu sử dụng q trình sắc kí, phân lập hợp chất Phenolic Tuy nhiên, việc sử dụng phản ứng màu dịch chiết thường khó phát khơng nhạy tương tác yếu tố gây nhiễu kết thực nghiệm Các hóa chất thường sử dụng phát chất phenol là: Clorit sắt, Vanllinin, Phosphomolybdate-phosphotungstate Đối với vài 10 Trường ĐHSP Hà Nội Khóa luận tốt nghiệp SRB [9] 4tecpenoid có tên rel-(1R,2S,3R,4R,6S)-p-menthane-1,2,3,6tetrol, rel-(1R,2R,3R,4S,6S)-p-menthane-1,2,3,6,tetrol, 9-hydroxythymol 3O-angelate (3β,20R)-20-hydroxylanost-25-en-3-yl-palminate, chúng có hoạt tính xitotoxic chống lại dòng tế bào HL-60, SMMC-7721 LO2 [10] Các loài thực vật chi Eupatorium thể nhiều hoạt tính sinh học thú vị, đặc biệt dẫn xuất thymol có khả kháng loại vi khuẩn Việc nghiên cứu thành phần hóa học lồi chi nên nhiều hạn chế, phần lớn tập trung vào loài Eupatorium staechadosmum Hance Việc tiếp tục sâu nghiên cứu thành phần hóa học hoạt tính sinh học chất có lồi thuộc chi Eupatorium có tác dụng làm thuốc vấn đề thú vị cần nhà khoa học quan tâm Chương : ĐỐI TƯỢNG VÀ PHƯƠNG PHÁP NGHIÊN CỨU 54 Trường ĐHSP Hà Nội Khóa luận tốt nghiệp 2.1 Mẫu thực vật Cây Mần tưới thu hái vào tháng 06 năm 2010 Hòa Bình Mẫu TS Trần Huy Thái, Viện Sinh thái Tài nguyên sinh vật, Viện Khoa học Công nghệ Việt Nam giám định Mẫu tiêu giữ Viện Hóa sinh biển, Viện Khoa học Cơng nghệ Việt Nam 2.2 Phương pháp phân lập hợp chất 2.2.1 Phương pháp chiết 2.2.1.1 Đặc điểm chung 2.2.1.2 Cơ sở trình chiết Quá trình chiết dựa định luật phân bố Nerst: KA = CA/CB Với KA số phân bố CA, CB: nồng độ chất hòa tan hai pha lỏng A, B khơng tan lẫn 2.2.1.3 Quá trình chiết thực vật 2.2.1.3.1 Hợp chất tự nhiên 2.2.1.3.2 Chọn dung môi chiết 2.2.1.3.3 Q trình chiết 2.2.2 Các phương pháp sắc kí 2.2.2.1 Đặc điểm chung phương pháp sắc kí 2.2.2 Các phương pháp sắc kí 2.2.2.1 Đặc điểm chung phương pháp sắc kí n = n∞bC/(1+bC) Với: • n: lượng chất bị hấp phụ lên pha tĩnh lúc đạt cân • n∞: lượng cực đại chất bị hấp phụ lên chất hấp phụ • b: Hằng số • C: nồng độ dung dịch 2.2.2.3 Phân loại phương pháp sắc kí 2.2.2.3.1 Sắc kí lỏng 2.2.2.3.2 Sắc kí khí 2.3 Các phương pháp xác định cấu trúc hợp chất hữu 2.3.1 Đo điểm chảy 2.3.2 Phổ hồng ngoại (IR) 2.3.3 Phổ tử ngoại (UV – Vis) 2.3.4 Phổ khối lượng (MS) 2.3.5 Phổ cộng từ hạt nhân (NMR) 55 Trường ĐHSP Hà Nội Khóa luận tốt nghiệp Chương : THỰC NGHIỆM 3.1 Phương pháp tách chiết Sắc kí lớp mỏng (TLC) thực bảng mỏng tráng sẵn DCAlufolien 60 F254 RP18 F254 (Merck-Đức) Các vết chất phát đèn tử ngoại hai bước sóng 254nm 368nm dùng thuốc thử dung dịch H2SO4 10% phun lên mỏng sấy nhiệt độ cao xuất màu Sắc kí cột (CC) tiến hành với chất hấp phụ pha thường (Silicagel 240-430 mesh, Merck) đảo pha (ODS-60-14/63, Fujisilisa-Nhật Bản) 3.2 Các phương pháp phổ Phổ khối lượng phun mù điện tử (ESI-MS) đo máy AGILENT 1200 LC-MSD Trap Viện Hóa học, Viện Khoa học Cơng nghệ Việt Nam Phổ cộng hưởng từ hạt nhân (NMR) đo máy Bruker AM500 FT-NMR Spectrometer, Viện Hóa học, Viện Khoa học Công nghệ Việt Nam 3.3 Phân lập chất Phần mặt đất Mần tưới sau thu hái phơi khơ bóng râm, xay nhỏ (3,5g) ngâm chiết với methanol (101x3 lần) thiết bị siêu âm Ultrasonic 2010 nhiệt độ 40-500C (3x20 phút) Dịch chiết sau cô đặc máy cất quay với áp suất giảm thu 300g cặn chiết methanol Cặn chiết hòa tan với nước chiết phân đoạn với n-hexan ethylaxetat thu cặn chiết n-hexan (60g) ethylaxetat (30g) tương ứng Tiến hành sắc kí cột silicagel cặn chiết nhexan rửa giải hệ dung môi gradient n-hexan-acetone (100:1 v/v→100% acetone) thu năm phân đoạn ký hiệu F1→F5 Tiến hành phân lập phân đoạn F3 sắc kí cột với chất hấp phụ silicagel pha thường, hệ dung môi rửa giải n-hexan-etyl axetat 4:1 thu hợp chất (40mg) Hợp chất (7,0 mg) tách từ phân đoạn F5 sắc ký cột silicagel pha thường rửa giải n-hexan-acetone 2:1 tinh chế lại cột pha đảo RP18 với hệ dung môi metanol-nước 10:1 Hợp chất 1: 9-angeloyloxy-8,10-dihydroxythymol (1) 56 Trường ĐHSP Hà Nội Khóa luận tốt nghiệp Chất dầu không màu Phổ khối lượng phun mù điện tử ESI-MS xuất pic [M + Na]+ m/z 302.9 cho phép xác định có cơng thức phân tử C15H20O5 (M=280) Trên phổ 1H-NMR (500 MHz, CDCl3)  (pp): 6,69 (1H, d, 1,0, H-2); 6,94 (1H, d, 8,5, H-5); 6,64 (1H, dd, 8,5, 1,0, H-6); 2,25 (3H, br s, H-7); 4,49 (1H, d, 11,0, H-9); 4,56 (1H, d, 11,0, H-9); 3,88 (1H, d, 12,0, H-10); 3,83 (1H, d, 12,0, H-10); 6,12 (1H, qq, 1,5, 7,0, H-3’); 1,92 (3H, dq, 1,5, 7,0, H4’); 1,84 (3H, d, 1,5, H-5’) Phổ 13C-NMR (125 MHz, CDCl3)  (pp): 139.9 (C-1); 118.5(C-2) ; 156.5(C-3); 119.8(C-4); 126.3(C-5); 120.5(C-6); 20.9(C-7); 78.9(C-8); 67.3(C-9); 66.0(C-10); 168.7(C-1’); 140.2(C-2’); 126.9(C-3’); 15.8(C-4’); 20.4(C-5’) Hợp chất 2: 9-angeloyloxy-10-acetoxy-8-hydroxythymol (2) Chất dầu không màu Phổ ESI-MS: m/z 321.1 [M-H]-, công thức phân tử C17H22O6 (M=322) Phổ 1H-NMR (500 MHz, CDCl3)  (pp): 6,70 (1H, d, 1,0, H-2); 6,92 (1H, d, 8,0, H-5); 6,65 (1H, dd, 8,0, 1,0, H-6); 2,27 (3H, br s, H-7); 4,46 (2H, d, H-9); 4,51 (1H, d, 12,0, H-10); 4,54 (1H, d, 12,0, H-10); 6,13 (1H, qq, 1,5, 7,0, H-3’); 1,93 (3H, dq, 1,5, 7,0, H-4’); 1,85 (3H, d, 1,5, H-5’); 2,07 (3H, s, H-2”) Phổ 13C-NMR (125 MHz, CDCl3)  (pp): 140.0 (C-1); 118.7 (C-2); 156.6 (C-3); 118.9(C-4) ; 126.3(C-5); 120.5(C-6); 20.9(C-7); 78.5(C-8); 67.6(C-9); 67.3(C-10); 168.1(C-1’); 140.2(C-2’); 126.9(C-3’); 15.8(C-4’); 20.4(C-5’); 171.2(C-1”); 20.7(C-2”) Chương : KẾT QUẢ VÀ THẢO LUẬN Từ dịch chiết clorofoc Mần tưới, hợp chất phân lập Cấu trúc hợp chất xác định phương pháp phổ bao gồm phổ khối ESI-MS phổ cộng hưởng từ hạt nhân 1D NMR 57 Trường ĐHSP Hà Nội Khóa luận tốt nghiệp Hợp chất 1: 9-angeloyloxy-8,10-dihydroxythymol Hợp chất phân lập dạng chất lỏng dạng dầu, không màu cho thấy dẫn xuất thymol Trên phổ 1H-NMR (Hình 4.1.2) có tín hiệu đặc trưng cho hệ proton ABX vòng thơm 6,69 (1H, d, J = 1,0 Hz, H-2), 6,94 (1H, d, J = 8,5 Hz, H-5) 6,64 (1H, dd, J = 8,5, 1,0 Hz, H-6); ba tín hiệu nhóm CH3 2,25 (3H, br s, H-7), 1,92 (3H, dq, J = 1,5, 7,0 Hz, H-4'), 1,84 (3H, d, J = 1,5 Hz, H-5') Phổ 13 C-NMR DEPT hợp chất cho thấy xuất 15 vạch tín hiệu gồm nhóm CH3, nhóm CH2, nhóm CH nhóm cac-bon bậc bốn (Hình 4.1.3-4.1.4) Tín hiệu nhóm CH2 67,3 66,0 nhóm CH 78,9 chứng tỏ nhóm có gắn với oxi Ngồi ra, tín hiệu đặc trưng nhóm angeloyl 168,7, 126,9, 140,2, 15,8 20,4 xác định (Bảng 1) So sánh kiện với tài liệu tham khảo cho thấy số liệu phổ hoàn toàn trùng khớp với hợp chất 9-angeloyloxy-8,10-dihydroxythymol cơng bố trước [11][12] Ngồi phổ khối lượng ESI-MS xuất pic ion m/z 302.9 [M + Na]+ hồn tồn phù hợp với cơng thức phân tử C15H20O5 (M=280) Từ kết hợp chất khẳng định 9-angeloyloxy8,10-dihydroxythymol 58 Trường ĐHSP Hà Nội Khóa luận tốt nghiệp Hình 4.1 Cấu trúc hóa học Hình 4.1.1 Phổ ESI-MS hợp chất 59 Trường ĐHSP Hà Nội Khóa luận tốt nghiệp Hình 4.1.2 Phổ 1H-NMR hợp chất Hình 4.1.3 Phổ 13C-NMR hợp chất 60 Trường ĐHSP Hà Nội Khóa luận tốt nghiệp Hình 4.1.4 Phổ DEPT hợp chất Hợp chất 2: 9-angeloyloxy-10-acetoxy-8-hydroxythymol Hợp chất thu dạng chất lỏng dạng dầu, không màu dẫn xuất thymol Số liệu phổ 1H, 13C-NMR DEPT tương đồng với số liệu chất ngoại trừ xuất thêm tín hiệu nhóm axetat C 171,2 20,7 H 2,07 (3H, br s) (Hình 4.2.1- 4.2.2) Điều khẳng định lại phổ khối lượng phun mù điện tử với pic [M-H]- m/z 321,1 tương ứng với công thức phân tử C17H22O6 Độ dịch chuyển hóa học C-10 hợp chất dịch chuyển 1,3 ppm phía trường thấp so với hợp chất chứng tỏ nhóm axetat đính vào vị trí C-10 Như hợp chất xác định 9-angeloyloxy-10-acetoxy-8hydroxythymol, hợp chất biết từ mần tưới [13] 61 Trường ĐHSP Hà Nội Khóa luận tốt nghiệp Hình 4.2 Cấu trúc hóa học Hình 4.2.1 Phổ ESI-MS hợp chất 62 Trường ĐHSP Hà Nội Khóa luận tốt nghiệp Hình 4.2.2 Phổ 1H-NMR hợp chất Hình 4.2.3 Phổ 13C-NMR hợp chất 63 Trường ĐHSP Hà Nội Khóa luận tốt nghiệp Hình 4.2.4 Phổ DEPT hợp chất Bảng Số liệu phổ 1H-NMR (500 MHz, CDCl3) hợp chất TT 10 3' 4' 5' H (J=Hz ) H (J=Hz ) 6,69 (1H, d, 1,0) 6,94 (1H, d, 8,5) 6,64 (1H, dd, 8,5, 1,0) 2,25 (3H, br s) 4,49 (1H, d, 11,0) 4,56 (1H, d, 11,0) 3,88 (1H, d, 12,0) 3,83 (1H, d, 12,0) 6,12 (1H, qq, 1,5, 7,0) 6,70 (1H, d, 1,0) 6,92 (1H, d, 8,0) 6,65 (1H, dd, 8,0, 1,0) 2,27 (3H, br s) 4,46 (2H, d) TLTK * H (J=Hz ) 6,72 (br,s) 6,94 (d,7,9) 6,67 (br, d, 7,9) 2,29 (s) 4,46 (d, 12,0) 4,54 (d, 12,0) 4,51 (1H, d, 12,0) 3,90 (d, 12,0) 4,54 (1H, d, 12,0) 3,81 (d, 12,0) 6,13 (1H, qq, 1,5, 7,0) 1,62 (m) 1,51 (m) 1,92 (3H, dq, 1,5, 7,0) 1,93 (3H, dq, 1,5, 7,0) 0,84 (m) 1,84 (3H, d, 1,5) 1,85 (3H, d, 1,5) 1,11 (d, 7,7) 64 Trường ĐHSP Hà Nội Khóa luận tốt nghiệp 2'' 2,07 (3H, s) * Số liệu theo tài liệu tham khảo Bảng Số liệu phổ 13C-NMR (125 MHz, CDCl3) hợp chất TT C TLTK * C C 139.9 140.0 118.5 118.7 156.5 156.6 119.8 118.9 126.3 126.3 120.5 120.5 20.9 20.9 78.9 78.5 67.3 67.6 10 66.0 67.3 168.7 168.1 1 140.2 140.2 2 126.9 126.9 3 15.8 15.8 4 20.4 20.4 5 1'' 171.2 2'' 20.7 * Số liệu theo tài liệu tham khảo [13] 140.1 118.6 156.6 118.9 126.3 120.5 20.9 78.5 67.3 67.6 168.1 126.9 140.2 15.8 20.4 171.2 20.7 KẾT LUẬN Cây Mần tưới từ lâu sử dụng y học cổ truyền chưa nghiên cứu hóa học Việt Nam Luận văn bước đầu nghiên cứu thành phần hóa học phần Mần tưới Từ dịch chiết hexan mần tưới, hai hợp chất dẫn xuất thymol phân lập phương pháp sắc ký Bằng phương pháp phổ bao gồm phổ khối ESI-MS phổ cộng hưởng từ hạt nhân chiều cấu trúc hợp chất 65 Trường ĐHSP Hà Nội Khóa luận tốt nghiệp xác định 9-angeloyloxy-8,10-dihydroxythymol (1) 9-angeloyloxy-10acetoxy-8-hydroxythymol (2) Tiếng Việt: TÀI LIỆU THAM KHẢO 66 Trường ĐHSP Hà Nội Khóa luận tốt nghiệp [1] Đỗ Huy Bích, Đặng Quang Chung cộng sự, Cây thuốc động vật làm thuốc Việt Nam, Nhà xuất Khoa học Kĩ thuật, 2004, II, trang 246-247 [2] Ngô Tĩnh, Trần Vũ Phi, Tồn phương thuốc bí truyền dân gian Trung Hoa, Nhà xuất Đà Nẵng, công ty phát hành sách Hà Nội hợp tác xuất năm 1999 (Dịch theo nguyên bản: Nhà xuất Khoa học Kĩ thuật Bắc Kinh), 1993, trang 1454-1486 [3] Lê Văn Hạc, NguyÔn Văn Sơn, Trần Đình Thắng, Nguyễn Xuân Dũng,Thnh phn húa học cảu Mần tưới trắng (Eupatorium staechadosmum Hance) ë Thanh Hóa, Tạp chí Dược học, 2000, trang 342 [4] Đỗ Tất Lợi, Những thuốc vị thuốc Việt Nam, Nhà xuất Y học Hà Nội , 2003, trang 252-253 [5] Võ Văn Chi, Từ điển thuốc Việt Nam, Nhà xuất Y học, 1997, trang 729-730, 1642 Tiếng Anh: [6] Motoo Tori, Yukiko Ohara, Katsuyuki Nakashima, and Masakadu Sono, Thymol Derivativesfrom Eupatorium fortunei, J.Nat Prod, 2001, 68 (8), pp 1048-1051 [7] M.Haruna, M.Haruna, Y.Sakakibara, and K.Ito, Structure and conformation of Eupatofortunin, a new germacrane-type sesquiterppene lactone from Eupatorium fortune Turcz, Chemical and Pharmaceutical Bulletin, 1986, 34(12), pp 5157-5160 [8] Liu K, Roeder E, Chen HL, Xju XJ, Pyrrolizidine Alkaloids from Eupatorium fortune Phytochemistry, 1992, 31(7), pp 2573-2574 [9] Hai Xia Jiang, Kun Gao, Highly Oxygennated Monoterpene from Eupatorium fortune, Chinese Chemical latters, 2005, 16, pp 1217-1219 67 Trường ĐHSP Hà Nội Khóa luận tốt nghiệp [10] Hai Xia Jiang, Ya Li, Jing Pan, Kun Gao, Terpenoids from Eupatorium fortune Turcz, Helvetica Chimica Acta, 2006, 89, pp 258266 [11] Araceli Pe´rez-Va´squez, Edelmira Linares, Robert Bye, Carlos M Cerda-Garcı´a-Rojas, Rachel Mata Phytotoxic activity and conformational analysis of thymol analogs from Hofmeisteria schaffneri Phytochemistry 69 (2008) 1339–1347 [12] Nguyen Thi Diem Trang, Wanner MJ, Koomen GJ, Nguyen Xuan Dung New acetophenone and thymol derivatives from Eupatorium stoechadosmum Planta Medica 1993, 59, 480-481 [13] Tori M, Ohara Y, Nakashima K, Sono M Thymol derivatives from Eupatorium fortunei Journal of Natural Products 2001, 64, 10481051 68 ... cổ truyền dân tộc Nội dung khóa luận gồm: Trường ĐHSP Hà Nội Khóa luận tốt nghiệp 1 .Nghiên cứu tổng quan thành phần hóa học hoạt tính sinh học có Mần tưới Phân lập số hợp chất từ Mần tưới phương... nghiên cứu lá, thân Mần tưới hạn chế định Vì tơi chọn đề tài: “ Nghiên cứu thành phần hóa học phân đoạn chiết hexane Mần tưới” nhằm góp phần tìm kiếm hợp chất thiên nhiên, tạo sở cho nghiên cứu. .. phần hóa học hoạt tính sinh học Mần tưới 1.3.2.1 Thành phần hóa học Ở Việt Nam, chưa có cơng trình nghiên cứu khoa học cơng bố lồi Mần tưới (Eupatorium fortunei) Mới có cơng trình nghiên cứu loài