Đề tài nghiên cứu Đánh giá độc tính tiền lâm sàng dược chất phóng xạ 90y Nimotuzumab trên chuột giới thiệu các loại dược chất phóng xạ chẩn đoán và điều trị ung thư đầu cổ, giới thiệu kháng thể đơn dòng dùng trong điều trị ung thư đầu cổ, kháng thể gắn đồng vị phóng xạ nhắm đích lên tế bào ung thư, phương pháp nghiên cứu điều chế kiểm tra và đánh giá dược chất phóng xạ 90yNimotuzumab trên chuột.
THE 20th NATIONAL CONGRESS OF VIETNAMESE SOCIETY OF RADIOLOGY AND NUCLEAR MEDICINE ĐÁNH GIÁ ĐỘC TÍNH TIỀN LÂM SÀNG DƯỢC CHẤT PHÓNG XẠ 90Y-NIMOTUZUMAB TRÊN CHUỘT NGUYỄN THỊ THU Viện Nghiên cứu hạt nhân hinhanhykhoa.com ĐẶT VẤN ĐỀ Hiệp hội Y học hạt nhân Châu Âu đề xuất phương án nghiên cứu độc tính tiền lâm sàng cho thuốc phóng xạ mới, để đưa vào ứng dụng lâm sàng DCPX chưa có cấp phép chuyên khảo dược điển Thay cho việc nghiên cứu độc tính cấp truyền thống trước kia, khái niệm nghiên cứu độc tính liều mở rộng đặt để thực với thuốc phóng xạ nhằm tạo số liệu tiền lâm sàng để đệ trình quan có thẩm quyền cấp phép sử dụng thuốc phóng xạ Để có sở liệu số liệu an toàn tiền lâm sàng độc tính phóng xạ định liều phóng xạ: việc đánh giá độc tính tiền lâm sàng 90Ynimotuzumab chuột thực Liều tiêm 100ug: thường thuốc kháng thể NỘI DUNG Nội dung 1: Điều chế 90Y-nimotuzumab Nội dung 2: Kiểm tra chất lượng 90Y-nimotuzumab Kiểm tra độ tinh khiết hóa phóng xạ Độ ổn định invitro invivo Nồng độ phóng xạ Hoạt độ riêng Nội dung 3: Đánh giá độc tính phóng xạ 90Y-nimotuzumab chuột Mỗi nhóm 10 chuột tiêm tĩnh mạch 90Y-nimotuzumab liều 9,25, 92,5 462,5 MBq/kg, nhóm chứng tiêm NaCl 0,9% nhóm tiêm nimotuzumab liều 500 mg Theo dõi trọng lượng chuột cách cân chuột trước tiêm chế phẩm hàng tuần Lấy máu để đánh giá số huyết học (CBC), sinh hóa (SGOT, SGPT) Tại thời điểm ngày 30 ngày Kiểm tra vi thể tế bào mô gan, thận, lách, phổi, tim So sánh với nghiên cứu thực với 131I-nimotuzumab 99mTc-NCA90 hinhanhykhoa.com ĐiỀU TRỊ UNG THƯ HiỆN NAY TRÊN THẾ GIỚI Nguồn: Int J Mol Sci 2016, 17, 33 Thống kê 14 triệu bệnh nhân ung thư hàng năm, điều trị đích so với phương pháp khác chưa phổ biến GIỚI THIỆU CÁC LOẠI DƯỢC CHẤT PHÓNG XẠ CHẨN ĐOÁN VÀ ĐIỀU TRỊ UNG THƯ ĐẦU CỔ Nhiều dược chất phóng xạ giai đoạn lâm sàng như: 131I-antiCD45antibody, 213Bi-anti-CD33 IgG điều trị bệnh bạch cầu dòng tủy, 90Y-epratuzumab 177Lu-J591 điều trị lymphoma thể nang giai đoạn I/II, điều trị ung thư tuyến tiền liệt, Tuy nhiên điều trị ung thư dạng rắn ác tính ung thư vú, ruột kết, tuyến tụy, đầu cổ, thận, phổi, tác nhân điều trị chưa hiệu quả, Việc điều trị nhiều thách thức hinhanhykhoa.com GIỚI THIỆU KHÁNG THỂ ĐƠN DÒNG DÙNG TRONG ĐIỀU TRỊ UNG THƯ ĐẦU CỔ • • • • Nimotuzumab (h-R3, 2003), Cetuximab (Erbitux, 2003), Panitumumab (Vectibix, 2006), Zalutumumab (HuMax, 2009) Kháng thể gắn đồng vị phóng xạ nhắm đích lên tế bào ung thư Đồng vị phóng xạ Yttri-90 (Y-90) phát xạ tia beta với lượng cao dùng điều trị miễn dịch phóng xạ NGUYÊN VẬT LIỆU, HĨA CHẤT • Kháng thể Nimotuzumab (có tên khác Cimaher, chai 50mg/10ml, hãng CIMAB, Cuba Công thức phân tử C6566H10082N1746O2056S40, trọng lượng phân tử 150.000 Da • Đồng vị phóng xạ Yttri-90, 90Yttrium- acetat (CH3COO)3 90Y, tách chiết từ máy phát đồng vị 90Sr/90Y phương pháp màng Supported Liquid Membrane (SLM) từ nguồn phóng xạ 90Sr Các hóa chất 2-ethylhexyl 2-ethylhexyl phosphonic axit (PC 88A), C16H35O3P, Daihatchi, Nhật, p-NCS-Bn-DOTA, Macrocyclic, Mỹ MERCK, DMSO (Dimethyl Sulfoxide) CMPO Octyl(phenyl)-N,N diisobutylcarbamoylmethyl phosphin oxide DTPA (Diethylentriaminpentaacetic axit) Các dung môi methanol n- dodecan, DMSO (Dimethyl Sulfoxide) Chuột Swiss 90Y-NIMOTUZUMAB • Dược chất phóng xạ 90Y-DOTA-pbenzyl-nimotuzumab bao gồm - Kháng thể đơn dòng nimotuzumab - Đồng vị phóng xạ 90Y • Kháng thể đơn dòng nimotuzumab gắn với p-SCN-benzyl-DOTA kỹ thuật tạo phức chất phân tử sinh học với chất chất tạo phức cua pSCN-benzyl-DOTA PHƯƠNG PHÁP NGHIÊN CỨU hinhanhykhoa.com KẾT QUẢ KIỂM TRA TRỌNG LƯỢNG CHUỘT TIÊM 90Y-NIMOTUZUMAB 40 Trọng lượng chuột (gam) 35 30 25 20 Nhóm chứng Nhóm tiêm liều 9,25 MBq/kg Nhóm tiêm liều 92,5 MBq/kg Nhóm tiêm liều 462,5 MBq/kg Nhóm tiêm kháng thể 500 ug/kg 15 10 14 21 28 30 Thời gian (ngày) Diễn biến trọng lượng chuột sau tiêm 90Y-nimotuzumab: Liều tiêm 9,25 462,5 MBq/kg, nhóm chứng nhóm thực nghiệm tăng giống Kết khơng có khác biệt có ý nghĩa thống kê biến đổi trọng lượng nhóm chuột với p>0,05 KẾT QUẢ KIỂM TRA CHỈ SỐ HUYẾT HỌC VÀ SINH HÓA (X± SD) Sau tiêm ngày Liều tiêm (MBq/kg) RBC (M/ml) NaCl 0,9% 8,58±0,3 9,25 92,5 462,5 500 mg/kg 8,76±0,62 8,88±0,44 9,54±0,80 8,48±4,24 WBC (K/ml) 1,14±0,48 1,14±0,64 1,16±0,32 1,42±0,38 2,09±1,00 PLT(K/mL) 710±136 540±102 632±120 452±92 596±187 SGOT(U/L) 78,8±41,8 109±23,3 83,6±33,9 118±22,5 96,5±25,1 SGPT(U/L) 43,4±3,5 48,0±9,9 41,2±6,8 58,6±4,1 51,2±16,6 Các số huyết học nhóm đối chứng nhóm tiêm thuốc khơng có khác biệt (p>0,05) nhóm chứng có số hồng cầu 8,58 ± 0,32 M/ml nhóm tiêm liều cao 9,54 ± 0,80 M/ml KẾT QUẢ KIỂM TRA CHỈ SỐ HUYẾT HỌC VÀ SINH HÓA (X± SD) Sau tiêm 30 ngày Liều tiêm (MBq/kg) NaCl 0,9% RBC (M/ml) 11,31±0,77 9,25 92,5 462,5 500 mg/kg 11,49±1,11 10,5±0,74 11,62±1,21 10,96±1,03 WBC (K/ml) 2,09±0,79 3,8±1,74 2,54±0,95 1,87±0,64 2,1±0,89 PLT(K/mL) 720±179 798±129 1013±243 631±267 863±250 SGOT(U/L) 84,6±39 94,2±56 105,8±57,6 102±57,6 83,2±39,8 SGPT(U/L) 47±9,64 42,8±24,4 51,2±34,3 50,3±26,2 44,7±12,04 Số lượng hồng cầu ổn định, nhóm chứng nhóm tiêm thuốc liều cao 11,31±0,77 M/ml 11,62±1,21, bạch cầu 2,09±0,79 K/ml 1,87±0,64 K/ml Kết cho thấy không thấy khác biệt nhóm chuột tiêm thuốc nhóm chứng hinhanhykhoa.com KẾT QUẢ CHỤP VI THỂ TẾ BÀO GAN Tế bào gan chuột đối chứng (A), chuột tiêm 90Y-nimotuzumab liều 462,5mCi/kg (B) chuột tiêm kháng thể liều 500 mg/kg - - - Các tế bào gan nhóm chứng giới hạn bình thường, khơng có nhân đơng hay thối hóa mỡ, khơng có hoại tử, tiểu thuỳ có cấu trúc rõ ràng, khơng có ứ mật, xuất huyết, tăng sinh hay xơ hóa Nhóm chuột tiêm liều cao tế bào gan có thối hóa nhẹ gồm thối hóa nước, thối hóa hạt hoại tử nhẹ quanh tĩnh mạch trung tâm, có thối hóa hạt Eosin mức độ nhẹ, khơng có thối hóa mỡ, tiểu thuỳ có cấu trúc rõ ràng, khơng có ứ mật, xuất huyết, tăng sinh hay xơ hóa Nhóm chuột tiêm kháng thể, mơ gan có thối hóa nước, thối hóa hạt nhẹ, hoại tử quanh tĩnh mạch trung tâm vùng mức độ nhẹ, hoại tử quanh khoảng cửa mức độ vừa, khơng có thối hóa mỡ, tiểu thuỳ có cấu trúc rõ ràng, khơng có ứ mật, xuất huyết, tăng sinh hay xơ hóa KẾT QUẢ CHỤP VI THỂ TẾ BÀO THẬN Hình ảnh vi thể tế bào thận Tế bào thận chuột đối chứng (A), chuột tiêm 90Y-nimotuzumab liều 462,5 mCi/kg (B) nimotuzumab 500/kg mg (C) Tế bào thận cho thấy có viêm mơ thận kẽ mức độ trung bình, tế bào ống thận bờ bàn chải nhân co lại, có khơng bào KẾT QUẢ CHỤP VI THỂ TẾ BÀO LÁCH Hình ảnh vi thể tế bào lách Tế bào lách chuột đối chứng (A), chuột tiêm 90Y-nimotuzumab liều 462,5 mCi/kg (B) nimotuzumab 500/kg mg (C) Các mô lách chuột cho thấy giới hạn bình thường, khơng viêm, khơng hoại tử, khơng xơ hóa KẾT QUẢ CHỤP VI THỂ TẾ BÀO PHỔI Hình ảnh vi thể tế bào phổi Tế bào phổi chuột đối chứng (A), chuột tiêm 90Y-nimotuzumab liều 462,5 mCi/kg (B) nimotuzumab 500/kg mg (C) Phổi giới hạn bình thường, khơng có viêm hay xuất huyết nhu mô phổi KẾT QUẢ CHỤP VI THỂ TẾ BÀO TIM Hình ảnh vi thể tế bào tim Tế bào tim chuột đối chứng (A), chuột tiêm 90Y-nimotuzumab liều 462,5 mCi/kg (B) nimotuzumab 500/kg mg (C) Các tế bào vân tim rõ cấu trúc, giới hạn bình thường, không hoại tử tim, không viêm tim xơ hóa mơ kẽ tim So sánh với nghiên cứu thực với 131I-nimotuzumab 99mTc-NCA90 Các tiểu thuỳ mơ gan có cấu trúc rõ ràng, nhân đơng nhẹ, có thối hóa mỡ nhẹ, có tăng sinh tái tạo tế bào gan mức nhẹ nhóm Thận rõ cấu trúc vùng vỏ tủy, mơ thận bình thường, khơng hoại tử ống thận, cầu thận khơng viêm, khơng xơ hóa Chuột tiêm 131I-nimotuzumab liều 92,5, 277,5 925 MBq/Kg Trọng lượng chuột (gam) 40 35 30 25 20 15 10 5 10 15 20 25 30 Thời gian (ngày) Các mơ gan chuột bình thường, tiểu thuỳ có cấu trúc rõ ràng, nhân đơng nhẹ, gan bình thường Thận rõ cấu trúc vùng vỏ tủy, mơ thận bình thường Các mơ tim, lách, phổi giới hạn bình thường Chuột tiêm 99mTcNCA90 liều 10, 100, 500 uCi/con ĐÁNH GIÁ CHUNG Mục đích đánh giá mức độc tính tiền lâm sàng dược chất phóng xạ kháng thể đơn dòng gắn đồng vị phóng xạ 90Y Thời gian thích hợp thí nghiệm 30 ngày hợp lý thuốc phóng xạ đánh dấu 90Y Liều tiêm 0,185 MBq, 1,85 MBq 9,25 MBq con, tính theo trọng lượng quy đổi liều kg 9,25 MBq, 92,5 MBq 462,5 MBq Tính theo liều tối đa cho phép 90Y dùng người mà chưa có độc tính phóng xạ 23,6 MBq/kg tiêm chuột liều 462,5 MBq/kg ĐÁNH GIÁ CHUNG Động vật thí nghiệm sống qua tuần theo dõi, chí với liều cao 462,5 MBq/kg Mức liều tiêm kháng thể 500 mg dùng, ngày loại thuốc có chất peptid protein dùng điều trị ICH dẫn đánh giá mức >100 mg Mức liều không gây biến đổi trầm trọng (NOAEL: No observed adverse effect level) xem 1,5 mg tính cho người 50 kg ngày, liều 9,25 MBq/kg LD50 gây độc cấp tính khơng tính, mức liều cao mức liều sử dụng nghiên cứu này, theo dẫn ICH S9 (International Conference on Harmonisation) Khi sử dụng liều cao, tế bào máu ổn định, mô không bị hư hại, lượng yttri đưa vào thể ít, hoạt tính riêng yttri 5,43 x 105 mCi/mg, tính có 0,05 x 10-4 nmol yttri tham gia phức hợp, nên không làm thay đổi tính chất dược lý KẾT LUẬN Với hoạt tính phóng xạ dùng thí nghiệm cao liều điều trị tối đa cho phép dùng người điều trị lâm sàng, độc tính dược chất phóng xạ 90Y gắn kháng thể đơn dòng chuột thực nghiệm mức nhẹ Mức gây độc nghiên cứu xuyên khắp thể nơi mà thuốc phóng xạ kháng thể đơn dòng qua Kết nghiên cứu rằng, quan nội tạng khơng có hư hại nhóm tiêm liều thấp nhóm tiêm liều cao Kết nghiên cứu giúp cho sở sản xuất có số liệu đệ trình cấp có thẩm quyền việc ứng dụng lâm sàng XIN CHÂN THÀNH CẢM ƠN ... thuốc phóng xạ Để có sở liệu số liệu an tồn tiền lâm sàng độc tính phóng xạ định liều phóng xạ: việc đánh giá độc tính tiền lâm sàng 90Ynimotuzumab chuột thực Liều tiêm