Đây là nghiên cứu đầu tiên về cao lỏng LT trên thực nghiệm và lâm sàng. Luận án đã cung cấp những kết quả về độc tính cấp, độc tính bán trường diễn, giả thuyết về cơ chế tác dụng, hiệu quả điều trị vết thương phần mềm trên động vật thực nghiệm và lâm sàng của cao lỏng LT.
BỘ GIÁO DỤC VÀ ĐÀO TẠO BỘ QUỐC PHÒNG VIỆN Y HỌC CỔ TRUYỀN QUÂN ĐỘI TRƯƠNG MINH TUẤN NGHIÊN CỨU ĐỘC TÍNH VÀ HIỆU QUẢ ĐIỀU TRỊ VẾT THƯƠNG PHẦN MỀM CỦA CAO LỎNG LT LUẬN ÁN TIẾN SỸ Y HỌC Hà Nội – Năm 2019 BỘ GIÁO DỤC VÀ ĐÀO TẠO BỘ QUỐC PHÒNG VIỆN Y HỌC CỔ TRUYỀN QUÂN ĐỘI TRƯƠNG MINH TUẤN NGHIÊN CỨU ĐỘC TÍNH VÀ HIỆU QUẢ ĐIỀU TRỊ VẾT THƯƠNG PHẦN MỀM CỦA CAO LỎNG LT Chuyên ngành: Y học cổ truyền Mã số: 62720201 LUẬN ÁN TIẾN SỸ Y HỌC NGƯỜI HƯỚNG DẪN KHOA HỌC GS.TS Nguyễn Minh Hà PGS.TS Đinh Văn Hân Hà Nội – Năm 2019 LỜI CAM ĐOAN Tôi xin cam đoan số liệu đề tài luận án phần số liệu đề tài nghiên cứu có tên: “Nghiên cứu bào chế đánh giá tác dụng điều trị vết thương phần mềm cao lỏng LT” Kết đề tài thành nghiên cứu tập thể mà thành viên Tơi Chủ nhiệm đề tài tồn thành viên nhóm nghiên cứu đồng ý cho phép sử dụng đề tài vào luận án để bảo vệ lấy tiến sĩ Các số liệu, kết nêu luận án trung thực chưa công bố cơng trình khác Nghiên cứu sinh Trương Minh Tuấn LỜI CẢM ƠN Sau thời gian học tập nghiên cứu, trải qua nhiều khó khăn, đến tơi hồn thành luận án tiến sỹ y học Với tất lịng, tơi xin bày tỏ biết ơn sâu sắc tới Đảng ủy, Ban giám đốc, Trung tâm Huấn luyện đào tạo, Ban Khoa học Quân Viện Y học cổ truyền Quân đội tạo điều kiện thuận lợi cho tơi q trình học tập thực đề tài Đặc biệt, tơi xin bày tỏ lịng biết ơn chân thành sâu sắc đến GS.TS Nguyễn Minh Hà, PGS.TS Đinh Văn Hân, hai người thầy kính yêu tận tình bảo, hướng dẫn, động viên, tạo điều kiện thuận lợi cho suốt q trình thực luận án Tơi xin chân thành cảm ơn thầy cô, nhà khoa học Hội đồng cho dẫn q báu giúp tơi hồn thành luận án Tơi xin chân thành cảm ơn tập thể cán Trung tâm Liền vết thương Viện Bỏng Quốc gia tạo điều kiện thuận lợi để tơi nghiên cứu hồn nghiệm mơ hình động vật nghiên cứu lâm sàng Tôi xin chân thành cảm ơn tập thể cán Khoa Nghiên cứu thực nghiệm, Viện Y học cổ truyền Quân đội, với trách nhiệm, tình cảm lực chuyên môn cao giúp hồn thành nghiên cứu độc tính thuốc Tơi xin chân thành cảm ơn tập thể cán Khoa Điều trị tích cực Viện YHCT Quân đội giúp đỡ, tạo điều kiện cho tơi q trình thu thập số liệu lâm sàng, góp phần hồn thành nghiên cứu Tôi xin chân thành cảm ơn thủ trưởng Viện 69, tập thể cán Khoa Hình thái, Viện 69 BTL Bảo vệ Lăng Chủ tịch Hồ Chí Minh, dành cho điều kiện đặc biệt người trang thiết bị giúp thu kết tốt cho luận án Tôi xin chân thành cảm ơn tới tập thể Khoa Quốc tế, Viện YHCT Quân đội nơi công tác tạo điều kiện động viên, giúp đỡ suốt thời gian học tập Cuối cùng, xin bày tỏ lòng biết ơn bố mẹ, anh chị em gia đình bạn bè Cảm ơn vợ chỗ dựa vững chắc, yêu thương, động viên, tạo điều kiện tốt tình cảm, tinh thần, vật chất cho tơi để hồn thành chương trình học tập thực thành công luận án Nghiên cứu sinh Trương Minh Tuấn DANH MỤC TỪ VIẾT TẮT ADP ATP bFGF CAM ĐVDT ECM EGF FGF HO-1 ICAM-1 IL LD50 MBC MIC50 MMPs mRNA NF-E2 OECD OXCA PAF PDGF PRP PVA/BS ROS SEM TEM TGF β TIMPs TNF VAC VCAM-1 VEGF Adenosine Diphosphate Adenosine triphosphat basic Fibroblast Growth Factor: yếu tố tăng trưởng nguyên bào sợi Cell adhesion molecules: phân tử bám dính tế bào Đơn vị diện tích Extracellular matrix: Cấu trúc ngoại bào Epidermal growth factor: Yếu tố tăng trưởng biểu bì Fibroblast growth factors: Yếu tố tăng trưởng nguyên bào sợi Enzyme xúc tác thoái hóa heme Intercellular Adhesion Molecule 1: Phân tử kết dính tế bào Interleukin Lethal dose 50%: Liều gây chết 50% Minimum Bactericidal Concentration: Nồng độ diệt khuẩn tối thiểu Minimum Inhibitory Concentration 50%: Nồng độ ức chế tối thiểu 50% vi khuẩn ống nghiệm Matrix metalloproteinase: enzym phân hủy protein đệm Messenger RNA: Ribonucleotid acid thông tin Nuclear factor erythroid- 2: yếu tố phiên mã quan trọng quy định kích thích HO-1 Organization for Economic Cooperation and Development: Tổ chức Hợp tác Phát triển Kinh tế Oxy cao áp Platelet Activating Factor: yếu tố hoạt hóa tiểu cầu Platelet-derived growth factor: Yếu tố tăng trưởng nguồn gốc tiểu cầu platelet – rich plasma: huyết tương giàu tiểu cầu Polyvinyl alcohol/Bletilla striata Reactive oxygen species: Gốc tự oxy hóa Scanning Electron Microscope: Kính hiển vi điện tử quét Transmission Electron Microscope: Kính hiển vi điện tử truyền qua Transforming growth factor β: Yếu tố tăng trưởng chuyển dạng Tissue inhibitors of metalloproteinases: Yếu tố ức chế hoạt động MMPs Tumor necrosis factor: Yếu tố hoại tử khối u Vacuum assisted closure: Trị liệu áp lực âm Vascular cell adhesion molecule-1: Phân tử kết dính mạch máu Vascular endothelial growth factor: Yếu tố tăng trưởng nội mạc mạch máu DANH MỤC BẢNG Bảng Bảng 2.1 Bảng 2.2 Bảng 2.3 Bảng 3.1 Bảng 3.2 Bảng 3.3 Bảng 3.4 Bảng 3.5 Bảng 3.6 Bảng 3.7 Bảng 3.8 Bảng 3.9 Bảng 3.10 Bảng 3.11 Bảng 3.12 Bảng 3.13 Bảng 3.14 Bảng 3.15 Bảng 3.16 Bảng 3.17 Bảng 3.18 Bảng 3.19 Bảng 3.20 Bảng 3.21 Bảng 3.22 Bảng 3.23 Bảng 3.24 Bảng 3.25 Bảng 3.26 Tên Bảng Thang điểm đánh giá kích ứng da Đánh giá mức độ kích ứng da thuốc Thang điểm đánh giá vết thương RESVECH V2.0 Thay đổi trọng lượng thỏ nghiên cứu độc tính cấp da Thay đổi trọng lượng thỏ nghiên cứu độc tính cấp vết thương thực nghiệm Kết thay đổi trọng lượng thỏ nghiên cứu độc tính bán trường diễn Thay đổi số huyết học thỏ thí nghiệm Ảnh hưởng cao lỏng LT tới số enzym gan Ảnh hưởng cao lỏng LT tới số số sinh hóa máu chức gan thận Tác dụng với E.coli tỷ lệ pha loãng khác Tác dụng kháng khuẩn P aeruginosa tỷ lệ pha loãng khác cao lỏng LT1, LT2, LT3 Tác dụng kháng khuẩn S aureus cao lỏng LT Khả kháng dòng vi khuẩn kiểm định LT1, LT2, LT3 Hiệu lực kháng khuẩn cao lỏng LT Trọng lượng thỏ nghiên cứu vết thương thực nghiệm Các số huyết học thỏ nghiên cứu vết thương thực nghiệm Các số xét nghiệm sinh hóa máu thỏ nghiên cứu vết thương thực nghiệm Thay đổi diện tích vết thương thỏ Tốc độ liền vết thương thỏ Thay đổi diện tích vùng biểu mơ thỏ Tỷ lệ cấy khuẩn vết thương dương tính thỏ Mật độ vi khuẩn chỗ vết thương thỏ Phân bố loài vi khuẩn chỗ vết thương thỏ Thay đổi số lượng tân mạch vết thương thỏ Thay đổi số lượng tế bào viêm vết thương thỏ Thay đổi số lượng nguyên bào sợi vết thương thỏ Nhận xét chung thay đổi hình thái mơ vết thương thỏ Độ tuổi bệnh nhân vết thương cấp tính Phân bố giới nhóm vết thương cấp tính Trang 42 42 56 60 61 62 63 64 64 67 68 69 70 70 71 71 72 72 73 73 74 74 75 75 76 76 79 80 80 Bảng 3.27 Mạch, huyết áp, nhiệt độ nhóm vết thương cấp tính Bảng 3.28 Thay đổi số huyết học nhóm vết thương cấp tính Bảng 3.29 Sự biến đổi số sinh hóa nhóm vết thương cấp tính Bảng 3.30 Biến đổi kích thước vết thương cấp tính Bảng 3.31 Tỷ lệ phần trăm thu hẹp vết thương cấp tính Bảng 3.32 Điểm RESVECH 2.0 nhóm cấp tính Bảng 3.33 Tỷ lệ cấy khuẩn dương tính nhóm vết thương cấp tính Bảng 3.34 Phân bố vết thương cấp tính theo chủng vi khuẩn nhiễm Bảng 3.35 Mật độ vi khuẩn trung bình nhóm vết thương cấp tính Bảng 3.36 Độ tuổi bệnh nhân có vết thương mạn tính Bảng 3.37 Phân bố giới nhóm vết thương mạn tính Bảng 3.38 Mạch, nhiệt độ, huyết áp nhóm vết thương mạn tính Bảng 3.39 Vị trí tổn thương nhóm vết thương mạn tính Bảng 3.40 Phân bố theo nguyên nhân tổn thương nhóm vết thương mạn tính Bảng 3.41 Thay đổi số huyết học bệnh nhân vết thương mạn tính Bảng 3.42 Các số sinh hóa bệnh nhân nhóm mạn tính Bảng 3.43 Biến đổi kích thước nhóm vết thương mạn tính Bảng 3.44 Thay đổi theo thang điểm RESVECH 2.0 nhóm vết thương mạn tính Bảng 3.45 Tỷ lệ phần trăm thu hẹp nhóm vết thương mạn tính Bảng 3.46 Phân bố theo chủng vi khuẩn nhiễm nhóm vết thương mạn tính Bảng 3.47 Tỷ lệ cấy khuẩn dương tính nhóm vết thương mạn tính Bảng 3.48 Mật độ vi khuẩn chỗ nhóm vết thương mạn tính 80 81 81 82 82 82 83 84 84 84 85 85 85 85 86 86 88 88 89 89 90 90 DANH MỤC HÌNH Hình Hình 1.1 Hình 1.2 Hình 1.3 Hình 1.4 Hình 1.5 Hình 1.6 Hình 1.7 Hình 1.8 Hình 1.9 Hình 1.10 Hình 1.11 Hình 1.12 Hình 2.1 Hình 2.2 Hình 2.3 Hình 2.4 Hình 2.5 Hình 2.6 Hình 2.7 Hình 2.8 Hình 2.9 Hình 2.10 Hình 2.11 Hình 2.12 Hình 3.1 Hình 3.2 Hình 3.3 Hình 3.4 Hình 3.5 Hình 3.6 Hình 3.7 Hình 3.8 Tên hình Trang Cấu trúc da Các dạng vết thương nguyên nhân học Vết thương nhiệt hóa chất Các vết loét mạn tính Tổ chức hạt mọc đẹp 10 Q trình biểu mơ hóa 10 Máy điều trị oxy cao áp 15 Hệ thống VAC 16 Tạo vết thương toàn da lưng lợn kìm bấm 27 sinh thiết Elgharably Các bước gây vết thương bỏng thực nghiệm 27 Tạo vết loét mạn tính Adriamycin 28 Quá trình LVT da tái tạo 29 Cao lỏng LT 36 Dụng cụ sinh thiết (biopsy punch) dùng nghiên cứu 37 Kính hiển vi điện tử quét JSM 5410LV dùng nghiên cứu 37 Kính hiển vi điện tử truyền qua JEM 1400 dùng nghiên 38 cứu Thỏ cạo làm lơng tồn vùng sống lưng 41 bên sườn Tạo vết thương đắp thuốc nghiên cứu độc tính cấp vết 44 thương da thực nghiệm Đắp thuốc lên vùng lưng hai bên sườn bụng thỏ 45 Lấy máu tĩnh mạch tai thỏ để làm xét nghiệm 46 Đánh dấu vùng tạo vết thương tạo vết thương thỏ 49 Đắp thuốc nghiên cứu thỏ thí nghiệm 50 Tính diện tích vết thương thỏ phần mềm imageJ 51 Đo diện tích vết thương bệnh nhân phần mềm 55 ImageJ chế độ polygon selection Hình ảnh chỗ đắp Cao lỏng LT da thỏ 61 Hình ảnh chỗ đắp Cao lỏng LT vết thương thực 62 nghiệm Hình ảnh đại thể thận thỏ 65 Hình ảnh đại thể gan thỏ 65 Hình ảnh vi thể gan thỏ nghiên cứu độc tính bán trường diễn 66 Hình ảnh vi thể thận thỏ nghiên cứu độc tính bán trường diễn 66 Hình ảnh vi thể da thỏ nghiên cứu độc tính bán trường diễn 66 Khả kháng khuẩn E.coli tỷ lệ pha loãng khác 67 136 GUIDELINE FOR THE TESTING OF CHEMICALS Groot AC, Schmidt E (2016), "Tea tree oil: contact allergy and chemical 137 composition," Contact Dermatitis, vol 75, no 3, pp 129-143 方方方,方方方,方方方, 方 (2013), "两两两两两两两两两两两两两两两两两," 第第第第第第, vol 13, no 12, pp 1460-1463 (Đổng Hoạt Ba, Dương Mỹ Linh, Hồ Soái Nhĩ CS (2013) Đánh giá tính an tồn tinh dầu tràm dùng sát khuẩn da Y học nhiệt đới 138 Trung Quốc, số 13, tập 12, tr 1460-1463) Nguyễn Trần Thị Giáng Hương, Đỗ Thị Phương, Phạm Thị Vân Anh cộng (2016), "Độc tính bán trường diễn cao xoa bách xà động vật thực nghiệm," Tạp chí Nghiên cứu Y học, số 99, tập 1, tr 32- 139 39 Edoardo G Giannini, Roberto Testa, Vincenzo Savarino (2005), "Liver enzyme alteration: a guide for clinicians," Canadian Medical 140 Association or its licensors, vol 172, no 3, pp 367–379 P G Bowler, B I Duerden, D G Armstrong (2001), "Wound Microbiology and Associated Approaches to Wound Management," 141 American society for microbiology, vol 14, no 2, pp 244-269 Vũ Ngọc Lộ, Nguyễn Thái An (2010), "Tác dụng sinh học tinh 142 dầu," Tạp chí Dược học, số 414, tập 50, tr 51-54 Huỳnh Thị Ngọc Lan, Hồ Ánh Nguyệt, Lâm Thị Ngọc Phương (2014), "Tính kháng khuẩn tinh dầu tràm trà Úc tinh dầu hương nhu trắng chủng vi khuẩn đề kháng kháng sinh phân lập từ bệnh 143 phẩm," Y học TP Hồ Chí Minh, số 18, tập 2, tr 209-215 Vũ Thu Trang, Nguyễn Thị Hoa (2015), "Nghiên cứu hiệu kháng vi khuẩn satphylococus aureus sử dụng kết hợp loại tinh dầu Việt 144 Nam," Tạp chí Khoa học Công nghệ, số 53, tập 4, tr 417-424 Cowan MM (1999), "Plant products as antimicrobial agents," Clinical 145 microbiology review, vol 12, no 4, pp 564-582 Trøstrup H, Thomsen K, Calum H, at al (2016), "Animal models of chronic wound care: the application of biofilms in clinical research," 146 Chronic Wound Care Management and Research, vol 3, pp 123-132 Wang Jin, Scott W.McCue, Matthew J.Simpson (2018), "The role of initial geometry in experimental models of wound closing," Chemical 147 Engineering Science, vol 179, pp 221-226 Atiyeh BS, Costagliola M, Hayek SN, at al (2007), "Effect of silver on burn wound infection control and healing: review of the literature," Burn 148 J Int Soc Burn Inj, vol 33, no 2, pp 139-148 Chaloupka K, Malam Y, Seifalian AM (2010), "Nanosilver as a new generation of nanoproduct in biomedical application," Trends in 149 Biotechnol, vol 28, no 11, pp 580-588 Chử Thị Thu Huyền, Nguyễn Thị Thanh Bình, Trịnh Ngọc Dương (2014), "Nano tiều phân bạc triển vọng ứng dụng Dược học," Tạp chi Khoa học Đại học Quốc gia Hà Nội: Khoa học Tự nhiên 150 Công nghệ, số 30, tập 2, tr 23-32 Đinh Văn Hân (2005), "Liền vết thương vết bỏng-các yếu tố ảnh hưởng tới q trình liền vết thương vết bỏng," Tạp trí y học thảm họa & bỏng, 151 số 4, tr 99-107 Carlos J, Soriano JV (2012), "Development of a wound healing index 152 for chronic wounds," EWMA Journal, số 12, tập 2, tr 39-46 Phan Thị Kim Ngân, Nguyễn Thị Bích Đào (2014), "Vi khuẩn học nhiễm trùng vết loét bàn chân nhóm bệnh nhân đái tháo đường typ 2," 153 Tạp chí Y học TP Hồ Chí Minh, số 18, tập 4, tr 60-68 Nguyễn Ngọc Tuấn, Nguyễn Thị Bích Phượng (2017), "Diễn biến mơ bệnh học chỗ vết thương mạn tính điều trị liệu pháp huyết tương giàu tiểu cầu tự thân," Tạp chí Y học thảm họa & Bỏng, số 1, tr 154 48-54 Hoàng Văn Quang, Lê Bảo Huy, Nguyễn Thị Thảo Sương (2013), "Đánh giá hiệu sanyrene phòng ngừa lt tì đè," Tạp 155 chí Y học TP Hồ Chí Minh, số 17, tập 3, tr 125-130 Castro B, Bastida FD, Segovia T, at al (2017), "The use of an antioxidant dressing on hard-to-heal wounds: a multicentre, prospective 156 case series," J Wound Care, vol 26, no 12, pp 742-750 Thomas Mustoe (2004), "Understanding chronic wounds: a unifying hypothesis on their pathogenesis and implications for therapy," Am J 157 Surg, vol 187, no 5A, pp 65S-70S C.T.K.H.Stadtländer (2007), "Scanning Electron Microscopy and Transmission Electron Microscopy of Mollicutes: Challenges and Opportunities," Modern Research and Educational Topics in Microscopy, 158 vol Formatex, pp 122-131 方方方, 方方方 (2001), "两两两两两两两两两两两两两两两两两两," 第第第第第第, vol 12, no 3, pp 921-922 (Đổng Lê Cường, Vương Duy Giai (2001) Triển vọng nghiên cứu chế tác dụng thuốc Trung dược dùng điều trị vết thương Y học lâm sàng Triết Giang, số 12, tập 3, tr 921-922) PHỤ LỤC Phụ lục 1: Phụ lục 2: Phụ lục 3: Phụ lục 4: Phụ lục 5: Phụ lục 6: Phụ lục 7: Phụ lục 8: Phụ lục 9: Phụ lục 10: Phụ lục 11: Phụ lục 12: Phụ lục 13: Phụ lục 14: Phụ lục 15: Quy trình bào chế cao lỏng LT Phiếu kiểm nghiệm dược liệu đầu vào tràm Tiêu chuẩn sở cao lỏng LT Phiếu kiểm nghiệm cao lỏng LT Kết nghiên cứu độc tính cấp đường ngồi da cao lỏng LT Kết nghiên cứu độc tính cấp vết thương thực nghiệm cao lỏng LT Kết nghiên cứu độc tính bán trường diễn đường da cao lỏng LT Kết nghiên cứu tác dụng kháng vi sinh vật kiểm định cao lỏng LT Kết nghiên cứu tác dụng điều trị vết thương phần mềm thực nghiệm cao lỏng LT Chấp thuận Hội đồng KH&CN Viện YHCT Quân đội khía cạnh đạo đức nghiên cứu y sinh học Chấp thuận Hội đồng Y đức Viện Bỏng Quốc gia Phiếu tình nguyện tham gia nghiên cứu Giấy chứng nhận thực hành tốt Thử nghiệm lâm sàng vấn đề đạo đức nghiên cứu Phiếu nghiên cứu sử dụng lâm sàng Danh sách bệnh nhân nghiên cứu ... tài ? ?Nghiên cứu độc tính hiệu điều trị vết thương phần mềm cao lỏng LT? ?? với hai mục tiêu: 1- Nghiên cứu độc tính cấp độc tính bán trường diễn Cao lỏng LT động vật thực nghiệm 2- Đánh giá hiệu cao. .. GIÁO DỤC VÀ ĐÀO TẠO BỘ QUỐC PHÒNG VIỆN Y HỌC CỔ TRUYỀN QUÂN ĐỘI TRƯƠNG MINH TUẤN NGHIÊN CỨU ĐỘC TÍNH VÀ HIỆU QUẢ ĐIỀU TRỊ VẾT THƯƠNG PHẦN MỀM CỦA CAO LỎNG LT Chuyên ngành: Y học cổ truyền Mã số:... dụng điều trị vết thương phần mềm cao lỏng LT 49 Chương CHẤT LIỆU, ĐỐI TƯỢNG VÀ PHƯƠNG PHÁP NGHIÊN CỨU 2.1 Chất liệu thiết bị nghiên cứu 2.1.1 Chất liệu nghiên cứu - Cao lỏng LT: Cao lỏng LT chiết