Tiêu chuẩn Quốc gia TCVN 11571-2:2017 quy định những yêu cầu kỹ thuật và chỉ tiêu chất lượng cây giống Bạch đàn urophylla (Eucalyptus urophylla S.T. Blake) và Bạch đàn camaldulensis (Eucalyptus camaldulensis Dehnh) nhân giống bằng hạt, giâm hom và nuôi cấy mô.
TIÊU CHUẨN QUỐC GIA TCVN 11571-2:2017 GIỐNG CÂY LÂM NGHIỆP - CÂY GIỐNG BẠCH ĐÀN - PHẦN 2: BẠCH ĐÀN UROPHYLLA VÀ BẠCH ĐÀN CAMALDULENSIS Forest tree cultivar - Eucalyptus sapling - Part 2: Eucalyptus urophylla S.T.Blake, Eucalyptus camaldulensis Dehnh Lời nói đầu TCVN 11571-2:2017 Viện Khoa học Lâm nghiệp Việt Nam biên soạn, Bộ Nông nghiệp Phát triển nông thôn đề nghị, Tổng Cục Tiêu chuẩn Đo lường Chất lượng thẩm định, Bộ Khoa học Công nghệ công bố Bộ TCVN 11571: Giống lâm nghiệp- Cây giống Bạch đàn gồm phần sau: - TCVN 11571-1:2016 Phần 1: Bạch đàn lai - TCVN 11571-2:2017 Phần 2: Bạch đàn urophylla Bạch đàn camaldulensis GIỐNG CÂY LÂM NGHIỆP - CÂY GIỐNG BẠCH ĐÀN - PHẦN 2: BẠCH ĐÀN UROPHYLLA VÀ BẠCH ĐÀN CAMALDULENSIS Forest tree cultivar - Eucalyptus sapling - Part 2: Eucalyptus urophylla S.T.Blake, Eucalyptus camaldulensis Dehnh Phạm vi áp dụng Tiêu chuẩn quy định yêu cầu kỹ thuật tiêu chất lượng giống Bạch đàn urophylla (Eucalyptus urophylla S.T Blake) Bạch đàn camaldulensis (Eucalyptus camaldulensis Dehnh) nhân giống hạt, giâm hom nuôi cấy mô Tài liệu viện dẫn TCVN 8760-1:2017: Giống lâm nghiệp - Vườn đầu dòng Phần 1: Nhóm lồi Keo Bạch đàn Thuật ngữ định nghĩa Trong tiêu chuẩn sử dụng thuật ngữ định nghĩa sau đây: 3.1 Cây giống (Seedling) Cây gieo ươm từ hạt 3.2 Cây hom (Rooted cutting) Cây tạo phương pháp giảm hom 3.3 Cây hom có bầu (Potted rooted cutting) Cây hom cấy vào bầu ươm (ra rễ trực tiếp bầu hom rễ trần cấy vào bầu) nuôi dưỡng vườn ươm đủ tiêu chuẩn trồng rừng 3.4 Cây hom rễ trần (Bare-rooted cutting) Cây hom rễ giá thể đủ tiêu chuẩn cấy vào bầu ươm 3.5 Cây mô (Tissue culture plantlet) Cây tạo phương pháp nuôi cấy mô 3.6 Cây mơ có bầu (Potted tissue culture plantlet) Cây mơ rễ cấy vào bầu ươm chăm sóc vườn ươm đủ tiêu chuẩn trồng rừng 3.7 Cây mô mầm (Bottled tissue culture plantlet) Cây mô rễ bình qua huấn luyện 3.8 Cây mô rễ trần (Bare-rooted tissue culture plantlet) Cây mô rễ qua huấn luyện cấy giá thể 3.9 Giống gốc (Original stock) Vật liệu nhân giống lấy trực tiếp từ đầu dòng ni cấy lưu giữ tối đa năm phòng ni cấy mô 3.10 Lô giống (germplasm lot) Vật liệu giống sản xuất từ vườn cung cấp vật liệu đợt thu hái 3.11 Lô hạt giống (Seedlot) Hạt giống thu từ nguồn giống định (cây trội, rừng giống, vườn giống xuất xứ công nhận) đợt thu hạt 3.12 Nhân giống hom (Cutting propagation) Phương pháp dùng đoạn thân, đoạn cành để tạo 3.13 Nuôi cấy mô (Tissue culture) Kỹ thuật cấy nuôi mô thực vật điều kiện nhân tạo (in vitro) nhằm điều khiển phân hố hình thái chức chúng 3.14 Vườn đầu dòng (hedge orchard) Vườn giống trồng giống vơ tính nhân từ đầu dòng để cung cấp vật liệu sản xuất giống vơ tính (cành ghép, cành chiết, hom giâm) 3.15 Vườn đầu dòng cấp (hedge orchard first generation) Vườn đầu dòng trồng mơ, nhân từ giống gốc từ giống phục tráng 3.16 Vườn đầu dòng cấp (hedge orchard second generation) Vườn đầu dòng trồng hom nhân từ vườn đầu dòng cấp Yêu cầu kỹ thuật 4.1 Cây giống nhân hạt Bảng - Yêu cầu kỹ thuật giống đem trồng rừng Tên tiêu Yêu cầu Nguồn gốc hạt Thu từ nguồn giống công nhận Tuổi Từ tháng đến tháng tuổi Đường kính cổ rễ Từ 0,3 cm đến 0,4 cm Chiều cao Từ 30 cm đến 40 cm Bầu Đường kính tối thiểu cm, chiều cao tối thiểu 10 cm, hỗn hợp ruột bầu thấp miệng bầu tối đa 1cm, bầu khơng bị vỡ Hình thái chung Cây khỏe, cứng cáp, khơng cụt ngọn, màu xanh Tình hình sâu bệnh hại Khơng có dấu hiệu bị sâu bệnh hại Chú thích: Phụ lục A đưa hướng dẫn kỹ thuật nhân giống Bạch đàn urophylla Bạch đàn camaldulensis hạt 4.2 Cây giống nhân hom 4.2.1 Cây hom rễ trần Bảng - Yêu cầu kỹ thuật hom rễ trần Tên tiêu Yêu cầu Nguồn gốc vật liệu Từ vườn đầu dòng quy định TCVN 8760-1:2017 Tuổi Từ tháng đến 1,5 tháng Đường kính cổ rễ Từ 0,2 cm đến 0,3 cm Chiều cao Từ cm đến 15 cm Số Có Số rễ Có rễ Hình thái chung Cây khỏe, đầy đủ phận, không cụt ngọn, rễ màu trắng ngà, khơng bị gãy Tình hình bệnh hại Khơng có dấu hiệu bị bệnh hại Chú thích: Phụ lục B đưa hướng dẫn kỹ thuật nhân giống Bạch đàn urophylla Bạch đàn camaldulensis phương pháp giâm hom 4.1.2 Cây hom có bầu Bảng - Yêu cầu kỹ thuật hom có bầu đem trồng rừng Tên tiêu Yêu cầu Nguồn gốc vật liệu Từ vườn đầu dòng quy định TCVN 87601:2017 Tuổi Từ tháng đến tháng Đường kính cổ rễ Từ 0,3 cm đến 0,4 cm Chiều cao Từ 25 cm đến 35 cm Bầu Đường kính tối thiểu 7cm, chiều cao tối thiểu 10 cm, hỗn hợp ruột bầu thấp miệng bầu tối đa cm, bầu khơng bị vỡ Số Có 14 hồn chỉnh Hình thái chung Cây khỏe, cứng cáp, khơng cụt ngọn, xanh Tình hình sâu bệnh hại Khơng có dấu hiệu bị sâu bệnh hại Chú thích: Phụ lục B đưa hướng dẫn kỹ thuật nhân giống Bạch đàn urophylla Bạch đàn camaldulensis phương pháp giâm hom 4.3 Cây giống nhân nuôi cấy mô 4.3.1 Cây mô mầm Bảng - Yêu cầu kỹ thuật mô mầm Tên tiêu Yêu cầu kỹ thuật Nguồn gốc vật liệu Từ vườn đầu dòng quy định TCVN 8760-1:2017 Tuổi 15 ngày đến 20 ngày sau cấy vào môi trường rễ Chiều cao Từ 2,3 cm đến 3,0 cm Số rễ Có rễ Chiều dài rễ Từ 1,5 cm đến cm Hình thái chung Cây sinh trưởng tốt, màu xanh, rễ màu trắng Tình hình sâu bệnh hại Khơng có dấu hiệu bị bệnh Chú thích: Phụ lục C đưa hướng dẫn kỹ thuật nhân giống Bạch đàn urophylla Bạch đàn camaldulensis phương pháp nuôi cấy mô 4.3.2 Cây mô rễ trần Bảng - Yêu cầu kỹ thuật mô rễ trần Tên tiêu Yêu cầu kỹ thuật Nguồn gốc vật liệu Từ mầm quy định bảng Tuổi mầm Từ tuần tuổi đến tuần tuổi tính từ cấy từ bình ni rễ vào giá thể Chiều cao Từ 2,5 cm đến 4,0 cm Số rễ Có rễ Số Có Hình thái chung Cây đầy đủ phận, màu xanh, rễ không bị gãy dập, đầu rễ trắng ngả màu vàng nhạt Tình hình sâu bệnh hại Khơng có dấu hiệu bị bệnh Chú thích: Phụ lục C đưa hướng dẫn kỹ thuật nhân giống Bạch đàn urophylla Bạch đàn camaldulensis phương pháp ni cấy mơ 4.3.3 Cây mơ có bầu Bảng - u cầu kỹ thuật mơ có bầu đem trồng rừng Tên tiêu Yêu cầu kỹ thuật Nguồn gốc vật liệu Từ mô mầm quy định bảng mô rễ trần quy định bảng Tuổi tháng đến tháng kể từ cấy vào bầu Đường kính cổ rễ Từ 0,3 cm đến 0,4 cm Chiều cao Từ 20 cm đến 35 cm Số Có 14 hoàn chỉnh Bầu Đường kính tối thiểu cm, chiều cao tối thiểu 10 cm, hỗn hợp ruột bầu thấp miệng bầu tối đa cm, bầu khơng bị vỡ Hình thái chung Cây khỏe, cứng cáp, khơng cụt ngọn, xanh Tình hình sâu bệnh hại Khơng có dấu hiệu bị sâu bệnh Chú thích: Phụ lục C đưa hướng dẫn kỹ thuật nhân giống Bạch đàn urophylla Bạch đàn camaldulensis phương pháp nuôi cấy mô Phương pháp kiểm tra 5.1 Thời điểm kiểm tra Khi xuất mầm, rễ trần có bầu 5.2 Phương pháp kiểm tra tiêu kỹ thuật 5.2.1 Cây mầm Bảng - Phương pháp kiểm tra tiêu chuẩn mầm Tên tiêu Nguồn gốc Tuổi Phương pháp kiểm tra Chọn mẫu dung lượng mẫu Căn vào hồ sơ lơ hạt giống lưu Tồn lơ giống sở sản xuất giống Chiều cao Đo từ gốc mầm đến đỉnh mầm thước kẻ vạch có độ xác đến mm < 50 bình: lấy bình, bình 10 Số rễ Đếm số rễ Chiều dài rễ Đo chiều dài rễ thước kẻ vạch có độ xác đến mm Hình thái chung Quan sát mắt thường ≥ 50 bình: lấy bình, bình Tồn lơ giống 5.2.2 Cây rễ trần Bảng - Phương pháp kiểm tra tiêu chuẩn rễ trần Tên tiêu Phương pháp kiểm tra Nguồn gốc Chọn mẫu dung lượng mẫu Căn vào hồ sơ lô giống lưu Tồn lơ giống sở sản xuất giống Tuổi Sử dụng thước kẹp có độ xác 0,1 mm, đo vị trí sát mặt bầu Đường kính cổ rễ Lơ giống < 2000 cây, lấy mẫu 30 Lô giống ≥ 2000 cây, lấy mẫu 50 Sử dụng thước kẻ vạch có độ xác 1mm, đo từ mặt bầu tới Lô giống < 2000 cây, lấy đỉnh sinh trưởng mẫu 30 Đếm số rễ mắt Lô giống ≥ 2000 cây, lấy mẫu thường 50 Đếm số mắt thường Chiều cao Số rễ Số Hình thái chung Tình hình sâu bệnh hại Quan sát mắt thường Tồn lơ giống 5.2.3 Cây có bầu Bảng - Phương pháp kiểm tra tiêu chuẩn có bầu Tên tiêu Nguồn gốc Tuổi Đường kính cổ rễ Chiều cao Phương pháp kiểm tra Căn vào hồ sơ lô giống lưu sở sản xuất giống Chọn mẫu dung lượng mẫu Tồn lơ giống Sử dụng thước kẹp có độ xác Lơ giống < 2000 cây, lấy mẫu 0,1 mm, đo vị trí sát mặt bầu 30 Sử dụng thước kẻ vạch có độ Lơ giống ≥ 2000 cây, lấy mẫu 50 xác mm đo từ mặt bầu tới đỉnh sinh trưởng Bầu Sử dụng thước kẻ vạch có độ xác mm đo đường kính chiều cao bầu mơ tả từ ngữ Số Đếm số mắt thường Hình thái chung Quan sát mắt thường Tình hình sâu bệnh hại Tồn lơ giống Hồ sơ kèm theo giống Tài liệu kèm theo giống gồm thông tin sau: - Tên địa sở sản xuất; - Tên giống, tuổi, tiêu kích thước chất lượng chính; - Mã hiệu nguồn giống; - Mã hiệu lô giống; - Số lượng bình mầm (khi xuất bán mầm bình); - Số lượng mơ/bình (khi xuất bán mầm bình); - Số lượng rễ trần (khi xuất rễ trần) số lượng có bầu (khi xuất có bầu); - Ngày xuất thời gian sử dụng; Thông tin in kèm theo hồ sơ lô giống; trường hợp cần thiết in tên giống mã hiệu lơ giống dán lên bình mầm xuất khỏi sở sản xuất Yêu cầu vận chuyển Cây giống vận chuyển phải đảm bảo thoáng, mát; không bị dập, gãy; không bị vỡ bầu Phụ lục A (Tham khảo) Kỹ thuật nhân giống Bạch đàn urophylla Bạch đàn camaldulensis hạt A.1 Nguồn gốc giống Bảng - Yêu cầu nguồn gốc hạt giống Tên tiêu Nguồn gốc giống Lô hạt giống Yêu cầu - Hạt giống nhập từ xuất xứ thu hái từ vườn giống, rừng giống cấp có thẩm quyền cơng nhận - Hạt giống thu từ vườn giống, rừng giống có 50% số hoa 20% số có hạt - Lơ hạt giống hỗn hợp 20 trội thu hái từ xuất xứ, vườn giống, rừng giống nhập từ xuất xứ cấp có thẩm quyền cơng nhận A.2 Kỹ thuật xử lý hạt giống - Hạt giống trước gieo ngâm thuốc tím (KMnO 4) nồng độ 0,05% 10 phút; sau vớt rửa sạch, để ngâm hạt nước ấm 40oC, để nguội dần 6-8h vớt ủ túi vải Hàng ngày rửa chua nước sạch, giữ túi ủ hạt ln ẩm Sau 3-5 ngày hạt nứt nanh đem gieo A.3 Kỹ thuật gieo hạt A.3.1 Kỹ thuật tạo bầu - Hỗn hợp ruột bầu đóng vào túi bầu PE kích thước tối thiểu 7cm x 10cm cho độ thống khí hỗn hợp ruột bầu túi bầu từ 15 đến 20% (không chặt khơng q lỏng); bầu đóng xong xếp thành hàng so le luống rộng 0,8 đến 1m, mặt bầu phẳng Lấp đất xung quanh 2/3 bầu kẽ hở bầu chặt luống bầu Các luống bầu cách 40 đến 50cm để chăm sóc thuận tiện A.3.2 Gieo hạt vào bầu - Hạt trước gieo trộn với cát mịn khô, theo tỷ lệ phần hạt đến phần cát theo trọng lượng hạt Gieo vãi toàn khu đất chuẩn bị để gieo hạt Diện tích gieo 1,5 m cho 10 gram hạt Khơng nên gieo hạt q dày dễ bị nấm Sau gieo xong dùng bình phun tưới đủ ẩm luống hạt gieo Dùng rơm (hoặc cỏ khô, khô) qua khử trùng nước vôi để che phủ mặt luống Sau đến ngày, mạ mọc bỏ lớp vật liệu che phủ (rơm, rạ, cỏ, khô) A.4 Kỹ thuật chăm sóc - Hằng ngày tưới nước (sáng sớm chiều tối), trì độ ẩm mức 60 đến 70% Sau đến ngày, mạ mọc chăm sóc luống bầu, bầu chết phải cấy dặm Chú ý đề phòng nấm bệnh trùng phá hoại mầm - Khi bén rễ tháo dỡ dần dàn che ra, đến tháng dỡ bỏ hồn tồn - Định kì làm cỏ phá váng phun thuốc phòng trừ nấm bệnh, trùng - 15 đến 20 ngày trước xuất vườn tiến hành đảo bầu, cắt giảm cường độ tưới cho trì độ ẩm hỗn hợp ruột bầu mức 40 đến 50% Phụ lục B (Tham khảo) Kỹ thuật nhân giống Bạch đàn urophylla Bạch đàn camaldulensis phương pháp giâm hom B.1 Vật liệu giâm hom B.1.1 Cây đầu dòng Bảng - Yêu cầu chất lượng đầu dòng Tên tiêu Yêu cầu Nguồn gốc Được trồng từ giống gốc Thời gian trì vườn Khơng q năm kể từ trồng Đường kính gốc 1,5 cm đến 3cm Chiều cao 30 cm đến 60 cm Hình thái chung Cây khỏe mạnh, thân không vết trầy xước khơng bị thiếu dinh dưỡng Tình hình sâu bệnh hại Khơng có dấu hiệu bị sâu bệnh B.1.2 Biện pháp tạo hom vườn vật liệu - Bấm đốn tạo tán - Tưới nước đủ ẩm, làm cỏ chăm sóc mẹ lấy cành để sinh trưởng tốt nhiều chồi - Cưa thân, cắt cành độ cao cần thiết để tạo nhiều chồi làm trẻ hóa hom giâm - Trước bước vào mùa giâm hom tháng tiến hành bón thúc cho vườn vật liệu, liều lượng 200 g NPK/cây để nhiều chồi hữu hiệu B.1.3 Cành lấy hom giâm Bảng - Yêu cầu chất lượng cành lấy hom giâm Tên tiêu Yêu cầu Nguồn gốc Hom lấy từ vườn cung cấp vật liệu đáp ứng yêu cầu kỹ thuật nêu bảng Loại hom Lấy từ cành cấp và/hoặc cấp hai khỏe mạnh, sức sống tốt, khơng có biểu bị sâu bệnh, cành mọc thẳng nghiêng không q 30o so với thân chính, hom nửa hóa gỗ, có có hồn chỉnh B.2 Kỹ thuật giâm hom B.2.1 Cắt hom B.2.1.1 Cắt cành hom - Dùng kéo cắt cành kéo to cắt cành chồi vượt đủ tiêu chuẩn (chú ý: cắt phải để lại đến nách cành lấy hom để tạo chồi cho lần cắt sau) Sau cắt xong đem khu nhà giâm để tiến hành giâm hom - Cắt cành hom vào buổi sáng sớm chiều mát cành hom cắt không để trực tiếp ánh nắng mặt trời để sang ngày hôm sau B.2.1.2 Cắt hom - Từ cành hom chọn đoạn hom (hom đoạn một) dài 10 cm đến 15 cm (tùy mùa sinh trưởng), hom đoạn hai có đến nách - Dùng dao sắc kéo cắt đoạn hom chọn, cắt vát gốc hom 45 o, tránh giập hom - Cắt bỏ đến phía để lại đến phía trên, cắt bỏ 2/3 phiến B.2.2 Khử trùng hom - Hom cắt phải ngâm dung dịch Benlat nồng độ 0,3% 10 đến 15 phút Sau vớt hom khay cho nước - Giá thể giâm hom cát: phải đảo phơi khô nắng đến ngày cát chưa qua sử dụng, trước cấy hom phải tưới đủ ẩm (độ ẩm 70 đến 75%) dùng dung dịch Benlat 0.3% tưới lên toàn mặt luống - Giá thể bầu đất: sử dụng Benlat nồng độ 0,3% thuốc tím (KMnO 4) nồng độ 0,1% phun lên giá thể với lượng phun 10 lít 100 m2 B.2.3 Cấy hom B.2.3.1 Kỹ thuật cấy hom - Chấm hom vào IBA dạng dung dịch nồng độ 1000 ppm dạng bột nồng độ hàm lượng 1% theo thể tích cho thuốc phủ kín mặt cắt hom cấy vào luống giâm hom - Hom cắt lần phải cấy ngày không để qua đêm - Độ sâu cấy hom thông thường đến cm B.2.3.2 Bầu cấy • Hỗn hợp ruột bầu phải tơi xốp, khơng lẫn đá, sỏi cuội, có khả giữ ẩm tốt đủ nguồn dinh dưỡng Hỗn hợp ruột bầu phải xử lý không bị nhiễm loại nấm vi khuẩn gây hại - Các yêu cầu cụ thể hỗn hợp ruột bầu sau: - pHH2O: 5,0 đến 6,0 - Thành phần giới đất theo thể tích: ○ Cát: khơng 10% ○ Sét: không 30 % ○ Tỉ lệ chất độn thô (phân chuồng hoai, than bùn, than trấu ): tối thiểu 10% theo thể tích • Túi bầu - Chất liệu: polyetylen có độ dày 0,2 mm - Hình dạng: hình khối trụ tròn - Kích thước (đường kính x chiều cao): tối thiểu 7cm x 10cm Lỗ thoát nước phân bố xung quanh đáy túi bầu, đến lỗ/bầu với kích thước lỗ đến mm, dùng túi bầu khơng đáy có chất liệu, hình dạng kích thước B.2.4 Chăm sóc B.2.4.1 Chăm sóc nhà giâm hom Sau cấy xong, phải phun tưới hom giâm cho mặt đủ ẩm phủ kín lều giâm hom nilong trắng để giữ ẩm Những ngày nắng gắt phải tăng độ tàn che lều giâm để giảm bớt nhiệt độ lều giâm hom - Việc tưới phun cho hom giâm phải tiến hành hàng ngày đặc biệt 15 đến 20 ngày đầu sau giâm hom Lều giâm hom có trang bị hệ thống phun sương tự động bán tự động lần phun khoảng 10 đến 15 giây thời gian cách quãng hai lần phun ngày nắng gắt 30 đến 40 phút, ngày giâm mát 60 đến 70 phút (tùy theo điều kiện thời tiết cụ thể mà có lịch phun cho cụ thể) - Khi rễ dỡ nilon, giảm dần độ che sáng tưới đủ ẩm Sau khoảng thời gian đến 10 ngày vào ổn định chuyển vườn ươm B.2.4.2 Chăm sóc hom vườn ươm - Sau hom chuyển vườn ươm hàng ngày tưới nước cho vào sáng sớm chiều mát - Định kỳ 10 đến 15 ngày làm cỏ phá váng cho Phụ lục C (Tham khảo) Kỹ thuật nhân giống Bạch đàn urophylla Bạch đàn camaldulensis phương pháp nuôi cấy mô C.1 Vật liệu ni cấy C.1.1 Cây đầu dòng Bảng - Yêu cầu chất lượng đầu dòng Tên tiêu Yêu cầu Nguồn gốc Được trồng từ giống gốc cơng nhận Thời gian trì vườn Khơng năm kể từ trồng Đường kính gốc 1,5 cm đến cm Chiều cao (đã cắt chồi) 30 cm đến 60 cm Hình thái chung Cây khỏe mạnh, thân không vết trầy xước không bị thiếu dinh dưỡng Tình hình sâu bệnh hại Khơng có biểu bị sâu bệnh gây hại C.1.2 Vật liệu nuôi cấy Bảng - Yêu cầu chất lượng vật liệu nuôi cấy Tên tiêu Yêu cầu Nguồn gốc Được lấy từ vườn cung cấp vật liệu đáp ứng yêu cầu kỹ thuật nêu bảng Vật liệu ni cấy Lấy từ cành nửa hóa gỗ cành cấp khỏe mạnh, sức sống tốt, không bị sâu bệnh, cành mọc thẳng nghiêng không 30o so với thân Tiêu chuẩn vật liệu ni cấy Dài cm đến cm, khử trùng mang chồi ngủ C.1.3 Chồi cho rễ Bảng - Yêu cầu chất lượng chồi cho rễ Tên tiêu Yêu cầu Nguồn gốc Lấy từ mẫu chồi đáp ứng yêu cầu kỹ thuật nêu bảng nhân không lần Chiều cao chồi 2,0 cm đến 2,5 cm Hình thái chung Chồi xanh, mọc thẳng, mở, thân phân lóng với đốt thân bệnh C.2 Kỹ thuật nuôi cấy C.2.1 Khử trùng mẫu vật tái sinh chồi - Mẫu vật khử trùng cách: + Cắt bỏ lá, rửa mẫu vật vòi nước chảy chổi lơng mềm + Rửa vật liệu xà phòng pha lỗng lỗng, rửa lại vòi nước chảy tráng qua nước cất vơ trùng + Lắc cồn 70% phút, sau tráng nước cất đến lần + Ngâm vật liệu dung dịch HgCl2 nồng độ 0,1 % với thời gian đến phút rửa nước cất vô trùng + Dùng panh dao sắc (vô trùng) cắt mẫu vật thành đoạn mẫu dài đến cm, có chứa mắt ngủ, cắm đoạn mẫu vào môi trường tái sinh chồi ban đầu theo phương thẳng - Mẫu vật theo dõi, quan sát, lọc loại mẫu chết bị nhiễm nấm vi khuẩn hàng ngày - Sau 30 đến 35 ngày, chồi nuôi dưỡng tốt đạt độ dài 1,5 đến 2,5cm, cắt cấy chuyển sang môi trường nhân nhanh chồi C.2.2 Nhân chồi - Cụm chồi sau tái sinh đạt độ dài 1,0 đến 2,0cm cấy chuyển sang môi trường nhân nhanh chồi cách dùng kéo cắt tách thành đoạn 0,5 đến 1,0cm có chứa mắt ngủ Sau cắm cụm chồi ngập đến mm vào môi trường theo phương nằm ngang - Chế độ nuôi: đến ngày sáng nhân tạo; đến ngày tối; đến ngày ánh sáng tự nhiên: đến ngày sáng nhân tạo - Loại bỏ mẫu nhiễm lần cấy chuyển - Chu kỳ cấy chuyển 20 đến 25 ngày - Sau đến 10 chu kỳ cấy chuyển cần sử dụng vật liệu C.2.3 Ra rễ in vitro - Chồi lựa chọn cấy rễ chồi có từ đốt trở lên, chiều cao 2,5 cm; thẳng; cứng cáp; xanh - Cấy đơn chồi, cắm chân chồi ngập đến mm môi trường theo phương thẳng, khoảng cách cấy chồi 0,5 đến 0,8 cm cho không giao hạn chế tiếp nhận ánh sáng - Bình rễ hoàn chỉnh sau 15 đến 20 ngày C.2.4 Huấn luyện - Bình rễ hồn chỉnh chuyển khu huấn luyện (huấn luyện đến 10 ngày) trước cấy vào giá thể C.2.5 Hồ rễ cấy vào giá thể - Lấy mầm từ lọ, rửa nước cho hết thạch, xử lý Benlat C nồng độ 3% đến phút - Cây cấy vào bầu đất cấy luống cát: + Cấy vào bầu đất: Rễ khơng dài 1,5cm cấy vào bầu (nếu dài 1,5cm phải cắt bớt để rễ không bị cuộn tạo hình chữ J) Dùng que cấy cắm vào bầu đất để tạo lỗ có độ sâu 1,5cm đến 2cm cho tương ứng với chiều dài rễ, dùng ngón tay ngón trỏ giữ cho thẳng đứng, đưa nhẹ vào lỗ bầu (không làm cong rễ, rễ lồi lên mặt bầu, cấy khơng làm đứt gãy rễ chính), lấy que cấy ấn nhẹ xung quanh gốc để rễ tiếp xúc với đất, cấy đến đâu dùng ô doa tưới nhẹ đến + Cấy vào luống cát: Rễ khơng dài q 1,5cm cấy vào bầu (nếu dài 1,5cm phải cắt bớt để rễ khơng bị cuộn tạo hình chữ J) Cây cấy vào luống cát sơng (các hàng cách 3cm đến 4cm, cách 1cm đến 2cm) Luống cát sông cần phải xử lý dung dịch Benlat C nồng độ 0,3% dung dịch thuốc tím (KMnO4) 0,5% trước cấy từ đến ngày C.2.6 Môi trường nuôi cấy - Môi trường cho nuôi cấy mô Bạch đàn uro môi trường MS cải tiến (MS**) - Môi trường phải hấp vô trùng nhiệt độ 121oC, áp suất 1,2 atm 20 phút điều chỉnh pH 5,8 - Môi trường nhân nhanh chồi MS** có bổ sung chất điều hòa sinh trưởng BAP (nồng độ từ 0,5 đến mg/l) NAA (nồng độ từ 0,5 đến mg/l) - Môi trường rễ ½ MS** có bổ sung chất điều hoà sinh trưởng gốc Auxin IBA (1,5 đến 2,0 mg/l) ABT1 (0,25 đến 0,5 mg/l) C.2.7 Bầu cấy • Hỗn hợp ruột bầu phải tơi xốp, khơng lẫn đá, sỏi cuội, có khả giữ ẩm tốt đủ nguồn dinh dưỡng Hỗn hợp ruột bầu phải xử lý không bị nhiễm loại nấm vi khuẩn gây hại - Các yêu cầu cụ thể hỗn hợp ruột bầu sau: - pHH2O: 5,0 đến 6,0 - Thành phần giới đất theo thể tích: ○ Cát: khơng q 10% ○ Sét: khơng 30 % ○ Tỷ lệ chất độn thô (phân chuồng hoai, than bùn, than trấu ): tối thiểu 10% theo thể tích • Túi bầu - Chất liệu: polyetylen có độ dày 0,2 mm - Hình dạng: hình khối trụ tròn - Kích thước (đường kính x chiều cao): tối thiểu 7cm x 10 cm - Lỗ thoát nước phân bố xung quanh đáy túi bầu, đến lỗ/bầu với kích thước lỗ đến mm, dùng túi bầu khơng đáy có chất liệu, hình dạng kích thước ... tra Khi xuất mầm, rễ trần có bầu 5.2 Phương pháp kiểm tra tiêu kỹ thuật 5.2.1 Cây mầm Bảng - Phương pháp kiểm tra tiêu chuẩn mầm Tên tiêu Nguồn gốc Tuổi Phương pháp kiểm tra Chọn mẫu dung lượng... ≥ 50 bình: lấy bình, bình Tồn lô giống 5.2.2 Cây rễ trần Bảng - Phương pháp kiểm tra tiêu chuẩn rễ trần Tên tiêu Phương pháp kiểm tra Nguồn gốc Chọn mẫu dung lượng mẫu Căn vào hồ sơ lơ giống lưu... bệnh hại Quan sát mắt thường Tồn lơ giống 5.2.3 Cây có bầu Bảng - Phương pháp kiểm tra tiêu chuẩn có bầu Tên tiêu Nguồn gốc Tuổi Đường kính cổ rễ Chiều cao Phương pháp kiểm tra Căn vào hồ sơ lô