PHẢN ỨNG HUYẾT THANH ỨNG DỤNG MIỄN DỊCH TRONG CHẨN ĐOÁN VI SINH VÀ BỆNH NHIỄM

PHẢN ỨNG HUYẾT THANH ỨNG DỤNG MIỄN DỊCH TRONG CHẨN ĐOÁN VI SINH VÀ BỆNH NHIỄM TS Nguyễn Thị Hoàng Lan Bộ môn Vi sinh Khoa Dược – Đại học Lạc Hờng MỤC TIÊU • Trình bày tính chất của phản ứng KN – KT • Nguyên tắc và các phương pháp thực hiện • Nhận định kết quả NG̀N GỐC TẾ BÀO MÁU ĐÁP ỨNG MIỂN DỊCH CHẨN ĐOÁN HUYẾT THANH HỌC • Nhận biết kháng nguyên hoăc̣ kháng thể • Lương giá kháng nguyên hoặc kháng thể IgG 70% - IgM 10% - IgA 20% - IgE 0.001% - IgD 1% PHẢN ỨNG HUYẾT THANH • Là phản ứng kháng nguyên – kháng thể • Ứng dụng chẩn đoán lâm sàng - Tìm kháng thể huyết - Nhận định vi sinh vật - Đo sự gia tăng kháng thể máu để nhận định tình trạng nhiễm bệnh CÁC KỸ THUẬT MIỄN DỊCH DÙNG TRONG CHẨN ĐOÁN • Quan sát trực tiếp mắt thường - Kết tủa - Ngưng kết - Trung hòa - Cố định bổ thể • Dùng chất đánh dấu - Enzyme - ELISA - Đờng vị phóng xạ - RIA - Huỳnh quang - IFA PHÁT HIỆN KHÁNG NGUYÊN • Dùng kháng thể (KT)đã được biết trước để phát hiện kháng ngun (KN) của vi sinh vật • Khơng cần ni cấy phân lập vi khuẩn • Giúp định danh vi sinh vật PHÁT HIỆN KHÁNG THỂ VÀ XÁC ĐỊNH HIỆU GIÁ KHÁNG THỂ • Dùng kháng nguyên mẫu biết cho kết hợp với kháng thể nếu có mẫu huyết của bệnh nhân • Đánh giá đáp ứng của thể kháng nguyên của vi sinh vật ( vaccine) PHỨC HỢP KN- KT • Phức hợp KN – KT sự gắn xác vị trí kháng ngun – vị trí kháng thể • Đặc hiệu → KN kết hợp với KT mà kích thích thể sinh ngược lại thơng qua cấu hình khơng gian của vị trí kháng nguyên vị trí kháng thể quyết định (ổ khóa với chìa khóa) KHÁNG NGUN HỊA TAN Kháng ngun thu được từ môi trường nuôi cấy virus loại bỏ virus thành phần tế bào - Enzyme của virus - Thành phần cấu tạo của virus - Kháng nguyên bề mặt bong KHÁNG NGUYÊN HỮU HÌNH • Kháng ngun hữu hình kháng ngun có kích thước lớn hờng cầu, tế bào vi khuẩn, có epitop bề mặt liên kết với kháng thể tạo thành mạng liên kết nhìn thấy mắt thường • TD: KN lõi KN vỏ virus (KN H : yếu tố gây ngưng kết hồng cầu KN N men phá hủy điểm tiếp nhận bề mặt tế bào ký chủ → CÚM) 13 CÁC LOẠI KHÁNG NGUYÊN • Kháng nguyên hòa tan = kết tủa Không kết cụm nếu không có kháng thể kết hợp • Kháng nguyên hữu hình = ngưng kết Ngưng kết với kháng thể Kết cụm nếu không có kháng thể kết hợp CÁC LOẠI KHÁNG THỂ • Kháng thể đa dòng o Hỗn hợp tế bào B o Xác định nhiều epitope KN o Có thể phản ứng chéo với KN khác • Kháng thể đơn dòng o Từ một clone tế bào B (tương bào) o Đặc hiệu cho epitope KN o Ít nhạy cảm KT đa dòng PHẢN ỨNG KẾT TỦA • Phản ứng huyết đó hàng ngàn phân tử KN-KT liên kết với vị trí xác định tạo thành dạng mạng lưới quan sát mắt thường • Phản ứng thực hiện mơi trường lỏng hoặc gel PHẢN ỨNG KẾT TỦA TRÊN MƠI TRƯỜNG LỎNG • Trộn DD kháng nguyên với DD kháng thể dạng hòa tan theo tỷ lệ nhất định ống nghiệm • Phản ứng KN-KT cho kết tủa nhiều nhất vùng cân → hạt lơ lửng hoặc lắng xuống đáy ống • Quan sát phản ứng một dãy ống nghiệm với nồng độ KN-KT từ thấp đến cao PHẢN ỨNG KẾT TỦA TRÊN THẠCH Kháng nguyên hòa tan Khuếch tán vòng Mancini o o o o o KT hòa thạch Cho KN vào khuếch tán Kết tủa dạng vòng Vòng kết tủa lớn : KN nhiều Định lượng Kết tủa thạch Ouchterlony o o o Định tính, KN KT khuếch tán ngược chiều Cần nhiều huyết Khó đọc kết quả và cần nhiều giờ (24-48h) Precipitation reactions in gels PHẢN ỨNG KẾT TỦA Đường cong kết tủa Đường kết tủa xuất hiện tỷ lệ KN-KT tối ưu PHẢN ỨNG NGƯNG KẾT Agglutination • Kháng ngun hữu hình • Kháng thể phản ứng với kháng nguyên bề mặt của phân tử dẫn tới sự tụ tập → ngưng kết hạt • Phản ứng thực hiện lam kính hay ống nghiệm • Ứng dụng nhận định nhóm máu chẩn đoán bệnh truyền nhiễm ( KT Widal dùng kháng huyết chẩn đoán bệnh thương hàn)