Tạp chí Cơng nghệ Sinh học 16(2): 327-335, 2018 NGHIÊN CỨU TÁCH CHIẾT VÀ TÁC DỤNG TĂNG CƯỜNG MIỄN DỊCH CỦA CÁC POLYSACCHARIDE TỪ LÁ CÂY THUỐC XUÂN HOA PSEUDERANTHEMUM PALATIFERUM (NEES) RADLK Võ Hoài Bắc1,2,*, Trần Thị Vân Anh1,2, Nguyễn Thị Mai Phương1,2, Nguyễn Thị Thanh Hương3,2, Lê Văn Trường1,2 Viện Công nghệ sinh học, Viện Hàn lâm Khoa học Công nghệ Việt Nam Học viện Khoa học Công nghệ, Viện Hàn lâm Khoa học Công nghệ Việt Nam Viện Sinh thái Tài nguyên vinh vật, Viện Hàn lâm Khoa học Công nghệ Việt Nam * Người chịu trách nhiệm liên lạc E-mail: vhbac@ibt.ac.vn Ngày nhận bài: 08.9.2017 Ngày nhận đăng: 04.4.2018 TÓM TẮT Cây Xuân Hoa Pseuderanthemum palatiferum (Nees) Radlk thuốc sử dụng dân gian Việt Nam để chữa nhiều bệnh như: bệnh nhiễm khuẩn đường tiêu hóa, trĩ, chấn thương chảy máu, tiêu mủ vết thương, bệnh ung thư thời kỳ phát bệnh, bệnh gan Cho đến nay, nhiều nghiên cứu cấu trúc, đặc tính tác dụng dược lý chất thứ cấp từ Xuân Hoa như: flavonoid, palmitic acid, ß-sitosterol, triterpene saponin, stigmasterol, salicylic acid, lignan, triterpene, dipeptide nghiên cứu Polysaccharide nhóm hợp chất nhà khoa học giới quan tâm tác dụng quan trọng chúng tăng cường miễn dịch, kháng viêm, làm lành vết thương…Trong nghiên cứu này, tách chiết, tinh sơ xác định tác dụng tăng cường miễn dịch polysaccharide chiết xuất từ thuốc này: hàm lượng polysaccharide Xuân Hoa đạt 8,2 % (± 0,65) trọng lượng khô Các điều kiện chiết rút polysaccharide thích hợp xác định: dung môi ethanol 25%, tỷ lệ nguyên liệu/dung môi (1g mẫu khô/10ml), nhiệt độ chiết rút 70°C, thời gian chiết rút 12 Chế phẩm polysaccharide tinh TCA 10%, có độ đạt 77,8% (± 1,19 %) hiệu suất thu nhận chế phẩm polysaccharide đạt 1,79 % (± 0,24) Chuột bị suy giảm miễn dịch cyclophosphamide điều trị chế phẩm polysaccharide qua đường uống lượng 150mg/kg thể trọng chuột ngày làm tăng có ý nghĩa (p0,05) Từ kết nghiên cứu trên, đưa điều kiện thích hợp để chiết rút polysaccharide từ Xuân Hoa sau: dung môi ethanol 25%, tỷ lệ nguyên liệu dung mơi 1/10, nhiệt độ trích ly 70°C, 12 Với điều kiện chiết rút thích hợp, hàm lượng polysaccharide từ Xuân Hoa P Palatiferum đạt 8,2 (± 0,65) % Hình Ảnh hưởng nhiệt độ đến hàm lượng polysaccharide chiết xuất (ethanol 25%, 60°C 6h, tỷ lệ:1g mẫu/20ml dung mơi); p< 0,05 (sự sai khác có ý nghĩa chiết nhiệt độ 70°C (c) so sánh với chiết nhiệt độ khác (a, b, e) 330 Tạp chí Cơng nghệ Sinh học 16(2): 327-335, 2018 H àm lượng polysaccharide (% tương đối) 120 b 100 d c e 80 60 a 40 20 3h 6h 12h 9h 15h Thời gian (h) o Hình Thời gian tối ưu chiết rút polysaccharide (Ethanol 25%, 70 C 6h, tỷ lệ:1g mẫu/20ml dung mơi), p< 0,05: sai khác có ý nghĩa chiết thời gian 12h (d) so sánh với chiết nhiệt độ khác (a, b, c) Hàm lượng polysaccharide (g/100 g mẫu khô) 10 b c a 1/5 1/10 1/20 Tỷ lệ mẫu (g)/V dung môi (ml) o Hình Tỷ lệ dung mơi thích hợp chiết rút polysaccharide (Ethanol 25%, 70 C 12h, tỷ lệ:1g mẫu/20ml dung mơi), p< 0,05 (sự sai khác có ý nghĩa chiết tỷ lệ 1/10 (b) so sánh với chiết tỷ lệ dung môi 1/5 (a) Tinh polysaccharide Dịch chiết rút theo điều kiện tối ưu tủa ethanol 80% thu chế phẩm polysaccharide Chúng tiến hành loại protein thu polysaccharide phương pháp Sevag (Staub et al., 1965) phương pháp TCA (Oliveira et al.,1999), hai phương pháp loại protein thường sử dụng tinh polysaccharide, phương pháp thích hợp cho việc loại protein, polysaccharide loài khác tinh Kết bảng cho thấy sử dụng tinh phương pháp TCA 10% loại protein hiệu nhất, độ tinh chế phẩm polysaccharide đạt cao (77,8 ±1,19 %) hiệu suất thu thu hồi đạt cao (1,79 ± 0,24 %), cao so với phương pháp lại 331 Võ Hoài Bắc et al Kiểm tra độ chế phẩm polysaccharide phổ UV Để đánh giá độ chế phẩm polysaccharide chiết từ Xuân Hoa P palatiferum, trình chiết rút, đo phổ UV dịch chiết dung dịch polysaccharide sau tinh từ bước sóng 200-700nm Kết cho thấy chế phẩm polysaccharide tinh đạt độ cao đường biểu diễn phổ UV dung dịch đỉnh bước sóng từ 200-220nm thấp bước sóng 260 -280 nm Ngược lại, dịch chiết thơ có nhiều tạp chất nên phổ UV cao bước sóng từ 200- 600nm (Hình 5) Kết phù hợp với nghiên cứu nghiên cứu trước như: polysaccharide từ Pinus koraiensis (Pan et al., 2013), từ chè xanh (Cai et al., 2013) Bảng So sánh phương pháp loại protein Sevag TCA Phương pháp tinh Chế phẩm polysaccharide tinh thu từ 100 g nguyên liệu khô (g) Hàm lượng polysaccharide (%) Hiệu suất (%) 1,4 ± 0,09 36,78 ± 0,86 0,52 ± 0,09 5% 2,1 ± 0,16 11,04 ± 0,98 0,23 ± 0,16 10% 2,3 ± 0,24 77,8 ± 1,19 * 1,79 ± 0,24 20% 1,35 ± 0,11 34,07 ± 1,16 0,46 ± 0,11 Sevag TCA Chú thích: ∗: p< 0,05 (sự sai khác hàm lượng polysaccharide có ý nghĩa so với phương pháp tinh lại) Hình Đồ thị biểu diễn phổ UV polysaccharide chiết từ Xuân Hoa P palatiferum Đánh giá tác dụng tăng cường miễn dịch chế phẩm polysaccharide chuột tiêm cyclophosphamide Chuột lơ thí nghiệm đối chứng cân đói mốc thời gian sau thử nghiệm trước sau ngày sử dụng chế phẩm polysaccharide nhằm đánh giá tác dụng polysaccharide đến khối lượng chuột Kết theo dõi bảng Kết bảng cho thấy trọng lượng lô II, III giảm so với lô đối chứng sinh học (p