Nghiên cứu tạo dung dịch keo bạc nano để phòng trừ bệnh rụng lá corynespora trên cây cao su do nấm corynespora cassiicola

DANH MỤC CƠNG TRÌNH ĐÃ CƠNG BỐ [1] L T A Nhien, L T T Tien, N D Luong, L Q Luan, “Radiation synthesis of silver nano particles/chitosan for controlling leaf fall disease on rubber trees causing by Corynespora cassiicola” Journal of Nanomaterials, vol 2018, pp 1-9, 2018 https://doi.org/10.1155/2018/7121549 [2] Lê Thị An Nhiên, Trần Đức Trọng, Lê Thị Thủy Tiên, Nguyễn Đức Lượng, Lê Quang Luân, “Nghiên cứu sinh tổng hợp bạc nano từ dịch nội bào vi khuẩn Bacillus subtillis ứng dụng nơng nghiệp” Tạp chí Khoa học Công nghệ Nông nghiệp Việt Nam, vol 2(87), pp 109-116, 2018 [3] L T A Nhien, L N T Tam, D H Xo, L Q Luan, N D Luong, “Radiation synthesis of silver nano particles/chitosan against Corynespora cassiicola causing leaf fall disease on rubber trees,” Journal of Science and Technology, vol 55(1B), pp 29-40, 2017 https://doi.org/10.15625/25252518/55/1A/12381 [4] L T A Nhien, N T Vu, H T M Huong, H Quyen, L T T Tien, N D Luong, L Q Luan, “Study on the antifungal effect against plant pathogenesis funguses of silver nano particles synthesized by γ-rays radiation,” Proceedings of IWNA 2017, 2017 [5] Lê Thị An Nhiên, Nguyễn Đức Lượng, Lê Thị Thủy Tiên, Nguyễn Thanh Quang, “ hảo s t ảnh hư ng m i trư ng nu i c y, nhiệt ộ, p bảo vệ th c v t v thu c n s ph t tri n n m Corynespora cassiicola (Berk and Curt.) Wei cao su,” Tạp chí Bảo vệ thực vật, vol 5, pp 51-56, 2016 [6] Nguyễn Đức Lượng, Lê Thị An Nhiên, Lê Thị Thủy Tiên Nguyễn Thanh Quang, "Tìm hi u khả i kháng s Vi sinh v t i với n m Corynespora cassiicola cao su Hevea brasiliensis Müller Arg," Hội nghị Khoa học Cơng nghệ sinh học tồn quốc 2013, 2013 MỞ ĐẦU Cây cao su (Hevea brasiliensis) cơng nghiệp dài ngày có giá trị kinh t cao, cung c p mủ gỗ cho nhiều ngành công nghiệp Đ p ứng nhu cầu kinh t , c c dòng cao su ược l a chọn theo hướng sinh trư ng mạnh Cùng với s sinh trư ng mạnh cao su thiệt hại bệnh gây gia tăng Đ ng k nh t bệnh rụng Corynespora n m Corynespora cassiicola gây ra, bệnh xu t năm 1999 v ang có chiều hướng lan rộng gây hại cho dòng vơ tính cao su Với trạng dịch bệnh bùng phát thu c hố học trước mắt giữ vai trò chủ l c cơng tác trị bệnh Cũng nhiều loại hố ch t khác, thu c trừ n m C cassiicola gây bệnh rụng Corynespora có th gián ti p làm hại sức khỏe ngư i, m i e dọa cho hệ sinh th i, ồng th i làm giảm ch t lượng sản phẩm Gần ây, c ng nghệ nano ngày phát tri n ược ịnh hướng việc nâng cao ch t lượng v su t trồng, ó nano bạc ược tổng hợp b ng phư ng ph p sinh học phư ng ph p chi u xạ, ược coi sản phẩn an tồn góp phần cơng tác phòng trị bệnh trồng Cây cao su loại xu t có giá trị lại ang gặp phải khó khăn v n ề bệnh rụng Corynespora n m C cassiicola gây việc phòng trị bệnh b ng biện ph p an to n ược ặc biệt quan tâm Từ v n ề th c tiễn nêu trên, ề tài: “Nghiên cứu tạo dung dịch keo bạc nano phòng trừ bệnh rụng Corynespora cao su n m Corynespora cassiicola” ược th c Đối tượng nghiên cứu N m C cassiicola ược phân l p từ cao su bị bệnh Corynespora trồng Đồng Nai Mục tiêu nghiên cứu luận án Tìm hi u bệnh rụng Corynespora cao su n m C cassiicola gây v tìm phư ng ph p tạo ch phẩm phòng trừ bệnh rụng Corynespora có hiệu phòng thí nghiệm v cao su vư n m Ý nghĩa khoa học Lu n n c ịnh ược c c iều kiện th ch hợp cho qu trình tạo ch phẩm gồm huyền ph vi khuẩn B subtilis, B thuringiensis, dung dịch keo bạc nano từ dịch nội b o vi khuẩn B subtilis v dung dịch keo bạc nano - chitosan b ng phư ng ph p chi u c ịnh ược khả ức ch n m C cassiicola gây bệnh rụng l Corynepora cao su c c dung dịch iều kiện in vitro, khả phòng v trị bệnh rụng l Corynespora cao su th ng tuổi vư n m b ng dung dịch keo bạc nano - chitosan Ý nghĩa thực tiễn Lu n án góp phần tìm giải pháp phòng trị bệnh rụng Corynespora n m C cassiicola gây cao su Bước ầu thành công cao su tháng tuổi vư n m Việc ứng dụng nano bạc phòng v trị bệnh rụng l Corynespora cao su phư ng ph p mới, có hiệu quả, p ứng s v n ề sau: - Áp dụng công nghệ cao phục vụ sản xu t nông nghiệp - iệc giảm sử dụng loại thu c bảo vệ th c v t hóa học góp phần bảo vệ sức khỏe nơng dân Tính luận án c ịnh ược ảnh hư ng kh i lượng phân tử v ộ deacetyl hóa chitosan lên k ch thước hạt bạc nano Bước ầu c ịnh ược ảnh hư ng bạc nano lên hệ sợi n m C cassiicola b ng ảnh SEM Xây d ng ược quy trình ch tạo ược dung dịch keo bạc nano có kích thước hạt khác sử dụng chitosan làm ch t ổn ịnh b ng phư ng ph p chi u xạ Chứng minh ược hiệu dung dịch keo bạc nano - chitosan ch tạo ược i với bệnh rụng l Corynespora cao su vư n m Nội dung nghi n ứu Phân l p khảo sát s y u t ảnh hư ng lên s sinh trư ng n m C cassiicola gây bệnh rụng Corynespora cao su, từ ó ặt k hoạch tạo ch phẩm phòng ch ng chúng hảo s t khả i kh ng n m C cassiicola B subtilis B thuringiensis hảo s t khả tổng hợp bạc nano từ dịch nội b o vi khuẩn B subtilis có khả kh ng n m C cassiicola Ch tạo dung dịch keo bạc nano - chitosan có khả ức ch n m C cassiicola b ng phư ng ph p chi u xạ Khảo sát khả ức ch n m C cassiicola dung dịch keo bạc nano iều kiện in vitro Khảo sát khả phòng trị bệnh rụng Corynespora n m C cassiicola gây cao su tháng tuổi vư n m dung dịch keo bạc nano - chitosan có k ch thước hạt bạc 10 nm Bố cục Lu n n gồm 167 trang, 20 bảng, 68 hình v 84 t i liệu tham khảo, bao gồm c c phần: ầu; Chư ng 1: Tổng quan t i liệu; Chư ng 2: ph p; Chư ng 3: mục c ng trình t lu n v ki n nghị; Danh c ng b ; T i liệu tham khảo v Phụ lục CHƯƠNG 1.1 t v thảo lu n; Chư ng 4: t liệu v phư ng TỔNG QUAN NGHIÊN CỨU ượ v ệnh rụng Corynespora Bệnh rụng Corynespora n m Corynespora cassiicola (Berk & Curt.) Wei gây gây thiệt hại r t nghiêm trọng Việt Nam mà i với ngành cao su không nhiều qu c gia th giới N m C cassiicola có th gây thiệt hại nhiều ph n cao su vào giai oạn sinh trư ng có th xảy quanh năm Các dạng v t bệnh phổ bi n gồm có dạng ng c , dạng m phi n lá, gân phụ, gân 1.2 ượ v nano Nano bạc hạt bạc có k ch thước từ 0,1 n 100 nm Nano bạc thư ng dạng dung dịch keo với ch t bảo vệ polymer giúp cho hạt bạc không bị k t tụ Nano bạc ứng dụng khoa học công nghệ nano i với bạc tăng t nh diệt khuẩn, sát trùng khử m i, ược ứng dụng sản xu t rau 1.3 T nh h t kh ng khu n nano Bạc nano ược em tác nhân kháng vi sinh v t có tác dụng ức ch mạnh mẽ với phổ hoạt ộng rộng ình 1.1 C ch diệt vi khuẩn bạc nano th ng qua c c tư ng t c với protein v nucleic acid i với vi khuẩn, n m virus ình 1.2 C ch diệt n m bạc nano th ng qua t c ộng c c g c o y hóa t (ROS) n ty th v DNA ình 1.3 C c c ch t c ộng bạc nano n vi sinh v t CHƯƠNG VẬT LIỆU VÀ PHƯƠNG PHÁP 2.1 Vật iệu - Lá cao su thuộc dòng vơ tính RRI ược thu hái N ng trư ng cao su Cẩm Đư ng - tỉnh Đồng Nai, có bi u ặc trưng bệnh rụng Corynespora - Cây cao su tháng tuổi DVT RRIV 4, không bị bệnh Công ty TNHH Một Thành viên Gi ng trồng s cung c p - Chủng vi khuẩn B subtilis (ATCC6633) B thuringiensis (ATCC10792) Bộ môn Công nghệ sinh học - Khoa Kỹ thu t Hóa học - Đại học Bách khoa thành ph Hồ Chí Minh cung c p 2.2 2.2.1 Nội ung phư ng ph p nghi n ứu Phân lập khảo sát số ốả n nấm C cassiicola gây bệnh rụng Corynespora cao su Thu mẫu cao su bị bệnh rụng l Corynespora, phân l p n m C cassiicola c ịnh y u t ảnh hư ng lên s sinh trư ng n m C cassiicola m i trư ng nu i c y, nhiệt ộ, p 2.2.2 Khảo sát khả ă ức chế nấm C cassiicola vi khuẩn B subtilis B thuringiensis hảo s t v so s nh khả ức ch n m C cassiicola dung dịch vi khuẩn B subtilis v B thuringiensis 2.2.3 Khảo sát số y u tố ả ẩn B subtilis Khảo sát khả tổng hợp bạc nano dịch nội bào xác t bào vi khuẩn B subtilis; ảnh hư ng nhiệt ộ, p n trình tổng hợp bạc nano từ dịch nội bào vi khuẩn B subtilis Đồng th i khảo sát th i gian ổn ịnh dung dịch keo bạc nano ược tạo thành 2.2.4 Ch tạo dung dịch keo bạc nano - chitosan bằ xạ c ịnh y u t ảnh hư ng u n k ch thước hạt bạc nano ược tạo thành như: liều xạ bão hòa; nồng ộ AgNO3; nồng ộ, kh i lượng phân tử v ộ deacetyl hóa chitosan Đồng th i khảo s t ộ ổn ịnh ch phẩm 2.2.5 Khảo sát hiệu lực ức ch nấm C cassiicola dung dịch keo bạc ều kiện in vitro Khảo sát khả ức ch n m C cassiicola dung dịch keo bạc nano ược tổng hợp từ dịch nội bào vi khuẩn B subtilis Khảo sát khả ức ch n m C cassiicola dung dịch keo bạc nano - chitosan ược ch tạo b ng phư ng ph p chi u với c c k ch thước hạt bạc nano nồng ộ bạc nano kh c nhau; So sánh hiệu ức ch n m với dung dịch keo bạc nano ược tổng hợp từ dịch nội bào vi khuẩn B subtilis hảo s t ảnh hư ng nồng ộ v k ch thước hạt bạc nano dung dịch keo bạc nano - chitosan 2.2.6 n hình th i sợi n m C cassiicola Khảo sát khả ă ị ệnh rụng Corynespora ơm dung dịch keo bạc nano - chitosan hảo s t khả phòng v trị bệnh rụng l Corynespora n m C cassiicola gây cao su tháng tuổi (có tầng ổn ịnh thuộc dòng vơ tính RRIV khơng bị bệnh, sinh trư ng ồng ều v ược trồng vư n m th ng trước ti n hành thí nghiệm) vư n m b ng dung dịch keo bạc nano - chitosan có k ch thước hạt 10 nm 2.3 Phư ng ph p số iệu C c s liệu ược tính tốn xử lý máy tính b ng phần mềm Excel chư ng trình SPSS 16.0 Trắc nghiệm th ng kê sử dụng trắc nghiệm Duncan d a vào bảng ANOVA, bảng trung bình bảng so sánh khác biệt nghiệm thức T-Test ược d ng so sánh s khác biệt có ý nghĩa su t p = 0,05 hai giá trị mức xác  đồ tổng quát nội dung nghiên cứu: CHƯƠNG KẾT QUẢ VÀ THẢO LUẬN Phân lập khảo sát số ếu tố ảnh hưởng đến sinh trưởng n m C cassiicola gây bệnh rụng Corynespora cao su 3.1.1 m ị ệ ụ ập nấm C cassiicola 3.1 Chủng n m C cassiicola phân l p từ cao su bị bệnh K t ịnh danh b ng phư ng ph p giải trình t gen ITS ược th k t tra cứu BLAST SEARCH 3.1.2 Ả ng củ mô ng ô ấ Sau 10 ng y nu i c y m i trư ng thạch l cao su, n m C cassiicola sinh trư ng t t nh t ạt ng k nh t i a 90,00 mm v có chiều dài bào tử cao nh t (86,39 μm) (Bảng 3.1) Bảng 3.1 Đư ng k nh tản n m v chiều dài trung bình bào tử n m C cassiicola sau 10 ng y nu i c y c c m i trư ng kh c Môi trường Đường k nh tản n Chi u dài trung bình bào t (μ ) PDA 59,70 44,12 Th ch malt 61,80 54,03 Th ch cao su 90,00 86,39 3.1.3 Ả ng nhiệ ộ Sau 10 ng y nu i c y m i trư ng thạch l cao su, n m C cassiicola sinh trư ng t t nh t nhiệt ộ 29C ( ng k nh tản n m ạt 90 mm) (Bảng 3.2) Bảng 3.2 Đư ng k nh tản n m sau 10 ng y nu i c y Nhiệt độ (C) Đường k nh tản n 10C 18,13 c c nhiệt ộ kh c 22C 85,63 29C 90,00 35C 22,75 3.1.4 Ả ng pH Sau 10 ng y nu i c y, pH 6,5 ng kính tản n m C cassiicola ạt k ch thước lớn nh t (90,00 mm) (Bảng 3.3) Bảng 3.3 Đư ng k nh tản n m sau 10 ng y nu i c y pH Đường k nh tản n 3.2 4,5 62,33 (mm) 5,0 73,67 c c p kh c 5,5 76,17 6,0 77,33 6,5 90,00 7,0 88,56 Khảo sát khả n ng ức chế n m C cassiicola vi khu n B subtilis B thuringiensis ức ch n m C cassiicola vi khuẩn B subtilis (45,67 %) cao h n so với vi khuẩn B thuringiensis (33,04 %) (Bảng 3.4) Bảng 3.4 So s nh hiệu ức ch n m C cassiicola vi khuẩn B subtilis B thuringiensis sau 10 ng y nu i c y Đường kính tản n m (mm) 90,00a* 48,89b 60,27c Nghiệm thức Đối chứng B subtilis B thuringiensis *: c ộ ộ 3.3 3.3.1 ị Hiệu lực ức chế (%) 0,00c 45,67b 33,04a ự ệ Một số yếu tố ảnh hưởng tới trình tổng hợp bào vi khu n B subtilis Q ự ố ị ộ nano từ dịch nội ẩ Ở c c nghiệm thức sử dụng dịch nội bào phần xác t bào vi khuẩn B subtilis ều xu t bước sóng h p thụ c c ại ặc trưng bạc nano 415 nm Tuy nhiên m t ộ quang nghiệm thức sử dụng dịch nội bào vi khuẩn ạt 0,65 cao h n 2,5 lần so với nghiệm thức sử dụng phần xác t bào (Hình 3.1) Mật độ quang Như v y, dung dịch keo bạc nano ược tạo chủ y u từ dịch nội bào vi khuẩn Bướ sóng n Hình 3.1 Quang phổ h p thụ dịch nội b o v c t b o vi khuẩn B.subtilis sau qu trình sinh tổng hợp bạc nano 3.3.2 Ả ng pH Dung dịch keo bạc nano ược tạo th nh p 10 có bước sóng h p thụ c c ại 412 nm (Hình 3.2) Tại bước sóng 420 nm, m t ộ quang ạt giá trị cao nh t (1,12) v k t ảnh TE p cho th y k ch thước hạt bạc nano hình th nh 10 l nhỏ nh t, trung bình 7,14 nm Như v y p 10 l p t t nh t cho Mật độ quang trình tổng hợp bạc nano từ B subtilis Bướ sóng n Hình 3.2 Quang phổ h p thụ dung dịch keo bạc nano hình th nh khác 3.3.3 Ả ng nhiệ ộ 10 c cp Ở nhiệt ộ 80C, dung dịch keo bạc nano ược tổng hợp từ dịch nội b o vi khuẩn B subtilis có bước sóng h p thụ c c ại l 415 nm, m t ộ quang ạt giá Mật độ quang trị cao nh t (1,45) (Hình 3.3) v hạt bạc nano có k ch thước nhỏ nh t (7,78 nm) Bướ sóng n Hình 3.3 Quang phổ h p thụ dung dịch sau phản ứng 3.3.4 Th i gian c c nhiệt ộ ịnh dung dịch keo bạc nano K t o quang phổ h p thụ dung dịch keo bạc nano ược tổng hợp từ dịch nội b o vi khuẩn B subtilis ( ình 3.4) cho th y m t ộ quang không thay ổi nhiều th i gian 20 ng y, giảm từ 1,45 1,23 ng y ầu tiên xu ng ng y thứ 20 Như v y dung dịch keo bạc nano ược tổng hợp từ dịch nội Mật độ quang b o vi khuẩn B subtilis có ộ ổn ịnh khoảng 20 ng y Bướ sóng n ình 3.4 Quang phổ h p thụ dung dịch keo bạc nano theo th i gian 3.4 Chế t o ung ị h k o b c nano - chitosan phư ng ph p hiếu x 3.4.1 Liều xạ bão hòa dung dịch bạc có nồ 11 ộ bạc nitrate khác Nồng ộ bạc nitrate ược bổ sung dung dịch chi u l 1,0; 2,5; 5,0 v 10,0 m có liều xạ chuy n hóa b o hòa tư ng ứng l 8, 12, 16 v 28 kGy, với bước sóng h p thụ c c ại tăng dần từ 397,5 lên 405,5 nm ch thước trung bình hạt nano bạc tăng dần theo nồng ộ bạc nitrate, l 5,18; 7,13; 8,69 v 10,06 nm (Bảng 3.5) Bảng 3.5 Đặc i m dung dịch keo bạc nano - chitosan theo nồng ộ bạc nitrate Nồng độ AgNO3 (mM) 1,0 2,5 5,0 10,0 3.4.2 Ả i u o h a kG 12 16 28 λmax (nm) 397,5 402,5 403,0 405,5 1,26 1,20 1,03 1,02 ộ chitosan lên í ng nồ K h thước h t (nm) 5,18 ± 0,18 7,13 ± 0,34 8,69 ± 0,50 10,06 ± 0,57 OD hi bổ sung chitosan với nồng ộ 1, 2, v ớc hạt nano v o dung dịch keo bạc nano, k ch thước trung bình hạt bạc nano tạo th nh giảm dần với s gia tăng nồng ộ chitosan, l 10,06; 8,60; 7,83 v 6,40 nm (Bảng 3.6) Bảng 3.6 Ảnh hư ng nồng ộ chitosan lên k ch thước hạt bạc nano Nồng độ chitosan (%) K h thước h t (nm) 10,06 ± 0,57 8,60 ± 0,25 7,83 ± 0,27 6,40 ± 0,26 3.4.3 Ả ng khố hạt nano hi bổ sung chitosan ng phân tử (Mw) chitosan lên í ớc với kh i lượng phân tử 100, 250 550 kDa v o dung dịch keo bạc nano, k ch thước trung bình hạt bạc nano tạo th nh giảm dần kh i lượng phân tử tăng, l 14,36; 11,72 v 10,13 nm (Bảng 3.7) Bảng 3.7 Ảnh hư ng kh i lượng phân tử chitosan lên k ch thước hạt bạc nano Mw chitosan (kDa) K h thước h t (nm) 3.4.4 Ả 100 14,36 ± 0,21 250 11,72 ± 0,33 500 10,13 ± 0,21 ó ộ deacetyl hóa (DD) khác lên kích ớc hạt bạc nano 12 hi bổ sung chitosan với ộ deacetyl hóa 7B, 8B, 9B v 10B v o dung dịch keo nano bạc, k ch thước trung bình hạt nano bạc tạo th nh tăng dần theo ộ deacetyl hóa, l 8,67; 10,06; 10,78 v 11,88 nm (Bảng 3.8) Bảng 3.8 Ảnh hư ng ộ deacetyl hóa chitosan lên k ch thước hạt bạc nano Độ deacetyl (%) K h thước h t trung bình (nm) 3.4.5 Th i gian gian 70,0 80,0 90,0 99,9 8,67 ± 0,42 10,06 ± 0,57 10,78 ± 0,23 11,88 ± 0,21 ịnh ị bạc nano - chitosan theo th i Dung dịch keo bạc nano - chitosan có ộ ổn ịnh khoảng 12 th ng Cụ th , mẫu có OD c c ại c c ỉnh 404, 405, 410 v 411 l 1,12; 1,20; 1,00 v 1,10 tư ng ứng với th i gian bảo quản mẫu 0, 3, 12 tháng nhiệt ộ Mật độ quang phòng (Hình 3.5) Bướ sóng n Hình 3.5 Quang phổ h p thụ dung dịch keo bạc nano - chitosan theo th i gian lưu trữ 3.5 3.5.1 Hiệu lực ức chế n m C cassiicola dung dịch keo b c nano u kiện in vitro ệ ự ức ch ấm ủ ịch keo bạ t ng h p t dịch nội bào vi khuẩn B subtilis c ộ Dung dịch keo bạc nano ược tổng hợp từ dịch nội b o vi khuẩn B subtilis có hiệu l c ức ch n m C cassiicola cao nh t ạt 59,46 t t c c nồng ộ v hiệu l c kh ng n m nồng ộ 80 ppm (Bảng 3.9 Hình 3.6) 13 Bảng 3.9 ức ch n m C cassiicola dung dịch keo bạc nano ược tổng hợp từ dịch nội b o vi khuẩn B subtilis c c nồng ộ kh c sau 10 ng y nu i c y Nồng độ pp Đường k nh tản n Hiệu lực ức chế (%) 74,00a* 0,00e ĐC b 57,89 21,77d 20 44,56c 39,78c 40 d 39,00 47,30b 60 e 30,00 59,46a 80 *: c ị ự ệ ự ộ ộ ố ình 3.6 Tản n m C cassiicola iều kiện m i trư ng có bổ sung dung dịch keo bạc nano ược tổng hợp từ dịch nội b o vi khuẩn B subtilis c c nồng ộ kh c 3.5.2 ệ ự ức ch ấm ủ ị í ớc hạt bạc nano khác Dung dịch keo bạc nano - chitosan có k ch thước 5, 10, 15 nm nồng ộ 50 ppm ều có khả kh ng n m với hiệu l c ức ch l 100,00; 62,22 v 52,08 % sau ngày nuôi c y (Bảng 3.10 Hình 3.7) Bảng 3.10 Khả ức ch n m C cassiicola dung dịch keo bạc nano - chitosan c c k ch thước khác sau ngày nuôi c y K h thước h t b c nano (nm) Hiệu lực ức chế (%) ĐC 0,00d* 100,00a 10 62,22b 15 52,08c *: c ị ự ệ ự ộ ộ ố 14 Hình 3.7 Tản n m C cassiicola sau ng y nu i c y m i trư ng thạch cao su bổ sung dung dịch keo bạc nano - chitosan c c k ch thước khác ệ 3.5.3 ự ức ch ớ ấm ủ ị - ộ Dung dịch keo bạc nano - chitosan (10 nm) có hiệu l c ức ch n m C cassiicola t t c c nồng ộ v hiệu l c ức ch n m cao nh t ạt 100,00 nồng ộ 90 ppm iều kiện in vitro (Bảng 3.11 Hình 3.8) Bảng 3.11 Khả ức ch n m C cassiicola dung dịch keo bạc nano - chitosan (10 nm) nồng ộ sau ng y nu i c y Nồng độ b c nano Đường kính tản n m Hiệu lực ức chế (ppm) ĐC 10 30 50 70 90 *: c ộ ộ (mm) 90,00a* 84,33b 73,33c 30,25d 7,50e 0,00g ị ự (%) 0,00g 6,29e 18,52d 66,39c 91,67b 100,00a ệ ự ố ình 3.8 Tản n m C cassiicola iều kiện m i trư ng có bổ sung dung dịch keo bạc nano - chitosan (10 nm) c c nồng ộ kh c 15 3.5.4 So sánh hiệu lực ức ch nấm C cassiicola dung dịch keo bạc c t ng h p t dịch nội bào vi khuẩn B subtilis với dung dịch keo bạc nano - chitosan Ở c ng nồng ộ lý 90 ppm, dung dịch keo bạc nano - chitosan (10 nm) có khả ức ch n m C casiicola (Hiệu l c ức ch 100,00 %) cao h n dung dịch keo bạc nano ược tổng hợp từ dịch nội b o vi khuẩn B subtilis (Hiệu l c ức ch 66,30 %) (Bảng 3.12 Hình 3.9) Nên ch ng t i chọn dung dịch keo bạc nano - chitosan (10 nm) cho c c th nghiệm sau Bảng 3.12 So s nh hiệu l c ức ch n m dung dịch keo bạc nano (A - dung dịch keo bạc nano - chitosan v B - dung dịch keo bạc nano ược tổng hợp từ dịch nội b o vi khuẩn B subtilis) Nồng độ Đường k nh A tản n B (mm) T-Test Hiệu lực ức A chế (%) B T-Test ĐC 90,00 10 ppm 84,50 30 ppm 73,67 50 ppm 30,85 70 ppm 7,67 90 ppm 0,00 90,00 79,67 61,18 51,67 42,50 30,33 0,00 0,00 - + 6,11 11,48 + + 18,15 32,02 + + 65,72 42,59 + + 91,48 52,78 + + 100,00 66,30 + (-) h c biệt kh ng có ý nghĩa ( ) h c biệt có ý nghĩa ình 3.9 Tản n m C cassiicola m i trư ng có bổ sung dung dịch keo bạc nano với c c nồng ộ khác sau 10 ngày nuôi c y (A) Bổ sung dung dịch keo bạc nano - chitosan (10 nm); (B) Bổ sung dung dịch keo bạc nano ược tổng hợp từ dịch nội b o vi khuẩn B subtilis 3.5.5 Ả ủ - ộ í 16 ạ ủ ấm cassicola ị K t quan sát hình SEM (Hình 3.10) cho th y: nghiệm thức i chứng không xử lý dung dịch keo bạc nano, sợi n m có hình dạng bình thư ng Nghiệm thức có phun dung dịch keo bạc nano 15 nm - 7,5 ppm, sợi n m bắt ầu khơ, co rút, hình dạng rõ ràng Nghiệm thức có phun dung dịch keo bạc nano 15 nm - 12,5 ppm, sợi n m kh , h i d nh lại với sợi n m bắt ầu có tượng co lại, sợi n m bi n dạng Nghiệm thức có phun dung dịch keo bạc nano 10 nm - 7,5 ppm, 10 nm - 12,5 ppm nm - 7,5 ppm sợi n m b t lại khơ nhiều h n, kh ng hình dạng sợi n m ban ầu Nghiệm thức có phun dung dịch keo bạc nano nm - 12,5 ppm, sợi n m bi n dạng, khơ hoàn toàn Như v y, nồng ộ bạc nano cao, kích thước hạt bạc nhỏ khả ức ch diệt n m cao Hình 3.10 Ảnh SE sợi n m C cassiicola sau phun dung dịch keo bạc nano - chitosan theo nồng ộ v k ch thước hạt bạc nano khác 3.6 6.6.1 Hiệu lự ph ng ệnh v trị ệnh rụng Corynespora cao su vườn ung ị h k o b c nano - chitosan ệ Hiệu lự Ở nghiệm thức i chứng âm kh ng có cao su bị nhiễm bệnh th i i m 28 ngày sau chủng bệnh (NSCB) theo dõi chứng tỏ khơng có s nhiễm chéo nghiệm thức 17 Về tỉ lệ bệnh (Bảng 3.13): sau 28 ng y chủng bệnh, tỉ lệ bị bệnh giảm dần tăng nồng ộ lý dung dịch keo bạc nano - chitosan Cụ th , lý dung dịch keo bạc nano - chitosan c c nồng ộ 0,0; 0,5; 1,0 v 1,5 ppm nghiệm thức sử dụng chitosan 16,0 ppm tỉ lệ bệnh ạt 100,00 cao h n so với tăng nồng ộ lý lên 2,0 v 2,5 ppm tỉ lệ bị bệnh ạt l 63,33 v 53,33 Về tỉ lệ bệnh l (Bảng 3.14): sau 28 ngày chủng bệnh, ngiệm thức chứng dư ng có 100,00 i l bị nhiễm bệnh, nghiệm thức lý với dung dịch keo bạc nano - chitosan nồng ộ 0,5 ppm, 1,0 ppm v có tỉ lệ bị nhiễm bệnh l 100,00 v 61,36 ; i chứng chitosan nồng ộ 1,5; 2,0 2,5 ppm có tỉ lệ bị nhiễm bệnh tư ng ứng 51,14 %; 42,89 % 34,27 % Về khả sinh trư ng cao su (Bảng 3.15): sau 28 ngày chủng bệnh, nghiệm i chứng âm phát tri n bình thư ng, chiều cao tăng trư ng ạt 12,28 cm; ạt 7,72 cm; nghiệm thức i chứng dư ng chiều cao tăng trư ng c c nghiệm thức có lý dung dịch keo bạc nano - chitosan với nồng ộ 2,0 ppm v 2,5 ppm chiều cao tăng trư ng ạt 11,85 cm v 12,45 cm, kh ng có s kh c biệt mặt ý nghĩa th ng kê so với nghiệm thức i chứng âm Bảng 3.13 Ảnh hư ng c c nồng ộ dung dịch keo bạc nano-chitosan (10nm) n tỷ lệ cao su bị nhiễm bệnh Nồng độ nano (ppm) 0,0 ĐC-) 0,0 ĐC+ 16,0 ppm CTS 0,5 1,0 1,5 2,0 2,5 *: c ộ ộ NSCB 0,00a* 46,67d 43,33cd 43,33cd 36,67bc 33,33b 6,67a 3,33a T ệ ị nhiễm bệnh (%) 14 NSCB 21 NSCB 0,00a 0,00a c 100,00 100,00d c 100,00 100,00d c 100,00 100,00d c 100,00 100,00d c 100,00 100,00d b 46,67 56,67c b 43,33 46,67b ị ự ố 18 28 NSCB 0,00a 100,00d 100,00d 100,00d 100,00d 100,00d 63,33c 53,33b ệ ự Bảng 3.14 Ảnh hư ng c c nồng ộ dung dịch keo bạc nano-chitosan (10nm) n tỷ lệ l cao su bị nhiễm bệnh Nồng độ nano (ppm) 0,0 ĐC-) 0,0 ĐC+ 16,0 ppm CTS 0,5 1,0 1,5 2,0 2,5 *: c ộ ộ NSCB 0,00a* 50,57g 35,23e 37,02e 22,25d 13,65c 10,53bc 9,47b ị T ệ ị nhiễm bệnh (%) 14 NSCB 21 NSCB 28 NSCB 0,00a 0,00a 0,00a g g 74,53 100,00 100,00g 51,31e 75,25e 100,00g e e 55,31 77,25 100,00g d d 36,41 47,49 61,36e 29,58c 41,67c 51,14d b b 22,38 31,10 42,89c b b 21,89 28,29 34,27b ự ệ ự ố Bảng 3.15 Chiều cao tăng trư ng cao su sau chủng bệnh ược lý trước b ng dung dịch keo bạc nano - chitosan (10 nm) c c nồng ộ kh c Nồng độ ĐC(ppm) Chi u cao 12,28a* (cm) ĐC+ 16,0 ppm CTS 7,72c 7,83c 0,5 1,0 1,5 2,0 2,5 9,42bc 10,02abc 10,19abc 11,85ab 12,45a *: c ị ộ hàng ự ố 19 ệ ự Hình 3.11 Cây cao su vư n m ược lý dung dịch keo bạc nano - chitosan (10 nm) c c nồng ộ kh c sau 28 ng y sau chủng bệnh (a, b, c, d, e, g v h 0,0 ppm (ĐC âm); 0,0 ppm (ĐC dư ng), 16,0 ppm CTS 0,5; 1,0; 1,5; 2,0 2,5 ppm) (phòng bệnh) Như v y, dung dịch ệ ả 6.6.2 Hiệu lự Ở nghiệm thức ệ ố c bạc 10 -chitosan v ồng ộ ppm ị ệ i chứng âm khơng có cao su bị nhiễm bệnh th i i m 28 ngày sau xử lý (NSXL) dung dịch keo bạc nano - chitosan theo dõi chứng tỏ s nhiễm chéo nghiệm thức 25 cm 20 25 cm t ược ghi nh n bảng 3.16; 3.17 v 3.18 cho th y th i i m 28 ng y sau lý trị bệnh b ng dung dịch keo bạc nano - chitosan (10 nm), c c nghiệm thức lý dung dịch keo bạc nano - chitosan c c nồng ộ 2,5; 5,0; 7,5 ppm khả trị bệnh th p (tỉ lệ bị bệnh giảm từ 50,00 % xu ng tư ng ứng l 30,00; 26,67; 23,33 v tỉ lệ l bị bệnh giảm từ 50,00 % xu ng tư ng ứng 31,48; 28,28; 24,52 ) Tuy nhiên, nghiệm thức lý dung dịch keo bạc nano - chitosan với nồng ộ 10,0 v 12,5 ppm hiệu trị bệnh tăng lên (tỉ lệ bị bệnh giảm mạnh từ 50,00 % xu ng tư ng ứng 13,33 v 6,67 v tỉ lệ l bị bệnh giảm từ 50,00 % xu ng tư ng ứng l 13,23 v 6,75 %) Về khả sinh trư ng cao su (Bảng 3.18): Sau 28 ng y lý dung dịch keo bạc nano - chitosan nghiệm i chứng âm phát tri n bình thư ng, chiều cao tăng trư ng ạt 13,43 cm; dư ng chiều cao tăng trư ng ạt 9,75 cm; nghiệm thức i chứng c c nghiệm thức có lý dung dịch keo bạc nano - chitosan với nồng ộ 2,5; 5,0; 7,5; 10,0 v 12,5 ppm chiều cao tăng trư ng ạt tư ng ứng 12,87; 12,88; 12,13; 12,85 v 13,15 cm, kh ng có s kh c biệt mặt ý nghĩa th ng kê so với nghiệm thức i chứng âm Bảng 3.16 Ảnh hư ng c c nồng ộ dung dịch keo bạc nano-chitosan (10nm) n tỷ lệ cao su bị nhiễm bệnh Nồng độ nano-chitosan (ppm) 0,0 ĐC-) 0,0 ĐC+ 80,0 ppm CTS 2,5 5,0 7,5 10,0 12,5 *: c T lệ NSXL a* 0,00 50,00b 50,00b 50,00b 50,00b 53,33b 53,33b 50,00b NSXL a 0,00 100,00e 46,67d 46,67d 43,33cd 40,00bcd 36,67bc 33,33b ị ộ ộ ị nhiễm bệnh (%) 14 NSXL a 28 NSXL a 0,00 100e 46,67d 43,33d 40,00cd 36,67cd 33,33bc 26,67b 0,00a 100,00g 30,33e 30,00e 26,67de 23,33d 13,33c 6,67b 0,00 100,00e 36,67d 36,67d 33,33cd 30,00cd 26,67c 16,67b ự ệ ố 21 21 NSXL ự Bảng 3.17 Ảnh hư ng c c nồng ộ dung dịch keo bạc nano-chitosan (10nm) n tỷ lệ l cao su bị nhiễm bệnh Nồng độ b c nano-chitosan (ppm) 0,0 ĐC-) 0,0 ĐC+ 80,0 ppm CTS 2,5 5,0 7,5 10,0 12,5 T lệ NSXL a* 0,00 50,32b 51,23b 51,54b 49,81b 50,22b 51,74b 50,19b *: giá trị cộ ị nhiễm bệnh (%) NSXL 14 NSXL a a 0,00 73,03g 47,89e 47,75e 43,52de 40,24cd 36,11bc 33,59b 21 NSXL a 0,00 100,00e 44,29d 44,44d 40,54d 35,32c 33,13c 28,06b 0,00 100,00g 36,47e 36,33e 34,27de 30,87cd 26,73c 16,56b 28 NSXL 0,00a 100,00d 31,60c 31,48c 28,28c 24,52c 13,23b 6,75ab ự khác th khác m t thống kê v i p