CHUYÊN đề CÔNG NGHỆ di TRUYỀN ĐỘNG vật và bài tập CÔNG NGHỆ DI TRUYỀN si06

HỘI THẢO KHOA HỌC CHUYÊN ĐÊ CÔNG NGHỆ DI TRUYÊN ĐỘNG VẬT VÀ BÀI TẬP CÔNG NGHỆ DI TRUYÊN CHUYÊN ĐỀ CÔNG NGHỆ Di TRUYÊN ĐỘNG VẬT VÀ BÀI TẬP CƠNG NGHỆ DI TRUN A PHẦN MỞ ĐẦU Cơng nghệ sinh học bước tiến quan trọng nỗ lực lâu dài, có nhiều lĩnh vực cơng nghệ sinh học khác theo đối tượng ứng dụng công nghệ sinh học phân tử, công nghệ sinh học thực vật, công nghệ sinh học động vật… Công nghệ sinh học có ứng dụng rộng rãi y dược, lương thực, thực phẩm, lượng, hóa chất, vật liệu nông lâm ngư nghiệp, bảo vệ môi sinh ngày thể thao đỉnh cao công nghệ sinh học áp dụng cách hiệu Cơng nghệ sinh học động vật (Animal Biotechnology) lĩnh vực chủ yếu công nghệ sinh học công nghệ di truyền sở ứng dụng kỹ thuật khoa học đại mang tính cơng nghệ vào tế bào động vật Tế bào coi đối tượng trung tâm vơ quan trọng, chúng có cấu trúc phức tạp tinh vi, thực trình trao đổi chất nhà máy hóa học với nhiều ưu việt Do tế bào có nhiều ưu nên công nghệ sinh học sử dụng tế bào làm nhà máy sản xuất công cụ thử nghiệm Giới hạn chuyên đề giới thiệu thao tác ứng dụng công nghệ di truyền tế bào động vật, với thời gian soạn thảo ngắn, trình độ hạn chế chuyên đề khơng tránh khỏi sai sót, thân tơi mong nhận đóng góp thầy giáo bạn đồng nghiệp để chuyên đề hoàn thiện Một số câu hỏi sưu tầm đưa vào phần câu hỏi tự giải chưa có hướng dẫn, xin gởi đến thầy tham khảo đóng góp lời giải, xin chân thành cảm ơn ! B PHẦN NỢI DUNG I LÝ THUYẾT Ni cấy tế bào động vật 1.1 Lược sử nuôi cấy tế bào động vật - Nuôi cấy tế bào động vật triển khai lần năm 1907, 40 năm sau thực triển khai cách quy mô - Những năm đầu thập kỷ 50 kỷ XX, tế bào động vật có vú ni với số lượng lớn để nuôi chủng virus gây bại liệt ( Poliomyelite virus) dùng để chế vacxin phòng chống bại liệt - Nuôi cấy tế bào người để nhân nuôi nhiều chủng virus khác nhằm sản xuất kháng thể đặc hiệu interferon Sự phát triển phương pháp nuôi cấy tế bào động vật người dẫn đến phát triển công nghệ vacxin chế phẩm miễn dịch - Kỹ thuật nuôi cấy tế bào động vật tạo hội để nghiên cứu tế bào ung thư, phân loại khối u ác tính, mơ hình thực nghiệm để khảo sát tác động hóa chất, xác định tương hợp mơ cấy ghép nghiên cứu tế bào đặc biệt tương tác chúng - Năm 1907, Harrison người nuôi cấy thành công mảnh mô phôi ếch dịch bạch huyết với kỹ thuật “giọt treo” (Hanging drop) Năm 1923, Carel hồn thiện kỹ thuật ni cấy tế bào bình thủy tinh (in vitro), dễ tiệt trùng tạo điều kiện cho tế bào phát triển tốt Nhưng phải chờ đến năm 1960, hồn thiện mơi trường ni cấy nhân tạo kỹ thuật ni cấy tế bào động vật phát triển mạnh ứng dụng vào nhiều ngành công nghệ sinh học 1.2 Đặc điểm tế bào động vật 1.1.2 Đặc điểm cấu trúc tế bào động vật Hình Cấu trúc tế bào động vật - Trong cấu trúc tế bào động vật khơng có thành xenlulơzơ, khơng có lục lạp, hóa dị dưỡng, khơng có khơng bào trung tâm (nếu có nhỏ).Có trung thể, chất dự trữ glycogen phân bào có phân tế bào chất eo thắt trung tâm - Các tế bào dịch huyền phù: Tế bào hồng cầu bạch huyết mơ liên kết khơng điển hình dạng thể lỏng Các tế bào máu dịch bạch huyết tế bào dịch huyền phù (suspension cells), khơng dính bám chúng sinh trưởng ni cấy in vitro Các tế bào khơng dính bám khơng đòi hỏi bề mặt để sinh trưởng Chẳng hạn, tế bào bạch huyết (lymphocytes) bắt nguồn từ mô bạch huyết tế bào khơng dính bám có hình cầu đường kính từ 10-20 µm Chúng nuôi cấy môi trường dịch lỏng theo phương thức tương tự vi khuẩn - Các tế bào dính bám: Hầu hết tế bào động vật bình thường tế bào dính bám, chúng cần có bề mặt để gắn vào sinh trưởng Trong ứng dụng, người ta sử dụng rộng rãi loại tế bào dính bám tế bào biểu mơ nguyên bào sợi (fibroblast) Các tế bào dính bám cần có bề mặt ẩm để sinh trưởng thủy tinh plastic Các tế bào động vật thường sử dụng nuôi cấy: tế bào bạch huyết, tế bào biểu mơ, ngun bào sợi Hình 2: Các tế bào động vật thường sử dụng nuôi cấy (a) tế bào bạch huyết, (b) tế bào biểu mô, (c) nguyên bào sợi - Sự liên kết tế bào : Các tế bào động vật tế bào eukaryote, chúng liên kết với nguyên liệu gian bào để tạo thành mô, quan hệ quan Các tế bào thường kết nối, tương tác thông tin với thông qua tiếp xúc vật lí trực tiếp Mơ động vật thường phân chia theo bốn nhóm: Biểu mơ (epithelium): tạo thành lớp phủ lớp lót bề mặt tự thể, bên bên ngồi Mơ liên kết (connective tissue): tế bào thường bao bọc thể gian bào rộng (kéo dài), chất lỏng, rắn rắn Mô (muscle): Các tế bào mô thường thon dài gắn với thành phiến bó mơ liên kết Mơ chịu trách nhiệm cho hầu hết chuyển động động vật bậc cao Mô thần kinh (nerve): Các tế bào mơ thần kinh gồm có thân bào chứa nhân nhiều phần mở rộng dài mảnh gọi sợi Các tế bào thần kinh kích thích dễ dàng truyền xung động nhanh - Các mối nối tế bào mô động vật Mối nối kín: Màng tế bào tế bào liền kề bị nén khít, gắn kết nhờ Protein đặc hiệu Tạo thành đường bịt kín liên tục quanh tế bào, mối nối kín ngăn cản rò rỉ dịch ngoại bào qua lớp tế bào biểu mô Ghép nối desmosome (thể nối): Thể nối có chức đinh tán, xiết tế bào thành Thể nối neo vào tế bào chất nhờ sợi trung gian cấu tạo từ protein keratin Mối nối hở (các mối nối thông tin): Tạo kênh tế bào chất từ tế bào đến tế bào liền kề Các mối nối hở cấu tạo từ Protein màng, bao lấy lỗ qua phân tử lưu thơng từ tế bào sang tế bào khác 1.3 Các ưu điểm nuôi cấy tế bào động vật - Hệ thống tế bào động vật “nhà máy tế bào” thích hợp cho việc sản xuất phân tử phức tạp kháng thể dùng làm thuốc phòng bệnh, điều trị chẩn đoán - Các tế bào động vật đáp ứng q trình hậu dịch mã xác sản phẩm protein sinh-dược (biopharmaceutical) - Sản xuất viral vector dùng liệu pháp gen (biến nạp gen bình thường vào tế bào soma mang gen tương ứng bị khiếm khuyết để chữa bệnh khiếm khuyết gây ra) Các mục đích liệu pháp bệnh ung thư, hội chứng suy giảm miễn dịch (HIV), chứng viêm khớp, bệnh tim mạch xơ hóa u nang - Sản xuất tế bào động vật để dùng làm chất in vitro nghiên cứu độc chất học dược học - Phát triển công nghệ mô phát sinh quan để sản xuất quan thay nhân tạo sinh học, dụng cụ trợ giúp, chẳng hạn : + Da nhân tạo để chữa bỏng + Mô gan để chữa bệnh viêm gan + Đảo Langerhans để chữa bệnh tiểu đường 1.4 Một số hạn chế nuôi cấy tế bào động vật Mặc dù tiềm ứng dụng nuôi cấy tế bào động vật lớn, việc nuôi cấy số lượng lớn tế bào động vật thường gặp khó khăn sau: - Các tế bào động vật có kích thước lớn cấu trúc phức tạp tế bào vi sinh vật - Tốc độ sinh trưởng tế bào động vật chậm so với tế bào vi sinh vật.Vì thế, sản lượng chúng thấp việc trì điều kiện ni cấy vơ trùng thời gian dài thường gặp nhiều khó khăn - Các tế bào động vật bao bọc màng huyết tương, mỏng nhiều so với thành tế bào dày thường thấy vi sinh vật tế bào thực vật, kết chúng dễ bị biến dạng vỡ - Nhu cầu dinh dưỡng tế bào động vật chưa xác định cách đầy đủ, môi trường nuôi cấy thường đòi hỏi bổ sung huyết máu đắt tiền - Tế bào động vật phần mơ tổ chức (phân hóa) thể đơn bào riêng biệt vi sinh vật - Hầu hết tế bào động vật sinh trưởng gắn bề mặt 1.5 Kỹ thuật nuôi cấy tế bào động vật 1.5.1 Các u cầu ni cấy tế bào: Có bốn yêu cầu để nuôi cấy tế bào thành công - Nhà xưởng, trang thiết bị : Các trang thiết bị tối thiểu cần phải có: Tủ an toàn sinh học, máy ly tâm chuyên sử dụng cho nuôi cấy tế bào, tủ ấm CO 2, bể ổn nhiệt, kính hiển vi Đối với tế bào linh trưởng, tế bào ung thư, tế bào bị nhiễm Mycoplasma cần ni cấy tủ an tồn sinh học cấp độ trở lên Hệ thống nuôi cấy cần đạt tiêu chuẩn bảo vệ người làm việc tế bào không bị lây nhiễm, thiết kế theo u cầu an tồn phòng thí nghiệm (ISO, GMP) - u cầu vơ trùng : Tủ an tồn sinh học cần phải hoạt động trước bắt đầu làm việc 15 phút để làm khơng khí bị nhiễm từ trước Khu vực làm việc bên tủ cấy phải khử trùng ( thường sử dụng cồn 70o isopropanol) Các nguyên vật liệu cần khử trùng trước đưa vào khu vực làm việc (hấp sấy tiệt trùng, lau cồn bật đèn tím) Người làm việc phải mặc trang phục bảo hộ đầy đủ - Nguồn nguyên vật liệu phải đạt tiêu chuẩn Các tế bào nhạy cảm điều kiện dinh dưỡng, pH, điều kiện ni cấy… Do đó, cần chọn nguồn ngun vật liệu phù hợp Các vật liệu dùng nuôi cấy nên kiểm tra xác nhận chất lượng đảm bảo không bị nhiễm khuẩn, đặc biệt huyết Vì vậy, nên sử dụng sản phẩm nhà cung cấp có uy tín - Người thực ni cấy tế bào phải có kiến thức kinh nghiệm thực hành tốt Đồng thời chấp hành quy trình chuẩn thẩm định đảm bảo cho thành công việc nuôi cấy tế bào 1.5.2.Chuẩn bị tế bào để nuôi cấy Nuôi cấy tế bào động vật có vú có nhiều cơng đoạn khác Cơng đoạn chuẩn bị tế bào để đưa vào nuôi cấy Trước hết, mảnh mô tách khỏi thể động vật điều kiện vô trùng Tiếp theo, mảnh mô xử lý với enzym protease, thường dung enzym trypsin để thu huyền phù tế bào Sau loại bỏ tripsin, dịch huyền phù chuyển vào bình ni cấy chun dụng nhựa plastic thủy tinh Bình ni có đáy phẳng, rộng, có chứa mơi trường ni cấy dạng lỏng thích hợp cho loại mơ Tế bào phải trải qua pha log (từ thời điểm bắt đầu đến lúc có dấu hiệu phân chia tế bào đầu tiên), tế bào tự gắn vào đáy bình ni bắt đầu phân chia nguyên phân Kiểu nuôi trực tiếp tế bào có nguồn gốc từ mơ phân hóa gọi ni cấy sơ cấp Việc ni cấy sơ cấp tế bào bình thường tạo lớp đơn tượng kìm hãm tiếp xúc kiểm sốt q trình phân bào chúng Nếu ta lấy phần lớp tế bào để tạo khoảng trống tế bào tiếp tục phân chia tới khoảng trống lấp kín dừng lại Ni mô, cơ, da, thận, phổi … phôi thuận lợi nuôi tế bào mô thể trưởng thành Các tế bào trình ni sơ cấp tách khỏi bình ni cách xử lý với trypsin EDTA Các tế bào dùng làm nguyên liệu khởi đầu cho việc tạo dòng ni thứ cấp (secondary cultures) Chúng “gieo” vào môi trường sinh dưỡng với mật độ cao Các tế bào nhân lên với tốc độ ổn định qua nhiều lần cấy chuyển liên tiếp Kết thu nhóm tế bào, gọi chủng tế bào (cell strain) Các tế bào khơng tăng lên vơ hạn mà chúng có khả phân chia số lần định khả phân chia giảm sút cuối bị chết Ví dụ, chủng tế bào người thường phân chia tối đa 100 lần trước chết 1.5.3 Các dòng tế bào liên tục (Continuous cell lines) Khơng phải tất dòng tế bào ni sơ cấp tạo dòng tế bào bị chết sau số lần phân chia mà có số tế bào biến đổi chúng tồn lâu dài Ví dụ, ni tế bào chuột có phần lớn tế bào bị chết sau phân chia 30 – 50 lần Một số tế bào bị biến đổi chúng có hình thái khác, tăng trưởng nhanh có khả tạo dòng tế bào riêng Những tế bào ngoại lệ tồn lâu dài khác với chủng tế bào khởi đầu chúng gọi dòng tế bào (cell lines) Trong q trình cấy chuyển liên tục, dòng tế bào chịu biến đổi sâu sắc Sự thay đổi dẫn đến hình thành cụm tế bào thay cho lớp đơn xếp cụm tế bào không Các dòng tế bào bị biến đổi gọi chung mơ ung thư chúng có khả gây ung thư đem tế bào cấy vào động vật tương ứng ban đầu chúng Các tế bào ung thư thường dạng lệch bội giống trường hợp thể bị nhiễm virut ung thư Để giải vấn đề này, cần phải giữ tế bào nuôi cấy điều kiện đông lạnh niều năm, cần ni cấy tế bào sau thực giải đông Thực tế người ta tiến hành trộn chất phụ gia (glyxerin, dimethylsulphoxit) để ngăn cản tác hại tinh thể đưa vào đông lạnh 1.5.4 Các môi trường ni cấy tế bào - Tế bào động vật có vú đòi hỏi điều kiện mơi trường ni cấy phức tạp, đủ chất dinh dưỡng cần thiết cho tăng trưởng, phân chia tế bào chúng bị tách khỏi thể chúng - Nhu cầu dinh dưỡng tế bào động vật có vú lớn vi sinh vật do, khơng giống vi sinh vật, động vật không trao đổi chất nitrogen vơ Vì thế, nhiều amino acid vitamin cần phải bổ sung vào môi trường Môi trường đặc trưng dùng nuôi cấy tế bào động vật bao gồm amino acid, vitamin, hormone, nhân tố sinh trưởng, muối khống glucose Ngồi ra, môi trường cần cung cấp từ 2-20% (theo thể tích) huyết tương động vật có vú Mặc dù huyết có thành phần chưa xác định đầy đủ, nhiều nghiên cứu cho thấy cần thiết cho phát triển tồn tế bào ni cấy - Mơi trường hóa chất: Mơi trường hóa chất sáng chế từ năm 1950 thay hoàn toàn cho dịch sinh học dịch chiết từ phôi gà, huyết tương,… Mơi trường hóa chất điều chế hàng loạt, cất giữ lâu, dễ thay thế, thêm, bớt chất cần thiết, bị lây nhiễm… Mơi trường ni cấy có chứa đủ chất dinh dưỡng (Cacbonhydrat, acid amin, vitamin, nguyên tố vi lượng, hormon, nhân tố sinh trưởng) Hiện nay, người ta dùng số môi trường nuôi cấy môi trường Eagle, môi trường Dulbecco,…Môi trường nuôi cấy phải đẳng trương để trì cân áp suất thẩm thấu Người ta thường dùng bicacbonat để tạo hệ đệm kết hợp với hệ làm giàu CO2 môi trường (5-10% CO2/95% khơng khí) tế bào ni Độ pH thích hợp 7,4 Người ta thường sử dụng đỏ phenol để kiểm tra độ pH môi trường, môi trường chuyển dần từ đỏ sang vàng cam tế bào phát triển tốt, chuyển sang vàng nhạt môi trường bị nhiễm khuẩn - Nhân tố sinh trưởng: Nếu khơng có nhân tố sinh trưởng tế bào động vật khơng phát triển Người ta thường phải bổ sung huyết bê vào mơi trường ni cấy (10-15%) huyết có chứa nhân tố sinh trưởng Nhưng dùng huyết vừa đắt tiền lại vừa dễ bị nhiễm khuẩn ngày người ta thường dùng chất bổ trợ để thay cho huyết như: insulin, transferin, ethanolamin,… sử dụng lớp tế bào nuôi - Môi trường nuôi cấy phải đạt tiêu chuẩn sau: + Môi trường phải chứa đầy đủ chất dinh dưỡng cho tồn sinh sản tế bào + Phải trì pH mơi trường ( pH = 7,0 – 7,3) hệ đệm thích hợp cho loại mơ lồi nghiên cứu + Mơi trường phải có ion cần thiết đảm bảo áp suất thẩm thấu chuẩn xác + Mơi trường phải có hợp chất cung cấp lượng glucose + Có chứa phenol red để thị pH - Có loại môi trường môi trường tự nhiên môi trường tổng hợp + Môi trường tự nhiên: Môi trường tự nhiên dung dịch chiết từ thể động vật như: dịch huyết tương, dịch nước ối bào thai, dịch chiết phôi … + Môi trường tổng hợp: Môi trường nuôi cấy tế bào tổng hợp từ chất vô hữu đơn giản Với mơi trường muối cân bằng, tế bào tồn số chúng không phân chia Muốn cho tế bào phân chia cần bổ sung vào môi trường amino axit (Arginin, Glutamin, Histidin,Isoleucin, Leucin, Lysin, Methionin… bổ sung vitamin cần thiết (Cholin chlorit, axit floric, nicotinic axit, pyridoxin, riboflavin, thiamin) chất đệm bicarbonat natri Ngoài ra, để chống tượng nhiễm khuẩn, nhiễm nấm người ta bổ sung kháng sinh penicillin để kháng khuẩn nystatine để kháng nấm số loại kháng sinh khác tetracyline, kanamycine, gentamycine để kháng loại khuẩn mycoplasma Cần bổ sung thêm – 10 % huyết huyết chứa thành phần glubiline miễn dịch , hooc mơn sinh trưởng … chất cần thiết cho phân chia tế bào Tất dụng cụ ni phải khuẩn, có tính trung tính Nước cất sử dụng để pha chế phải tinh khiết, khơng có ion lạ - Các chất kháng sinh: Các chất kháng sinh penecillin, streptomicin amphotericin B thường dùng để chống nhiễm khuẩn cho mẻ cấy Tuy nhiên, chất kháng sinh thường độc phải dùng với liều lượng thích hợp phải kết hợp với quy trình tiệt trùng chu đáo Bảng Thành phần môi trường Eagle (1959) 1.5.5.K ỹ thuật nuôi cấ y tế bào động vật : Ni cấy sơ cấp q trình ni cấy tế bào trực tiếp từ mô trước lần cấy chuyền (subculture) Trong nuôi cấy sơ cấp, tế bào ban đầu thường hỗn hợp dòng tế bào khác nhau, chứa kiểu tế bào trội nhất, có tế bào quan tâm tế bào khác (được gọi tế bào nhiễm) Có thể loại bỏ tế bào nhiễm học hay enzyme tách mô hay cách trì điều kiện chọn lọc dương tính cho sống sót kiểu tế bào quan tâm cần thu nhận Qui trình ni cấy sơ cấp gồm: + Bước 1: Thu nhận mơ (tươi đơng lạnh) có chứa tế bào sống + Bước 2: Phẫu tích tách rời tế bào, xác định nồng độ + Bước 3: Nuôi cấy tế bào Thu nhận mẫu xử lý sơ bộ: Các mẫu thu nhận bao gồm mô thể, trước lấy phải làm mơ vị trí lấy, đưa mơ vào bảo quan dung dịch DPBS, nhanh chóng chuyển phòng thí nghiệm Xử lí mẫu sơ bao gồm rửa nhiều lần dung dịch PBS có bổ sung kháng sinh, kháng nấm, sau cắt bỏ phần mô chết, phần thừa,… mẫu mô cần cắt nhỏ thành mảnh 2-3 mm2 Tách rời tế bào: Có thể sử dụng nhiều phương pháp khác như: - Tách tế bào học: nghiền, ép - Tách tế bào cách ủ với enzyme trypsin hay collagenase - Tách tế bào phương pháp li tâm theo gradient tỷ trọng - Tách tế bào phương pháp dựa vào marker bề mặt Kết giai đoạn thu dịch tách tế bào Nuôi cấy - Dùng pipetman hút vào bốn eppendorf, ml dịch tách tế bào - Li tâm 1000 vòng/ph 10 phút, loại bỏ dịch - Cho vào eppendorf ml môi trường nuôi, huyền phù tế bào vortex - Hút dịch huyền phù tế bào bốn eppendorf cho vào bình ni cấy (bình Roux) bỏ sung 1ml mơi trường - Ủ 37,50C tủ nuôi, sau 24h thay môi trường tiếp tục ủ dịch Carbohydrate loại đơn giản thường có tính miễn dịch yếu cần thiết liên kết với protein mang Carbohydrate lớn gợi đáp ứng bình thường khơng gây đáp ứng thứ cấp Kháng nguyên chuẩn bị nhiều cách như: + Nghiền phá hủy mô + Tách chiết phân tử tủa muối hay chất tẩy rửa Phương pháp chọn phụ thuộc vào kháng nguyên hòa tan hay khơng hòa tan thành phần kháng nguyên protein, carbohtydrate hay acid nucleic Các kháng nguyên tách chiết làm theo trọng lượng chúng theo kích thước thơng qua trình điện di gel 2.2.2.Sản xuất kháng thể đơn dòng Năm 1975 Kohler Milstein đưa kỹ thuật sản xuất kháng thể, phát triển kỹ thuật cho phép tương bào hòa vào tế bào ung thư Myeloma để tạo tế bào lai lớn lên Các tế bào có khả lớn lên không hạn chế mà sản xuất kháng thể đặc hiệu gọi kháng thể đơn dòng Các kháng thể đơn dòng sản xuất từ kháng nguyên không cách chọn lựa dòng tế bào đơn giản sau hợp nhất, chúng chuẩn bị để chống lại thay đổi rộng rãi phân tử gây miễn dịch protein, cacbohydrate, nucleic acid phối hợp chúng Các kháng thể đơn dòng hình thành đặc hiệu với yếu tố định phân tử gây miễn dịch Vì thế, dùng để tách yếu tố định ấy, thêm vào dòng tế bào lai cung cấp cách không hạn chế kháng thể dịch tế bào Sản xuất kháng thể đơn dòng gồm bước Bước 1: Gây miễn dịch (tạo tế bào lympho sinh kháng thể) Muốn sản xuất thành công kháng thể đơn dòng trước hết đòi hỏi động vật phải gây miễn dịch tốt với kháng nguyên mong muốn Số lượng lympho B có khả hình thành kháng thể tăng lên sau gây miễn dịch biểu thành cơng q trình sản xuất thành cơng kháng thể đơn dòng Gây miễn dịch in vivo: trình gây miễn dịch thực động vật chọn thường chuột nhắt trắng, chuột cống chủng Nhiều sơ đồ gây miễn dịch cho nhiều loại kháng nguyên khác nhau: kháng nguyên hoà tan, sơ đồ đơn giản tiêm 0,05- 0,1mg kháng nguyên với tá chất Freund hoàn chỉnh Mũi thứ hai thường thực sau tuần với lượng kháng nguyên, động vật lấy máu tuần thứ tư để định lượng kháng thể vật có hàm lượng kháng thể cao tiêm nhắc lại vào tĩnh mạch với ½ lượng kháng nguyên 26 Nếu vật có lượng kháng thể chưa cao, người ta tiêm nhắc lại lần Tế bào lách (Lympho B mẫn cảm) thu sau ngày kể từ lần tiêm vào tĩnh mạch Đây phương pháp gây miễn dịch thích hợp cho q trình sản xuất kháng thể đơn dòng có nguồn gốc từ người chất có tính kháng ngun yếu Tế bào lành ni cấy gây miễn dịch in vitro Phương pháp cần lượng nhỏ kháng nguyên, thời gian gây miễn dịch ngắn Bước 2: Dung hợp tế bào Máu động vật sau gây miễn dịch cần tiến hành ly tâm để thu phân đoạn khác Trong có phân đoạn có nồng độ tế bào lympho B cao Các tế bào myolema cần trì giai đoạn sinh trưởng mạnh Có nhiều phương pháp dung hợp tế bào khác nhau, người ta thường dùng polyethylene glycol( PEG) : + Hỗn hợp tế bào lympho B tách từ tuyến tụy động vật gây miễn dịch trộn với tế bào myolema có nồng độ cao ni mơi trường có nồng độ PEG thích hợp + So với virus Sendai, PEG làm tăng đáng kể số lượng tế bào lai, PEG có khả tạo nhiều điểm ngưng kết bề mặt tế bào Lympho B Nồng độ thích hợp PEG khoảng 50% Với ni cấy tế bào lớp PEG có trọng lượng phân tử 1000 Da tốt nhất, tế bào nuôi hỗn dịch, trọng lượng phân tử 4000 Da PEG có hiệu tốt PEG có tác dụng làm thay đổi cấu trúc màng tế bào, tạo điều kiện cho tế bào dễ dính kết hợp với Tần số tạo tế bào lai phụ thuộc nhiều vào pH dung dịch PEG ( Sharon -1980) Số lượng tế bào lai nhận nhiều dung dịch PEG có pH từ 8,2 -8,4 + Neuraminidaza dùng để xử lý tế bào trước cho dung hợp, có tác dụng làm tăng hiệu suất dung hợp, dimethyl sulfoxide có tác dụng tạo thuận lợi cho liên hợp tác dụng PEG (Theo Norwood) Bước 3: Nuôi cấy phát triển tế bào lai môi trường chọn lọc Có mơi trường thường dùng q trình sản xuất kháng thể đơn dòng: môi trường RPMI 1640, môi trường Dulbeccos môi trường Iscoves Sau dung hợp, hỗn dịch tế bào nuôi môi trường chọn lọc (HAT) Trong môi trường có aminosterin ức chế q trình tổng hợp ADN Tất tế bào u tuỷ tế bào lách không dung hợp chết vài ngày sau Chỉ có tế bào lai với hai đặc trưng cần thiết cho phát triển môi trường chọn lọc sống nhân lên Quá trình chọn lọc hoàn tất 5-7 ngày sau dung hợp, thấy rõ tế bào lai tế bào chết Khi môi trường chuyển sang màu vàng cần bổ sung thêm môi trường Việc thường thực cách hút bỏ 20 - 50% môi trường cũ thay môi trường khơng có 27 aminopterin (mơi trường HT) Sau vài ngày tế bào lai ni cấy mơi trường bình thường Một số chất hỗ trợ ngày đầu phát triển tế bào lai thường dùng nhiều huyết bào thai bê (FCS) tế bào cuống rốn người (HUCS) Bước 4: Chọn lọc tạo dòng tế bào sản xuất kháng thể Mục đích việc kiểm tra sớm định loại tế bào lai sản xuất kháng thể mong muốn để đỡ tốn công sức nguyên liệu trì phát triển tế bào không cần thiết Phương pháp kiểm tra sản xuất kháng thể tế bào cần định rõ trước lai tế bào Vì tế bào lai thường phát triển với tốc độ khác ELISA kỹ thuật dùng nhiều để phát kháng thể kỹ thuật sản xuất kháng thể đơn dòng, dễ thực hiện, có độ nhạy cao kiểm tra lượng mẫu lớn lúc Phương pháp cho biết trực tiếp lớp, phân lớp kháng thể phát cách dùng kháng huyết đặc hiệu Kiểm tra tế bào lai tiến hành quần thể tế bào lai mọc rõ môi trường nuôi cấy ngả màu vàng Các quần thể tế bào dương tính phải tách dòng để sản xuất loại kháng thể đặc hiệu Hơn nữa, việc tách dòng nhanh giúp cho việc tách biệt tế bào lai dương tính khỏi phát triển mạnh tế bào lai không sản suất kháng thể 28 2.2.3.Sản xuất kháng thể đa dòng Các kháng thể đa dòng tạo nên cách tiêm chất gây miễn dịch (kháng nguyên) vào sinh vật sau thời gian thích hợp tách huyết tương ứng Sự đáp ứng miễn dịch phụ thuộc vào lượng chất kháng nguyên khả đáp ứng miễn dịch vật tiêm với kháng nguyên Thơng thường, lần tiêm kháng thể sinh chứa IgM với nồng độ thấp, lần tiêm thứ hai nồng độ kháng thể IgG đạt mức trung bình Tuy nhiên, lần làm tăng nồng độ kháng thể IgG đáng kể - Chuẩn bị hỗn hợp tá dược kháng nguyên Kháng nguyên trộn với tá dược trước tiêm với mục đích làm cho kháng nguyên giải phóng từ từ để kích thích hệ thống sinh miễn dịch sinh vật Để chuẩn bị tá dược kháng nguyên thường trộn dung dịch kháng nguyên với tá dược Freund tương đương với Ngoài tá dược Freund dùng số khác Titermax với liều 50-500ml/động vật Tuy nhiên, với tế bào sống khơng cần thiết phải bổ sung tá dược - Con đường gây miễn dịch Phương pháp chung thường gây miễn dịch cho thỏ chuột tiêm da lượng lớn tiêm vào động vật kháng thể đặc hiệu dẫn qua phương pháp Tiêm tĩnh mạch thử thỏ, đáp ứng nhanh mạnh kháng ngun vào máu nhanh chóng tới quan sinh miễn dịch gan, lách phổi Tuy nhiên, tiêm tĩnh mạch khơng thích hợp cho lần tiêm kháng nguyên đặc hiệu dễ bị loại trừ chất hóa học thô azide sodium qua đường phổi II BÀI TẬP Câu hỏi có hướng dẫn trả lời Câu 1: Hãy mơ tả tiến trình thí nghiệm dung hợp hai tế bào hai loài động vật khác để chứng minh phân tử prôtêin màng sinh chất có khả di chuyển hay khơng? Hướng dẫn trả lời - Trước tiên người ta phải đánh dấu protein màng hai lồi khác cho phân biệt chúng (đánh dấu đồng vị phóng xạ chất phát quang), sau cho TB hai loài tiếp xúc dung hợp với (nhờ trợ giúp chất định) - Sau khoảng thời gian một, quan sát dấu chuẩn lồi "TB lai" kính hiển vi Nếu protein màng loài đan xen với TB lai chứng tỏ prơtêin màng dịch chuyển Tuy nhiên, protein lồi khơng pha trộn vào mà nằm hai phía riêng biệt TB lai ta chưa thể kết luận chắn protein màng khơng 29 di chuyển Vì protein lồi di chuyển loại TB khó di chuyển sang màng TB lồi khác Câu 2: ( IBO -2013)Sự tiến hóa nhanh kháng nguyên cúm Hemagglutinin (HA) trở ngại lớn điều trị bệnh hiệu Nhằm xác định kháng thể chống nhiều chủng cúm cách hiệu quả, người ta phân lập riêng rẽ 13.000 tế bào plasma (tương bào) người tiêm chủng kích hoạt chúng sản sinh kháng thể Những kháng thể kiểm tra tính kháng với loại HA khác (H5 VN/04, H7 NE/03 hỗn hợp văcxin) cách đo lực bám kết (binding) chúng với (hình A) Hiệu bám kết hai kháng thể tiềm rõ rệt X Y chúng với (hình A) Hiệu bám kết hai kháng thể tiềm rõ rệt X Y số loại HA thu từ nhóm (màu đỏ) (xanh lam) tiếp tục đánh giá cách đo nồng độ cần thiết để thu 50% hiệu bám kết tối đa (chỉ số EC50, hình B) Để so sánh, số EC50 đo với kháng thể kháng HIV kháng thể X* tạo tương bào vốn ban đầu sản sinh X tất đột biến phục hồi để thu trình tự tương ứng di truyền từ bố mẹ Mỗi phát biểu hay sai? A Mỗi đáp ứng miễn dịch kháng văcxin cúm điều hòa tập hợp đa dạng gồm nhiều kháng thể B.Kháng thể Y kháng hiệu HA thu từ chủng nhóm 2, song không gây miễn dịch kháng tất chủng nhóm nghiên cứu C Miễn dịch rộng rãi kháng thể X phần phát sinh từ đột biến xôma D Việc tiêm kháng thể X gây đáp ứng miễn dịch hiệu kháng lại số lớn chủng cúm qua nhiều năm Hướng dẫn trả lời A Đúng 30 Như thấy bảng hình A, có số lượng lớn tế bào plasma sản xuất kháng thể chống lại HA có vắc-xin B Đúng Điều thấy hình B nơi kháng thể Y khơng liên kết với tất HA nhóm tốt kháng thể đối kháng với HIV C Đúng Vì dòng mầm tất gen không đồng miễn dịch, khác biệt kháng thể X X * phải đột biến soma xảy dòng tế bào dẫn đến tế bào plasma sản xuất X Lưu ý đột biến soma xếp lại phổ biến tế bào sản xuất kháng thể, có khả thích ứng để đối phó với loạt kháng nguyên D Sai Câu 3: Mặc dù tiêm kháng thể X đồng thời miễn dịch thụ động chống lại loạt chủng cúm, khơng cung cấp miễn dịch chủ động Vì thế, tiêm chủng khơng kéo dài vài tuần tối đa tháng Virut viêm gan B chứa kháng nguyên HBs, HBc HBe, HBs dùng phổ biến làm văcxin, Hbe biểu số chủng virut Bảng cho biết có mặt (+) vắng mặt (-) kháng nguyên virut kháng thể tìm thấy số bệnh nhân Dấu hỏi (?) phép thử (kiểm tra) chưa thực Hãy phát biểu hay sai? A Bệnh nhân P1 vừa chủng văcxin gần đây, trước chưa bị nhiễm virut viêm gan B B Bệnh nhân P2 vượt qua lây nhiễm virut viêm gan B thành công C Các bệnh nhân P3 P4 bị nhiễm virut viêm gan B D Bệnh nhân P5 vừa chủng văcxin Hướng dẫn trả lời A Đúng 31 Kể từ tiêm vắc-xin thực cách sử dụng HBs, người tiêm vắc-xin sản xuất IgG kháng HBs sau vài tuần Nhiễm viêm gan, nhiên dẫn đến kháng HBc kháng thể kháng HBe thường khơng tìm thấy P1 B Đúng Mặc dù khơng tìm thấy kháng ngun, P2 tạo IgG chống lại ba loại kháng nguyên, loại không sử dụng tiêm chủng C Đúng Kháng nguyên HBe tìm thấy P3, dấu hiệu tốt cho thấy virus có mặt Ngoài ra, hệ thống miễn dịch P3 bắt đầu phản ứng cách sản xuất kháng thể IgM Vì P4 cho thấy IgG kháng HBc chống HBe, nên bệnh nhân bị nhiễm bệnh thời điểm Sự diện HBs nhiều chứng tỏ nhiễm trùng xảy thay vắc-xin gần đây, khơng có khả áp dụng cho người tiêm chủng D Đúng Sự diện IgM chống HBs chứng tỏ có phơi nhiễm với HBs Tuy nhiên, khơng có kháng ngun HBc HBe, nên có khả nguồn phơi nhiễm tiêm chủng gần Câu 4: a Sự kiện xảy sau tế bào nhiễm trình diện kháng nguyên lên bề mặt tế bào? A.Hình thành kháng thể B Hoạt hóa tế bào T độc C Tăng thực bào D Hoạt hóa tế bào B b Huyết tương bệnh nhân bị viêm gan B chứa kháng nguyên bề mặt (viết tắt HBsAg) virut viêm gan B, có khơng có kháng ngun lõi (viết tắt HbcAg) virut viêm gan B Điều mô tả nhất? A HBcAg có lẽ cấu tạo chủ yếu từ lipit B HBsAg cấu tạo chủ yếu từ protein C Nồng độ enzym gan huyết tương không thay đổi bệnh nhân bị viêm gan cấp tính D Nồng độ enzym gan huyết tương giảm bệnh nhân bị viêm gan cấp tính Câu 5: Virut viêm gan B chứa kháng nguyên HBs, HBc HBe, HBs sử dụng phổ biến làm văcxin, HBe biểu số chủng virut 32 Để xác định xem có nên cho trẻ tiêm chủng văcxin phòng viêm gan B khơng, bố mẹ số trẻ đưa kiểm tra có mặt hay vắng mặt kháng nguyên virut kháng thể tương ứng trẻ Bảng thể kết kiểm tra trẻ (kí hiệu từ T1 đến T5) Những trẻ chưa tiêm văcxin viêm gan B Dấu (+) thể có mặt, dấu (-) thể vắng mặt, dấu (?) thể phép kiểm tra chưa thực Anti- Anti- Anti- HBs HBc HBe IgG IgM IgG T1 + ? + + + T2 T3 ? + ? + ? T4 + + T5 ? ? ? Dựa vào kết xét nghiệm, cho biết trẻ trên: IgG + ? + + Kí hiệu trẻ AntiHBs HBc HBe HBs - Trẻ bị nhiễm virut viêm gan B? Giải thích - Trẻ bị nhiễm virut viêm gan B khỏi bệnh? Giải thích - Trẻ cần tiêm văcxin phòng bệnh viêm gan B? Giải thích – Trẻ bị nhiễm virut viêm gan B trẻ T1 T3 Hướng dẫn trả lời Giải thích: Từ bảng kết cho thấy có trẻ T1 T3 có mặt kháng nguyên virut viêm gan B, mà trẻ chưa tiêm văcxin phòng viêm gan B, chứng tỏ trẻ T1 T3 bị nhiễm virut - Trẻ bị nhiễm virut viêm gan B khỏi bệnh trẻ T4 T5 Giải thích: Từ bảng kết cho thấy trẻ T4 T5 khơng có kháng ngun virut viêm gan B Trẻ T4 có loại kháng thể (Anti-HBs, Anti-HBc, Anti-HBe), trẻ T5 có Anti-Hbe (loại kháng nguyên có mặt số chủng virut) Chứng tỏ T4 T5 vừa bị nhiễm virut viêm gan B thể tạo kháng thể chống lại kháng nguyên virut - Trẻ cần tiêm văcxin phòng viêm gan B trẻ T2 Giải thích: Từ bảng kết cho thấy trẻ T2, khơng có mặt kháng ngun kháng thể, đó, cần tiêm văcxin viêm gan B cho T2 để trẻ tạo kháng thể chống lại virut viêm gan B 33 Câu hỏi tự trả lời Câu 1: Nuôi cấy tế bào khối u người với loại thuốc ảnh hưởng đến chu kỳ tế bào Sau xử lý, thuốc loại bỏ khỏi nuôi cấy tế bào (lần thứ 0) tế bào giữ điều kiện tối ưu để phát triển Tại thời điểm xác định trước, mẫu ni cấy có số lượng tế bào giống hệt nhuộm thuốc nhuộm huỳnh quang đưa vào máy phân tích dòng chảy tế bào Hình cho thấy đường cong phân tích tế bào theo dòng chảy thu Các câu hay sai: A Pha S quần thể tế bào kéo dài B Quần thể tế bào chứa nhiều histone lúc quần thể nuôi cấy 12 C Nếu nhiễm sắc thể bị đóng xoắn quần thể ni cấy 24 tạo hai loại nhiễm sắc thể: có khơng có nhiễm sắc thể chị em D Có khả CDD (một thành phần yếu tố thúc đẩy pha M) ổn định thời điểm lấy mẫu Câu 2: Các tế bào cổ tin chứa phân tử sinh học chất dinh dưỡng túi màng lipid Một phân tử sinh học xuất sớm phân tử RNA (ribozyme) Tuy nhiên, ribozyme đại biết cần cation hóa trị hai (ví dụ: Mg 2+) có nồng độ từ 10-3 đến 10-2 M để hoạt động, túi chứa axit béo bị rò rỉ nồng độ Bạn nghi ngờ có thành phần khác màng túi giúp trì nồng độ Mg2+ cao Vì lý này, bạn tiến hành thí nghiệm sử dụng túi có thành phần khác để kiểm tra xem việc bổ sung Mg2+ có gây rò rỉ chất tan từ túi hay không cách sử dụng phương pháp lọc gel (a) Nếu việc bổ sung Mg2+ làm cho túi bị rò rỉ có hai đỉnh đồ thị, đỉnh phần túi, đỉnh lại phần chất tan bị rò rỉ Bạn làm thí nghiệm với ba loại túi nhiệt độ phòng: túi chứa axit béo (OA), túi chứa thêm este glycerol (OA / GMO), túi chứa thêm amide (OA / GMOA) Các chất hòa tan quan sát thuốc nhuộm hữu nhỏ oligonucleotide bp Kết thu hình (b - g) 34 Dye leakage: rò rỉ thuốc nhuộm Oligo leakage: rò rỉ đoạn oligo Các câu hay sai: A Nếu túi ổn định không bị rò rỉ, kết lọc gel hiển thị đỉnh bên phải hình a B Các tế bào cổ có chứa este glycerol amit màng túi có lợi chọn lọc mơi trường giàu Mg2+ so với tế bào khơng có C Nếu thí nghiệm lặp lại 4°C, rò rỉ tăng lên tất loại túi D Nếu chiều dài oligonuleotide sử dụng thí nghiệm tăng lên 18 bp, khơng có thay đổi biểu đồ e, f, g oligonucleotide giống ion xâm nhập vào màng lipid Câu 3: Một thí nghiệm thực để xác định thay đổi biểu protein chu kỳ tế bào Tế bào gốc biểu bì nuôi cấy đĩa petri môi trường bổ sung huyết để tạo đủ tế bào cho thí nghiệm Vào 24 trước thí nghiệm bắt đầu, tế bào gốc biểu bì chuyển đến môi trường nuôi cấy không chứa huyết Huyết sau thêm vào sau 24 mẫu protein chiết xuất từ tế bào gốc biểu bì sau 14 Các mẫu protein sau phân tích SDS-PAGE hiển thị hình bên 35 A Tế bào gốc biểu bì tìm thấy màng đáy lớp biểu bì da B Việc thay mơi trường không chứa huyết thực để ngăn tế bào sinh sôi nảy nở đồng hóa phase G0 C Một số dải protein gel cho thấy cải thiện sau ủ kéo dài 14 D Từ kết trên, thấy pha S nằm thứ đến thứ gel SDS-PAGE Câu 4: Một nhà khoa học muốn nghiên cứu phản ứng miễn dịch thể dịch nhiễm virut X Các nhà nghiên cứu sử dụng ba loại chuột chuột bình thường (+ / +), chuột bị tổn thương tế bào gốc lympho tủy sống (scid / scid) chuột bị hỏng tuyến ức (nud / nud) Máu từ chuột bị nhiễm lấy, sau trung hòa tồn kháng thể kháng thể IgM thử nghiệm Các kết đo hiển thị hình Các câu hay sai: A Kết thí nghiệm cho thấy phản ứng miễn dịch với virus X liên quan đến phản ứng miễn dịch dịch thể B Hình thành IgG để chống lại virut X liên quan đến tế bào lympho T C Các tế bào lympho T hoàn toàn cần thiết cho thể để tạo kháng thể D Kháng thể tạo từ tế bào tuỷ sống tuyến ức Câu 5: Để tạo kháng thể gắn với thụ thể acetylcholine từ quan phát điện lươn điện, bạn tiêm thụ thể phân lập vào chuột Bạn lưu ý mối tương quan thú vị: chuột có lượng kháng thể cao có kiểu hình yếu chậm chạp; lượng kháng thể thấp chuột linh động Bạn nghi ngờ kháng thể phản ứng với thụ thể acetylcholine chuột, khiến nhiều thụ thể bị phá hủy Vì giảm số lượng thụ thể acetylcholine sở bệnh nhược người, bạn tự hỏi liệu việc tiêm thuốc neostigmine vào chuột giúp chúng hồi phục sức mạnh tạm thời, bệnh nhân nhược hay không Neostigmine ức chế acetylcholinesterase, enzyme chịu trách nhiệm thủy phân acetylcholine khe synap Kết bạn tiêm neostigmine vào chuột, chúng trở nên hoạt động Đề xuất giải thích cách neostigmine phục hồi chức tạm thời khớp thần kinh với lượng thụ thể acetylcholin giảm Câu 6: Các thụ thể đồng kích thích ức chế điều chỉnh tín hiệu thụ thể kháng nguyên tế bào lympho T, B Một thụ thể phát biểu bề mặt tế bào T gọi X Một kháng thể X tạo sử dụng thí nghiệm kích thích tế bào T Trong thí nghiệm này, kháng thể phức hợp TCR (anti CD3) CD28 (anti CD28) biết kích thích tín hiệu thơng qua thụ thể đó, kháng thể X Dữ liệu từ thí nghiệm đo tiết IL-2 36 tế bào T kích thích với kết hợp kháng thể khác thể Hình bên No stim: khơng có kích thích a Việc kích thích thụ thể X có sản xuất IL-2 từ tế bào T hay khơng? Nó tăng cường hay ức chế tín hiệu TCR? Giải thích b Nếu bạn kiểm tra trình tự axit amin thụ thể X tế bào chất, bạn tìm thấy mơ hình gì? c Các nghiên cứu sinh hóa cho thấy thụ thể X kích thích, lượng tyrosine miền tế bào chất phosphoryl hóa Từ liệu này, hai protein truyền tin có khả đưa tới thụ thể X kích thích gì? Câu 7: Bạn thiết kế protein huỳnh quang màu xanh biến đổi gen (GFP) có chứa trình tự KDEL Khi protein chuyển vào nguyên bào sợi người bình thường kiểm tra kính hiển vi huỳnh quang, huỳnh quang xuất khắp bào tương Để phân tích thêm kết quả, phân đoạn bào quan khác tế bào chất thu thập từ tế bào biểu GFP chứa KDEL sau kiểm tra Western blots sử dụng kháng thể kháng GFP (27 kDa) protein disulfide isomerase (PDI), protein gắn màng ER hạt (RER) kích thước khoảng 55 kDa Các blot xác nhận diện GFP tế bào chất, mong đợi tín hiệu PDI phần RER a Giải thích lại xuất PDI phân đoạn Golgi, có lượng nhỏ? b Với chức protein PDI, bạn mong đợi điều hai alen gen PDI bị loại chuột? 37 Câu 8: Một số polyribonucleotide tổng hợp sử dụng loạt thí nghiệm mã hóa di truyền với hệ thống dịch mã khơng có tế bào Từ thí nghiệm trước đây, người ta biết mã axit amin đọc theo trình tự gồm ba nucleotide (bộ ba) Một số liệu tổng hợp protein sản xuất từ polyiribonucleotide tổng hợp sau: Các câu sau hay sai: A Dịch mã thí nghiệm base đầu 5’ polybonucelotide phía đầu 3’ B Các axit amin Serin mã hóa ba CUC C Axit amin Leucine mã hóa loại codon khác D Nếu lặp lại thí nghiệm sử dụng polyribonucleotide CU chắn thu sản phẩm bao gồm leucine serine Câu 9: Dưới phả hệ tính trạng trội NST thường, quy định alen Q Cá thể mang kiểu gen qq cá thể Qq Bạn muốn lập đồ di truyền tính trạng liên quan đến hai SSR Biết rằng, người ta phân tích điện di alen nhận từ bố cá thể 2-7; alen Q/q SSR 25 không xảy hốn vị a Vẽ sơ đồ vị trí SSR 25 so với alen Q cá thể b Xác định kiểu gen (alen Q, SSR 25 37) cá thể 2, 3, phả hệ Câu 10: Một số chủng nấm men đột biến nhạy cảm với nhiệt độ phân lập (“Altair”, Cetus”, “Corvus”, “Orion”) Các chủng nấm men đơn bội phát triển bình thường 23 ° C 38 37 ° C, tất chủng có phân tách sớm nhiễm sắc thể chị em sau chép DNA a Mỗi đột biến làm thí nghiệm kiểm tra sau: tế bào đột biến giao phối kiểu “α” nuôi cấy chéo đĩa plate với tế bào kiểu dại giao phối kiểu “a” nhiệt độ 37°C Các kết mơ tả (trong vệt màu xám cho thấy tăng trưởng) Cho biết đột biến xét lặn hay trội Giải thích b Trong thí nghiệm mới, chủng Altair nuôi cấy chéo với chủng Corvus, Orion thu kết hình Cho lai chủng đột biến Altair Corvus tạo thành tế bào lưỡng bội, sau trải qua q trình phân bào hình thành bào tử Xác định kiểu gen chủng Altair Corvus, chủng lưỡng bội kiểu gen bào tử 39 TÀI LIỆU THAM KHẢO Công nghệ sinh học – PGS- TS Nguyễn Bá Lộc Công nghệ sinh học - công nghệ di truyền, TS.Trịnh Đình Đạt, NXB Giáo dục Hóa sinh học- Nguyễn Văn Mùi (2001), Nhà xuất Đại học Quốc gia Hà Nội Công nghệ sinh học người động vật, (2010), Phan Kim Ngọc, NXB Giáo dục Sinh học, Campbell Reece, NXB Giáo dục http://www.thuviensinhhoc.com/chuyen-de-sinh-hoc/cong-nghe-sinh-hoc/5173-adn-taito-hop.html 7.http://tailieu.vn http://violet.vn/main/ 40 ...CHUYÊN ĐỀ CÔNG NGHỆ Di TRUYÊN ĐỘNG VẬT VÀ BÀI TẬP CƠNG NGHỆ DI TRUN A PHẦN MỞ ĐẦU Cơng nghệ sinh học bước tiến quan trọng nỗ lực lâu dài, có nhiều lĩnh vực cơng nghệ sinh học khác... ứng dụng công nghệ sinh học phân tử, công nghệ sinh học thực vật, công nghệ sinh học động vật Công nghệ sinh học có ứng dụng rộng rãi y dược, lương thực, thực phẩm, lượng, hóa chất, vật liệu... sinh ngày thể thao đỉnh cao công nghệ sinh học áp dụng cách hiệu Cơng nghệ sinh học động vật (Animal Biotechnology) lĩnh vực chủ yếu công nghệ sinh học công nghệ di truyền sở ứng dụng kỹ thuật