Để đánh giá ảnh hưởng của sốc độ mặn lên tỷ lệ nở, số naupli nở ra/cái, các cá thể copepoda cái mang hai bọc trứng được chia ngẫu nhiên vào 9 độ mặn (tổng số 27 đơn vị thí nghiệm, 12 cái/đơn vị thí nghiệm) trong 30 giờ. Ở thí nghiệm 2, tác động đồng thời của hai yếu tố độ mặn và nhiệt độ, naupli mới nở F1 được nuôi trong các cốc nhựa 1 lít cho tới khi quần thể trưởng thành 100% ở 2 nhiệt độ (30ºC và 34ºC) kết hợp với 7 độ mặn (5, 10, 15, 20, 25, 30, 35 ppt), mỗi nghiệm thức có 5 lần lặp. Kích thước copepoda trưởng thành, sức sinh sản, tỷ lệ nở thành công, số naupli nở ra/copepoda được xác định.
Tạp chí Khoa học - Cơng nghệ Thủy sản Số 4/2019 THÔNG BÁO KHOA HỌC KHẢ NĂNG CHỊU SỐC ĐỘ MẶN VÀ SỰ TƯƠNG TÁC CỦA ĐỘ MẶN VỚI NHIỆT ĐỘ LÊN ĐẶC ĐIỂM SINH HỌC VÀ SINH SẢN CỦA LOÀI COPEPODA Pseudodiaptomus annandalei TOLERANCE TO SALINITY SHOCK AND SALINITY–TEMPERATURE INTERACTION ON SURVIVAL, BIOLOGICAL CHARACTERISTICS AND REPRODUCTION OF THE COPEPOD Pseudodiaptomus annandalei Đồn Xn Nam¹, Phạm Quốc Hùng¹, Đinh Văn Khương¹ Ngày nhận bài: 08/08/2019; Ngày phản biện thơng qua: 21/11/2019; Ngày duyệt đăng: 11/12/2019 TĨM TẮT Hai thí nghiệm thực để đánh giá khả chịu sốc độ mặn tác động đồng thời độ mặn nhiệt độ lên tỷ lệ sống, sức sinh sản, tỷ lệ nở thành công, số naupli/cái khả sinh sản loài giáp xác chân chèo Pseudodiaptomus annandalei Ở thí nghiệm 1, naupli, copepodit, copepoda đực trưởng thành kiểm tra khả chịu sốc độ mặn nồng độ muối khác nhau: 0, 5, 10, 15, 20, 25, 30, 35, 40 ppt Mỗi nghiệm thức có lần lặp, tổng số 27 đơn vị thí nghiệm Tỷ lệ sống sau 24 48 xác định Để đánh giá ảnh hưởng sốc độ mặn lên tỷ lệ nở, số naupli nở ra/cái, cá thể copepoda mang hai bọc trứng chia ngẫu nhiên vào độ mặn (tổng số 27 đơn vị thí nghiệm, 12 cái/đơn vị thí nghiệm) 30 Ở thí nghiệm 2, tác động đồng thời hai yếu tố độ mặn nhiệt độ, naupli nở F1 nuôi cốc nhựa lít quần thể trưởng thành 100% nhiệt độ (30ºC 34ºC) kết hợp với độ mặn (5, 10, 15, 20, 25, 30, 35 ppt), nghiệm thức có lần lặp Kích thước copepoda trưởng thành, sức sinh sản, tỷ lệ nở thành công, số naupli nở ra/copepoda xác định Để tiến hành xác định khả sinh sản (số naupli sinh 10 ngày copepoda cái), 50 đực 50 bố trí ngẫu nhiên vào đơn vị thí nghiệm Số naupli sinh đánh giá 10 ngày Kết cho thấy thay đổi đột ngột độ mặn ảnh hưởng đến tỷ lệ sống, tỷ lệ nở số naupli/cái P annandalei; kết hợp độ mặn - nhiệt độ ảnh hưởng đến kích thước, sức sinh sản, số naupli/cái khả sinh sản (số naupli sinh ra) copepoda P.annandalei Khả chịu thay đổi độ mặn copepoda trưởng thành tốt so với giai đoạn copepodit naupli Trứng copepoda không nở bị sốc độ mặn ppt 40 ppt Kết thí nghiệm cho thấy, P annandalei loài rộng muối, chúng sống sinh sản độ mặn từ đến 35 ppt điều kiện nhiệt độ 30 34ºC Lồi P annandalei có kết sinh sản cao (157 ± 3,0 naupli 10 ngày/cái) tổ hợp độ mặn 15 ppt nhiệt độ 30ºC Từ khóa: Độ mặn nhiệt độ, Pseudodiaptomus annandalei, sức sinh sản, sinh sản, tỷ lệ sống, tỷ lệ nở thành công ABSTRACT Two experiments were conducted to determine the effects of salinity shock and the combined effects of salinities and temperatures on survival, fecundity, hatching rate, nauplii production per female and reproduction ability of the copepod Pseudodiaptomus annandalei In the salinity shocking experiment, nauplii, copepodites, adult males and adult females were directly introduced into one of nine different salinities 0, 5, 10, 15, 20, 25, 30, 35, 40 ppt from the culture salinity of 20 ppt without acclimation Each treatment had three replicates and a total 27 experimental units The survival was determined after 24h and 48h Additionally, the hatching success and hatching nauplii were determined when ovigerous females were shocked in one of the same salinities (27 experimental units, 12 female per experimental unit) In the salinity - temperature experiment, newly hatched ¹ Viện Ni trồng Thủy sản, Trường Đại học Nha Trang TRƯỜNG ĐẠI HỌC NHA TRANG • 75 Tạp chí Khoa học - Cơng nghệ Thủy sản Số 4/2019 nauplii F1 were cultured in 1-L plastic cups at two temperature regimes (30ºC 34ºC) combined with seven different salinities (5, 10, 15, 20, 25, 30, 35 ppt) with five replicates per treatment The adult size, fecundity, hatching success and nauplii/copepod were determined In addition, 50 adult males and 50 adult females from each treatment were cultured (5 experimental units of 10 males and 10 females each) Nauplii production were observed for 10 days Results indicate salinity shocking affects survival, hatching success, nauplii/female; the salinity - temperature combination affects adult size, fecundity and reproduction of copepod P annandalei Adult copepods dealt better with salinity shock than copepodites and nauplii There was no hatching success at ppt and 40 ppt P annandalei is euryhaline species that can growth and reproduction in a wide range of salinity from to 35 ppt at 30 to 34ºC Our results suggest that the optimal salinity - temperature combination for the reproduction of this species (157 ± 3.0 nauplii/female in 10 days) is 15 ppt and 30ºC Keywords: Salinity and temperature, Pseudodiaptomus annandalei, fecundity, reproduction, survival, hatching success I ĐẶTVẤN ĐỀ Ương nuôi ấu trùng giai đoạn khó khăn sản xuất giống cá biển Thời điểm ăn ấu trùng cá thường có tỷ lệ chết cao không cung cấp loại thức ăn Trong sinh vật phù du sử dụng làm thức ăn sống, giáp xác chân chèo (copepoda) cho loại phù hợp cho ấu trùng cá biển so với luân trùng Artemia Copepoda thức ăn sống tự nhiên ấu trùng cá biển, với hàm lượng DHA EPA cao so với luân trùng Artemia làm giầu, t l DHA/EPA khong (Shields v ctv, 1999, Conceiỗóo ctv, 2010), với 50% lipid phospholipid (Bell ctv, 2003) nên đáp ứng đủ nhu cầu dinh dưỡng cho ấu trùng cá biển (Toledo ctv, 1999, Garcia ctv, 2008, Koedijk ctv, 2010, Tam.T.D Tung H, 2015, Santhanam ctv, 2019, Kassim ctv, 2019) Nghiên cứu loài copepoda Pseudodiaptomus annandalei cho thấy thành phần thể copepoda có hàm lượng HUFA cao cho dù ni lồi tảo khơng có DHA Tetraselmis chuii Nghiên cứu chứng tỏ thành phần axit béo thể loài P annandalei khơng phụ thuộc hồn tồn vào thành phần axit béo thức ăn luân trùng Artemia (Rayner ctv, 2017) Đây lý quan trọng giúp loài Pseudodiaptomus annandalei quan tâm nghiên cứu nuôi sinh khối làm thức ăn sống nuôi trồng thủy sản (Doi ctv, 1997, Liao ctv, 2001, Lee ctv, 76 • TRƯỜNG ĐẠI HỌC NHA TRANG 2010, Rayner ctv, 2015) Nguồn copepoda P annandalei ao nuôi thủy sản Việt Nam bị suy giảm biến động điều kiện môi trường tự nhiên (GrØnning ctv, 2019) Độ mặn nhiệt độ cho yếu tố sinh thái giới hạn ảnh hưởng lớn tới đặc điểm sinh học loài copepoda P annandalei (Beyrend-Dur ctv, 2011) Do vậy, việc tiến hành nghiên cứu ảnh hưởng độ mặn tác động đồng thời độ mặn với yếu tố nhiệt độ lên lồi P annandalei cần thiết, góp phần nâng cao hiệu ni sinh sản lồi copepoda này, giúp giải khó khăn khâu sản xuất giống lồi cá biển từ thúc đẩy nghề nuôi cá biển phát triển bền vững II VẬT LIỆU VÀ PHƯƠNG PHÁP NGHIÊN CỨU Copepoda thí nghiệm Lồi copepoda P annandalei thu ngồi ao ni thủy sản diện tích 5.000 m², có độ sâu trung bình 1,2 m độ mặn nước 20 – 23 ppt trại thực nghiệm Cam Ranh, Viện Nuôi Trồng Thủy Sản, Trường Đại Học Nha Trang Những P annandalei mang bọc trứng phân lập cách sử dụng ống pipet hút cá thể kính hiển vi soi sử dụng để gây nuôi tạo quần thể copepoda sống điều kiện phòng thí nghiệm: nhiệt độ 27 - 30ºC độ mặn 20 ppt Quần thể P annandalei sử dụng làm nguồn copepoda cho thí nghiệm Tạp chí Khoa học - Cơng nghệ Thủy sản Bố trí thí nghiệm Thí nghiệm 1: Ảnh hưởng sốc độ mặn: từ 20 ppt vào độ mặn từ 0, 5, 10, 15, 20, 25, 30, 35, 40 ppt đến tỷ lệ sống copepoda sau 24 giờ, 48 tỷ lệ nở thành công, số naupli nở sống/cái P annandalei phân lập từ ao nuôi nuôi sinh khối độ mặn 20 ppt, nhiệt độ 28 - 30ºC Bốn nhóm copepoda sử dụng thí nghiệm (1) naupli N4 - N6, (2) copepodit C2 - C4, (3) copepoda đực trưởng thành, (4) copepoda trưởng thành Các cá thể P annandalei giai đoạn thu từ bể nuôi sinh khối độ mặn 20 ppt bố trí trực tiếp vào nghiệm thức độ mặn từ đến 40 ppt, không qua giai đoạn độ mặn Giai đoạn naupli giữ giếng ni có ml nước; copepodit, copepoda đực trưởng thành nuôi giữ đĩa petri nhựa có 10 ml nước Thiết kế thí nghiệm cho nhóm copepoda là: độ mặn (0, 5, 10, 15, 20, 25, 30, 35, 40 ppt) × lần lặp = 27 đơn vị thí nghiệm Mỗi đơn vị thí nghiệm gồm 10 cá thể tương ứng tổng số 270 cá thể nhóm Copepoda khơng cho ăn 48 thí nghiệm Các đĩa petri đặt bàn điều kiện nhiệt độ phòng thí nghiệm 29,5 – 30,5ºC Tỷ lệ sống giai đoạn thời điểm 24 48 xác định Để đánh giá tỷ lệ nở thành công xác định số naupli/copepoda bố trí vỉ ni gồm 27 đơn vị thí nghiệm ứng độ mặn Mỗi đơn vị thí nghiệm gồm 12 cá thể mang bọc trứng, copepoda nuôi giếng ni chứa ml nước có độ mặn tương ứng với nghiệm thức từ đến 40 ppt Copepoda cho ăn tảo Isochrysis galbana lần với mật độ tảo 30.000 đến 35.000 tế bào/ml để tránh copepoda đói ăn naupli Các vỉ ni đặt bàn nhiệt độ phòng thí nghiệm 29,5 – 30,5 ºC Sau 30 nuôi, xác định số giếng có naupli nở ra, cố định đếm số naupli giếng Thí nghiệm 2: Ảnh hưởng đồng thời yếu tố độ mặn nhiệt độ đến kích thước trưởng thành, sức sinh sản, tỷ lệ nở thành công, số naupli nở ra/cái tổng số naupli sinh Số 4/2019 10 ngày copepoda P annandalei: Thí nghiệm thiết kế: nhiệt độ (30ºC 34ºC) × độ mặn (5, 10, 15, 20, 25, 30, 35 ppt) × lần lặp = 70 đơn vị thí nghiệm P annandalei trưởng thành lọc thu từ ao có độ mặn 20 – 23 ppt nhiệt độ 26 – 29ºC, nuôi nhiệt độ độ mặn thí nghiệm – ngày Sau đó, cá thể mang trứng phân lập cho sinh sản 30 cá thể mang trứng ni cốc nhựa lít Sau 30 giờ, cá thể lọc vợt lọc có mắt lưới 200 µm lại nước có naupli F1 nở cốc tương ứng với đơn vị thí nghiệm Các cốc chứa naupli đặt bể ổn nhiệt độ có thiết bị điều khiển nhiệt độ nhiệt độ thí nghiệm 30ºC 34ºC Copepoda cho ăn lần ngày tảo Chaetoceros muelleri P annandalei nuôi tất cá thể phát triển đến giai đoạn trưởng thành ngày tuổi thứ 13 Các cá thể trưởng thành sử dụng để bố trí xác định thơng số như: kích thước cá thể đực trưởng thành; sức sinh sản; tỷ lệ nở thành công số naupli nở copepoda 50 copepoda đực 50 copepoda trưởng thành thu từ nghiệm thức bố trí vào đơn vị thí nghiệm Mỗi đơn vị thí nghiệm gồm 10 copepoda đực 10 copepoda trưởng thành nuôi cốc nhựa lít nước Hàng ngày lọc thu naupli để đếm, loại bỏ cá thể đực chết thời gian 10 ngày Chế độ chăm sóc quản lý thí nghiệm Trong thí nghiệm 2: Thức ăn ni P annandalei tảo C muelleri với mật độ cho ăn khoảng 87.000 tế bào/ml, ngày lần P annandalei nuôi nước lọc lõi lọc có kích thước 0,5 µm Nước có độ mặn từ đến 30 ppt pha từ nước biển có độ mặn 33 ppt với nước ppt; nước có độ mặn 35 ppt có từ phơi nắng nước biển 33 ppt Chế độ chiếu sáng 12 sáng: 12 tối ánh sáng đèn huỳnh quang 36W dài 1,2 m từ trần phòng thí nghiệm Nhiệt độ thí nghiệm kiểm sốt thiết bị ổn nhiệt (heater) TRƯỜNG ĐẠI HỌC NHA TRANG • 77 Tạp chí Khoa học - Cơng nghệ Thủy sản đặt bể ổn nhiệt có chứa nước theo dõi ngày lần Phương pháp thu phân tích mẫu Thí nghiệm 1: Tỷ lệ sống thời điểm 24 48 tính số copepoda sống chia cho số copepoda ban đầu (10 copepoda) đơn vị thí nghiệm Tỷ lệ nở thành công sau 30 ấp nở tính cho số P annandalei mang trứng có naupli nở giếng tổng số 12 P annandalei đưa vào ấp nở đơn vị thí nghiệm (12 con/vỉ nuôi, 12 giếng nuôi vỉ nuôi), vỉ nuôi nghiệm thức Số naupli trung bình nở từ P annandalei tính tổng số naupli chia cho 12 P annandalei mang trứng đơn vị thí nghiệm Naupli cố định Lugol 4% trước đếm số lượng kính hiển vi soi Thí nghiệm 2: Kích thước P annandalei trưởng thành (50 đực 50 nghiệm thức) đo kính hiển vi soi (Olympus SZ61) có gắn thước đo thị kính: tính từ đỉnh đầu đến hết phần đầu ngực (Prosome length) Sau kích thước quy đổi kích thước thực tế (với độ xác 10 µm) thơng qua tính tốn từ phép đo thước chuẩn (1 mm = N số vạch) kính soi vật kính Kích thước thực tế (µm) = số vạch * 1000/N Sức sinh sản/lần đẻ số trứng hai buồng trứng P annandalei Với 50 mang trứng nghiệm thức độ mặn nhiệt độ cố định formol 5%, sau mổ rạch bọc trứng đếm số trứng bọc trứng kính hiển vi soi (Olympus SZ61) Số naupli trung bình nở từ P annandalei tính tổng số naupli chia cho số P annandalei mang trứng đơn vị thí nghiệm Naupli cố định Lugol 4% trước đếm số lượng kính hiển vi soi Mỗi đơn vị thí nghiệm gồm 12 cái/một vỉ nuôi, vỉ nuôi nghiệm thức Trung bình số naupli sinh P annandalei 10 ngày tổng trung 78 • TRƯỜNG ĐẠI HỌC NHA TRANG Số 4/2019 bình số naupli sinh ngày nghiệm thức Naupli lọc thu hàng ngày cố định Lugol 4% trước đếm số lượng kính hiển vi soi Số naupli trung bình ngày (sinh copepoda cái) đơn vị thí nghiệm tính tổng số naupli chia cho tổng số copepoda sống Phương pháp xử lý số liệu Các số liệu tỷ lệ sống, sức sinh sản, tỷ lệ nở thành công, số naupli nở số naupli sinh trình bày dạng giá trị trung bình ± sai số chuẩn (Mean ± SE) Tất số liệu xử lý phần mềm Microsoft excel 2010 phần mềm SPSS version 22 với phân tích phương sai ba yếu tố (Three-way ANOVA) yếu tố (One-way ANOVA), so sánh Ducan với mức ý nghĩa P0,05 Hình Ảnh hưởng sốc độ mặn lên tỷ lệ sống giai đoạn naupli P annandalei 80 • TRƯỜNG ĐẠI HỌC NHA TRANG Tạp chí Khoa học - Cơng nghệ Thủy sản Số 4/2019 Hình Ảnh hưởng sốc độ mặn lên tỷ lệ sống giai đoạn copepodit P annandalei Hình Ảnh hưởng sốc độ mặn đến tỷ lệ sống copepoda đực trưởng thành P annandalei TRƯỜNG ĐẠI HỌC NHA TRANG • 81 Tạp chí Khoa học - Cơng nghệ Thủy sản Số 4/2019 Hình Ảnh hưởng sốc độ mặn đến tỷ lệ sống copepoda trưởng thành P annandalei 1.2 Tỷ lệ nở thành công số naupli nở ra/P annandalei Kết ảnh hưởng sốc độ mặn đến sinh sản (Hình 5) cho thấy tỷ lệ nở trứng copepoda bị ảnh hưởng chuyển từ độ mặn 20 ppt vào độ mặn khác mà không qua độ mặn Tỷ lệ copepoda có trứng nở naupli đạt cao độ mặn 20, 25, 30 ppt với 95 – 97%, sai khác khơng có ý nghĩa thống kê nghiệm thức độ mặn (P>0,05), lại sai khác có ý nghĩa thống kê với nghiệm thức độ mặn lại (P