Nghiên cứu nuôi cấy invitro cây đảng sâm (codonopsis javanica)

BỘ GIÁO DỤC VÀ ĐÀO TẠO TRƢỜNG ĐẠI HỌC TÂY BẮC LÊ VIỆT DŨNG NGHIÊN CỨU ẢNH HƢỞNG CỦA MỘT SỐ CHẤT ĐIỀU HÒA SINH TRƢỞNG THỰC VẬT VÀ ÁNH SÁNG ĐÈN LED TRONG NUÔI CẤY INVITRO CÂY ĐẲNG SÂM (Codonopsis javanica ( Blume) Hook.f.) Ở SƠN LA Chuyên ngành: Sinh học thực nghiệm Mã số: 842 01 14 LUẬN VĂN THẠC SĨ KHOA HỌC SINH HỌC Ngƣời hƣớng dẫn khoa học: TS Lò Thị Mai Thu SƠN LA, NĂM 2017 LỜI CAM ĐOAN Tác giả luận văn xin cam đoan luận văn cơng trình nghiên cứu độc lập cá nhân tác giả Các số liệu, kết nêu luận văn trung thực chưa công bố công trình Tác giả luận văn Lê Việt Dũng i LỜI CẢM ƠN Sau thời gian học tập nghiên cứu, luận văn em hoàn thành, với lòng biết ơn sâu sắc nhất, em xin gửi đến q Thầy Cơ Khoa Sinh - Hóa, Phòng Sau đại học - Trường Đại học Tây Bắc tạo điều kiện thuận lợi giúp đỡ em suốt thời gian em học tập, nghiên cứu trường Em xin chân thành cảm ơn anh, chị Trại Thực nghiệm Sinh học Viện Công nghệ Sinh học - Viện Hàn lâm Khoa học Công nghệ Việt Nam tận tình giúp đỡ trình làm thực nghiệm Em xin bày tỏ lòng biết ơn sâu sắc tới TS Lò Thị Mai Thu tận tâm hướng dẫn, giúp đỡ động viên em q trình làm luận văn Để hồn thành luận văn, em nhận quan tâm, giúp đỡ, động viên đồng nghiệp, bạn bè, gia đình Em xin chân thành cảm ơn! Sơn La, tháng 12/2017 Học viên thực Lê Việt Dũng ii MỤC LỤC LỜI CAM ĐOAN i LỜI CẢM ƠN ii MỤC LỤC iii DANH MỤC CÁC CHỮ VIẾT TẮT iv DANH MỤC CÁC HÌNH v DANH MỤC CÁC BẢNG, BIỂU vi MỞ ĐẦU Lý chọn đề tài Nội dung nghiên cứu Mục tiêu nghiên cứu Error! Bookmark not defined Phạm vi nghiên cứu Error! Bookmark not defined Ý nghĩa thực đóng góp đề tàiError! Bookmark not defined CHƢƠNG I: TỔNG QUAN 10 1.1 Giới thiệu sơ lược Đẳng sâm 10 1.1.1 Sơ lược Đẳng sâm 10 1.1.2 Phân loại[6] 11 1.1.3 Đặc điểm hình thái 11 1.1.4 Tác dụng Đảng sâm 12 1.1.4.1 Các hoạt chất sinh học có Đẳng sâm 12 1.1.4.2 Tác dụng dược lý 13 1.1.5 Tình hình nghiên cứu Đẳng sâm 14 1.2 Nguồn ánh sáng nhân tạo vai trò ánh sáng LEDError! Bookmark not defined 1.2.1 Nguồn ánh sáng nhân tạo nhân giống trồng 15 1.2.2 Đèn LED 16 iii 1.2.3 Ứng dụng đèn LED nhân giống trồng 17 1.3 Ứng dụng công nghệ chọn tạo giống trồng 19 1.3.1 Phương pháp nuôi cấy mô tế bào thực vật 19 1.3.2 Sự phát sinh hình thái thực vật 19 1.3.3 Hệ thống nuôi cấy mô tế bào thực vật 20 1.3.4 Môi trường nuôi cấy 21 1.3.5 Vai trò chất điều hòa sinh trưởng thực vật 22 1.3.5.1 Auxin 22 1.3.5.2 Cytokinin 22 CHƢƠNG II: PHƢƠNG PHÁP NGHIÊN CỨU 25 2.1 Vật liệu, hóa chất thiết bị 25 2.1.1 Vật liệu thực vật 25 2.1.2 Hóa chất thiết bị 25 2.1.2.1 Thiết bị 25 2.1.2.2 Hóa chất 25 2.1.3 Bố trí thí nghiệm 25 2.2 Địa điểm nghiên cứu 2.3 Phương pháp nghiên cứu 26 2.2.1 Ảnh hưởng BAP NAA đến khả tạo đa chồi Đẳng sâm 26 2.2.2 Ảnh hưởng IBA than hoạt tính đến khả tạo rễ Đẳng sâm 27 2.2.3 Ảnh hưởng ánh sáng đèn LED tới sinh trưởng phát triển Đẳng sâm 27 2.3 Các tiêu theo dõi 28 2.4 Phương pháp xử lý số liệu 29 CHƢƠNG III: KẾT QUẢ VÀ THẢO LUẬN 30 3.1 Kết nuôi cấy invitro Đẳng sâm thu thập Sơn La 30 3.1.1 Khảo sát ảnh hưởng nồng độ BAP NAA đến khả tạo đa chồi Đẳng sâm 30 3.1.2 Khảo sát ảnh hưởng IBA than hoạt tính đến phát triển rễ Đẳng sâm 34 3.2 Khảo sát sinh trưởng phát triển Đẳng sâm ánh sáng đèn LED 41 3.2.1 Kết nhân nhanh tạo đa chồi Đẳng sâm invitro điều kiện chiếu sáng LED 3.2.2 Kết nhân nhanh tạo rễ Đẳng sâm invitro điều kiện chiếu sáng LED CHƢƠNG IV: KẾT LUẬN VÀ KIẾN NGHỊ 10 4.1 Kết luận 10 4.2 Kiến nghị 11 TÀI LIỆU THAM KHẢO 12 PHỤ LỤC DANH MỤC CÁC CHỮ VIẾT TẮT 2,4-D 2,4 – diclophenoxy axit AC Than hoạt tính BAP Benzyl amino purine et al cộng IAA indol axetic axit IBA Indolyl acetic acid LED Light - Emitting Diode MS Murashige & Skoog, 1962 NAA Naphthalene acetic acid PMG Photomorphogenesis iv DANH MỤC CÁC HÌNH Hình Tên hình Trang Hình 1.1 Cây Đẳng sâm Hình 1.2 Hình thái Đẳng sâm 6 Hình 1.3 Phổ phát xạ số LED màu sử dụng cho chiếu sáng thực vật Hình 3.1 Ảnh hưởng nồng độ BAP NAA đến khả tạo đa chồi Đẳng sâm Hình 3.2 Ảnh hưởng nồng độ IBA đến khả tạo rễ Đẳng sâm Hình 3.3 Ảnh hưởng ánh sáng đèn LED đến sinh trưởng Đẳng sâm Hình 3.4 Ảnh hưởng ánh sáng đèn LED đến khả tạo chồi Đẳng sâm Hình 3.5 Ảnh hưởng ánh sáng đèn LED đến khả tạo rễ Đẳng sâm v 15 34 37 38 41 44 DANH MỤC CÁC BẢNG, BIỂU Bảng Tên bảng Bảng 1.1 Hoạt chất có Đẳng sâm Bảng 2.1 Ảnh hưởng nồng độ BAP NAA đến khả tạo đa chồi Đẳng sâm Bảng 2.2 Ảnh hưởng IBA than hoạt tính đến khả tạo rễ Đẳng sâm Bảng 3.1: Ảnh hưởng nồng độ BAP vầ NAA đến khả tạo đa chồi Đẳng sâm Biểu đồ 3.1 Ảnh hưởng nồng độ BAP NAA đến khả tạo đa chồi Đẳng sâm Bảng 3.2 Ảnh hưởng IBA than hoạt tính đến khả tạo rễ Đẳng sâm Biểu đồ 3.2 ảnh hưởng IBA đến khả tạo rễ Đẳng sâm Trang 27 28 32 33 35 36 Bảng 3.3 Ảnh hưởng phối hợp ánh sáng đèn LED với tỷ lệ khác đến khả tạo chồi Đẳng 39 sâm 10 11 Biểu đồ 3.3: Ảnh hưởng đèn LED đến khả tạo đa chồi Đẳng sâm Bảng 3.4 Ảnh hưởng ánh sáng đèn LED với tỷ lệ khác đến khả tạo rễ Đẳng sâm Biểu đồ 3.4: Ảnh hưởng ánh sáng LED đến khả rễ Đẳng sâm vi 40 42 43 MỞ ĐẦU Lý chọn đề tài Đẳng sâm, loài leo thảo, sống nhiều năm Đẳng sâm lồi dược liệu có giá trị kinh tế Theo sách đỏ Việt Nam Đẳng sâm nguồn gen quý thuốc quý, sử dụng phổ biến y học dân tộc [1] Đẳng sâm thuốc quý, có tác dụng bổ ngũ tạng, nâng cao thể lực, tăng sức dẻo dai, tăng cường khả miễn dịch cho thể; có tác dụng ích huyết, sinh tân dịch, chống mệt mỏi, giảm stress Bộ phận dùng làm thuốc Đẳng sâm rễ Rễ Đẳng sâm chứa saponins, triterpenes streroid Các hoạt chất có Đẳng sâm giúp cho hoạt động trao đổi chất thể tốt Về công dụng, Đẳng sâm dùng thay cho nhân sâm bệnh thiếu máu, da vàng, bệnh bạch huyết, viêm thượng thận, nước tiểu có anbumin, chân phù đau; dùng làm thuốc bổ dày, chữa ho, tiêu đờm, lợi tiểu Do có giá trị dược lý kinh tế nên người dân tập trung khai thác rễ Đẳng sâm rừng cách triệt để; làm cạn kiệt giảm khả tái sinh nguồn tự nhiên Vì vậy, để bảo vệ nguồn dược liệu mang tính đặc hữu vùng cần có nghiên cứu bảo tồn, nhân giống, phát triển nguồn dược liệu Sơn La tỉnh miền núi phía Bắc có điều điều kiện khí hậu, đất đai có nhiều thuận lợi để phát triển loại dược liệu, thống kê 241 loại thuốc, 100 loại thuốc đặc trưng vùng 12 loại thuốc có trữ lượng lớn tự nhiên, gồm: bình vơi, cốt khí, cẩu tích, đẳng sâm, hà thủ ơ, hồng tinh, hy thiêm, kê huyết đẳng, táo mèo, thảo minh, thổ phục linh, thiên niên kiện Dân thường khai thác để bán cho thương lái nước Đặc biệt, năm trước đây, việc khai thác tràn lan không đơi với tái tạo, bảo tồn dẫn đến tình trạng loại dược liệu tự nhiên ngày cạn kiệt Có nhiều phương pháp để bảo tồn lồi dược liệu q, có phương pháp ni cấy invitro với mục đích tạo số lượng lớn giống đồng đều, bệnh Giàn A4 Giàn A3 Giàn A5 Hình 3.3: Ảnh hưởng ánh sáng đèn LED đến sinh trưởng Đẳng sâm 3.2.1 Kết nhân nhanh tạo đa chồi Đẳng sâm invitro điều ki n chiếu sáng LED Thân Đẳng sâm cắt thành đoạn nhỏ có kích thước từ 1,52 cm, có chứa chồi nách cấy vào mơi trường S3( MS + 30g/l đường + 0,2 mg/l NAA + 1mg/l BAP +2,5g/l phytagel) Sau đó, mẫu cấy ni cấy giàn đèn LED với tỷ lệ ánh sáng khác Sau 15 ngày 30 ngày nuôi cấy, tiến hành quan sát, thu thập xử lý số liệu, kết thu thể qua biểu đồ 3.1 bảng 3.3 Bảng 3.3 Ảnh hưởng phối hợp ánh sáng đèn LED với tỷ lệ khác đến khả tạo đa chồi Đẳng sâm (sau 15 ngày 30 ngày theo dõi) Chiều dài thân (cm) Số chồi/cây Giàn A1 Sau 15 ngày 3,0  0,2 5,4  1,1 Giàn A2 2,9  0,3 5,8 1,2 Giàn A3 2,5  0,2 5.3 1,2 Giàn A4 3,3  0,3 6,7 1,3 Giàn A5 2,2  0,3 5,2  1,2 Giàn A1 Sau 30 ngày 6,5 ± 0,2 9,4 ± 1,3 Giàn A2 6,8 ± 0,3 9,2 ± 1,2 Giàn A3 6,4 ± 0,3 9,5 ± 1,4 Giàn A4 7,6 ± 0,2 11,8 ± 1,3 Giàn A5 6,5 ± 0,2 9,1 ± 1,2 số chồi/ 14 12 10 sau 15 ngày theo dõi sau 30 ngày theo dõi Giàn A1 Giàn A2 Giàn A3 Giàn A4 Giàn A5 Biểu đồ 3.3: Ảnh hưởng đèn LED đến khả tạo đa chồi Đẳng sâm Qua bảng 3.3, biểu đồ 3.3 hình 3.4 ta thấy sinh trưởng Đẳng sâm tỉ lệ đèn khác có sinh trưởng tạo đa chồi tăng lên cách rõ rệt theo ngày Ở 15 ngày đầu, sinh trưởng Đẳng sâm tỉ lệ đèn khác trung bình dao động từ 5,2 đến 6,7 chồi/cụm, tỉ lệ đèn 20% xanh: 80% đỏ đậm ( Giàn A4) trung bình 6,7 chồi/1 cụm đạt giá trị cao tỉ lệ huỳnh quang trung bình 5,2 chồi/1 cụm đạt giá trị thấp Ở 30 ngày sau, sinh trưởng Đẳng sâm có thay đổi tỉ lệ đèn khác so với 15 ngày đầu dao động từ 9,1 đến 11,4 chồi/cụm, tỉ lệ đèn 20% xanh : 80% đỏ đậm ( giàn A4) trung bình 11,4 chồi/1 cụm đạt giá trị cao đạt giá trị thấp tỉ lệ đèn 100% trắng ( giàn A5) (trung bình 9,1 chồi/1 cụm) Những số liệu thu sau 15 ngày 30 ngày nuôi cấy phản ánh chất lượng ánh sáng khác lên sinh trưởng phát triển chồi Đẳng sâm invitro Do đó, chúng tơi lựa chọn ánh sáng thích hợp tạo đa chồi Đẳng sâm thí nghiệm ánh sáng giàn A4 có tỷ lệ 80% đỏ đậm 20% xanh) Sau 15 ngày Sau 30 ngày Hình 3.4: Ảnh hưởng ánh sáng đèn LED đến khả tạo chồi Đẳng sâm 3.2.2 Kết nhân nhanh tạo rễ Đẳng sâm invitro điều ki n chiếu sáng LED Ánh sáng đơn sắc từ đèn LED (đi – ốt phát quang) nghiên cứu làm nguồn sáng nhân giống thực vật Sử dụng ánh sáng đơn sắc đỏ (600 – 700 nm) đỏ xa (700 – 800 nm) kết hợp với xanh lam đèn LED làm tăng trưởng tốt tiết kiệm điện so với dùng đèn huỳnh quang Một yếu tố mơi trường ảnh hưởng lên q trình tạo rễ mẫu cấy ánh sáng Ánh sáng góp phần vào việc tạo rễ chồi bất định đoạn cắt Chỉ cần cường độ ánh sáng thấp cho trình tạo rễ, cường độ ánh sáng cao ngăn cản tạo rễ Đối với số loài, quang kỳ ảnh hưởng đến tạo rễ Chất lượng ánh sáng ảnh hưởng đến rễ Sử dụng chồi từ môi trường nhân đa chồi co chiều dài từ – 2,5cm cấy vào môi trường R2 (MS + 10g/l đường + 0,5mg/l IBA + 0,5g/l AC + 2,5g/l phytagel) Sau đặt mẫu cấy giàn đèn LED có tỷ lệ ánh sáng khác Sau 15 ngày 30 ngày nuôi cấy, tiến hành quan sát, thu thập xử lý số liệu, kết thu thể qua bảng 3.4 biểu đồ 3.4 Bảng 3.4: Ảnh hưởng phối hợp ánh sáng đèn LED với tỷ lệ khác đến khả tạo rễ Đẳng sâm (sau 15 ngày 30 ngày theo dõi) Tỷ lệ rễ (%) Số rễ/cây Chiều dài rễ (cm) Sau 15 ngày Giàn A1 100 3,4 ± 1,2 0,5 ± 0,05 Giàn A2 100 3,2 ± 1,3 0,4 ± 0,05 Giàn A3 100 3,1 ± 1,2 0,2 ± 0,05 Giàn A4 100 3,2 ± 1,0 0,2 ± 0,05 Giàn A5 100 2,9 ± 1,2 0,5 ± 0,05 Sau 30 ngày Giàn A1 100 6,8 ± 1,5 2,6 ± 0,2 Giàn A2 100 6,2 ± 1,3 2,5 ± 0,2 Giàn A3 100 6,4 ± 1,3 2,3 ± 0,3 Giàn A4 100 6,5 ± 1,4 2, ± 0,2 Giàn A5 100 5,8 ± 1,3 2,5 ± 0,2 số rễ/cây 15 ngày 30 ngày Giàn A1 Giàn A2 Giàn A3 Giàn A4 Giàn A5 Biểu đồ 3.4: Ảnh hưởng ánh sáng LED đến khả rễ Đẳng sâm Những số liệu thu sau 15 ngày 30 ngày nuôi cấy phản ánh chất lượng ánh sáng khác lên sinh trưởng phát triển rễ Đẳng sâm invitro Kết cho thấy, chất lượng ánh sáng khác tác động khác lên sinh trưởng phát triển Đẳng sâm invitro Ở 15 ngày đầu, phát triển rễ Đẳng sâm ở tỉ lệ khác trung bình dao động từ 2,9 đến 3,4 rễ/cây, đèn A1 (20% xanh :80% đỏ cam) có trung bình 3,4 rễ/cây đạt giá trị cao giàn đèn A5 đèn huỳnh quang có số rễ trung bình 2,9 rễ/ đạt giá trị thấp Ở 30 ngày sau, sinh trưởng phát triển rễ Đẳng sâm có thay đổi giàn đèn Số rễ trung bình dao động từ 5,8 đến 6,8 rễ/cây, giàn đèn A1 số rễ trung bình 6,8 rễ/cây đạt giá trị cao giàn đèn A5 đèn huỳnh quang có trung bình 5,8 rễ/ đạt giá trị thấp Do đó, tơi đến kết luận ánh sáng thích hợp cho việc kích thích, phát triển rễ Đẳng sâm ánh sáng giàn đèn A1 có tỉ lệ 20% ánh sáng xanh 80% ánh sáng đỏ cam Sau 15 ngày Sau 30 ngày Hình 3.5 Ảnh hưởng ánh sáng LED đến khả tạo rễ Đẳng sâm CHƢƠNG IV KẾT LUẬN VÀ ĐỀ NGHỊ 4.1 Kết luận Dựa vào kết thu từ thí nghiệm trên, rút số kết luận sau: Mơi trường thích hợp cho q trình nhân nhanh chồi Đảng sâm mơi trường MS có bổ sung 1mg/l BAP; 0,5mg/l NAA 30g/l đường saccharose, 2,5g/l phytagel, chuẩn độ pH = 5,8 Hệ số nhân chồi đạt cao sau tuần 5,2 lần Mơi trường thích hợp cho q trình rễ Đảng sâm môi trường MS có bổ sung 0,5mg/l IBA; 0,5g/l than hoạt tính 10g/l đường succharose, 2,5g/l phytagel, chuẩn pH = 5,8 Số rễ tạo thành đạt cao rễ/ 10 Tỷ lệ ánh sáng đèn LED giàn đèn A4( 20% xanh: 80% đỏ đậm) thích hợp cho sinh trưởng phát triển đa chồi Đảng sâm Tỷ lệ ánh sáng đèn led giàn đèn A1 (20% xanh : 80% đỏ cam) thích hợp cho hình thành rễ Đẳng sâm 4.2 Đề nghị Tiếp tục nghiên cứu ảnh hưởng chất điều hòa sinh trưởng đèn LED đến sinh trưởng phát triển Đẳng sâm theo dõi nhà lưới Tiếp tục đưa Đẳng sâm invitro tự nhiên để khảo sát sinh trưởng, phát triển đạt hiệu suất Triển khai kĩ thuật nhân giống invitro Đẳng sâm tác động ánh sáng đèn LED cho số sở tạo giống địa bàn tỉnh Sơn La để tạo giống Đẳng sâm có chất lượng tốt Tiếp tục nghiên cứu triển khai ảnh hưởng số chất điều hòa sinh trưởng khác nhằm tạo giống Đẳng sâm tối ưu có giá trị kinh tế cao 11 TÀI LIỆU THAM KHẢO TÀI LIỆU TIẾNG VIỆT Bộ Khoa học Công Nghệ (2000) Sách Đỏ Việt Nam, Phần thực vật NXB KH&KT, Hà Nội Đỗ Tất Lợi (2009), Những thuốc vị thuốc Việt Nam, NXB Y học Nhân giống invitro sâm dây ( Codonopsis javanica (Blume).Hook.f.) kĩ thuật nuôi cấy mô thực vật Tống Xuân Hoa năm 2016 Gottlieb Haberlandt (1902), Thực nghiệm ni cấy mơ tế bào tách rời Hồng Minh Chung, Phạm Xuân Sinh, Nguyễn Mạnh Tuyển - Bước đầu nghiên cứu thành phần hóa học vị thuốc đảng sâm Việt Nam Tạp chí dược liệu, tập số 1; 2002 Lê Trần Bình, Hỗ Hữu Nhị, Lê Thị Muội (1997), Công nghệ sinh học thực vật cải tiến giống trồng, NXB Nông Nghiệp Lê Văn Hồng, Cơng nghệ ni cấy mơ tế bào thực vật, Nhà xuất Khoa Học Kỹ thuật Hà Nội Nghuyễn Như Khanh, Cao Phi Bằng (2008), Sinh lý học thực vật, NXB Giáo dục Nguyễn Như Khanh (2008), Sinh học phát triển thực vật, NXB Giáo dục TÀI LIỆU TIẾNG ANH 10 Bula, R.J, Morrow R.C., Tibbitts T.W., Barta D.J., Ignatius R.W., Martin T.S (1991) Light-emitting diodes as a radiation source for plants HortScience, 26, 203-205 11 Goins, G.D., Yorio, N.C., Sanwo, M.M., Brown, C.S (1997) Photomorphogenesis, photosynthesis, and seedyield of wheat plants grown under light emitting diodes (LEDs) with or without supplemental blue lighting J Exp Bot, 48, 1407-1413 12 Moreira da Silva, M.H., Debergh, P.C (1997) The effect of light quality on the morphogenesis of in vitro cultures of Azorina vidalii (Wats.) Feer Plant Cell Tiss Org Cult, 51, 187-193 13 Nhut, D.T., Hong, L.T.A., Watanabe, H., Goi, M., Tanaka, M (2002b) In vitro growth of banana plantlets cultured under red and blue light-emitting 12 diodes (LEDs) irradiation source Act Hort, 575, 117-123 14 Nhut, D.T., Takamura, T., Goi, M., Watanabe, H., Satao, M., Tanaka, M (2000) The effect of various blue to red ratios for LED irradiation system on the in vitro growth of Phalaenopsis plantlets J Japan Soc Hortic Sc, 218 (Abstract) 15 Nhut, D.T., Takamura, T., Watanabe, H., Murakami, A., Murakami, K., Tanaka, M (2002a) Sugar-free micropropagation of Eucalyptus citriodora using light-emitting diodes (LEDs) and film-rockwool culture system Environ Control Biol, 40, 147-155 16 Nhut, D.T., Takamura, T., Watanabe, H., Okamoto, K., Tanaka, M (2003a) Responses of strawberry plantlets cultured in vitro under superbright red and blue lightemitting diodes (LEDs) Plant Cell Tiss Org, 73, 43-52 17 P Pinho, T Rosvall, E Tetri, M Eloholma and L Halonen (2008), "Light emitting diodes in plant growth: Comparative growth test in greenhouse and evaluation of photosynthetic radiation," Helsinki University of Technology, Department of Electronics – Lighting Unit, Espoo, Tech Rep 48, 2008 18 Rajapakse, N.C., Young, R.E., McMahon, M.J., Oi, R (1999) Plant height control by photoselective filters: current status and future prospects HortTech 9, 618-624 19 Sung, I.K., Kitoya, M., Hirano, T (1998) The effects of time and intensity of supplemental blue lighting during morning twilight on growth and physiological performance of cucumber seedling Life Supp Biosph Sci, 5, 137-142 20 Tanaka, M., Takamura, T., Watanabe, H., Endo, M., Panagi, T., Okamoto, K (1998) Invitro growth of Cymbidium plantlets cultured under superbright red and blue light-emitting diodes J Hortic Sci Biotech, 73, 3944 21 Tennessen, D.J., Singsaas, E.L., Sharkey, T.D (1994) Light-emitting diodes as a light source for photosynthesis research Photo Res, 39, 85-92 13 22 Tripathy, B.C., Brown, C.S (1995) Root-shoot interaction in the greening of wheat seedlings grown under red light Plant Physiol, 107, 407-411 23 Wheeler, R.M., Mackowiak, C.L., Sager, J.C (1991) Soybean stem growth under high pressure sodium with supplemental blue lighting Agron J, 83, 903-906 THAM KHẢO INTERNET 24 http://www.sieuthinhansam.vn 25 http://www.thuviensinhhoc.com 14 PHỤ LỤC Bảng 1: Thành phần loại môi trƣờng nuôi cấy Loại mơi trƣờng Kí Thành phần hiệu MS +30g/l đườngsaccharose +2,5g/l Mơi trường đa chồi D1 phytagel+ chất điều hòa sinh trưởng pH =5,8 MS + 10g/l đường saccharose +2,5g/l Môi trường rễ D2 phytagel+ AC + chất điều hòa sinh trưởng pH=5,8 Bảng 2: Thành phần môi trƣờng MS_(Murashige&Skoog, 1962) Thànhphần Thành Potasium nitrate (KNO3) Nồngđộ (mg/l) 1900 phần đa Amonium nitrate (NH4NO3) 1650 lượng Magnesium sulfate (MgSO4.7H2O) 370 Calcium chloride (CaCl2.H2O) 440 Potassium phosphate (KH2PO4) 170 Manganese sulfate (MnSO4 4H2O) 22,3 Boric Acid (H3BO3) 6,2 Thành phần vi Zinc Sulfate (ZnSO4.7H2O) 8,6 lượng Potassium Iodine (KI) 0,83 Colbalt chloride (CoCl2.6H2O) 0,025 Cupric Sulfate (CuSO4.5H2O) 0,025 Ferrous sulfate (FeSO4.7H2O) 27,8 Sodium molybdate (Na2MoO4.2H2O) 0,25 Na2EDTA.2H2O 37,2 Các Myo-inositol 100 chất Pyridoxine HCl 0,5 hữu Nicotinic aAcid 0,5 Thiamine HCl 0,1 IAA 1-30 Kinetin 0,04- 10 Glycine (recrytallized) 2,0g/l Edamine 1,0g/l Sucrose 30g/l Agar 10g/l ... cạnh có nhiều đề tài nghiên cứu nuôi cấy invitro Đẳng sâm Mặc dù Đẳng sâm invitro tạo cho số lượng chồi rễ nhiều chất lượng chồi rễ chưa cao Các nghiên cứu nước Các nghiên cứu nước chủ yếu thực... tài nghiên cứu ảnh hưởng chất điều hòa sinh trưởng thực vật ánh sáng đến LED nuôi cấy invitro Đẳng sâm mà nghiên cứu khác chưa đề cập tới Phát triển quy trình nhân giống invitro Đẳng sâm (Codonopsis. .. Thư viên VDL), chưa có đề nghiên cứu ảnh hưởng nhân tố sinh trưởng ánh sáng đèn LED nuôi cấy invitro Đẳng sâm Vì việc nghiên cứu hồn thiện quy trình ni cấy invitro Đẳng sâm có ý nghĩa quan trọng