Tiêu chuẩn Quốc gia TCVN 6470:2010 trình bày nội dung về phụ gia thực phẩm - phương pháp thử đối với các chất tạo màu. Tiêu chuẩn này quy định các phương pháp thử đối với các chất tạo màu được sử dụng làm phụ gia thực phẩm.
TIÊU CHUẨN QUỐC GIA TCVN 6470:2010 PHỤ GIA THỰC PHẨM - PHƯƠNG PHÁP THỬ ĐỐI VỚI CÁC CHẤT TẠO MÀU Food additives - Test methods for food colours Lời nói đầu TCVN 6470:2010 thay TCVN 6470:1998; TCVN 6470:2010 xây dựng sở JECFA 2006, Combined Compendium of Food Additive Specifications, Volume 4: Analytical methods, test procedures and laboratory solutions used by and referenced in the food additive specifications (Tuyển tập quy định kỹ thuật phụ gia thực phẩm, Tập 4: Các phương pháp phân tích, quy trình thử nghiệm dung dịch phòng thử nghiệm sử dụng viện dẫn yêu cầu kỹ thuật phụ gia thực phẩm); TCVN 6470:2010 Ban kỹ thuật tiêu chuẩn quốc gia TCVN/TC/F4 Phụ gia thực phẩm chất nhiễm bẩn biên soạn, Tổng cục Tiêu chuẩn Đo lường Chất lượng đề nghị, Bộ Khoa học Công nghệ công bố PHỤ GIA THỰC PHẨM - PHƯƠNG PHÁP THỬ ĐỐI VỚI CÁC CHẤT TẠO MÀU Food additives - Test methods for food colours Phạm vi áp dụng Tiêu chuẩn quy định phương pháp thử chất tạo màu sử dụng làm phụ gia thực phẩm Tài liệu viện dẫn Các tài liệu viện dẫn sau cần thiết cho việc áp dụng tiêu chuẩn Đối với tài liệu viện dẫn ghi năm công bố áp dụng phiên nêu Đối với tài liệu viện dẫn khơng ghi năm cơng bố áp dụng phiên nhất, bao gồm sửa đổi, bổ sung (nếu có) JECFA 2006, Combined Compendium fo Food Additive Specifications, Volume 4: Analytical methods, test procedures and laboratory solutions used by and referenced in the food additive specifications, Section of Analytical Techniques (Tuyển tập quy định kỹ thuật phụ gia thực phẩm, Tập 4: Các phương pháp phân tích, quy trình thử nghiệm dung dịch phòng thử nghiệm sử dụng viện dẫn yêu cầu kỹ thuật đới với phụ gia thực phẩm, Phần Các kỹ thuật phân tích) Phương pháp thử 3.1 Quy định chung - Trong tiêu chuẩn sử dụng thuốc thử tinh khiết phân tích sử dụng nước cất nước loại khóang, trừ có quy định khác - Trong tiêu chuẩn sử dụng thiết bị dụng cụ phòng thử nghiệm thơng thường 3.2 Phương pháp nhận biết chất màu 3.2.1 Phương pháp nhận biết sắc kí Xem JECFA 2006, Combined Compendium fo Food Additive Specifications, Volume 4, Section on Analytical Techniques (Tuyển tập quy định kỹ thuật phụ gia thực phẩm, Tập 4, Phần Các kỹ thuật phân tích) Giá trị hệ số lưu R1 chất nói chung khơng thể định lượng xác nhiều yêu tố bao gồm: thành phần thời hạn hỗn hợp dung môi, nồng độ dung mơi bay khơng khí, chất lượng giấy sắc kí, hướng seo giấy, kiểu loại chất lượng chất màu phụ, nồng độ, giá trị pH dung dịch nhiệt độ Do đó, cần so sánh mẫu thử với chất màu chuẩn cách cho chạy đồng thời vài chất màu có nồng độ tương tự để loại bỏ số yếu tố Bảng đưa ví dụ giá trị R1 dự kiến dung dịch 1% chất màu khác triển khai sắc kí lớp mỏng silica gel G hệ thống 10 dung môi nêu đây: Iso propanol: amoniac (tỉ trọng 0,880): nước (7: 2: 1) Iso butanol: etanol: nước: amoniac (tỉ trọng 0,880) (10 : 20 : 10 : 1) Dung dịch kali nitrat bão hòa nước Phenol: nước (4: 1) (phần khối lượng/thể tích) Axit clohydric (tỉ trọng 1,18): nước (23 : 77) Trinatri xitrat: amoniac (tỉ trọng 0,880): nước (2g: 15 ml: 85 ml) Axeton: 2-butanon: amoniac (tỉ trọng 0,880): nước (60: 140: 1: 60) n-Butanol: etanol: pyridin: nước (2 : : : 2) Iso propanol: amoniac (tỉ trọng 0,880) (4: 1) 10 n-Butanol: axetic axit (băng): nước (10: 5: 6) CHÚ THÍCH: Thành phần hệ dung môi phải chuẩn bị Việc đánh giá chất tạo màu cần thực sắc đồ ẩm dung mơi, đánh giá lại sau khô Màu sắc cần đánh giá ánh sáng tới xuyên qua, ánh sáng từ ngoại (UV) thấy nhiều chất màu thay đổi đặc tính màu Ngồi ra, ánh sáng tử ngoại thường dùng để nhận biết có mặt các tạp chất huỳnh quang khơng màu Nếu có thể, sử dụng hai xạ UV có chiều dài bước sóng khác nhau; đèn phát xạ bước sóng khoảng 250 nm Nên tiến hành phép thử với axit, kiềm thuốc thử thích hợp khác, để khẳng định kết Tất phép thử tiến hành với pipet mao quản vết màu Khi nhận biết chất tạo màu cách so sánh với chất màu chuẩn phải đáp ứng yêu cầu sau đây: - khoảng di chuyển vài hệ dung môi; - màu sắc ánh sáng thường ánh sáng tử ngoại; - thay đổi màu với thuốc thử Bảng - Giá trị Rf số chất tạo màu tan nước Chất tạo màu Số C.I Số INS Hệ thống dung môi 10 124 0,66 (0,85) 0,75 0,88 0,03 0,95 1,00 0,60 0,90 0,11 0,52 0,00-0,57 122 0,65 (0,77) 0,81 0,00-0,42 0,16 0,00 (0,00032) 1,00 0,65 0,88 0,34 (0,46) 0,63 (0,110,70) 123 0,62 (0,48; (0,76) 0,75 (0,83) 1,00 (0,001,00) 0,04 (0,16) 1,00 1,00 0,40 (0,64; 0,66) 0,90 0,10 (0,41) 0,39; 0,67 45430 127 0,85 (0,68; 0,79) 0,91 (0,86; 0,74; 0,81) 0,00,0,10 0,00-0,90 (0,41) 0,00 0,00-0,95 0,64; 0,66 (0,58) 0,89 0,66 (0,57; 0,43) 1,00 18050 - 0,68 0,680 0,37 0,12 0,00-0,71 0,90 0,64 0,90 0,36 0,68 16230 - 0,71 (0,67; 0,88) 0,80 (0,75) 0,64 (1,00; 0,35) 0,23; 0,15; 0,04 0,73 1,00 0,64 (0,62; 0,50; 0,67) 0,91 0,36 (0,32; 0,17) 0,69 (0,46; 0,82) 15970 - 0,83 (0,62) 0,88 (0,78) 0,00 (0,000,42) 0,42 (0,13) 0,13 (0,38) 0,76 (1.00) 0,68 (0,65) 0,92 0,64 (0,29) 0,82, 0,71 15985 110 0,75 (0,68) 0,82 (0,74) 1,00 (0,001,00) 0,17; 0,03 1,00 1,00 0,65 (0,48) 0,90 0,34 (0,10; 0,22) 0,67 (0,46) Màu đỏ Ponceau 4R Cochineal 16255 Red A Carmosine Azorubine 14720 Amaranth 16185 Erythrosine RS Red2G Màu vàng cam Orange G Orange RN Sunset Yellow FCF Orange Yellow S Màu vàng Tartrazine 19140 102 0,66 0,77 0,46-1,00 0,08 0,930 0,930 0,52 0,93 0,14 0,50 Yellow 2G 18965 - 0,63 0,80 0,77 0,21 0,74 0,620 0,62 0,92 0,21 0,75 Quinoline Yellow 47005 104 0,83; 0,88 0,88 (0,82) 0,00-1,00 0,65 (0,21) 0,26-1,00; 0,00-0,38 0,95 (0,35) 0,54 (0,68) 0,88 Fast Yellow AB 13015 - 0,77 0,81 0,560 0,14 0,97 0,560 0,56 0,93 0,36 0,66 142 0,44 (0,52; 0,68; 0,74) 0,61 (0,67; 0,75; 0,81; 0,84) 0,49 (0,24) 0,53 (0.05; 0,36; 1,00) 0,29 (0,43) 1,00 0,46 (0,56; 0,71) 0,75 (0,89; 0,92) 0,07 0,55 132 0,56 (0,70) 0,50-0,76 (0,78) 0,00 (0,05; 0,90; 1,00) 0,09, 0,18 (0,52) 0,92 0,94 0,66 (0,71; 0,73) 0,89; 0,84 0,37 (0,000,34) 0,00-0,63 - 0,00 0,00 0,00 0,00 0,00 0,00 0,00 0,00 0,00 0,00 42090 - 0,64 (0,73) 0,78 0,05 0,45 (0,68) 0,10 0,00-1,00 0,61 (0,68) 0,88 0,30 (0,49; 0,00-0,23) 0,53 (0,64) 42051 131 0,34 0,60 0,68 0,05 0,55 0,15 0,95 0,69 (0,72) 0,84 (0,92) 0,00-0,10 0,59 42640 - 0,73 (0,67); (0,91) 0,80 (0,72) 0,00 (0,000,48) 0,62 (0,511,00) 0,67 0,89 (0,62) 0,37; 0,45; 0,70; 0,76 0,64 (0,71) 0,00-0,31; 0,11-0,75 0,64 (0,83) Màu xanh màu tím Green S Acid Brilliant Green BS Lissamine Green Indigo Carmine Indigotin 44090 73015 Indanthrene Blue Solanthrene 69800 Blue RS Anthragen Blue Brilliant Blue FCF Patent Blue V Violet 6B 0,00-0,37 0,00-1,00 Methyl Violet 0,56; 0,81; 0,90 0,00 (0,000,31) 0,78; 0,79; 0,86 0.71; 0,66 1,00 (0,001,00) 0,91 (0,80) 0,79-1,00 0,00-0,80 0,00 (0,000,53) 0,00-0,68 (0,11; 0,28; 0,53; 1,00) 0,11 (0,90) 0,69; 0,27; 0,00-0,77 0,15,0,00 1,00 0,59; 0,64; 0,53 (0,37) 0,93 0,94; 0,87 0,75; 0,79 (0,00(0,000,83) 0,70) 42535 - - - Chocolate Brown FB - - 0,00 0,69 0,00 0,75 0,00-0,82 0,00 (0,000,23) 0,00-1,00 0,00-1,00 0,36; 0,51; 0,62 0,87 0,00-0,38 0,00-0,75 Chocolate Brown HT 20285 - 0,00 0,63 0,74 0,00-1,00 0,00 (0,000,16) 0,00-1,00 0,00-1,00 0,34; 0,43; 0,62 0,88 0,00-0,32 0,00-0,73 28440 151 0,66 (0,47) 0,75 0,00 (0,001,00) 0,00 1,00 1,00 0,38 (0,61) 0,85 0,05 0,00-0,43 27755 152 0,62 0,75 1,00 01,00 1,00 1,00 0,38 (0,61) 0,85 0,09 0,00-0,45 Màu nâu màu đen Brown FK Black PN Brilliant - Black BN Black 7984 CHÚ DẪN Số C.I.: số chất màu; Số ngoặc đơn ( ), vết phụ có cường độ màu thấp hơn; “0.xx-0.yy”: vạch vết; 0,34 (0,26; 0,53) 0,00-0,73 3.2.2 Phương pháp nhận biết đo quang phổ Xem JECFA 2006, Combined Compendium of Food Additive Specifications, Volume 4, Section on Analytical Techniques (Tuyển tập quy định kỹ thuật phụ gia thực phẩm, Tập 4, Phần Các kỹ thuật phân tích) Phương pháp quang phổ áp dụng cho vùng tử ngoại, hồng ngoại vùng ánh sáng nhìn thấy phổ điện từ Vùng nhìn thấy quang phổ thơng thường kiểm tra bước việc thử nhận biết chất màu chưa biết Có nhiều chất màu cho dải hấp thụ đặc trưng vùng nhìn thấy Phổ vùng tử ngoại sử dụng, nên thu nhận kết với kết từ phổ nhìn thấy, Trong ứng dụng phép đo quang phổ UV-VIS, phổ thu từ nhiều dung môi, từ dung mơi riêng lẻ, phải điều kiện khác Phổ dung dịch nước cần thu điều kiện trung tính (được đệm amoni axetat), axit (axit clohydric 0,1N), kiềm (natri hydroxit 0,1 N) Phổ hấp thụ vùng UV-VIS thông thường thể đồ thị độ hấp thụ bước sóng Cùng với bước sóng có độ hấp thụ cực đại, đặc tính hữu ích đặc trưng phổ hấp thụ “đoạn uốn” hay điểm uốn đường phổ Các đặc tính thường phân biệt hai nhiều chất màu có độ hấp thụ cực đại bước sóng Nhiều chất màu xác định việc quan sát phạm vi mà độ hấp thụ cực đại đặc tính khác đường cong hấp thụ bị thay đổi theo thay đổi pH khác thay đổi dung môi Phổ hấp thụ hồng ngoại biện pháp hữu ích khác để nhận biết hợp chất Ví dụ, phổ hấp thụ vùng UV-VIS chất màu Sunset Yellow Orange GGN gần đồng phổ hồng ngoại chúng lại khác hòan tồn vùng phổ mà nhóm axit sulfonic hấp thụ mạnh Phổ hồng ngoại chất thu cách dùng chế phẩm mẫu khác nhau; chế phẩm thông dụng là: - dung dịch vật liệu thử dung mơi thích hợp; - huyền phù vật liệu thử chất lỏng thích hợp - viên kali bromua (trong kỹ thuật này, lượng nhỏ chất màu, thường từ mg đến mg trộn kỹ với kali bromua khô, tinh khiết, hỗn hợp đưa vào khn thích họp nén thành viên mỏng lực nén từ 700 kg/cm đến 1400 kg/cm2) Phổ thường biểu thị % độ truyền theo số sóng (cm -1) Các phần lồi phổ cường độ pic hấp thụ hình dạng chúng Cần ý để nhận biết dải hấp thụ chất nhiễm bẩn Tất vật liệu cần kiểm tra để chắn khơng nước dung môi khác trước thu phổ hồng ngoại nước tất dung mơi hữu hấp thụ xạ hồng ngoại Các chất màu tan nước thường xử lý để phân tich cách hòa tan mẫu nước, thêm axit axetic, làm bay đến gần khô, sau làm khơ khoảng 100 °C để loại sót Nên thu nhận phổ hồng ngoại mẫu dạng chất rắn khô mẫu trắng 3.2.3 Các phương pháp nhận biết khác Để nhận biết chất màu, khử chất màu phân huỷ nhận biết sản phẩm tạo thành Phương pháp đặc biệt áp dụng để nhận biết chất màu azo Các hợp chất amin tạo từ phản ứng khử nhận biết dễ dàng kỹ thuật sắc kí đo quang phổ Các chất màu có cấu trúc tinh thể xác định nhận biết biểu đồ nhiễu xạ tia X tinh thể học tia X Một số chất màu chuyển thành dạng dẫn xuất tinh thể nhận biết theo cách tương tự 3.3 Phương pháp xác định tổng hàm lượng chất màu 3.3.1 Phương pháp xác định tổng hàm lượng chất màu đo quang phổ 3.3.1.1 Nguyên tắc Độ hấp thụ dung dịch chất màu xác định bước sóng hấp thụ cực đại tổng hàm lượng chất màu tính cách sử dụng giá trị độ hấp thụ chất chuẩn Độ hấp thụ chất màu có mẫu thử hấp thụ vùng chất màu dùng để tính kết 3.3.1.2 Thiết bị, dụng cụ 3.3.1.2.1 Máy đo quang phổ dải UV-VIS, đo độ hấp thụ xác đến ± % xác hơn, dải bước sóng từ 350 nm đến 700 nm với độ rộng khe hiệu nhỏ 10 nm 3.3.1.2.2 Cuvet quang phổ, có chiều dài đường quang cm 3.3.1.3 Quy trình - Phương pháp xác định hàm lượng chất màu tan nước 3.3.1.3.1 Cách tiến hành Cân 0,25 g ± 0,02 g mẫu thử (m), chuyển vào bình định mức lít Thêm nước vừa cất dung môi định tiêu chuẩn yêu cầu kỹ thuật xoay bình để hòa tan Thêm nước đến vạch trộn Pha loãng thành dung dịch có nồng độ thích hợp theo quy định chi tiết tiêu chuẩn yêu cầu kỹ thuật Đo độ hấp thụ (A) bước sóng có độ hấp thu cực đại, sử dụng máy đo quang phổ (3.3.1.2.1), cuvet cm (3.3.1.2.2), dùng nước dung môi định làm mẫu trắng 3.3.1.3.2 Tinh kết Hàm lượng chất màu tổng số mẫu thử, X, tính phần trăm khối lượng (%) theo cơng thức sau: hoặc: A độ hấp thụ dung dịch mẫu bước sóng hấp thụ cực đại; 1% A1cm độ hấp thụ riêng chất chuẩn; a độ hấp thụ chất chuẩn, tính l/(g.cm); Vo dung tích bình định mức, tính lít (Vo = lít); r chiều dài cuvet (3.3.1.2.2), tính centimet (r = 1cm); F hệ số pha lỗng (thể tích pha lỗng thể tích đong); m khối lượng mẫu thử, tính gam (g) 3.3.1.4 Quy trình - Phương pháp xác định hàm lượng chất màu tan dung môi hữu 3.3.1.4.1 Thuốc thử 3.3.1.4.1.1 Cloroform, không chứa axit 3.3.1.4.1.2 Xyclohexan 3.3.1.4.2 Cách tiến hành Cân khoảng 0,08 g ± 0,01 g mẫu thử (m), cho vào bình định mức 100 ml (V 1) Thêm 20 ml cloroform (3.3.1.4.1.1) hòa tan cách xoay mạnh bình Cần chắn dung dịch suốt Thêm xyclohexan (3.3.1.4.1.2) đến vạch trộn Dùng pipet lấy 5,0 ml dung dịch (v 1) cho vào bình định mức 100 ml thứ hai (V2) định mức xyclohexan đến vạch Dùng pipet lấy 5,0 ml dung dịch pha loãng (v2) cho vào bình định mức 100 ml thứ ba (V3) thêm xyclohexan đến vạch Đo độ hấp thụ (A) dung dịch pha loãng hai lần bước sóng hấp thụ cực đại, sử dụng máy đo quang phổ (3.3.1 3.1) cuvét cm (3.3.1.3.2), dùng xyclohexan làm mẫu trắng Thực quy trình này, tránh tiếp xúc với khơng khí đến mức thực tất bước điều kiện tránh ánh sáng trực tiếp mặt trời 3.3.1.4.3 Tính kết Hàm lượng chất màu tổng số mẫu thử, X, tính phần trăm khối lượng (%) theo công thức sau: hoặc: A độ hấp thụ dung dịch mẫu bước sóng hấp thụ cực đại; 1% A1cm độ hấp thụ riêng chất chuẩn quy định tiêu chuẩn yêu cầu kỹ thuật; a độ hấp thụ chất chuẩn, tính l/(g.cm); V1, V2, V3 dung tích bình định mức, tính mililít (mỗi bình 100 ml); v1, v2 thể tích lấy pipet, tính mililít (mỗi lần lấy ml); 10-3 hệ số chuyển đổi, tính mililit lít (ml/l); m khối lượng mẫu thử, tính gam (g) 3.3.1.5 Quy trình - Phương pháp xác định hàm lượng chất màu màu muối kim loại (lake) 3.3.1.5.1 Thuốc thử 3.3.1.5.1.1 Axit clohydric 3.3.1.5.1.2 Dung dịch đệm phosphat, pH = 7, chuẩn bị sau: Cân 13,61g kali dihydro phosphat cho vào cốc có mỏ dung tích 2000 ml, hòa tan 200 ml nước pha loãng đến1 000 ml Thêm khoảng 90 ml dung dịch natri hydroxit N Xác định pH máy đo pH chỉnh pH đến 7,0 dung dịch natri hydroxit 0,1 N axit phosphoric loãng 3.3.1.5.2 Cách tiến hành Cân xác lượng màu muối kim loại có độ hấp thụ gần độ hấp thụ dung dịch màu gốc dung dịch thử nghiệm theo 3.3.1.3 Chuyển lượng cân vào cốc có mỏ dung tích 250 ml có chứa 10 ml axit clohydric (3 1.5.1.1) pha loãng với nước đến khoảng 50 ml Vừa đun vừa khuấy để hòa tan màu muối kim loại, sau để nguội đến nhiệt độ phòng Chuyển sang bình định mức lít, thêm dung dịch đệm phosphat pH (3.3.1.5.1.2) đến vạch trộn Tiến hành theo quy trình 3.3.1 theo quy định tiêu chuẩn yêu cầu kỹ thuật, dùng dung dịch đệm phosphat có pH để làm mẫu trắng đo quang phổ 3.3.2 Phương pháp xác định tổng hàm lượng chất màu chuẩn độ với titan triclorua 3.3.2.1 Nguyên tắc Titan clorua (titan triclorua TiCI3) khử chất màu thành sản phẩm khử chuẩn độ Phương pháp giả định đồng phân chất màu phụ có đương lượng titan triclorua chất màu 3.3.2.2 Thuốc thử vật liệu 3.3.2.2.1 Dung dịch titan triclorua, nồng độ 0,1 N 3.3.2.2.1.1 Chuẩn bị dung dịch titan triclorua 0,1 N Đong 800 ml nước cho lít dung dịch yêu cầu, vào cốc có mỏ có dung tích thích hợp Đun sôi mạnh nước bếp điện (3.3.2.3.2) min, đậy mặt kính đồng hồ nguội đến nhiệt độ phòng Dùng ống đong chia vạch thêm 90 ml axit clohydric (3.3.2.2.2), khuấy thêm 100 ml dung dịch titan triclorua 20 % cho lít dung dịch yêu cầu (không chuyển lượng kết tủa trắng từ bình đựng thuốc thử titan triclorua sang), thực tủ hút Trộn dung dịch chuyển sang bình chuẩn độ (3.3.2.3.1.1) Gắn buret (3.3.2.3.1.2) vào nối với nguồn khí argon Cho khí argon (3.3.2.2.10) qua dung dịch h đến h qua nhánh bên có khóa bình mở để trì áp suất khí Trong trì tốc độ dòng khí thấp, hút chất chuẩn độ vào buret Tháo buret, loại bỏ chất chuẩn độ đổ đầy lại Làm buret, loại bỏ chất chuẩn độ lại đổ đầy buret Tiếp tục làm lại đổ đầy buret thêm hai lần Ngừng cấp khí, khóa nhánh bên bình bảo quản dung dịch 72 h trước sử dụng 3.3.2.2.1.2 Chuẩn hóa dung dịch titan triclorua 0,1 N Làm buret sau đổ đầy titan triclorua 0,1 N (3.3.2.2.1) vào buret Sử dụng vòng h Cân 3,0 g ± 0,2 g sắt(ll) amoni sulfat (3.3.2.2 3), cho vào bình nón 500 ml Thêm 200 ml nước Dùng ống đong chia độ thêm 25 ml axit sulfuric 10 N (3.3.2.2.4) Dùng pipet lấy 20 ml dung dịch chuẩn kali dicromat 0,100 N (3.3.2.2.5) cho vào bình nón Xoay bình để trộn Nối kín bình nón với nút (3.3.2.3.1.5) (nút cao su gắn que khuấy, ống dẫn khí vào ống thóat khí, đầu tip buret que khuấy thuỷ tinh) Đẩy nhẹ khí argon (3.3.2.2.10) vào bình Bật khuấy (3.3.2.3.1.4) tăng nhẹ tốc độ dung dịch sôi mạnh mà không bị bắn tung toé Đợi trước bắt đầu chuẩn độ tiếp tục khuấy toàn trình Sau thêm giọt từ 15 ml đến 17 ml dung dịch titan triclorua 0,1 N vòng min, ngừng dòng chất chuẩn độ giảm dòng khí argon Lấy que khuấy thuỷ tinh khỏi nút dùng pipet lấy 10 ml dung dịch chất thị amoni thioxyanat 50 % (3.3.2.2.6) cho vào bình Màu dung dịch chuyển sang đỏ nâu Lấy pipet ra, đưa que khuấy thuỷ tinh trở lại phục hồi dòng khí argon Thêm giọt titan triclorua 0,1 N, dừng lại từ s đến s sau giọt, quan sát dung dịch đổi màu rõ từ đỏ nâu sang xanh nhạt Điểm kết thúc chuẩn độ (từ 20 ml đến 21 ml) đạt dung dịch trở lại màu xanh nhạt ban đầu bền 20 s Ngắt dòng khí argon từ từ tắt dụng cụ khuấy Ghi lại thẻ tích (V) dung dịch titan triclorua 0,1 N dùng, xác đến 0,05 ml Thực chuẩn độ lặp lại ba lần Xác định với mẫu trắng khơng có chất thị cách lặp lại quy trình nêu mà khơng dùng kali dicromat 0,100 N (3.3.2.2.5) Việc xác định mẫu trắng cần 0,5 ml dung dịch titan triclorua 0,1 N (3.3.2.2.1) Ghi lại thể tích dùng, xác đến 0,05 ml Đối với lần chuẩn độ, nồng độ dung dịch titan triclorua N 20 V Vb đó: N nồng độ dung dịch kali dicromat chuẩn; 20 thể tích dung dịch kali dicromat, tính mililit (ml); V thể tích dung dịch titan triclorua cần để chuẩn độ phần thể tích dung dịch chuẩn kali dicromat, tính mililit (ml); V b thể tích dung dịch titan triclorua dùng phép thử trắng, tính mililit (ml) Tính nồng độ dung dịch chuẩn titan triclorua kết trung bình kết ba lần chuẩn độ Chuẩn hóa lại dung dịch hàng tuần cách thực phép chuẩn độ dung dịch kali dicromat 0,100 N xác định mẫu trắng khơng có chất thị 3.3.2.2.2 Axit clohydric 3.3.2.2.3 Sắt (Il) amoni sulfat [Fe(NH 4)4(SO4)2.6H2O] 3.3.2.2.4 Dung dịch axit sulfuric, nồng độ 10 N 3.3.2.2.5 Dung dịch chuẩn kali dicromat, nồng độ 0,100 N 3.3.2.2.6 Dung dịch chất thị amoni thioxyanat, nồng độ 50 % 3.3.2.2.7 Natri xitrat 3.3.2.2.8 Natri hydrotartrat 3.3.2.2.9 Viên trợ sơi 3.3.2.2.10 Khí argon, dạng khí nén UHP (cũng sử dụng cacbon dioxit sinh từ thiết bị Kipp, khí nitơ nén sử dụng với điều kiện loại bỏ lượng oxi dư) 3.3.2.3 Thiết bị, dụng cụ 3.3.2.3.1 Thiết bị chuẩn độ (ví dụ xem Hình 1), bao gồm: 3.3.2.3.1.1 Bình chuẩn độ, thuỷ tinh bosilicat (có thể tích đến lít, cần), với cổ thủy tinh mài 29/42 (đối với buret), nhánh bên để đưa ống dẫn khí vào, nhánh có khóa (để thóat khí) nhánh có nắp thuỷ tinh để bổ sung chất chuẩn độ vào bình CHÚ THÍCH Bình chuẩn độ chế tạo thủ cơng CHÚ THÍCH 2: Nên đặt sục nước nguồn khí argon thiết bị chuẩn độ 3.3.2.3.1.2 Buret điện tử, dung tích 25 ml, Brinkmann Digital Burrette II™ tương đương 3.3.2.3.1.3 Bình nón, dung tích 500 ml, đậy kín nút cao su số 10 3.3.2.3.1.4 Bộ khuấy gắn phía 3.3.2.3.1.5 Bộ nút, gồm nút cao su số 10, có năm lỗ dùng cho que khuấy đầu tip buret phân phối, nguồn khí argon, ống thóat khí pipet có dung tích 10 ml 3.3.2.3.1.6 Nút thuỷ tinh dùng cho cổng pipet 3.3.2.3.1.7 Ống nối, thủy tinh cao su đàn hồi 3.3.2.3.2 Bếp điện độ phóng Lắp tờ sắc kí khơ, với tờ giấy sắc kí (3.4.3.6) khơng chấm để làm mẫu trắng vào khung (Nếu cần, tiến hành đồng thời số tờ giấy sắc kí) Hình - Phương pháp dùng giấy sắc kí Rót lượng dung mơi sắc kí (3.4.2.1) vừa đủ vào khay, cho bề mặt lớp dung môi thấp đường giấy sắc kí (3.4.3.6) khoảng cm Thể tích dung mơi cần dùng phụ thuộc vào kích thước bình khai triển cần xác định trước Đặt khung đỡ vào vị trí đậy nắp bình Để cho dung mơi chạy lên phía trước đến khoảng cách định phía đường nền, sau nhấc khung đỡ đưa vào tủ làm khô 50 °C đến 60 °C 10 đến 15 Lấy giấy chạy sắc kí khỏi khung đỡ Cắt dải giấy sắc kí (3.4.3.6) thành dải băng màu phụ, cắt lấy dải giấy tương đương từ vị trí tương ứng giấy đối chứng Đặt dải, chia thành số phần phù hợp, xấp xỉ nhau, vào ống nghiệm riêng rẽ (3 4.3.5) Thêm 5,0 ml hỗn hợp nước : axeton (tỉ lệ : theo thể tích) vào ống nghiệm, xoay ống từ đến min, thêm 15,0 ml dung dich natri hydro cacbonat 0,05 N (3 4.2.3) lắc ống để trộn Lọc dịch chiết có màu mẫu trắng qua giấy lọc đường kính cm (3 4.3.7) vào ống nghiệm (3 4.3.5) xác định độ hấp phụ dịch chiết màu bước sóng hấp thụ cực đại chúng, sử dụng cuvet 40 mm (3.4 3.4) kín, so sánh với 5,0 ml hỗn họp lọc nước axeton (tỉ lệ : theo thể tích) 15,0 ml dung dịch natri hydro cacbonat 0,05 N Đo độ hấp thụ dịch chiết từ dải mẫu trắng bước sóng đo dịch chiết màu hiệu chỉnh độ hấp thụ dịch chiết màu với giá trị đo mẫu trắng Từ dung dịch mẫu thử nồng độ %, chuẩn bị dung dịch chuẩn tương ứng với L/100 %, L giới hạn chất màu phụ quy định tiêu chuẩn cụ thể Chấm 0,10 ml dung dịch lên giấy sắc kí kỹ thuật mô tả trên, cho chạy sắc đỏ mẫu thử mẫu trắng, sau làm khô từ 10 đến 15 50 °C đến 60 °C Cắt giấy thành dải cắt dải tương tự từ giấy trắng Tiến hành bước xác định độ hấp thụ tổng số (A s ) chất chuẩn hiệu chuẩn theo giá trị mẫu trắng 3.4.5 Tính kết Hàm lượng chất mẫu phụ mẫu thử, X , tính phần trăm khối lượng (%) theo cơng thức: L giới hạn chất màu phụ quy định tiêu chuẩn cụ thể, D tổng hàm lượng chất màu mẫu thử A a + A b + A c + + A n tổng độ hấp thụ chất màu phụ hiệu chỉnh theo giá trị mẫu trắng, A s độ hấp thụ dung dịch chuẩn 3.5 Phương pháp xác định chất không tan nước 3.5.1 Thiết bị, dụng cụ 3.5.1.1 Tủ sấy, hoạt động dải nhiệt độ tử 0°C đến 200 °C 3.5.1.2 Chén lọc, sứ 3.5.1.3 Đĩa lọc sợi thủy tinh, kiểu Whatman GF/C loại tương đương 3.5.1.4 Bình hút ẩm 3.5.2 Cách tiến hành Cần từ 4,5 g đến 5,5 g mẫu thử (m), cho vào cốc có mỏ dung tích 250 ml Thêm khoảng 200 ml nước nóng (từ 80 °C đến 90 °C), khuấy để hòa tan, dung dịch nguội đến nhiệt độ phòng Lọc dung dịch qua đĩa lọc (3.5.1.3) vào chén lọc sứ (3.5.1.2) biết khối lượng rữa nước lạnh dịch rửa không màu Sấy khơ chén lọc cặn 135 °C thu khối lượng không đổi Làm nguội chén chứa cặn bình hút ẩm (3.5.1.4) trước lần cân 3.5.3 Tính kết Hàm lượng chất khơng tan nước, X, tính phần trăm khối lượng (%) theo cơng thức: đó: mR khối lượng phần cặn lại, tính gam (g); m khối lượng mẫu thử, tính gam (g) 3.6 Phương pháp xác định chất chiết ete 3.6.1 Phương pháp I 3.6.1.1 Thuốc thử 3.6.1.1.1 Nhơm ơxit, dạng bột, dùng cho sắc kí 3.6.1.1.2 Dung dịch natri hyđroxit, nồng độ N 0,1 N 3.6.1.1.3 Dung dịch axit clohydric, nồng độ N 0,1 N 3.6.1.1.4 Etyl ete isopropyl ete, chưng cất ổn định, tinh sau: Ngay trước sử dụng, ete chưng cất cần cho qua cột nhôm oxit cao 30 cm, để loại bỏ peroxit chất gây ức chế Thử để đảm bảo hết peroxit sau: Chuẩn bị dung dịch sắt(II) thioxyanat khơng màu cách trộn thể tích dung dịch sắt(ll) sulfat 0,1 N dung dịch amoni thioxyanat 0,1 N Cẩn thận làm màu đỏ ion sắt(lll) dung dịch chuẩn titan triclorua 0,1 N Thêm 10 ml ete vào 50 ml dung dịch lắc hỗn hợp thật mạnh đến Khơng có màu đỏ xuất 3.6.1.2 Thiết bị, dụng cụ 3.6.1.2.1 Bộ chiết lỏng-lỏng, kiểu dịch chuyển lên, có phận phân phối thuỷ tinh xốp, dung tích làm việc 500 ml, có mẩu dây đồng thau cho vào qua ngưng 3.6.1.2.2 Bình chưng cất, dung tích 250 ml 500 ml, bên có cuộn dây đồng nhỏ (0,5 g) 3.6.1.2.3 Tủ sấy, hoạt động dải nhiệt độ từ 0°C đến 200 °C 3.6.1.2.4 Bình hút ẩm 3.6.1.3 Cách tiến hành 3.6.1.3.1 Chiết ete kiềm Cần xác khoảng 5,0 g mẫu thử (m) (đối với chất màu có độ hòa tan nhỏ g/150 ml, dùng lượng nhỏ hơn, theo quy định tiêu chuẩn cụ thể) Hòa tan mẫu 150 ml nước, thêm 2,5 ml dung dịch NaOH N (3.6.1.1.2) chuyển dung dịch vào bình chưng cất dung tích 500 ml (3.6.1.2.2), thêm nước đến khoảng 200 ml Thêm 200 ml ete (3.6.1.1.4) vào bình chưng cất chiết h với tốc độ hồi lưu khoảng 15 ml/min Giữ lại dung dịch màu Chuyển dịch chiết ete vào phễu chiết rửa dịch chiết ete lần lần dùng 25 ml dung dịch NaOH 0,1 N (3.6.1.1.2) sau rửa nước Chuyển vào bình chưng cất dung tích 250 ml (3.6.1.2.2) cân trước (m1), có chứa cuộn dây đồng chưng cất phần ete, giảm thể tích đến khoảng ml 3.6.1.3.2 Chiết ete axit Thêm ml axit clohydric N (3.6.1.1.3) vào dung dịch màu giữ lại từ 3.6.1.3.1, trộn chiết m ột lượng ete 3.6.1.3.1 Rửa dịch chiết ete lần lần dùng 25 ml clohydric 0.1 N (3.6.1.1.3) sau rửa nước Chuyển phần vào bình chứa dịch chiết kiềm (xem 3.6.1.3.1) làm bay cẩn thận cho bay hết ete Làm khơ hòan tồn tủ sấy (3.6.1.2.3) 85 °C 20 min, sau để nguội bình bình hút ẩm 30 đem cân Lặp lại q trình làm khơ để nguội thu khối lượng khơng đổi (m2) 3.6.1.4 Tính kết Hàm lượng chất chiết ete, X, tính phần trăm khối lượng (%) theo cơng thức đó: m khối lượng mẫu thử, tính gam (g); m1 khối lượng bình chưng cất dung tích 150 ml với dịch chiết ete kiềm (xem 3.6.1.3.1), tính gam (g); m2 khối lượng bình chưng cất với dịch chiết ete axít sau sấy (xem 3.6.1.3.2), tính gam (g) 3.6.2 Phương pháp II 3.6.2.1 Thuốc thử 3.6.2.1.1 Etyl ete isopropyl ete, chưng cất ổn định, tinh kiểm tra để đảm bảo khơng peroxit theo 3.6.1.1.4 3.6.2.2 Thiết bị, dụng cụ 3.6.2.2.1 Bộ chiết Soxhlet, có đoạn dây đồng thau cho vào qua ngưng cuộn dây đồng nhỏ (0,5 g) cho vào bình chưng cất 3.6.2.2.2 Đĩa làm bay 3.6.2.2.3 Nồi cách thuỷ 3.6.2.2.4 Tủ sấy, hoạt động dải nhiệt độ từ 0°C đến 200 °C 3.6.2.3 Cách tiến hành Cân xác khoảng g mẫu thử (m) Chuyển vào ống chiết Soxhlet (3.6.2.2.1) chiết 150 ml ete (3.6.2.1.1) h Cô đặc dịch chiết ete nồi đến khoảng ml Làm khô phần cặn đĩa làm bay (3.6.2.2.2) biết khối lượng (m 1), nồi cách thuỷ, sau làm khơ 105 °C đến thu khối lượng khơng đổi (m 2) 3.6.2.4 Tính kết Hàm lượng chất chiết ete, X, tính phần trăm khối lượng (%) theo cơng thức đó: m khối lượng mẫu thử, tính gam (g); m1 khối lượng đĩa làm bay (3.6.2 2.2), tính gam (g), m2 khối lượng với dịch chiết ete sau sấy (xem 3.6.2.3), tính gam (g) 3.7 Phương pháp xác định hàm lượng chất không tan axit clohydric màu muối kim loại 3.7.1 Thuốc thử 3.7.1.1 Axit clohydric đậm đặc 3.7.1.2 Axit clohydric, nồng độ 0,5 % (phần thể tích) 3.7.2 Thiết bị, dụng cụ 3.7.2.1 Tủ sấy, hoạt động dải nhiệt độ từ 0°C đến 200 °C 3.7.2.2 Chén nung, thuỷ tinh thiêu kết, số 3.7.2.3 Bình hút ẩm 3.7.3 Cách tiến hành Cân xác khoảng g màu muối kim loại (lake) (m) cho vào cốc có mỏ dung tích 500 ml Thêm 250 ml nước 60 ml axit clohydric đậm đặc (3.7.1 1) Đun sôi hòa tan tồn chất màu alumin Lọc qua phễu lọc vào chén nung thủy tinh (3.7.2.2) biết khối lượng (m1) Rửa phễu lọc axit clohydric nóng nồng độ 0,5 % (3.7.1.2) nước rửa khơng màu Sấy khơ cốc 135 °C thu khối lượng không đổi (m2) Làm nguội bình hút ẩm trước khí cân 3.7.4 Tính kết Hàm lượng chất khơng tan axit clohydric màu muối kim loại, X, tính phần trăm khối lượng (%) theo cơng thức: đó: m khối lượng mẫu thử, tính gam (g); m1 khối lượng chén nung thủy tinh, tính gam (g); m2 khối lượng chén nung với mẫu sau sấy, tính gam (g) 3.8 Phương pháp xác định chất không tan cloroform 3.8.1 Thuốc thử 3.8.1.1 Cloroform, nhiệt độ sôi 61,1 °C 3.8.2 Thiết bị, dụng cụ 3.8.2.1 Tủ sấy, hoạt động dải nhiệt độ từ 0°C đến 200 °C 3.8.2.2 Bếp điện 3.8.2.3 Chén nung, có đĩa lọc bơng thuỷ tinh 3.8.2.4 Bình chân khơng máy hút chân khơng 3.8.2.5 Bình hút ẩm 3.8.2.6 Cốc có mỏ, dung tích 250 ml 3.8.3 Cách tiến hành Cân xác lượng mẫu thử (m1) quy định chất tạo màu, cho vào cốc có mỏ dung tích 250 ml (3.8.2.6) Trộn với 100 ml cloroform (3 8.1 ) Khuấy đun đến sôi bếp điện (3.8.2.2) đặt tủ hút Lọc chân không dung dịch nóng vào chén nung (3.8 3) biết khối lượng (m2) Dùng cloroform chuyển phần cặn cốc có mỏ vào chén nung Rửa cặn chén nung với phần 10 ml cloroform nước rửa không màu Đặt chén nung vào tủ sấy (3.8.2.1) sấy 100 °C đến 150 °C h; để nguội chén nung bình hút ẩm (3.8.2.5) Cân chén nung với mẫu thử nguội (m ) 3.8.4 Tính kết Hàm lượng chất khơng tan cloroform có mẫu thử, X, tính phần trăm khối lượng (%) theo cơng thức sau: m1 khối lượng phần mẫu thử, tính gam (g); m2 khối lượng chén nung, tính gam (g); m3 khối lượng chén nung với mẫu sau sấy để nguội, tính gam (g) 3.9 Phương pháp xác định amin thơm khơng sulfonat hóa 3.9.1 Ngun tắc Các amin thơm khơng sulfonat hóa chiết toluen từ dung dịch mẫu thử kiểm hóa chiết lại axit sau đo máy đo quang phổ, sau diazo hóa ghép lại Các sản phẩm thể theo anilin, trừ biết trước dạng amin khác CHÚ THÍCH: Phương pháp khơng đủ nhạy để xác định anilin mức thấp mg/kg 3.9.2 Thuốc thử 3.9.2.1 Toluen 3.9.2.2 Dung dịch axit clohydric, nồng độ N 3.9.2.3 Dung dịch axit clohydric, nồng độ N 3.9.2.4 Dung dịch kali bromua, nồng độ 50 % 3.9.2.5 Dung dịch natri cacbonat, nồng đ ộ N 3.9.2.6 Dung dịch natri hydroxit, nồng độ N 3.9.2.7 Dung dịch natri hydroxit, nồng độ 0,1 N, 3.9.2.8 Dung dịch muối R (muối dinatri axit 2-naphtol-3,6 disulfonic), nồng độ 0,05 N 3.9.2.9 Dung dịch natri nitrit, nồng độ 0,5 N 3.9.2.10 Dung dịch chuẩn anilin, chuẩn bị sau: Cân 0,100 g anilin chưng cất lại, cho vào cốc có mỏ chuyển sang bình định mức 100 ml, tráng cốc vài lần nước Thêm 30 ml dung dịch axit clohydric N (3.9.2.3) pha nước đến vạch, nhiệt độ phòng Đem pha lỗng 10,0 ml dung dịch nước đến 100 ml bình định mức, trộn kỹ; ml dung dịch tương đương với 0,0001 g anilin (3.9.2.1) Chuẩn bị dung dịch chuẩn anilin trước sử dụng 3.9.3 Thiết bị, dụng cụ 3.9.3.1 Máy đo quang phổ, đo dải nhìn thấy 3.9.3.2 Cuvet đo phổ, chiều dài đường quang 40 mm 3.9.4 Cách tiến hành 3.9.4.1 Dựng đồ thị chuẩn Đong thể tích dung dịch chuẩn anilin sau đây, cho vào dãy bình định mức 100 ml : ml, 10 ml, 15 ml, 20 ml 25 ml Pha loãng đến 100 ml dung dịch axit clohydric N (3.9.2 2) trộn kỹ Dùng pipet lấy 10 ml từ dung dịch cho vào ống nghiệm khô, làm nguội 10 cách ngâm cốc nước đá Cho vào ống nghiệm ml dung dịch kali bromua (3.9.2.4) 0,05 ml dung dịch natri nitrit (3.9.2.9) Trộn để yên 10 cốc nước đá Cho vào bình định mức 25 ml, bình ml dung dịch muối R (3.9.2.8) 10 ml dung dịch natri cacbonat (3.9.2.5) Rót dung dịch anilin xử lý vào bình riêng có chứa dung dịch muối R dung dịch natri cacbonat, tráng ống nghiệm nước Pha lỗng nước đến vạch, đậy nắp bình, trộn kỹ dung dịch bình để yên 15 nơi tối Đo độ hấp thụ cặp dung dịch bước sóng 510 nm, dùng cuvet 40 mm Sử dụng mẫu so sánh hỗn hợp gồm 10,0 ml dung dịch axit clohydric N (3.9 2.1), 10,0 ml dung dich natri cacbonat (3 9.2.5), 2,0 ml dung dịch muối R (3.9.2.8), pha loãng đến 25,0 ml nước Dựng đồ thị tương quan độ hấp thụ khối lượng anilin 100 ml dung dịch amlin 3.9.4.2 Chuẩn bị kiểm tra dung dịch thử Cân khoảng 2,0 g mẫu thử (m), xác đến 0,01 g Cho vào phễu chiết có chứa 100 ml nước, tráng thành phễu 50 ml nước, xoay phễu để hòa tan mẫu thử, thêm ml dung dịch natri hydroxit N (3.9.2.6) Chiết với hai lần, lần 50 ml toluen (3.9.2.1) rửa dịch chiết toluen gộp lại lượng 10 ml dung dịch natri hydroxit 0,1 N (3.9.2.6) để loại hết vết màu Chiết phần toluen rửa ba lần, lần 10 ml dung dịch axit clohydric N (3.9.2.3) pha loãng nước phần dịch chiết gộp chung đến 100 ml Trộn kỹ Dung dịch gọi dung dịch T Dùng pipet lấy 10,0 ml dung dịch T cho vào ống nghiệm khô, làm nguội 10 cách ngâm cốc đựng nước đá, thêm ml dung dịch kali bromua (3.9.2.4) tiến hành tiếp mô tả để dựng đường chuẩn, bắt đầu việc thêm 0,05 ml dung dịch natri nitrit (3.9.2.9) Đo độ hấp thụ cặp dung dịch thử bước sóng 510 nm, cuvet 40 mm (3.9.3.2), sử dụng dung dịch so sánh chuẩn bị từ 10,0 ml dung dịch T, 10 ml dung dịch natri cacbonat (3.9.2.5) 2,0 ml dung dịch R (3.9.2.8), pha loãng nước đến 25 ml Đọc khối lượng anilin (ma) tương ứng với độ hấp thụ quan sát từ dung dịch mẫu thử đồ thị chuẩn 3.9.5 Tính kết Hàm lượng amin thơm khơng sulfonat hóa, X, tính phần trăm khối lượng anilin (%) theo cơng thức: đó: ma khối lượng anilin đọc được, tính gam (g); m khối lượng mẫu thử, tính gam (g) 3.10 Phương pháp xác định hàm lượng bazơ leuco chất màu triarylmetan sulfonat hóa 3.10.1 Ngun tắc Khơng khí thổi qua dung dịch có chứa chất tạo màu, đồng(ll) clorua, dimetylformamit dung dịch phân tích quang phổ Trong điều kiện này, bazơ leuco (hợp chất vô sắc) oxi hóa thành chất màu tương ứng làm tăng khả hấp thụ tương ứng với lượng bazơ leuco có mẫu thử 3.10.2 Thuốc thử 3.10.2.1 Đồng(ll) clorua [CuCI2.2H2O] 3.10.2.2 Dimetylformamit (DMF) 3.10.3 Thiết bị, dụng cụ 3.10.3.1 Máy đo quang phổ dải nhìn thấy 3.10.3.2 Cuvet, có chiều dài đường quang cm (cuvet dòng chảy tùy chọn) 3.10.4 Cách tiến hành LƯU Ý: Thực quy trình nhanh tốt 3.10.4.1 Chuẩn bị dung dịch 3.10.4.1.1 Dung dịch A Cân 10,0 g đồng(ll) clorua (3.10.2.1) hòa tan 200 ml DMF (3.10.2.2) Chuyển vào bình định mức lít thêm DMF (3.10.2.2) đến vạch 3.10.4.1.2 Dung dịch B Cân xác lượng mẫu thử (m), tính theo miligam, theo quy định tiêu chuẩn cụ thể Hòa tan khoảng 100 ml nước, chuyển vào bình định mức lít thêm nước đến vạch 3.10.4.1.3 Dung dịch a Dùng pipet lấy 50 ml DMF (3.10.2.2) cho vào bình định mức 250 ml Đậy màng Parafilm™ (hoặc loại tương đương) đặt nơi tối 3.10.4.1.4 Dung dịch b Dùng pipet lấy xác 10 ml dung dịch B cho vào bình định mức 250 ml Thêm 50ml DMF (3.10.2.2) Đậy màng Parafilm™ (hoặc loại tương đương) đặt nơi tối 3.10.4.1.5 Dung dịch c Dùng pipet lấy 50 ml dung dịch A vào bình định mức 250 ml Cho sục khí qua dung dịch 30 theo cách sau: Luồn pipet ml vào ống nối dẻo gắn với nguồn khơng khí thổi Cho khơng khí thổi qua từ từ vào dung dịch bình qua pipet điều chỉnh dòng khí với tốc độ nhanh kiểm sốt Sau 30 min, tháo pipet khỏi dung dịch tráng, rửa thành pipet nước vào bình sử dựng chai rửa Sau đó, ngắt dòng khơng khí 3.10.4.1.6 Các dung dịch d1 d2 (các lần lặp lại) Dùng pipet lấy xác 10 ml dung dịch B cho vào hai bình định mức riêng rẽ, dung tích 250 ml Thêm vào bình 50 ml dung dịch A Sục khơng khí qua dung dịch 30 min, sử dụng phương pháp nêu dung dịch c Sau ngừng sục khí, dùng nước pha loãng dung dịch a, b, c, d 1, d2 năm bình dung tích đặt nồi cách thủy cho nguội đến nhiệt độ phòng, DMF nước trộn với có phát nhiệt Khơng giữ bình lâu mức cần thiết; thông thường từ đến 10 đủ Thêm nước đến vạch Đo độ hấp thụ dung dịch máy đo quang phổ 3.10.4.2 Xác định đo quang phổ Dựa theo Bảng đây, dựng đường hấp thụ dung dịch a, b, c, d 1, d2 bước sóng từ 500 nm đến 700 nm, dùng dung dịch a dung dịch c làm mẫu trắng Tráng kỹ cuvet dung dịch mẫu thử lần đo Khi dùng cuvet dòng chảy tráng ba lần, lần dùng 40 ml dung dịch mẫu thử Bảng - Các đường hấp thụ Đường cong Mẫu trắng Dung dịch Nhận xét a a Đặt điểm zero bước sóng 700 nm, cho chạy; ghi lại độ hấp thụ bước sóng hấp thụ cực đại chất màu chuẩn a b Cho chạy đường cong không điều chỉnh lại điểm zero: ghi lại độ hấp thụ bước sóng hấp thụ cực đại c c Đặt điểm zero 700 nm; ghi độ hấp thụ bước sóng hấp thụ cực đại chất màu chuẩn 4a c d1 Chạy đường cong không điều chỉnh lại điểm zero, ghi lại độ hấp thụ bước sóng hấp thụ cực đại 4b c d2 Chạy đường cong không điều chỉnh lại điểm zero; ghi độ hấp thụ bước sóng hấp thụ cực đại 3.10.5 Tính kết Hàm lượng bazơ leuco có mẫu thử, X, tính phần trăm khối lượng (%) theo công thức: đó: A1 , A2, A3, A4 độ hấp thụ cực đại ghi ghi tương ứng cuvet 2, Vo thể tích bình định mức, tính lít (Vo = lít); F hệ số pha loãng: F = 250 ml/10 ml; a khả hấp thụ chất màu 100 %, tính l/(mg.cm); b chiều dài đường quang cuvet, tính centimet (cm) (b = 1cm); m khối lượng mẫu thử, tính gam (g); R tỉ số khối lượng phân tử chất màu khối lượng phân tử bazơ leuco (được quy định tiêu chuẩn cụ thể) 3.11 Phương pháp xác định hợp chất hữu chất màu 3.11.1 Phương pháp xác định sắc kí lỏng hiệu cao 3.11.1.1 Nguyên tắc Các hợp chất hữu chất màu tách HPLC, sử dụng rửa giải gradient định lượng cách so sánh diện tích pic chúng với diện tích pic thu từ dung dịch chuẩn Các điều kiện mô tả dùng làm hướng dẫn phải sửa đổi chút để tách tốt Các sai lệch so với điều kiện quy định, khác chiều dài cột Kiểu nhồi cột hệ dung môi sử dụng quy trình ion cặp đơi, cho sai lệch rửa giải so với điều kiện định, trật tự rửa giải phân giải CHÚ THÍCH Để tách xác định hợp chất hữu khơng phải chất màu (ví dụ: tạp chất không màu, chất trung gian) phương phắp sắc kí lỏng hiệu cao (HPLC) có vài ưu so với kỹ thuật sắc kí khác, cải thiện q trình tách, nhanh (có thể tự động hóa) xác Khi xác định hợp chất hữu cụ thể, phải có chất chuẩn cho hợp chất trước phân tích màu cụ thể Thông thường phương pháp HPLC mô tả chi tiết Các vật liệu nhồi cột, cột mao quản, kiểu độ nhạy detector phải chọn để tách tối đa định lượng tạp chất nêu tiêu chuẩn yêu cầu kỹ thuật chất tạo màu, tạp chất khác 3.11.1.2 Thuốc thử 3.11.1.2.1 Metanol 3.11.1.2.2 Dung dịch amoni axetat, nồng độ 0,2 N 3.11.1.2.3 Các chất chuẩn theo yêu cầu 3.11.1.3 Thiết bị, dụng cụ Các điều kiện để tiến hành sắc kí cho 3.11.1.3.1 Máy sắc kí lỏng hiệu cao, có gradient rửa giải, trang bị: - điều khiển/bộ tích phân; - bơm, tốc độ dòng ml/min, - lấy mẫu tự động, có bơm dung tích 20 l; - detector, đo độ hấp thụ vùng UV-VIS; - máy in/vẽ đồ thị 3.11.1.3.2 Cột sắc kí, C18 silica gel, cỡ hạt m kích thước cột 250 mm x 4,6 mm 3.11.1.3.3 Cột bảo vệ, C18 silica gel, cỡ hạt m, kích thước cột 15 mm x 4,6 mm 3.11.1.4 Cách tiến hành 3.11.1.4.1 Các thông số thiết bị - thể tích bơm: 20 l; - chất rửa giải + A: amoni axetat 0,2 N (3.11.1.2.2); + B: metanol (3.11.1.2.1) - gradient + 0,0 (bơm mẫu); + từ đến 35 min: % đến 40 % B (phân tích); + từ 35 đến 41 min: 100 % B (rửa); + từ 41,1 đến 55 min: từ 100 % đến % B (quay thành phần gradient ban đầu cột cân bằng) - tốc độ dòng: 1,0ml/min - nhiệt độ: mơi trường - áp suất bơm: nhỏ 300 psi (2,07 MPa), lớn 000 psi (27,58 MPa) - bước sóng detector: theo yêu cầu - tích phân: diện tích pic 3.11.1.4.2 Phương pháp xác định Chuẩn bị dung dịch mẫu chất tạo màu nồng độ 0,5 % (phần khối lượng) amoni axetat 0,02 M Chuẩn bị dung dịch hiệu chuẩn từ chất chuẩn tạp chất quy định tiêu chuẩn cụ thể Tiến hành phân tích theo hướng dẫn HPLC detector, 3.11.2 Phương pháp xác định sắc kí cột 3.11.2.1 Nguyên tắc Thu thập dịch rửa giải phân đoạn, sử dụng đo phổ hấp thụ từ để nhận biết hợp chất có mặt phân đoạn để tính nồng độ chất 3.11.2.2 Thuốc thử 3.11.2.2.1 Xenluloza dạng bột, Whatman xenluloza có hàm lượng sắt thấp tương đương 3.11.2.2.2 Amoni sultat, có hàm lượng sắt thấp 3.11.2.2.3 Dung dịch amoni sulfat, nồng độ 25 %, chuẩn bị từ amoni sultat (3.11.2.2.2) 3.11.2.3 Thiết bị, dụng cụ 3.11.2.3.1 Cột sắc kí (xem Hình 4), chuẩn bị sau: Chuẩn bị dung dịch nhão từ bột xenluloza dung dịch amoni sulfat 25 % (3.11.2 2.3), dùng khoảng 75 g xenluloza (3.11.2.2 1) cho 500 ml chất lỏng Đặt đĩa nhỏ lưới thép không rỉ vào chỗ thắt đỉnh cột sắc kí Rót thể tích vừa đủ dung dịch nhão vào cột sắc kí đến cách miệng cột khoảng cm Thỉnh thoảng vỗ nhẹ vào cột sắc kí để đảm bảo cột nhồi chặt Rửa cột 200 ml chất rửa giải dung dịch amoni sulfat 25 % (3.11.2.2.3) Kiểm tra cột cách cho 200 ml dung dịch amoni sulfat 25 % qua cột đo độ hấp thụ UV dung dịch máy đo quang phổ Độ hấp thụ phải đủ thấp để tránh gây nhiễu cho phép phân tích Kích thước tính centimet Hình - Cột sắc kí 3.11.2.3.2 Máy đo quang phổ, đo vùng tử ngoại 3.11.2.3.3 Cuvet đo phổ, chiều dài đường quang cm 3.11.2.4 Cách tiến hành Cân 0,200 g mẫu thử (m) cho vào cốc có mỏ 150 ml hòa tan 20 ml nước Thêm khoảng g bột xenluloza (3.11.2.2.1) thêm 50 g amoni sulfat (3.11.2.2.2) Chuyển hỗn hợp vào cột sắc kí (3.11.2.3.1), tráng cốc dung dịch amoni sulfat 25 % (3.11.2.2.2) cho nước tráng vào cột sắc kí Làm cột nước ngừng gần ngừng chảy Cho dung dịch amoni sulfat (3.11.2.2.2) vào cột tốc độ tương đương với tốc độ dòng chảy qua cột Thu lấy phần chiết phân đoạn 100 ml Tiếp tục thu 12 phần chiết Giữ lại cột chất cột phần chiết cuối kiểm tra đo quang phổ Trộn kỹ phần dịch chiết đo phổ hấp thụ tử ngoại dung dịch bước sóng từ 220 nm đến 400 nm, dùng chất rửa giải làm mẫu trắng Nếu phổ hấp thụ phân đoạn thứ 12 cho thấy có mặt hợp chất tiếp tục thu phần chiết từ cột hợp chất rửa giải hết Khả hấp thụ hợp chất hữu cơ, chất trung gian thu phân đoạn dự kiến có mặt mong muốn chất tạo mẫu dùng để tính hàm lượng hợp chất hữu khơng phải chất màu có mẫu thử quy định tiêu chuẩn cụ thể CHÚ THÍCH Thơng thường hợp chất có mặt phân đoạn rửa giải Khi có hợp chất, với lượng đáng kể có dịch chiết phân đoạn nào, số liệu đo quang phổ điều Trong trường hợp này, khối lượng hợp chất khác cần xác định phương pháp đo phổ thông thường hỗn hợp chất hấp thụ Một vài mẫu thử có chứa lượng nhỏ chất khác nhau, đặc biệt muối vô cơ, cho “độ hấp thụ nền” Việc hiệu chỉnh tiến hành sau: Xác định lượng chất hấp thụ phân đoạn thu từ cột trước sau phân đoạn Lấy độ hấp thụ quan sát phân đoạn có chứa hợp chất hữu trừ (1/2) tổng hai độ hấp thụ Phần lại lấy làm độ hấp thụ muối vơ 3.11.2.5 Tính kết Hàm lượng hợp chất hữu chất màu có mẫu thử, X, tính phần trăm khối lượng (%) theo cơng thức: đó: A độ hấp thụ tổng số phân đoạn rửa giải hiệu chỉnh độ hấp thụ mẫu trắng; V1 thể tích phân đoạn (V1 =0,100 lít); a khả hấp thụ lít, tính lit/(g.cm); b chiều dài đường quang cuvet, tính centimet (cm) (b = cm); m khối lượng mẫu thử, tính gam (g) 3.12 Phương pháp xác định hàm lượng clorua CHÚ THÍCH: Phương pháp tiến hành kết hợp với việc xác định hàm lượng nước (hao hụt khối lượng sấy) (3.15) kết xác định hàm lượng clorua dùng để tính hàm lượng nước 3.12.1 Thuốc thử 3.12.1.1 Dung dịch axit nitric, nồng độ 1,5 N 3.12.1.2 Dung dịch chuẩn bạc nitrat, nồng độ 0,1 N 3.12.2 Thiết bị, dụng cụ 3.12.2.1 Thiết bị chuẩn độ điện 3.12.2.2 Điện cực thị bạc 3.12.2.3 Điện cực so sánh calomel, có thân thuỷ tinh có cầu nối dung dịch kali sulfat 3.12.3 Cách tiến hành Cân xác từ 0,5 g đến 1,0 g mẫu thử (m), hòa tan 100 ml nước axit hóa ml dung dịch axit nitric 1,5 N (3.12.1.1) Đặt điện cực bạc (3.12.2.2) điện cực calomel có thân thuỷ tinh (3.12.2.3) vào dung dịch màu Nếu có điện cực so sánh calomel chuẩn nối điện cực với dung dịch cầu nối kali sulfat bão hòa (dùng điện cực thuỷ tinh làm điện cực so sánh khơng cần đến cầu nối kali sulfat bão hòa; điều làm đơn giản thiết bị cách đáng kể điện cực thuỷ tinh đủ ổn định để sử dụng điện cực so sánh cho kiểu chuẩn độ này) Chuẩn độ dung dịch màu dung dịch bạc nitrat 0,1 N 3.12.4 Tính kết Hàm lượng clorua mẫu thử, X, tính phần trăm khối lượng (%) natri clorua theo cơng thức: đó: V1 thể tích dung dịch bạc nitrat 0,1 N dùng để chuẩn độ, tính mililit (ml); m khối lượng mẫu thử, tính gam (g); 0,00585 khối lượng natri clorua tương ứng với ml dung dịch bạc nitrat 0,1 N, tính gam (g) 3.13 Phương pháp xác định hàm lượng sulfat CHÚ THÍCH Phương pháp tiến hành kết hợp với việc xác định hàm lượng nước (hao hụt khối lượng sấy) (3.15) kết xác định hàm lượng sulfat dùng để tính hàm lượng nước 3.13.1 Thuốc thử 3.13.1.1 Natri clorua, không chứa sulfat 3.13.1.2 Axit clohydric 3.13.1.3 Dung dịch bari clorua, nồng độ 0,25 N 3.13.2 Cách tiến hành Cân 5,0 g mẫu thử, cho vào bình nón dung tích 250 ml hòa tan khoảng 100 ml nước cách hâm nóng nồi cách thuỷ Thêm 35 g natri clorua không chứa sulfat (3.13.1.1) Đậy nắp bình xoay bình vòng h Làm nguội bình, chuyển lượng chứa bình sang bình định mức 250 ml dung dịch natri clorua bão hòa, để dung dịch nguội đến 20 °C pha lỗng đến vạch Lắc bình, lọc dung dịch qua giấy lọc khô Dùng pipet lấy 100 ml dịch lọc cho vào cốc có mỏ dung tích 500 ml, pha lỗng đến 300 ml nước axit hóa axit clohydric (3.13.1.2), thêm ml dư Đun dung dịch đến sôi thêm lượng dư dung dịch bari clorua 0,25 N (3.13.1.3), vừa thêm giọt vừa khuấy Để yên hỗn hợp bếp điện h, để qua đêm nhiệt độ phòng Gia nhiệt đến khoảng 80 °C kết tủa lắng xuống Lọc bỏ kết tủa bari sulfat, rửa nước nóng làm nóng chảy độ nóng tạo màu đỏ đậm, chén nung biết khối lượng, thu khối lượng không đổi Tiến hành phép thử trắng, sử dụng quy trình nêu hiệu chỉnh khối lượng bari sulfat tìm 3.13.3 Tính kết Hàm lượng sulfat có mẫu thử X, tính phần trăm khối lượng (%) natri sulfat theo cơng thức: đó: m1 khối lượng bari sulfat hiệu chỉnh, tính gam (g); m khối lượng mẫu, tính gam (g); 2,5 tỉ số thể tích dung dịch mẫu thử định mức thể tich dịch lọc lấy để axit hóa 0,6086 tỉ số khối lượng phân tử natri sulfat khối lượng phân tử bari sulfat 3.14 Phương pháp xác định clorua sulfat tan nước có màu muối nhôm 3.14.1 Thuốc thử 3.14.1.1 Dung dịch axit nitric, nồng độ 1,5 N 3.14.1.2 Dung dịch axit clohydric 3.14.1.3 Dung dịch bari clorua, nồng độ 0,25 N 3.14.2 Cách tiến hành Cân xác 10 g mẫu thử cho vào cốc có mỏ dung tích 400 ml Thêm 250 ml nước Khuấy để hòa tan mẫu thử, sau khuấy vòng 30 Lọc dung dịch Đong 50 ml dịch lọc, thêm 50 ml nước axit hóa ml dung dịch axit nitric 1,5 N (3.14.1.1) Xác định hàm lượng clorua phương pháp chuẩn độ điện sử dụng cho chất tạo màu tan (xem 12) Đong lấy 50 ml dịch lọc, pha loãng đến 300 ml nước axit hóa axit clohydric (3.14.1.2), thêm ml dư Đun dung dịch đến sôi thêm lượng dư dung dịch bari clorua 0,25 N (3.14.1.3), vừa thêm giọt vừa khuấy Tiến hành phân tích cách phân huỷ, lọc nung kết tủa quy định phương pháp xác định hàm lượng sulfat sử dụng cho chất tạo màu tan (xem 3.13) 3.15 Phương pháp xác định hàm lượng nước (hao hụt khối lượng sấy) 3.15.1 Thiết bị, dụng cụ 3.15.1.1 Tủ sấy, hoạt động dải nhiệt độ từ °C đến 200 °C 3.15.1.1 Bình cân, đường kính 50 mm, cao 30 mm, có nút thủy tinh mài 3.15.2 Cách tiến hành Cân từ 2,0 g đến 3,0 g mẫu thử (m) bình cân (3.15.2.2) với nắp đậy biết khối lượng sấy bình cân mở nắp tủ sấy (3.15.2.1) nhiệt độ quy định tiêu chuẩn cụ thể (± °C) thu khối lượng không đổi, làm nguội bình hút ẩm trước lần cân 3.15.3 Tính kết Hao hụt khối lượng sấy mẫu, X, tính phần trăm khối lượng (%) theo cơng thức: đó: m1 khối lượng mẫu thử, tính gam (g); m2 khối lượng mẫu thử sấy khơ, tính gam (g) CHÚ THÍCH Kết xác định hao hụt khối lượng sấy bao gồm hàm lượng clorua (xác định theo 3.12) hàm lượng sulfat (xác định theo 3.13), cần lưu ý cống bố hàm lượng nước mẫu thử CHÚ THÍCH 2: Các chất tạo màu có chứa nhóm -SO3Na hay -COONa thường hút ẩm, lượng nước giữ lại có mặt chất tạo màu dạng hydrat Khi chất tạo màu sấy 135 °C hao hụt khối lượng tương đương với tổng hàm lượng nước, điều khơng phải cho trường hợp Ví dụ, Erytrosin vá Ponceau R, loại giữ phân tử nước dạng kết tinh 135 °C cần lưu ý tính tổng hàm lượng chất có mặt mẫu thử Báo cáo thử nghiệm Báo cáo thử nghiệm phải ghi rõ: a) phương pháp lấy mẫu sử dụng, biết; b) phương pháp thử dùng, viện dẫn tiêu chuẩn này; c) kết thử nghiệm thu được; d) tất chi tiết thao tác không quy định tiêu chuẩn này, tùy ý lựa chọn với chi tiết bất thường khác ảnh hường tới kết quả; e) thông tin cần thiết để nhận biết đầy đủ mẫu thử MỤC LỤC Phạm vi áp dụng Tài liệu viện dẫn Phương pháp thử 3.1 Quy định chung 3.2 Phương pháp nhận biết chất màu 3.2.1 Phương pháp nhận biết sắc kí 3.2.2 Phương pháp nhận biết đo quang phổ 3.2.3 Các phương pháp nhận biết khác 3.3 Phương pháp xác định tổng hàm lượng chất màu 3.3.1 Phương pháp xác định tổng hàm lượng chất màu đo quang phổ 3.3.2 Phương pháp xác định tổng hàm lượng chất màu chuẩn độ với titan triclorua 3.4 Phương pháp xác định hàm lượng chất màu phụ 3.5 Phương pháp xác định chất không tan nước 3.6 Phương pháp xác định chất chiết ete 3.7 Phương pháp xác định hàm lượng chất không tan axit clohydric màu muối kim loại 3.8 Phương pháp xác định chất không tan cloroform 3.9 Phương pháp xác định amin thơm khơng sulfonat hóa 3.10 Phương pháp xác định hàm lượng bazơ leuco chất màu triarylmetan sulfonat hóa 3.11 Phương pháp xác định hợp chất hữu chất màu 3.11.1 Phương pháp xác định sắc kí lỏng hiệu cao 3.11.2 Phương pháp xác định sắc kí cột 3.12 Phương pháp xác định hàm lượng clorua 3.13 Phương pháp xác định hàm lượng sulfat 3.14 Phương pháp xác định clorua sulfat tan nước có màu muối nhôm 3.15 Phương pháp xác định hàm lượng nước (hao hụt khối lượng sấy) Báo cáo thử nghiệm ... Phương pháp xác định Chuẩn bị dung dịch mẫu chất tạo màu nồng độ 0,5 % (phần khối lượng) amoni axetat 0,02 M Chuẩn bị dung dịch hiệu chuẩn từ chất chuẩn tạp chất quy định tiêu chuẩn cụ thể Tiến... dịch mẫu bước sóng hấp thụ cực đại; 1% A1cm độ hấp thụ riêng chất chuẩn quy định tiêu chuẩn yêu cầu kỹ thuật; a độ hấp thụ chất chuẩn, tính l/(g.cm); V1, V2, V3 dung tích bình định mức, tính mililít... giá trị đo mẫu trắng Từ dung dịch mẫu thử nồng độ %, chuẩn bị dung dịch chuẩn tương ứng với L/100 %, L giới hạn chất màu phụ quy định tiêu chuẩn cụ thể Chấm 0,10 ml dung dịch lên giấy sắc kí kỹ