Tiêu chuẩn Quốc gia TCVN 9951:2013 về Phụ gia thực phẩm - Chất tạo màu - Indigotine áp dụng cho chất tạo màu indigotine được sử dụng làm phụ gia thực phẩm. Lượng ăn vào hàng ngày chấp nhận được (ADI) của Indigoline là từ 0 mg/kg đến 5 mg/kg thể trọng. Mời các bạn cùng tham khảo nội dung chi tiết.
pháp thử 5.1 Xác định độ hòa tan, theo 3.7 TCVN 6469:2010 5.2 Nhận biết chất màu, theo 3.2 TCVN 6470:2010 5.3 Xác định hao hụt khối lượng sấy, theo 3.15 TCVN 6470:2010 5.4 Xác định hàm lượng chất không tan nước, theo 3.5 TCVN 6470:2010 5.5 Xác định hàm lượng chất màu tổng số, theo 3.3.2 (Phương pháp chuẩn độ với titan triclorua) TCVN 6470:2010 Lượng mẫu: từ 1,0 g đến 1,1 g; Chất đệm: 15 g natri hydro tartrat 1,00 ml dung dịch titan triclorua (TiCI3) 0,1 N tương đương 23,32 mg chất màu 5.6 Xác định hàm lượng dinatri 3,3'-dioxo-[delta2,2'-biindolin]-5,5'-disulfonat, dinatri 3,3'dioxo- [delta2,2'-biindolin]-5,7'-disulfonat chất màu phụ 5.6.1 Nguyên tắc Tách đồng phân chất màu phụ sắc kí lỏng hiệu cao (HPLC) sử dụng phương pháp ngoại chuẩn 5.6.2 Thuốc thử Tất thuốc thử sử dụng phải loại tinh khiết phân tích, nước sử dụng phải nước cất nước có độ tinh khiết tương đương, trừ có quy định khác 5.6.2.1 Axetonitril, dùng cho HPLC 5.6.2.2 Amoni axetat, dùng cho HPLC 5.6.2.3 Chất chuẩn dinatri 3,3'-dioxo-[delta 2,2'-biindolin]-5,5'-disulfonat 5.6.2.4 Chất chuẩn dinatri 3,3'-dioxo-[delta 2,2'-biindolin]-5,7'-disulfonat 5.6.2.5 Dung dịch chuẩn gốc, 000 g/ml Cân 0,10 g chất chuẩn (5.6.2.3 5.6.2.4), xác đến 0,1 mg, chuyển vào bình định mức 100 ml thêm nước đến vạch 5.6.2.6 Dung dịch chuẩn làm việc Từ dung dịch chuẩn gốc (5.6.2.5), chuẩn bị năm dung dịch chuẩn làm việc có dải nồng độ từ g/ml đến 20 g/ml 5.6.3 Thiết bị, dụng cụ Sử dụng thiết bị, dụng cụ phòng thử nghiệm thơng thường cụ thể sau: 5.6.3.1 Bình định mức, dung tích 50 ml 100 ml 5.6.3.2 Hệ thống HPLC, trang bị detector tử ngoại-khả kiến (UV/VIS) detector mảng diod bơm mẫu 5.6.4 Cách tiến hành 5.6.4.1 Chuẩn bị mẫu thử Cân 0,10 g mẫu thử (w2), xác đến 0,1 mg, chuyển vào bình định mức 100 ml (V) (5.6.3.1) thêm nước đến vạch (dung dịch mẫu thử SA) Chuyển 1,00 ml (vs1) 5,00 ml (vs5) dung dịch SA vào hai bình định mức 50 ml (vS) (5.6.3.1) riêng rẽ thêm nước đến vạch (dung dịch mẫu thử S1 S5) 5.6.4.2 Điều kiện HPLC - bước sóng detector: 610 nm; - cột: C18 silica gel (250 mm x 4,6 mm, m) ACE C18 tương đương; - pha động: dung môi A (amoni axetat 0,02 mol/l) dung môi B (hỗn hợp axetonitril : nước theo tỉ lệ thể tích : 3); - gradient rửa giải: tỉ lệ thể tích dung mơi A : dung mơi B từ đến 15 min: 92 : đến 70 : 30 từ 15 đến 25 min: 70 : 30 đến 40 : 60 từ 25 đến 30 min: 40 : 60 đến 92 : từ 30 đến 35 min: 92 : 8; - nhiệt độ cột: 40 °C; - tốc độ dòng: 1,0 ml/min; - thể tích bơm: 20 l Các chất màu phụ tách khỏi thành phần đồng phân Chất màu phụ mononatri 3,3'-dioxo-[delta2,2'-biindolin]-5 sulfonat rửa giải khoảng 21 5.6.4.3 Dựng đường chuẩn Bơm năm dung dịch chuẩn làm việc (5.6.2.6) đồng phân theo điều kiện cụ thể nêu 5.6.4.2 tích phân diện tích pic phút thứ 6,5 đồng phân 5,5' (dinatri 3,3'dioxo-[delta2,2'- biindolin]-5,5'-disulfonat) phút thứ 10,8 đồng phân 5,7' (dinatri 3,3'dioxo-[delta2,2'-biindolin]- 5,7'-disulfonat) Dựng đường chuẩn diện tích píc theo nồng độ chất chuẩn, tính microgam mililit ( g/ml) 5.6.4.4 Phép xác định Bơm dung dịch mẫu thử sA, s1 s5 Diện tích píc đồng phân 5,7' dung dịch mẫu thử phải tuyến tính đường chuẩn, khơng, phải tăng thể tích Vs5 Dung dịch mẫu thử s1, s5 sA dùng để định lượng đồng phân 5,5', đồng phân 5,7' chất màu phụ 5.6.5 Tính kết Tính nồng độ đồng phân 5,5', C5,5', biểu thị phần trăm khối lượng, theo công thức sau: C5,5' A 5,5' b5,5' 10 m5,5' vs 100 v v s1 ws Tính nồng độ đồng phân 5,7', C5,7', biểu thị phần trăm khối lượng, theo công thức sau: C5,7' A 5,7' b 5,7' 10 m5,7' vs v s5 v 100 ws Tính nồng độ chất màu phụ, Csub, biểu thị phần trăm khối lượng, theo công thức sau: Csub A sum b 5,5' 10 m5,5' v 100 ws Trong đó: A5,5' diện tích píc đồng phân 5.5' sắc đồ; A5,7' diện tích píc đồng phân 5,7' sắc đồ; Asum tổng diện tích tất píc sắc đồ bước sóng 610 nm, ngoại trừ hai đồng phân 5,5' 5,7'; b5,5' b5,7' hệ số tuyến tính đường chuẩn đồng phân 5,5' đồng phân 5,7'; m5,5' m5,7' độ dốc đường chuẩn (đơn vị diện tích: ml/ g) đồng phân 5,5' đồng phân 5,7'; ws khối lượng mẫu thử, tính gam (g); v thể tích dung dịch mẫu thử sA, tính mililit (ml); vs1 thể tích dung dịch mẫu thử s1, tính mililit (ml); vs5 thể tích dung dịch mẫu thử s5, tính mililit (ml); vs thể tích dung dịch mẫu thử sau pha lỗng, tính mililit (trong trường hợp v s = 50 ml) 5.7 Xác định hàm lượng hợp chất hữu chất màu, theo 3.11 TCVN 6470:2010 Gradient rửa giải HPLC: từ % đến 100 % với tốc độ % phút (tuyến tính), sau rửa giải 100 %; 5.8 Xác định hàm lượng amin thơm bậc khơng sulfonat hóa, theo 3.9 TCVN 6470:2010 5.9 Xác định hàm lượng chất chiết ete, theo 3.6 TCVN 6470:2010, sử dụng g mẫu thử 5.10 Xác định hàm lượng chì, theo TCVN 8900-6:2012 TCVN 8900-8:2012 ... chất chuẩn (5.6.2.3 5.6.2.4), xác đến 0,1 mg, chuyển vào bình định mức 100 ml thêm nước đến vạch 5.6.2.6 Dung dịch chuẩn làm việc Từ dung dịch chuẩn gốc (5.6.2.5), chuẩn bị năm dung dịch chuẩn. .. HPLC 5.6.2.3 Chất chuẩn dinatri 3,3'-dioxo-[delta 2,2'-biindolin]-5,5'-disulfonat 5.6.2.4 Chất chuẩn dinatri 3,3'-dioxo-[delta 2,2'-biindolin]-5,7'-disulfonat 5.6.2.5 Dung dịch chuẩn gốc, 000 g/ml... 6470:2010 5.9 Xác định hàm lượng chất chiết ete, theo 3.6 TCVN 6470:2010, sử dụng g mẫu thử 5.10 Xác định hàm lượng chì, theo TCVN 8900-6:2012 TCVN 8900-8:2012