Tiêu chuẩn Quốc gia TCVN 9041:-2012 về Sản phẩm rau quả - Xác định hàm lượng 5-hydroxymethylfurfural (5-HMF) quy định phương pháp xác định hàm lượng 5-hydroxymethylfurfural (5-HMF) trong các sản phẩm rau quả đã chế biến nhiệt.
TIÊU CHUẨN QUỐC GIA TCVN 9041:2012 ISO 7466:1986 SẢN PHẨM RAU QUẢ - XÁC ĐỊNH HÀM LƯỢNG 5-HYDROXYMETHYLFURFURAL (5-HMF) Fruit and vegetable products - Determination of 5-hydroxymethylfurfural (5-HMF) content Lời nói đầu TCVN 9041:2012 hồn tồn tương đương với ISO 7466:1986; TCVN 9041:2012 Cục An toàn vệ sinh thực phẩm tổ chức biên soạn, Bộ Y tế đề nghị, Tổng cục Tiêu chuẩn Đo lường Chất lượng thẩm định, Bộ Khoa học Công nghệ công bố SẢN PHẨM RAU QUẢ - XÁC ĐỊNH HÀM LƯỢNG 5-HYDROXYMETHYLFURFURAL (5-HMF) Fruit and vegetable products - Determination of 5-hydroxymethylfurfural (5-HMF) content Phạm vi áp dụng Tiêu chuẩn quy định phương pháp xác định hàm lượng 5-hydroxymethylfurfural (5-HMF) sản phẩm rau chế biến nhiệt Nguyên tắc Chuẩn bị dung dịch mẫu thử cách cho thêm nước vào phần mẫu thử Đối với sản phẩm chứa nhiều 10 mg sulfua dioxit tự lít, thêm axetaldehyd Thêm dung dịch axit barbituric p-toluidin vào phần dung dịch mẫu thử, dung dịch màu đỏ tạo thành phản ứng 5-hydroxymethylfurfural có mặt dung dịch mẫu thử Thực đo phổ bước sóng 550 nm Thuốc thử Chỉ sử dụng thuốc thử loại tinh khiết phân tích nước cất nước có độ tinh khiết tương đương, vừa đun sôi 3.1 Dung dịch Carrez (I) Hòa tan 150 g kali hexacyanoferrat(II) nước pha loãng nước đến 000 ml 3.2 Dung dịch Carrez (II) Hòa tan 300 g kẽm sulfat ngậm bảy phân tử nước pha loãng nước đến 000 ml 3.3 Dung dịch axit barbituric Hòa tan 0,500 g axit barbituric 70 ml nước, làm nóng nồi cách thủy, cần chuyển định lượng sang bình định mức vạch 100 ml, cần để nguội pha lỗng đến vạch Dung dịch cần bảo quản tủ lạnh 3.4 Thuốc thử p-toluidin Hòa tan 10,0 g p-toluidin (nóng chảy nhiệt độ 45 oC) khoảng 50 ml propan-2-ol, làm nóng nồi cách thủy, cần thêm 10 ml axit axetic băng, chuyển định lượng sang bình định mức vạch 100 ml, cần để nguội pha loãng đến vạch propan-2-ol Dung dịch bảo quản chai màu nâu sẫm, để tủ lạnh bền tháng 3.5 Axetaldehyd, dung dịch % thể tích (dùng trường hợp hàm lượng sulfua dioxit tự sản phẩm vượt 10 mg/l) 3.6 Dung dịch chuẩn 5-hydroxymethylfurfural (5-HMF) CHÚ THÍCH: Có thể tinh sản phẩm có bán sẵn thị trường chưa biết độ tinh khiết cách chưng cất chân không (115 oC oC; 1,333 Pa) bảo quản môi trường nitơ 3.6.1 Dung dịch gốc Hòa tan 200 mg 5-HMF nước, chuyển định lượng sang bình định mức vạch 200 ml, pha loãng nước đến vạch trộn kỹ 3.6.2 Dung dịch làm việc Chuyển ml dung dịch gốc (3.6.1) sang bình định mức vạch 100 ml, pha loãng nước đến vạch trộn kỹ Thiết bị, dụng cụ vật liệu Sử dụng thiết bị, dụng cụ phòng thử nghiệm thông thường cụ thể sau: 4.1 Máy đo phổ, đo bước sóng 550 nm trang bị cuvet có chiều dài đường quang cm 4.2 Bình định mức vạch, dung tích 25 ml, 100 ml 200 ml 4.3 Ống nghiệm, chia vạch 10 ml, có nút mài 4.4 Nồi cách thủy, trì nhiệt độ 20 oC oC 4.5 Cân phân tích Cách tiến hành 5.1 Chuẩn bị mẫu thử Loại bỏ hạt vỏ cứng, cần, trộn kỹ mẫu Một số mẫu cần lọc đủ Rã đông sản phẩm đông lạnh đông lạnh sâu bình kín cho phần chất lỏng tạo thành q trình rã đơng vào sản phẩm trước trộn 5.2 Phần mẫu thử Lấy 20 ml 20 g mẫu thử CHÚ THÍCH: Đối với sản phẩm chứa hàm lượng 5-HMF cao lấy phần mẫu thử nhỏ hơn, ví dụ: 10 ml 10 g, ml g 5.3 Chuẩn bị dung dịch thử 5.3.1 Sản phẩm đồng có màu nhạt khơng màu Chuyển phần mẫu thử sang bình định mức vạch 100 ml (4.2) Đặt nồi cách thủy (4.4), kiểm soát nhiệt độ 20 oC oC Pha loãng nước đến vạch Lọc dung dịch loại bỏ 20 ml dịch lọc đầu tiên, cần 5.3.2 Sản phẩm đồng hóa có màu đậm Chuyển phần mẫu thử sang bình định mức vạch 100 ml (4.2) thêm 50 ml nước Dùng pipet thêm cẩn thận ml dung dịch Carrez (I) (3.1) ml dung dịch Carrez (II) (3.2) Pha loãng nước đến vạch trộn Lọc dung dịch loại bỏ 20 ml dịch lọc 5.4 Xác định 5.4.1 Sản phẩm chứa hàm lượng sulfua dioxit tự nhỏ 10 mg/l 5.4.1.1 Dùng pipet chuyển vào hai ống nghiệm (4.3) (A B) ống ml dung dịch thử (5.3.1 5.3.2) Thêm 5ml dung dịch thuốc thử p-toluidin (3.4), đậy nắp lắc Để yên đến 5.4.1.2 Cho ml nước vào ống A lắc Đổ đầy dung dịch (dung dịch đối chứng) vào cuvet đo phổ 5.4.1.3 Cho ml dung dịch axit barbituric (3.3) vào ống B lắc Đổ đầy dung dịch vào cuvet đo phổ thêm dung dịch axit barbituric từ đến đo độ hấp thụ bước sóng 550 nm, so với dung dịch đối chứng (5.4.1.2) CHÚ THÍCH: Ở thời điểm sau bổ sung dung dịch axit barbituric khoảng từ đến độ hấp thụ đo dung dịch đạt tối đa sau hạ xuống đột ngột Lấy số đọc độ hấp thụ tối đa 5.4.2 Sản phẩm chứa hàm lượng sulfua dioxit tự lớn 10 mg/l 5.4.2.1 Loại bỏ sơ sulfua dioxit Chuyển 15 ml dung dịch thử (5.3.1 5.3.2) vào bình định mức vạch 25 ml, thêm ml dung dịch axetaldehyd (3.5), lắc pha loãng nước đến vạch lắc tiếp 5.4.2.2 Tiến hành quy định 5.4.1 5.5 Chuẩn bị đường chuẩn Chuyển vào dãy sáu ống nghiệm (4.3) tương ứng: 0,2 ml, 0,6 ml, 1,0 ml, 1,4 ml, 1,8 ml 2,0 ml dung dịch chuẩn làm việc 5-HMF (3.6.2) Thêm nước vào ống nghiệm (trừ ống cuối cùng) để có tổng thể tích ml Các dung dịch chứa tương ứng: g; g; 10 g; 14 g; 18 g 20 g 5-HMF Tiến hành quy định 5.4.1 Vẽ đồ thị hàm lượng 5-HMF tính g theo độ hấp thụ tương ứng Biểu thị kết Hàm lượng 5-HMF, biểu thị miligam lit miligam kilogam, theo công thức: m1 V1 V2 V0 m1 V1 V2 m0 Trong đó: m0 khối lượng phần mẫu thử (trường hợp phần mẫu thử tính theo khối lượng), tính gam (g); m1 khối lượng 5-HMF tương ứng với độ hấp thụ đo 5.4.1 5.4.2 đọc từ đường chuẩn, tính microgam ( g); V0 thể tích phần mẫu thử (trường hợp mẫu thử tính theo thể tích), tính mililit (ml) V1 thể tích dung dịch thử (trường hợp 100 ml), tính mililit (ml) V2 thể tích phần dung dịch thử dùng để xác định (trường hợp ml), tính mililit (ml) Biểu thị kết đến số nguyên gần nhất, sau: a) nước quả: miligam lit; b) dạng sản phẩm khác: miligam lit miligam kilogam Báo cáo thử nghiệm Báo cáo thử nghiệm phải ghi rõ phương pháp thử dùng kết thử nghiệm thu Báo cáo thử nghiệm phải đề cập đến chi tiết thao tác không quy định tiêu chuẩn này, tùy ý lựa chọn với chi tiết bất thường khác ảnh hưởng tới kết Báo cáo thử nghiệm phải bao gồm thông tin cần thiết để nhận biết đầy đủ mẫu thử ... Tiến hành quy định 5.4.1 5.5 Chuẩn bị đường chuẩn Chuyển vào dãy sáu ống nghiệm (4.3) tương ứng: 0,2 ml, 0,6 ml, 1,0 ml, 1,4 ml, 1,8 ml 2,0 ml dung dịch chuẩn làm việc 5-HMF (3.6.2) Thêm nước vào... (dùng trường hợp hàm lượng sulfua dioxit tự sản phẩm vượt 10 mg/l) 3.6 Dung dịch chuẩn 5-hydroxymethylfurfural (5-HMF) CHÚ THÍCH: Có thể tinh sản phẩm có bán sẵn thị trường chưa biết độ tinh khiết... tương ứng: g; g; 10 g; 14 g; 18 g 20 g 5-HMF Tiến hành quy định 5.4.1 Vẽ đồ thị hàm lượng 5-HMF tính g theo độ hấp thụ tương ứng Biểu thị kết Hàm lượng 5-HMF, biểu thị miligam lit miligam kilogam,