Tiêu chuẩn Quốc gia TCVN 9977:2013 về Thực phẩm - Định lượng tổng vi sinh vật hiếu khí bằng phương pháp sử dụng đĩa đếm petrifilm-TM quy định phương pháp sử dụng đĩa đếm Petrifilm-TM để định lượng tổng vi sinh vật hiếu khí trong thực phẩm.
lớn 10 ml để phân phối ml 4.4 Thiết bị đếm khuẩn lạc, loại chuẩn loại có độ khuếch đại độ nhìn thấy tương đương 4.5 Cân, cân xác đến 0,1 g 4.6 Thiết bị trộn tốc độ cao, có bình chứa vơ trùng 4.7 Tủ ấm, trì nhiệt độ 35 oC ± oC 4.8 Nồi hấp áp lực, trì nhiệt độ 121 ºC Lấy mẫu Việc lấy mẫu không qui định tiêu chuẩn Phòng thử nghiệm phải nhận mẫu đại diện không bị hư hỏng thay đổi trình vận chuyển bảo quản Chuẩn bị mẫu thử 6.1 Yêu cầu chung Chuẩn bị tất dung dịch pha loãng thập phân từ 90 ml nước dùng để pha loãng (3.1) 10 ml dung dịch mẫu thử pha loãng trước đó, trừ có quy định khác Lắc dung dịch pha loãng 25 lần với biên độ dao động 30 cm 6.2 Thực phẩm nói chung Cân vơ trùng 50 g mẫu thử, xác đến 0,1 g, cho vào bình trộn vơ trùng thiết bị trộn tốc độ cao (4.6) (Đối với mẫu đông lạnh, cân mẫu chưa rã đông Ổn định mẫu thử đông lạnh oC đến oC thời gian không 18 h để lấy 50 g phần mẫu thử, cần) Thêm 450 ml nước dùng để pha loãng (3.1) trộn Thời gian trộn mẫu thử đến cấy mẫu lên đĩa môi trường không 15 Nếu tổng khối lượng mẫu không đủ 50 g lấy khoảng nửa thêm thể tích nước dùng để pha lỗng (3.1) cần thiết để có dung dịch pha lỗng 10 -1 Tổng thể tích bình trộn phải phủ hồn tồn dao trộn 6.3 Hạt vỡ Cân vô trùng 50 g mẫu thử, xác đến 0,1 g, cho vào bình trộn vơ trùng thiết bị trộn (4.6) Thêm 50 ml nước dùng để pha loãng (3.1) lắc mạnh (lắc 50 lần với biên độ dao động 30 cm) để thu dung dịch pha loãng 10o Để yên đến lắc trước chuẩn bị dãy dung dịch pha loãng thập phân trước cấy mẫu 1) Sản phẩm 3M Center, St Paul, MN 55144, USA Thông tin đưa để thuận tiện cho người sử dụng tiêu chuẩn, sử dụng sản phẩm tương tự cho kết tương đương 6.4 Bột từ loại hạt Cân vơ trùng 10 g mẫu thử, xác đến 0,1 g, cho vào bình trộn vơ trùng thiết bị trộn (4.7) Thêm 90 ml nước dùng để pha loãng (3.1) lắc mạnh (lắc 50 lần với biên độ dao động 30 cm) để thu dung dịch pha loãng 10-1 Để yên đến lắc trước chuẩn bị dãy dung dịch pha loãng thập phân trước cấy mẫu Cách tiến hành Đặt đĩa đếm vi sinh vật hiếu khí PetrifilmTM (4.1) lên bề mặt phẳng Nhấc màng mỏng phía nhỏ ml huyền phù mẫu thử vào màng Đậy cẩn thận màng mỏng phía xuống chất cấy Dàn huyền phù diện tích 20 cm cách ấn nhẹ xuống tâm dụng cụ dàn mẫu (4.3) (mặt gờ dụng cụ dàn mẫu hướng xuống dưới) Lấy dụng cụ dàn mẫu để yên đĩa cho gel đông đặc lại Đặt đĩa vào tủ ấm (4.7) theo phương nằm ngang với nắp hướng lên trên, không chồng cao 20 đĩa, ủ ấm đĩa nhiệt độ 35 oC ± oC 48 h ± h Sau ủ xong, bảo quản đơng lạnh nhiệt độ nhỏ - 15 o C đến ngày, cần Đếm khuẩn lạc đĩa sau giai đoạn ủ, sử dụng thiết bị đếm khuẩn lạc (4.4) Có thể sử dụng khuếch đại rọi sáng để thuận tiện cho việc đếm Đếm tất khuẩn lạc có màu đỏ đĩa chứa từ 30 khuẩn lạc đến 300 khuẩn lạc Tính biểu thị kết Để tính số lượng vi sinh vật hiếu khí, nhân tổng số lượng khuẩn lạc đĩa (hoặc số lượng trung bình khuẩn lạc đĩa, đếm đĩa kép độ pha loãng) với số nghịch đảo độ pha loãng tương ứng Khi đếm khuẩn lạc đĩa kép độ pha lỗng kế tiếp, tính số lượng trung bình khuẩn lạc cho độ pha lỗng trước xác định trung bình số đếm tổng vi sinh vật hiếu khí Nếu khơng có đĩa có số đếm lớn 30 khuẩn lạc có màu đỏ ghi lại số đếm xác đĩa có độ pha lỗng thấp (tương ứng với dung dịch pha lỗng nhất) Nếu tất đĩa có số đếm lớn 300 xác định số đếm ước tính cách đếm số khuẩn lạc nhiều vng đại diện, tính số đếm trung bình ô vuông nhân số đếm với 20 (diện tích vùng sinh trưởng khoảng 20 cm 2) Trong trường hợp này, phải báo cáo số ước tính Nếu đĩa có mật độ khuẩn lạc q lớn để ước tính số đếm kết báo cáo "quá nhiều để đếm" Báo cáo thử nghiệm Báo cáo thử nghiệm phải bao gồm thơng tin đây: - thông tin cần thiết để nhận biết đầy đủ mẫu thử; - viện dẫn tiêu chuẩn phương pháp sử dụng; - kết đơn vị biểu thị kết quả; - ngày tháng lấy mẫu phương thức lấy mẫu (nếu có); - ngày tháng nhận mẫu phòng thử nghiệm; - ngày tháng thử nghiệm; - điểm đặc biệt quan sát trình thử nghiệm; - thao tác không quy định tiêu chuẩn coi tùy chọn, với chi tiết cố ảnh hưởng đến kết Phụ lục A (Tham khảo) Kết phép thử liên phòng thử nghiệm Các kết phép thử liên phòng thử nghiệm nêu Bảng A.1 Bảng A.1 - Kết phép thử liên phòng thử nghiệm tổng vi sinh vật hiếu khí Sản phẩm Độ lệch chuẩn lặp lại, sr Độ lệch chuẩn Độ lệch chuẩn Độ lệch chuẩn tái lập, tương đối lặp lại,tương đối tái lập, RSDr, % RSDR, % sR Bột mì 0,225 0,246 5,3 5,8 Sản phẩm dạng hạt 0,272 0,674 7,4 18,4 Tôm 0,540 0,615 9,8 11,1 Gia vị 0,274 0,303 6,0 6,6 Thịt gà tây 0,278 0,348 5,3 6,6 Rau 0,310 0,454 6,3 9,2 THƯ MỤC TÀI LIỆU THAM KHẢO [1] Validation AFNOR des méthodes alternatives d'analyse Rapport de synthèse: Reconduction de la validation ISO 16140 de la méthode 3MTM PetrifilmTM pour la numération de la flore totale dans les produits alimentaires Synthèse Reconduction Flore Totale Version (6 juillet 2009) ... thử liên phòng thử nghiệm tổng vi sinh vật hiếu khí Sản phẩm Độ lệch chuẩn lặp lại, sr Độ lệch chuẩn Độ lệch chuẩn Độ lệch chuẩn tái lập, tương đối lặp lại,tương đối tái lập, RSDr, % RSDR, % sR... - ngày tháng thử nghiệm; - điểm đặc biệt quan sát trình thử nghiệm; - thao tác không quy định tiêu chuẩn coi tùy chọn, với chi tiết cố ảnh hưởng đến kết Phụ lục A (Tham khảo) Kết phép thử liên... nghiệm phải bao gồm thơng tin đây: - thông tin cần thiết để nhận biết đầy đủ mẫu thử; - viện dẫn tiêu chuẩn phương pháp sử dụng; - kết đơn vị biểu thị kết quả; - ngày tháng lấy mẫu phương thức lấy