Tiêu chuẩn Việt Nam TCVN 5147:1990 về Thịt và sản phẩm của thịt - phương pháp xác định dư lượng penixilin quy định phương pháp xác định tổng penicillin tồn dư trong thịt và sản phẩm của thịt dùng làm thực phẩm cho người và thức ăn gia súc.
TIÊU CHUẨN VIỆT NAM TCVN 5147:1990 THỊT VÀ SẢN PHẨM CỦA THỊT PHƯƠNG PHÁP XÁC ĐỊNH DƯ LƯỢNG PENIXILIN Meat and meat products Determination of penicillin residues Tiêu chuẩn quy định phương pháp xác định tổng penicillin tồn dư thịt sản phẩm thịt dùng làm thực phẩm cho người thức ăn gia súc Đặc tính chung Penicillin thuộc họ kháng sinh, chất hữu có phân tử lượng lớn, tồn thịt sản phẩm thịt với hàm lượng nhỏ Họ penicillin gồm nhiều dẫn xuất benzyl penicillin, potasium penicillin, phenoxymethyl penicillin, ampycillin, anhydrous, bezathyl penicillin G, procaine penicillin G, …v.v Nguyên tắc Ap dụng phương pháp gián tiếp, dựa vào phản ứng tạo phức đặc trưng hoàn toàn định lượng penicillin với thuốc thử phenaltrolin- cadimi sinh phức bền Chiết phức nitrobenzen đo phổ hấp thụ nguyên tử kim loại cadimi phức tướng hữu cơ, hay phân hủy tướng hữu cơ, lấy cadimi vào axit clohydric, dung dịch 1% phổ caidimi Lấy mẫu Theo TCVN 4833 - 89 ( ST SEV 2433 - 80) Dụng cụ, thiết bị hoá chất 4.1 Dụng cụ, thiết bị: + Máy phổ hấp thụ nguyên tử SP - 9/800 hay loại tương đương + Đèn catốt rỗng cadimi + Bếp đun cách thủy + Máy xay sinh tố + Bình định mức loại + Pipet loại + Cốc chịu nhiệt + Phễu chiết 250 ml + Một số dụng cụ khác 4.2 Hóa chất: Dùng loại tinh khiết cao 99,99% hay tinh khiết quang phổ ( Specpure) + Thuốc thử Tris ( 1,10 - Phenaltrolin) Cadimi + Dung môi nitrobenzen ( C6H5NO2) + Dung dịch gốc tiêu chuẩn cadimi nồng độ 1mg/ ml + Axit nitric, dung dịch 65% + Hydroperoxyt (H2O2) dung dịch 30% + Dung dịch 1% axitclohydric nitric nước + Nước cất lần Chuẩn bị thử 5.1 Chuẩn bị mẫu phân tích: Mẫu thịt cần phân tích thái nhỏ, trộn đều, cân lượng 10 g cho vào máy xay sinh tố Thêm vào 30 ml nước cất cho máy chạy phút Cho toàn huyễn dịch vào cốc chịu nhiệt, điều chỉnh pH khoảng - đun cách thủy 60 - 70 C 30 phút Chuyển dung dịch vào bình định mức định mức nước cất đến thể tích 50 ml Sau ly tâm lắng cặn, lấy 25 ml dịch nước cho tác dụng với lượng dư (15 lần) thuốc thử Tris (1,10 - Phenaltrolin) cadimi (khoảng 10 ml) Lắc kỹ 10 phút, sau cho 5ml dung môi nitrobenzen lắc tiếp 30 phút Để yên cho phân lớp hoàn toàn phễu chiết tách lấy phần dung môi hữu chứa phức liên hợp Tro hóa ướt dung dịch chiết 30 ml axit nitric 65% vài giọt hydropeoxyt 30% bình keldan đến thu dung dịch mẫu Chuyển toàn mẫu cốc chịu nhiệt cạn để đuổi axit Sau thêm 5ml axit clohydric 1% vào cốc, chuyển dung dịch sang bình định mức định mức axit clohydric 1% đến thể tích 20 ml tiến hành xác định cadimi 5.2 Pha dãy chuẩn: Dùng dung dịch gốc tiêu chuẩn cadimi nồng độ mg/ml axit clohydric 1% để pha lỗng Tính lượng phù hợp để pha dãy chuẩn có nồng độ cadimi 0, - 0,5 - 1,0 - 1,5 - 2,0 - 2,5 g/ml bình định mức tích 25 ml 5.3 Chuẩn bị mẫu trắng: Đồng thời với việc chuẩn bị mẫu phân tích phải chuẩn bị thêm mẫu trắng để so sánh bổ Mẫu trắng chuẩn bị mẫu phân tích khơng có mẫu phân tích 5.4 Các điều kiện thực nghiệm: + Vạch phổ đo cadimi 228,8nm; + Khe đo máy AAS 0,5 nm + Burner: Loại khe dài 10 cm + Cường độ đến catốt rỗng : dùng 80% giá trị cực đại + Hỗn hợp khí: khơng khí nén axetylen 4,2/1,2 lít/ phút + Tốc độ dẫn mẫu : 4, - ml / phút + Thời gian đo: - 10 giây + Các điều kiện khác chọn phù hợp với máy AAS Tiến hành thử + Đặt thông số chọn mục 5.4 cho máy để đo cadimi + Cho máy chạy để ổn định (15 phút) + Đo phổ hấp thụ cadimi từ mẫu chuẩn, mẫu trắng Rồi đến mẫu phân tích Mỗi mẫu đo lần lấy giá trị trung bình cộng lần thử đồng thời có sai lệch giá trị khơng vượt q 15% + Hiệu chỉnh giá trị mẫu trắng (nếu có) + Dựng đường chuẩn theo hệ tọa độ D -C Trong D cường độ vạch phổ hấp thụ cadimi mẫu chuẩn tương ứng với nồng độ C dãy chuẩn + Xác định nồng độ Cx cadimi mẫu phân tích theo đường chuẩn Tính kết Tổng hàm lượng cadimi mẫu phân tích tính theo cơng thức sau C - Cx V V = 20 ml C tính Mg Sau xác định hàm lượng cadimi mẫu phân tích ta suy lượng penicillin theo phản ứng sau: Penicillin + Tris ( 1,10 - phenal trolin) Cd phức liên hợp Cd( phenaltrolin)3(Penicillin)2 Theo thành phần phức liên hợp ta thấy rằng: nguyên tử cadimi tương ứng với phân tử penicillin hay 112,4 g cadimi tương ứng với mol penicillin hay 112,4 g cadimi tương ứng với mol penicillin Vậy g cadimi tương ứng với 2/112,4 mol penicillin Do C g 2.C/112,4 mol Suy cơng thức tính hàm lượng tổng penicillin G = 2.C/112,4.a Tính mol/g Chú thích Nếu sau chiết phức nitrobenzen mà tiến hành đo cadimi phức mẫu chuẩn phải chiết nitrobenzen đo cần lưu ý thuốc thử Tris (1,10 - Phenaltrolin) Cd lấy dư 15 lần nên dẫy dung dịch chuẩn dung dịch cadimi gốc mà dung dịch penicillin gốc Sau cho lượng dung dịch gốc tác dụng với lượng dư thuốc thử, sau chiết nitrobenzen đo xác định trực tiếp tổng penicillin mẫu theo dãy dung dịch chuẩn Cách phức tạp tốn lượng lớn dung mơi nên ta phải tiến hành vơ hóa tiếp ( mục 5.1) Theo phương pháp dung dịch chuẩn gốc dung dịch chứa ion Cd2+ PHỤ LỤC Pha dung dịch gốc tiêu chuẩn cadimi nồng độ 1mg/ml; cân 1,1423g cadimi oxyt bột (Cd0), thêm 40 ml axit nitric 6M, đun nhẹ cho tan hết, để nguội định mức nước cất đến lít Dung dịch gọi dung dịch A Dung dịch cadimi nồng độ 10 g/ml; lấy ml dung dịch A, pha loãng định mức axit nitri 1% đến 100ml Dung dịch gọi dung dịch B Dung dịch cadimi nồng độ 0,1 g/ml: lấy ml dung dịch B, pha loãng định mức axit nitric 1% đến thể tích 100ml ... tiến hành xác định cadimi 5.2 Pha dãy chuẩn: Dùng dung dịch gốc tiêu chuẩn cadimi nồng độ mg/ml axit clohydric 1% để pha lỗng Tính lượng phù hợp để pha dãy chuẩn có nồng độ cadimi 0, - 0,5 - 1,0... 2,5 g/ml bình định mức tích 25 ml 5.3 Chuẩn bị mẫu trắng: Đồng thời với việc chuẩn bị mẫu phân tích phải chuẩn bị thêm mẫu trắng để so sánh bổ Mẫu trắng chuẩn bị mẫu phân tích khơng có mẫu phân... dịch chuẩn Cách phức tạp tốn lượng lớn dung mơi nên ta phải tiến hành vơ hóa tiếp ( mục 5.1) Theo phương pháp dung dịch chuẩn gốc dung dịch chứa ion Cd2+ PHỤ LỤC Pha dung dịch gốc tiêu chuẩn