Tiêu chuẩn Quốc gia TCVN 8453:2010 quy định phương pháp tính các hàm lượng rượu tự do và rượu tổng số trong tinh dầu bằng cách xác định các trị số este trước và sau khi axetyl hóa bằng anhydric axetic khi có mặt natri axetat.
8% 5.2.2 Natri axetat, dạng khan, làm nóng chảy dạng bột 5.2.3 Natri clorua, dung dịch bão hòa 5.2.4 Natri cacbonat/natri clorua, dung dịch 20 g/l natri cacbonat khan bão hòa với natri clorua 5.2.5 Magie sulfat, dạng khan, natri sulfat dạng khan, sấy khô dạng bột 5.2.6 Giấy quỳ Thiết bị, dụng cụ Sử dụng thiết bị, dụng cụ phòng thử nghiệm thơng thường cụ thể sau: 6.1 Thiết bị axetyl hóa, gồm có bình axetyl hóa dung tích từ 100 ml đến 250 ml, với cổ thủy tinh mài gắn với sinh hàn dài m đường kính khoảng 10 mm Bình cầu sinh hàn phải làm khô cẩn thận trước sử dụng 6.2 Ống đong, dung tích 10 ml, chia vạch 0,1 ml 6.3 Ống đong, dung tích 50 ml, chia vạch ml 6.4 Nồi cách thủy, trì nhiệt độ khoảng từ 40 C đến 50 C 6.5 Dụng cụ làm nóng thích hợp, để đun sôi anhydrit axetic mà không làm nhiệt cục 6.6 Phễu chiết, dung tích nhỏ 250 ml 6.7 Thiết bị để xà phòng hóa, gồm có bình cầu thủy tinh bền với kiềm, dung tích từ 100 ml đến 250 ml lắp khít với sinh hàn dài m đường kính 10 mm 6.8 Buret, dung tích 50 ml, chia vạch 0,1 ml, đáp ứng yêu cầu nêu TCVN 7149-1 (ISO 385-1)3) 6.8 Cân phân tích Lấy mẫu 3) TCVN 7149-1 (ISO 385-1) với TCVN 7149-2 (ISO 385-2) thay TCVN 7149:2007 (ISO 385:2005) Dụng cụ thí nghiệm thủy tinh – Buret Tiến hành lấy mẫu theo TCVN 8442 (ISO 212) Cách tiến hành 8.1 Chuẩn bị mẫu thử Mẫu thử chuẩn bị theo TCVN 8443 (ISO 356) 8.2 Xác định trị số este trước axetyl hóa Xác định trị số este trước axetyl hóa theo phương pháp đưa TCVN 8451 (ISO 709) 8.3 Axetyl hóa Trộn khoảng 10 ml mẫu thử (8.1), 10 ml anhydrit axetic (5.2.1) g natri axetat khan (5.2.2) bình axetyl hóa (6.1) Thêm mảnh đá bọt sứ lắp sinh hàn vào bình cầu Đốt bình dụng cụ làm nóng (6.5) trì lượng chất lỏng bình sơi khoảng h theo thời gian quy định tiêu chuẩn cụ thể loại tinh dầu cần phân tích Ở cuối giai đoạn này, chất lỏng nguội Thêm 50 ml nước cất làm ấm nồi cách thủy (6.4) nhiệt độ từ 40 C đến 50 C 15 min, lắc bình Để nguội đến nhiệt độ phòng, tháo ống sinh hàn chuyển phần chất lỏng sang phễu chiết (6.6) Rửa bình cầu hai lần với 10 ml nước thu lấy nước rửa vào phễu chiết Đợi tách pha hoàn toàn tháo hết loại bỏ pha nước Rửa tinh dầu cách lắc liên tục với: a) 50 ml dung dịch natri clorua (5.2.3); b) 50 ml dung dịch natri cacbonat/natri clorua (5.2.4); c) 50 ml dung dịch natri clorua (5.2.3); d) 20 ml nước Nếu rửa hướng dẫn, giấy quỳ (5.2.6) làm trung tính Cho pha tinh dầu vào ống khô lắc vài lần 15 với g magie natri sulfat (5.2.5) Lọc Lặp lại bước lắc tiếp với phần g magie natri sulfat tinh dầu axetyl hóa khơng chứa nước 8.4 Xác định trị số este sau axetyl hóa Xác định trị số este tinh dầu axetyl hóa (8.3) theo yêu cầu TCVN 8451 (ISO 709), cách sử dụng khoảng g, cân xác đến 0,05 g, tinh dầu axetyl hóa 50 ml dung dịch kali hydroxit (5.1.2) Biểu thị kết 9.1 Trị số este sau axetyl hóa tính theo cơng thức sau: E2 28,05 ' V0 V1' m 9.2 Hàm lượng loại rượu tự do, tính phần trăm khối lượng theo loại rượu nêu, tính theo cơng thức sau: M r E2 E1 561 0,42 E2 CHÚ THÍCH: Cơng thức tính đến việc tăng khối lượng phần mẫu thử suốt trình axetyl hóa 9.3 Hàm lượng loại rượu liên kết, tính phần trăm khối lượng theo loại rượu nêu, tính theo cơng thức sau: M r E1 561 9.4 Hàm lượng rượu tổng số, tính phần trăm khối lượng theo loại rượu nêu, thu cách cộng hai phần trăm thu 9.2 9.3 Trong công thức trên: m khối lượng mẫu thử tinh dầu axetyl hóa, tính gam (g); V0' thể tích dung dịch axit clohydric (5.1.3) sử dụng phép thử trắng, tính mililit (ml); V1' thể tích dung dịch axit clohydric (5.1.3) sử dụng phép xác định trị số este sau axetyl hóa, tính mililit (ml); Mr khối lượng phân tử tương đối rượu sử dụng để biểu thị kết theo quy ước nêu tiêu chuẩn loại tinh dầu cần phân tích; E1 trị số este tinh dầu trước axetyl hóa (8.2), xác định theo TCVN 8451 (ISO 709); E2 trị số este tinh dầu sau axetyl hóa (8.4), xác định theo TCVN 8451 (ISO 709) 10 Báo cáo thử nghiệm Báo cáo thử nghiệm phải ghi rõ phương pháp sử dụng kết thu Báo cáo thử nghiệm phải đề cập chi tiết thao tác không quy định tiêu chuẩn coi tùy chọn tình làm ảnh hưởng đến kết Báo cáo thử nghiệm phải bao gồm tất chi tiết cần thiết để nhận biết đầy đủ mẫu thử ...Tiến hành lấy mẫu theo TCVN 8442 (ISO 212) Cách tiến hành 8.1 Chuẩn bị mẫu thử Mẫu thử chuẩn bị theo TCVN 8443 (ISO 356) 8.2 Xác định trị số este trước axetyl... làm nóng (6.5) trì lượng chất lỏng bình sơi khoảng h theo thời gian quy định tiêu chuẩn cụ thể loại tinh dầu cần phân tích Ở cuối giai đoạn này, chất lỏng nguội Thêm 50 ml nước cất làm ấm nồi... nêu tiêu chuẩn loại tinh dầu cần phân tích; E1 trị số este tinh dầu trước axetyl hóa (8.2), xác định theo TCVN 8451 (ISO 709); E2 trị số este tinh dầu sau axetyl hóa (8.4), xác định theo TCVN