Tiêu chuẩn Quốc gia TCVN 8181:2009 - ISO 1735:2004. Tiêu chuẩn về Phomat và sản phẩm phomat chế biến - xác định hàm lượng chất béo - phương pháp khối lượng (phương pháp chuẩn). Tiêu chuẩn này quy định phương pháp chuẩn để xác định hàm lượng chất béo trong tất cả các loại phomat và sản phẩm phomat chế biến chứa hàm lượng lactoza thấp hơn 5 % (khối lượng) của chất khô không béo.
TIÊU CHUẨN QUỐC GIA TCVN 8181:2009 ISO 1735:2004 PHOMAT VÀ SẢN PHẨM PHOMAT CHẾ BIẾN - XÁC ĐỊNH HÀM LƯỢNG CHẤT BÉO - PHƯƠNG PHÁP KHỐI LƯỢNG (PHƯƠNG PHÁP CHUẨN) Cheese and processed cheese products - Determination of fat content - Gravimetric method (Reference method) Lời nói đầu TCVN 8181:2009 hoàn toàn tương đương với ISO 1735:2004; TCVN 8181:2009 Ban kỹ thuật tiêu chuẩn quốc gia TCVN/TC/F12 Sữa sản phẩm sữa biên soạn, Tổng cục Tiêu chuẩn Đo lường Chất lượng đề nghị, Bộ Khoa học Công nghệ công bố PHOMAT VÀ SẢN PHẨM PHOMAT CHẾ BIẾN - XÁC ĐỊNH HÀM LƯỢNG CHẤT BÉO - PHƯƠNG PHÁP KHỐI LƯỢNG (PHƯƠNG PHÁP CHUẨN) Cheese and processed cheese products - Determination of fat content - Gravimetric method (Reference method) CẢNH BÁO - Khi áp dụng tiêu chuẩn liên quan đến vật liệu, thiết bị thao tác gây nguy hiểm Tiêu chuẩn đưa hết tất vấn đề an toàn liên quan đến việc sử dụng chúng Người sử dụng tiêu chuẩn phải tự thiết lập thao tác an tồn thích hợp xác định khả áp dụng giới hạn qui định trước sử dụng tiêu chuẩn Phạm vi áp dụng Tiêu chuẩn qui định phương pháp chuẩn để xác định hàm lượng chất béo tất loại phomat sản phẩm phomat chế biến chứa hàm lượng lactoza thấp % (khối lượng) chất khô không béo Tài liệu viện dẫn Các tài liệu viện dẫn sau cần thiết cho việc áp dụng tiêu chuẩn Đối với tài liệu viện dẫn ghi năm cơng bố áp dụng phiên nêu Đối với tài liệu viện dẫn không ghi năm cơng bố áp dụng phiên nhất, bao gồm sửa đổi, bổ sung (nếu có) ISO 3889 Milk and milk products - Determination of fat content - Mojonnier type fat extraction flasks (Sữa sản phẩm sữa - Xác định hàm lượng chất béo - Bình chiết chất béo kiểu Mojonnier) Thuật ngữ định nghĩa Trong tiêu chuẩn sử dụng thuật ngữ định nghĩa sau đây: Hàm lượng chất béo phomat sản phẩm phomat chế biến (fat content of cheese and processed cheese products) Phần khối lượng chất xác định phương pháp qui định tiêu chuẩn CHÚ THÍCH Hàm lượng chất béo tính phần trăm khối lượng Nguyên tắc Phần mẫu thử phân hủy axit clohydric sau bổ sung etanol Dung dịch axit-etanol chiết ete dietyl dầu nhẹ, dung môi loại bỏ cách chưng cất cho bay Xác định khối lượng chất chiết Nguyên tắc thường gọi nguyên tắc SchmidBondzynski-Ratzlaff Thuốc thử Chỉ sử dụng thuốc thử loại tinh khiết phân tích nước cất nước khử khống nước có chất lượng tương đương, trừ có qui định khác Tất thuốc thử phép để lại lượng cặn không đáng kể thực phép thử theo qui định (5.1) 5.1 Độ tinh khiết thuốc thử Để kiểm tra chất lượng thuốc thử, tiến hành phép thử trắng theo 9.2 Sử dụng bình thu nhận chất béo trống chuẩn bị theo 9.3, dùng cho mục đích kiểm sốt khối lượng Tất thuốc thử để lại lượng cặn không lớn 0,5 mg (xem A.1 Phụ lục A) Nếu thuốc thử để lại lượng cặn lớn 0,5 mg, xác định lượng cặn dung môi riêng rẽ cách chưng cất 100 ml ete dietyl dầu nhẹ, tương ứng Sử dụng bình kiểm chứng chất béo trống, để thu khối lượng thực cặn không lớn 0,5 mg Thay thuốc thử dung môi không đạt yêu cầu, chưng cất lại dung môi Rất dung mơi chứa chất bay mà bị giữ lại nhiều chất béo Nếu có dấu hiệu cho thấy có mặt chất thế, tiến hành phép thử trắng tất thuốc thử dung mơi, sử dụng bình thu nhận chất béo với khoảng g butterfat khan Nếu cần, chưng cất lại dung mơi có mặt g butterfat khan 100 ml dung môi Sử dụng dung môi sau chưng cất lại 5.2 Axit clohydric đậm đặc, 5.3 Axit clohydric loãng, 20 20 (HCl) = 1,18 g/ml (HCl) = 1,125 g/ml Pha 675 ml axit clohydric đậm đặc (5.2) nước đến 000 ml trộn 5.4 Etanol, etanol bị metanol làm biến tính, chứa 94% (thể tích) etanol (xem A.5) 5.5 Ete dietyl, không chứa peroxit (xem A.4), phù hợp với yêu cầu phép thử trắng 5.6 Dầu nhẹ, có dải sơi từ 30 oC đến 60 oC pentan [CH3(CH2)3CH3] có điểm sơi 36 oC CHÚ THÍCH Nên sử dụng pentan pentan có độ tinh khiết cao chất lượng ổn định 5.7 Dung môi hỗn hợp Ngay trước sử dụng, trộn thể tích ete dietyl (5.5) dầu nhẹ (5.6) Thiết bị, dụng cụ CẢNH BÁO - Vì việc xác định buộc phải sử dụng dung môi bay dễ cháy, nên thiết bị điện dùng phải thuân theo qui định an toàn sử dụng dung môi Sử dụng thiết bị phòng thử nghiệm thơng thường dụng cụ sau: 6.1 Cân phân tích, có khả cân xác đến mg, đọc đến 0,1 mg 6.2 Máy ly tâm, có bình cầu chiết chất béo có ống chiết (6.6) quay từ 500 r/min đến 600 r/min để tạo trường hấp dẫn khoảng 80 g đến 90 g miệng bình chiết ống chiết CHÚ THÍCH Việc sử dụng máy ly tâm tùy chọn, khuyến cáo sử dụng loại thiết bị (xem 9.4.7) 6.3 Thiết bị chưng cất làm bay hơi, để chưng cất dung mơi etanol từ bình cầu làm bay từ cốc đĩa (xem 9.4.13) nhiệt độ không 100 oC 6.4 Tủ sấy, đốt nóng điện, có cửa thơng gió mở hồn tồn, trì nhiệt độ 102 oC oC suốt khoang sấy Tủ gắn với nhiệt kế thích hợp 6.5 Nồi cách thủy bếp điện 6.6 Bình cầu chiết chất béo kiểu Mojonnier, qui định ISO 3889 CHÚ THÍCH Cũng dùng ống nghiệm chiết chất béo có si phơng nối với chai rửa, qui trình có khác qui định Phụ lục B Các bình phải đậy nút bần chất lượng tốt, đậy nắp vật liệu khác không bị ảnh hưởng thuốc thử sử dụng Nút bần chiết ete dietyl (5.5), đặt vào nước 60 oC lớn 15 Sau làm nguội nước cho chúng bão hòa nước sử dụng 6.7 Giá, để giữ bình chiết chất béo (hoặc ống chiết chất béo) (6.6) 6.8 Chai rửa, thích hợp để dùng với dung mơi hỗn hợp (5.7) Không dùng chai rửa làm chất dẻo 6.9 Bình thu nhận chất béo, ví dụ: bình đun sơi, đáy phẳng, có dung tích từ 125 ml đến 250 ml, bình nón có dung tích 250 ml, đĩa thép không gỉ, đáy phẳng, đường kính từ 80 mm đến 100 mm, chiều cao khoảng 50 mm Không sử dụng đĩa nhôm 6.10 Chất trợ sôi, không chứa chất béo, sứ xốp cacbua silicon (tùy chọn trường hợp dùng đĩa kim loại) 6.11 Ống đong, dung tích ml 25 ml 6.12 Pipet chia độ, để phân phối 10 ml 6.13 Bộ kẹp, kim loại để giữ bình, cốc đĩa 6.14 Tấm màng mỏng xenlulo, khơng sơn, tan axit clohydric, dày từ 0,03 mm đến 0,05 mm, kích thước 50 mm x 75 mm Các phải trơ với điều kiện thử nghiệm 6.15 Máy nghiền xay thích hợp, dễ làm sạch, dùng để chuẩn bị mẫu thử Lấy mẫu Mẫu gửi đến phòng thí nghiệm phải mẫu đại diện Mẫu không bị hư hỏng thay đổi suốt trình vận chuyển bảo quản Việc lấy mẫu không qui định tiêu chuẩn Nên lấy mẫu theo TCVN 6400 (ISO 707) Tất mẫu thử nghiệm phải bảo quản nhiệt độ khoảng từ oC đến 20 oC từ lấy mẫu tiến hành thử nghiệm Chuẩn bị mẫu thử Trước phân tích, loại bỏ cùi, vết bẩn lớp bề mặt mốc phomat cho thu mẫu thử đại diện phomat Nghiền xay mẫu thử dụng cụ nghiền xay (6.15) Trộn nhanh mẫu nghiền phomat cứng nửa cứng nghiền lần thứ hai, cần trộn kỹ Tốt phomat cứng nửa cứng cắt thành miếng có kích thước 15 mm x 15 mm Trộn miếng hình khối cách lắc hộp chứa Nghiền xay mẫu thử mô tả Làm máy nghiền sau lần chuẩn bị mẫu Nếu mẫu khơng thể nghiền xay trộn kỹ cách nhào trộn mạnh ví dụ cối chày Chú ý khơng để thất ẩm Bảo quản mẫu thử vật chứa kín khí phân tích, sau nghiền tiến hành phân tích sớm tốt Tuy nhiên, chưa thể thực ngay, phải ý bảo quản mẫu cách Nếu bảo quản lạnh phải đưa mẫu nhiệt độ phòng Trộn kỹ mẫu để ngăn ngừa hút ẩm vào phomat xuất trình làm mát làm ấm Đảm bảo tất ẩm ngưng tụ thành vật chứa kết hợp hết vào mẫu thử Khi phomat nghiền cho thấy có mốc khơng mong muốn có dấu hiệu hư hỏng khơng tiến hành kiểm tra Tất trình chuẩn bị mẫu thử phải tiến hành theo cách cho giảm thiểu thất thoát ẩm Việc thất thoát ẩm làm tăng hàm lượng chất béo biểu kiến Cách tiến hành CHÚ THÍCH Một qui trình thay khác sử dụng ống chiết chất béo có gắn với si phơng chai rửa qui định Phụ lục B 9.1 Phần mẫu thử Trộn mẫu thử (Điều 8) cách khuấy trộn nhẹ Cân ngay, từ g đến g mẫu thử, xác đến mg, cho trực tiếp gián tiếp vào bình chiết chất béo (6.6), cốc có mỏ bình cầu 100 ml Cân khoảng g phomat chứa hàm lượng chất béo đến 30 % phần khối lượng Đối với phomat chứa hàm lượng chất béo cao 30 % chỉnh phần mẫu thử thích hợp cho thu khối lượng chất béo chiết từ 750 mg đến 1000 mg Phần mẫu thử cân màng xenlulo (6.14), sau gấp lại cho vào bình chọn Chuyển phần mẫu thử hết tốt sang bầu thấp (bầu nhỏ) bình chiết chất béo 9.2 Phép thử trắng Tiến hành phép thử trắng đồng thời với phép xác định, sử dụng qui trình dùng loại thuốc thử, bỏ qua phần mẫu thử (xem A.2) Nếu giá trị thu phép thử trắng vượt 1,0 mg, kiểm tra thuốc thử, trước chưa kiểm tra (xem 5.1) Việc điều chỉnh giá trị lớn 2,5 mg cần nêu báo cáo thử nghiệm 9.3 Chuẩn bị bình thu nhận chất béo Làm khơ bình thu nhận chất béo (6.9) vài chất trợ sôi (6.10) tủ sấy (6.4) đặt 102 oC h CHÚ THÍCH Chất trợ sơi để giúp cho sơi nhẹ suốt q trình loại bỏ dung môi, đặc biệt trường hợp sử dụng bình thu nhận chất béo thủy tinh; tùy ý trường hợp dùng đĩa kim loại Để bình thu nhận chất béo (tránh bụi) nguội đến nhiệt độ phòng cân (bình thủy tinh để h, đĩa kim loại 30 min) Khơng nên đặt bình thu nhận chất béo tủ hút ẩm để tránh chưa đủ nguội thời gian làm nguội bị kéo dài Dùng kẹp đặt bình thu nhận chất béo lên cân để tránh làm thay đổi nhiệt độ Cân bình xác đến mg 9.4 Xác định 9.4.1 Tùy thuộc vào hình dạng thiết bị chiết cỡ mẫu thử, thêm từ ml đến 10 ml axit clohydric loãng (5.3) Thêm axit clohydric để rửa phần mẫu thử sang bầu nhỏ bình chiết chất béo (6.6) lên đáy cốc bình trộn 9.4.2 Làm nóng lọ bình chiết chất béo cách di chuyển nhẹ nhàng (không để cháy) nồi cách thủy bếp điện (6.5) lửa hạt tan hết CHÚ THÍCH Một số bình chiết chất béo kiểu Mojonnier khơng làm nóng lửa 9.4.3 Để yên lọ bình chiết chất béo từ 20 đến 30 nồi cách thủy (6.5) giữ cho sôi nhẹ lửa bếp điện (6.5) 10 Làm nguội dòng nước chảy 9.4.4 Nếu việc phân hủy thực thiết bị chiết chất béo, thêm 10 ml etanol (5.4) Trộn kỹ cách nhẹ nhàng cách cho lượng chứa bình chiết chất béo chảy chảy lại bầu mà không chất lỏng dâng lên gần cổ bình Tiến hành tiếp 9.4.5 Cách khác, việc phân hủy thực lọ khác với bình chiết chất béo (6.6), rót lượng chứa lọ sang bình chiết chất béo Tráng lọ 10 ml etanol (5.4) Trộn kỹ cách nhẹ nhàng cách cho lượng chứa bình chiết chất béo chảy lại bầu mà không chất lỏng dâng lên gần cổ bình Tráng tiếp lọ 25 ml dietyl ete (5.5) rót lượng chứa lọ sang bình chiết chất béo, tráng đầu tip miệng bình lượng dietyle ete bổ sung Đậy nắp tinh khiết chất béo nút bần bão hòa nước nút làm vật liệu khác làm ướt nước (xem 6.6) lắc bình cầu 9.4.5 Cuối tráng lại lọ 25 ml dầu nhẹ (5.6) rót dung mơi vào bình chiết chất béo, tráng đầu tip miệng bình lượng dầu nhẹ bổ sung Đậy nắp bình chiết chất béo lắc bình 9.4.6 Sau tiếp tục qui trình ly tâm 9.4.7 9.4.5 Thêm 25 ml ete dietyl (5.5) Đậy bình nút bần bão hòa nước đậy nút làm chất liệu khác (xem 6.6) làm ướt nước Lắc mạnh bình vòng khơng lắc mạnh để tránh tạo nhũ bền Trong trình lắc, giữ bình tư nằm ngang bầu nhỏ hướng lên trên, cho chất lỏng bầu lớn chảy sang bầu nhỏ cách định kỳ Nếu cần, làm mát bình dòng nước chảy Tháo nút cách cẩn thận, tráng nút cổ bình cầu dung mơi hỗn hợp (5.7) Dùng chai rửa (6.8) cho nước rửa chảy vào bình chiết chất béo 9.4.6 Cho thêm 25 ml dầu nhẹ (5.6) Đậy bình nút bần nút khác làm ướt lại nước (ngâm vào nước) Lắc nhẹ bình cầu 30 s mô tả 9.4.5 9.4.7 Cho ly tâm bình chiết chất béo đậy kín từ đến tần số quay từ 500 -1 đến 600 -1 Nếu khơng có máy li tâm, đặt bình cầu đậy kín giá đỡ (6.7), 30 có lớp bề mặt rõ rệt phân biệt rõ với lớp chất lỏng Làm mát bình cầu dòng nước chảy, cần 9.4.8 Cẩn thận lấy nút ra, dùng dung mơi hỗn hợp (5.7) để tráng nút vào phía cổ bình chiết chất béo Dùng chai rửa (6.8) để tráng bình cho nước rửa chảy vào bình cầu Nếu mặt lớp phân cách thấp chỗ thắt cổ bình, cần nâng cao mức lên chút cách nhẹ nhàng cho thêm nước theo thành bình (xem Hình 1) để dung mơi gạn dễ dàng CHÚ THÍCH Trong Hình Hình mơ tả ba loại bình qui định ISO 3889 chọn, điều khơng có nghĩa ưu tiên loại khác 9.4.9 Giữ bình chiết chất béo bầu nhỏ, cẩn thận gạn nhiều tốt lớp bề mặt vào bình thu nhận chất béo (9.3) chuẩn bị có chứa chất trợ sơi (6.10) (đối với đĩa kim loại tùy chọn) Tránh khơng gạn chút chất lỏng vào bình (xem Hình 2) 9.4.10 Tráng phía ngồi cổ bình chiết chất béo dung môi hỗn hợp (5.7) Thu lấy nước rửa vào bình thu nhận chất béo; ý khơng để dung mơi hỗn hợp tràn thành ngồi bình chiết Tốt nhất, nên loại bỏ dung môi phần dung mơi khỏi bình thu nhận chất béo cách chưng cất làm bay mô tả 9.4.13 9.4.11 Thực chiết lần hai cách lặp lại thao tác mô tả 9.4.5 đến hết 9.4.9, dùng 15 ml ete dietyl (5.5) 15 ml dầu nhẹ (5.6) để thay cho 25 ml Dùng ete dietyl để tráng thành cổ bình chiết chất béo Nếu cần, nâng cao mặt lớp phân cách đến cổ bình chiết chất béo (xem Hình 1) cách nhẹ nhàng cho thêm nước theo thành bình (xem Hình 1) để gạn hết dung mơi nhiều tốt (xem Hình 2) Hình – Trước gạn Hình – Sau gạn 9.4.12 Thực chiết lần ba cách lặp lại thao tác mô tả 9.4.5 đến hết 9.4.9 Chỉ sử dụng 15 ml ete dietyl (5.5) 15 ml dầu nhẹ (5.6) Dùng ete dietl để tráng bên cổ bình chiết chất béo Nếu cần, nâng cao mặt lớp phân cách đến cổ bình (xem Hình 1) để gạn hết dung mơi nhiều tốt (xem Hình 2) Lần chiết thứ ba bỏ qua sản phẩm có hàm lượng chất béo nhỏ 3% 9.4.13 Loại bỏ dung môi (kể etanol) hết tốt khỏi bình thu nhận chất béo cách chưng cất, cách làm bay sử dụng cốc có mỏ đĩa (xem 6.3) Tráng thành cổ bình nón dung mơi hỗn hợp (5.7) trước bắt đầu chưng cất 9.4.14 Sấy bình thu nhận chất béo h để tủ sấy (6.4) nhiệt độ 102 oC Lấy bình thu nhận chất béo khỏi lò sấy kiểm tra xem chất béo hay chưa Nếu chất béo khơng trong, chất béo bị coi có tạp chất phải lặp lại tồn qui trình Nếu chất béo trong, bảo quản bình thu nhận chất béo khỏi bụi để nguội bình đến nhiệt độ phòng cân (đối với bình thủy tinh tối thiểu h đĩa kim loại tối thiểu 30 min) CHÚ THÍCH Tùy thuộc vào bình thu nhận chất béo sử dụng, nên đặt nghiêng bình tủ sấy để dung mơi dễ dàng Khơng lau bình thu nhận chất béo trước lúc cân Dùng kẹp để đặt bình thu nhận chất béo lên cân để tránh làm thay đổi nhiệt độ Cân xác đến 1,0 mg 9.4.15 Sấy bình thu nhận chất béo tủ sấy (6.4) nhiệt độ 102 oC Cân lại theo 9.4.14 Nếu cần, lặp lại qui trình sấy cân chênh lệch khối lượng bình thu nhận chất béo hai lần cân liên tiếp nhỏ 1,0 mg Ghi khối lượng tối thiểu khối lượng bình thu nhận chất béo chất chiết 10 Tính biểu thị kết 10.1 Phương pháp tính Tính hàm lượng chất béo , w, theo công thức w= m1 m2 m3 m4 m0 Trong đó: m0 khối lượng phần mẫu thử (9.1), tính gam (g); x100% m1 khối lượng bình thu nhận chất béo chất chiết được, xác định 9.4.15, tính gam (g); m2 khối lượng bình thu nhận chất béo chuẩn bị (9.3), tính gam (g); m3 khối lượng bình thu nhận chất béo sử dụng thử mẫu trắng (9.2) chất chiết xác định 9.4.15, tính gam (g); m4 khối lượng bình thu nhận chất béo (9.3) sử dụng phép thử trắng (9.2), tính gam (g) 10.2 Biểu thị kết Làm tròn kết đến hai chữ số thập phân 11 Độ chụm 11.1 Phép thử liên phòng thử nghiệm Các chi tiết phép thử liên phòng thử nghiệm nêu Phụ lục C Các giá trị thu từ phép thử không áp dụng cho dải nồng độ chất khác với giá trị nêu Các phòng thử nghiệm sử dụng phương pháp cần lưu ý loại phomat cụa thể, thực tế thu giá trị cao r R 11.2 Độ lặp lại Chênh lệch tuyệt đối hai kết thử nghiệm riêng rẽ độc lập, thu sử dụng phương pháp, vật liệu thử giống hệt nhau, người phân tích, sử dụng thiết bị, khoảng thời gian ngắn, không % trường hợp lớn 0,30% 11.3 Độ tái lập Chênh lệch tuyệt đối hai kết thử nghiệm riêng rẽ độc lập, thu tiến hành thử vật liệu thử giống hệt nhau, người phân tích khác thực hiện, sử dụng thiết bị khác phòng thử nghiệm khác nhau, khơng q 5% trường hợp lớn 0,40 % 12 Báo cáo thử nghiệm Báo cáo thử nghiệm phải nêu rõ: a) thông tin cần thiết nhận biết đầy đủ mẫu thử; b) phương pháp lấy mẫu sử dụng, biết; c) phương pháp thử sử dụng, viện dẫn tiêu chuẩn này; d) tất điều kiện thao tác không qui định tiêu chuẩn này, xem tùy ý, với tình bất thường ảnh hưởng đến kết e) kết thử nghiệm thu đáp ứng yêu cầu độ lặp lại nêu kết cuối thu Phụ lục A (tham khảo) Các ý cách tiến hành A.1 Phép thử trắng để kiểm tra thuốc thử (xem 5.1) A.1.1 Trong phép thử trắng này, bình thu nhận chất béo (6.9) dùng để kiểm tra khối lượng sử dụng để đảm bảo thay đổi không điều kiện môi trường phòng cân ảnh hưởng nhiệt độ bình thu nhận chất béo khơng làm ảnh hưởng đến việc xem xét có mặt hay khơng có mặt chất khơng bay có phần chiết thuốc thử Bình kiểm chứng dùng bình đối trọng trường hợp cân có hai đĩa cân Mặt khác, chêch lệch khối lượng biểu kiến [(m3 – m4) 10.1] bình kiểm chứng phải xem xét kiểm tra khối lượng bình thu nhận chất béo dùng phép thử trắng Do đó, thay đổi khối lượng biểu kiến bình kiểm tra, điều chỉnh theo thay đổi khối lượng biểu kiến bình thu nhận chất béo cho mục đích kiểm chứng, khơng tăng q 1,0 mg A.1.2 Rất dung mơi có chứa chất bay bị giữ lại nhiều chất béo Nếu thấy có mặt chất thế, cần tiến hành thử trắng tất thuốc thử dung mơi sử dụng bình thu nhận chất béo với khoảng g butterfat khan Nếu cần, chưng cất lại dung mơi với có mặt g butterfat 100 ml dung môi Chỉ dùng dung môi khoảng thời gian ngắn sau chưng cất lại A.2 Tiến hành phép thử trắng đồng thời với việc xác định (9.2) Giá trị thu thử mẫu trắng, tiến hành đồng thời với việc xác định, cho phép khối lượng biểu kiến chất chiết từ phần mẫu thử (m1 – m2) điều chỉnh cho có mặt chất khơng bay chiết từ thuốc thử Nhưng điều chỉnh cần có vài thay đổi điều kiện mơi trường phòng cân chênh lệch nhiệt độ bình thu nhận chất béo (6.9) phòng cân hai lần cân (9.4.15 9.3) Trong điều kiện thích hợp (giá trị thấp phép thử trắng thuốc thử, nhiệt độ cân phòng cân, thời gian bình thu nhận chất béo đủ nguội), giá trị ln ln nhỏ 1,0 mg sau bỏ qua phần tính kết trường hợp xác định thông thường Cũng thường gặp giá trị lớn đến 2,5 mg (dương âm) Sau điều chỉnh giá trị này, kết Khi điều chỉnh giá trị lớn 2,5 mg sử dụng phải nêu lên phần báo cáo kết (Điều 12) Nếu giá trị thu phép thử trắng thường lớn 1,0 mg cần kiểm tra lại thuốc thử trước chưa kiểm tra Thuốc thử khơng tinh khiết cần phải thay làm lại (xem 5.1 A.1) A.3 Thử peroxit Để thử peroxit, cho ml dung dịch kali iodua 100 g/l chuẩn bị vào 10 ml ete dietyl (5.5) đựng ống đong nhỏ có nắp thủy tinh trước tráng ete Lắc ống đong sau để yên Không quan sát thấy màu vàng lớp Có thể sử dụng phương pháp thử nghiệm thích hợp khác peroxit Để đảm bảo cho ete dietyl khơng chứa peroxit, xử lý ete ba ngày trước sử dụng sau: Cắt kẽm thành dải để chúng chạm đến nửa chai đựng ete, dùng khoảng 80 cm kẽm cho lít ete dietyl Trước sử dụng, nhúng toàn dải kẽm dung dịch chứa 10g đồng (II) sulfat ngậm năm phân tử nước (CuSO4.5H2O) ml sulfuric [98%(khối lượng)] đậm đặc lit Rửa kỹ dải nhẹ nhàng nước, đặt dải mạ đồng ướt vào chai đựng ete dietyl để chúng chai Có thể sử dụng phương pháp khác với điều kiện không ảnh hưởng đến kết xác định A.4 Ete dietyl có chứa chất chống oxi hóa Ete dietyl có chứa khoảng mg/kg chất chống oxi hóa có bán sẵn số quốc gia, đảm bảo dùng để xác định chất béo Hàm lượng không dùng cho mục đích đối chứng Tại số quốc gia có bán sẵn ete dietyl chứa hàm lượng chất chống oxi hóa cao hơn, ví dụ: đến mg/kg Những ete dietyl nên sử dụng phép xác định thường xuyên phải tiến hành phép thử trắng đồng thời với phép xác định, để điều chỉnh sai số hệ thống lượng dư chất chống oxi hóa gây Đối với mục đích đối chứng, loại ete dietyl ln phải chưng cất trước sử dụng A.5 Etanol Có thể sử dụng etanol bị metanol làm biến tính với điều kiện etanol khơng làm ảnh hưởng đến kết việc xác định Phụ lục B (Tham khảo) Cách tiến hành khác dùng ống chiết chất béo có si phơng có nối với chai rửa B.1 Khái quát Nếu sử dụng ống chiết chất béo (6.6) có si phơng có nối với chai rửa (Xem ví dụ Hình B.1) thay cho bình chiết chất béo (6.6) tiến hành theo qui định Phụ lục Các ống phải có nắp đậy nút bần chất lượng tốt qui định bình chiết chất béo (6.6) B.2 Cách tiến hành B.2.1 Chuẩn bị mẫu thử Xem Điều B.2.2 Phần mẫu thử Tiến hành theo qui định 9.1 dùng ống chiết chất béo (6.6) Phần mẫu thử phải chuyển hết vào đáy ống chiết chất béo B.2.3 Phép thử trắng Xem 9.2 A.2 B.2.4 Chuẩn bị bình thu nhận chất béo Xem 9.3 B.2.5 Xác định B.2.5.1 Tiến hành xác định Cho thêm 10 ml dung dịch axit clohydric loãng (5.3) để rửa phần mẫu thử (B.2.2) đáy ống chiết chất béo, cốc có mỏ hình trộn B.2.5.2 Làm nóng ống bình chiết chất béo cách di chuyển nhẹ nhàng (không để cháy) nồi cách thủy bếp điện (6.5) lửa hạt tan hết B.2.5.3 Để yên ống bình chiết chất béo từ 20 đến 30 nồi cách thủy (6.5) giữ cho sôi nhẹ lửa bếp điện (6.5) 10 Làm nguội dòng nước chảy B.2.5.4 Nếu việc phân hủy thực thiết bị chiết chất béo, thêm 10 ml etanol (5.4) Trộn kỹ cách nhẹ nhàng cách cho lượng chứa bình chiết chất béo chảy chảy lại bầu mà không chất lỏng dâng lên gần cổ bình Tiến hành tiếp B.2.5.5 Cách khác, việc phân hủy thực ống khác với bình cầu chiết chất béo (6.6), rót lượng chứa lọ sang bình chiết chất béo Tráng lọ 10 ml etanol (5.4) Trộn kỹ cách nhẹ nhàng cách cho lượng chứa bình chiết chất béo chảy chảy lại bầu mà không chất lỏng dâng lên gần cổ bình Tráng tiếp lọ 25 ml dietyl ete (5.5) rót lượng chứa lọ sang bình chiết chất béo, tráng đầu tip miệng bình lượng dietyl ete bổ sung Đậy nắp bình nút bần bão hòa nước nút làm vật liệu khác làm ướt lại nước (xem 6.6) lắc bình cầu B.2.5.5 Cuối tráng lại lọ 25 ml dầu nhẹ (5.6) rót dung mơi vào bình chiết chất béo, tráng đầu tip miệng bình lượng dầu nhẹ bổ sung Đậy nắp bình chiết chất béo lắc bình B.2.5.6 Sau tiếp tục qui trình ly tâm B.2.5.7 B.2.5.5 Thêm 25 ml ete dietyl (5.5) Đậy bình nút bần bão hòa nước đậy nút làm chất liệu khác làm ướt nước (xem 6.6) Lắc mạnh bình vòng khơng lắc mạnh để tránh tạo nhũ bền Trong trình lắc, giữ bình tư nằm ngang bầu nhỏ hướng lên trên, cho chất lỏng bầu lớn chảy sang bầu nhỏ cách định kỳ Nếu cần, làm mát bình dòng nước chảy đến nhiệt độ phòng Tháo nút cách cẩn thận, tráng nút cổ bình cầu dung mơi hỗn hợp (5.7) Dùng chai rửa (6.8) cho nước rửa chảy vào bình chiết chất béo B.2.5.6 Cho thêm 25 ml dầu nhẹ (5.6) Đậy bình chiết chất béo nút bần nút khác ướt lại nước (ngâm vào nước) Lắc bình cầu nhẹ nhàng vòng 30 s mơ tả B.2.5.5 B.2.5.7 Cho ly tâm ống chiết chất béo đậy kín từ đến tần số quay từ 500 -1 đến 600-1 Nếu khơng có máy li tâm, đặt ống đậy kín giá đỡ (6.7) 30 thấy có lớp bề mặt rõ rệt phân biệt rõ với lớp chất lỏng Nếu cần, làm mát ống dòng nước chảy B.2.5.8 Cẩn thận lấy nút ra, dùng dung môi hỗn hợp (5.7) để tráng nút cho chảy vào cổ ống Dùng chai rửa (6.8) để tráng bình cho nước rửa chảy vào ống B.2.5.9 Lắp khớp nối si phông nối với chai rửa vào ống Đẩy ống nối bên khoảng mm cao mặt tiếp xúc lớp Ống nối phía bên phải song song với trục ống chiết chất béo Cẩn thận gạn lớp bề mặt ống vào bình thu nhận chất béo (xem 9.3) có chứa chất trợ sơi (6.10) trường hợp bình (còn đĩa kim loại tùy chọn) Khơng để lớp chất lỏng lẫn vào Tráng phía ngồi khớp nối dung mơi hỗn hợp, thu lấy nước rửa vào bình thu nhận chất béo B.2.5.10 Tháo khớp nối khỏi cổ ống Nâng nhẹ ống nối tráng phần thấp ống nối bên dung môi hỗn hợp (5.7) Hạ thấp chèn lại ống nối chuyển nước rửa vào bình thu nhận chất béo Tráng rửa lại khớp nối dung môi hỗn hợp, cho nước rửa vào lọ Loại bỏ dung môi phần dung môi khỏi bình nhận cách cất làm bay 9.4.13, yêu cầu B.2.5.11 Thực chiết lần hai cách lặp lại thao tác mô tả B.2.5.5 đến B.2.5.10, thay 25 ml 15 ml ete dietyl (5.5) 15 ml dầu nhẹ (5.6) Dùng ete dietyl để tráng thành khớp nối Trong suốt trình tháo khớp nối khỏi ống chiết chất béo sau lần chiết lần trước B.2.5.12 Thực chiết lần ba, cách lặp lại thao tác mô tả B.2.5.3 đến B.2.5.10 dùng 15 ml ete dietyl (5.5) 15 ml dầu nhẹ (5.6) để tráng thành khớp nối mơ tả B.2.5.10 Lần chiết ba bỏ qua phomat có hàm lượng béo nhỏ % B.2.5.13 Tiến hành mô tả 9.4.13 đến 9.4.15 CHÚ DẪN a Dung dịch tháo khớp nối 105 ml ± ml b Độ dày thành 1,5 mm ± 0,5 mm Hình B.1 – Các ví dụ ống chiết chất béo Phụ lục C (tham khảo) Phép thử liên phòng thử nghiệm Phép thử cơng tác quốc tế gồm 12 phòng thử nghiệm sáu quốc gia tham gia thực hai mẫu khác bốn loại phomat Tám mẫu thử thu chia thành 16 mẫu kép Phép thử COKZ (NL) tổ chức Tất giá trị biểu thị theo khối lượng Các kết thu được phân tích thống kê theo TCVN 6910-1 (ISO 5725-1) TCVN 6910-2 (ISO 5725-2) số liệu độ chụm Bảng C.1 Phomat 1a Phomat 2b Phomat 3c Phomat 4d A B A B A B A B 12 12 12 12 11 11 12 11 Giá trị trung bình, % 27,12 26,99 29,98 30,69 14,54 9,64 33,01 31,50 Độ lệch chuẩn lặp lại, sr , % 0,117 0,062 0,116 0,070 0,044 0,039 0,102 0,125 Hệ số biến thiên lặp lại, % 0,43 0,23 0,39 0,23 0,30 0,40 0,31 0,40 Giới hạn lặp lại, r (2,8 sr), % 0,332 0,174 0,328 0,197 0,124 0,110 0,290 0,354 Độ lệch chuẩn tái lập, sR % 0,169 0,096 0,124 0,106 0,081 0,065 0,166 0,210 Hệ số biến thiên tái lập, % 0,62 0,36 0,41 0,35 0,56 0,67 0,50 0,67 Giới hạn tái lập, R (2,8 sR), % 0,479 0,252 0,352 0,299 0,228 0,187 0,470 0,593 Số lượng phòng thử nghiệm lại sau trừ ngoại lệ a Phomat Emmenthaler b Phomat Gouda c Phomat chế biến d Phomat mềm Pháp THƯ MỤC TÀI LIỆU THAM KHẢO [1] TCVN 6400 (ISO 707), Sữa sản phẩm sữa – Hướng dẫn lấy mẫu [2] TCVN 6910-1 (ISO 5725-1), Độ xác (độ độ chụm) phương pháp đo kết đo – Phần : Các định nghĩa nguyên tắc chung [3] TCVN 6910-2 (ISO 5725-2), Độ xác (độ độ chụm) phương pháp đo kết đo – Phần 2: Phương pháp để xác định độ lặp lại độ tái lặp phương pháp đo tiêu chuẩn ... [1] TCVN 6400 (ISO 707), Sữa sản phẩm sữa – Hướng dẫn lấy mẫu [2] TCVN 691 0-1 (ISO 572 5-1 ), Độ xác (độ độ chụm) phương pháp đo kết đo – Phần : Các định nghĩa nguyên tắc chung [3] TCVN 691 0-2 (ISO. .. giá trị biểu thị theo khối lượng Các kết thu được phân tích thống kê theo TCVN 691 0-1 (ISO 572 5-1 ) TCVN 691 0-2 (ISO 572 5-2 ) số liệu độ chụm Bảng C.1 Phomat 1a Phomat 2b Phomat 3c Phomat 4d A B... khoảng mg/kg chất chống oxi hóa có bán sẵn số quốc gia, đảm bảo dùng để xác định chất béo Hàm lượng không dùng cho mục đích đối chứng Tại số quốc gia có bán sẵn ete dietyl chứa hàm lượng chất