Đề tài thực hiện để nghiên cứu về tác dụng kháng viêm của các phân đoạn từ thân Khai, phân tách chất tinh khiết từ phân đoạn có tác dụng kháng viêm mạnh để tiếp tục cho những thử nghiệm dược lí tiếp theo. Mời các bạn cùng tham khảo bài viết để nắm rõ nội dung chi tiết.
NGHIÊN CỨU THÀNH PHẦN HÓA HỌC CỦA DÂY KHAI (COPTOSAPELTA TOMENTOSA) THEO ĐỊNH HƯỚNG TÁC DỤNG KHÁNG VIÊM Trần Thị Vân Anh*, Trần Hùng* TÓM TẮT Mở đầu: Dây Khai (Coptosapelta tomentosa (Blume) Vahl ex Heyne var dongnaiensis (Pit.) Phamh.) họ Rubiaceae thuốc dây tộc đồng bào Re sử dụng từ lâu với tác dụng đáng ý trị thấp khớp, rửa vết thương phần mềm tránh nhiễm trùng sử dụng thuốc bổ Những nghiên cứu trước tác dụng sinh học Dây Khai cho thấy phân đoạn saponin rễ Khai có tác dụng kháng viêm mạnh Mục tiêu: Đề tài tiếp tục nghiên cứu tác dụng kháng viêm phân đoạn từ thân Khai, phân tách chất tinh khiết từ phân đoạn có tác dụng kháng viêm mạnh để tiếp tục cho thử nghiệm dược lí Phương pháp: Mơ hình gây phù chân chuột với chất carrageenin sử dụng khảo sát tác dụng kháng viêm phân đoạn từ dây Khai Phân đoạn có hoạt tính kháng viêm mạnh tách thành phân đoạn đơn giản phương pháp thường quy phòng thí nghiệm phân bố lỏng lỏng, sắc kí cột ….Từ phân đoạn đơn giản, chất tinh khiết phân lập sắc kí cột với pha tĩnh silica gel Sephadex Cấu trúc chất phân lập xác định phổ MS NMR Kết quả: Cao cồn toàn phần thân Khai thể hoạt tính kháng viêm có ý nghĩa thống kê liều 8g dược liệu/kg Cao cồn phân tách thành phân đoạn phương pháp phân bố lỏng lỏng với dung môi petroleum ether, benzen, ethyl acetat, n-butanol Các phân đoạn thử hoạt tính kháng viêm với liều qui theo liều 8g dược liệu/kg thể trọng chuột dựa hiệu suất chiết cao Cao EtOAc thể hoạt tính kháng viêm mạnh Từ phân đoạn này, phương pháp sắc kí cột silica gel Sephadex LH 20 sử dụng, phân lập chất 3-O-β-D- glucopyranosyl sitosterol; 3-O-[β-D-glucopyranosyl-(1→3)-α-L-rhamnopyranosyl]quinovic; 3-O-[β-D-glucopyranosyl-(1→4)-α-L-rhamnopyranosyl]- quinovic acid, 3-O-[β-D-glucopyranosyl(1→3)-α-L-rhamnopyranosyl-] quinovic acid 28- β-D-glucopyranosyl ester Kết luận: Đề tài nghiên cứu thành phần hóa học dây Khai theo định hướng tác dụng kháng viêm phân lập hợp chất glycosid từ phân đoạn có tác dụng kháng viêm mạnh Đây lần hợp chất phân lập từ dây Khai Đề tài tạo sở tiền đề cho việc nghiên cứu ứng dụng dây Khai thành dạng chế phẩm kháng viêm hiệu quả, an toàn tương lai Từ khóa: Coptosapelta tomentosa, Rubiaceae, saponin triterpen, acid quinovic, kháng viêm ABSTRACT STUDY CHEMICAL CONSTITUENTS IN ANTI INFLAMMATORY EXTRACTS OF COPTOSAPELTA TOMENTOSA Tran Thi Van Anh, Tran Hung * Y Hoc TP Ho Chi Minh * Vol 14 - Supplement of No - 2010: 116–122 Background: “Day Khai” Coptosapelta tomentosa (Blume) Vahl ex Heyne var dongnaiensis (Pit.) Phamh Rubiaceae, an ethnomedicine of Re minority in central Vietnam, has long been used for treatment of rheumatism, for washing wounds to avoid infection or as a tonic The previous results of bioactivity investigation revealed that saponin extract of the root possessed a strong anti-inflammatory activity * Bộ môn Dược liệu – Khoa Dược - Đại học Y Dược Tp.HCM Địa liên lạc: ThS.DS Trần Thị Vân Anh ĐT: 0918852989 Email: vananhd99@yahoo.com Objective: The aim of this study was investigation of the inflammatory activity of fractions from “Day Khai” and isolation of the principal components from the active fractions for further pharmacological studies Methods: Carrageenin-induced paw oedema model was used for estimation of inflammatory activity of fractions From the most active fraction, chemical constituents were chemically investigated to find out the main class of compounds for isolation work Extraction, fractionation and isolation were carried out as common phytochemical methods Structures of isolated compounds were deduced by means of MS and NMR spectroscopy Results: The crude ethanol extract of the stems of Coptosapelta tomentosa presented anti-inflammatory activity at dose g/kg Among five fractions, which were partioned from ethanol extract by solvent-solvent distribution, EtOAc fraction possessed higher levels of activity From this fraction, four compounds were isolated by column chromatography on silica gel and Sephadex LH 20 Their structures were identified as 3-O-β-Dglucopyranosyl sitosterol; 3-O-[β-D-glucopyranosyl-(1→3)-α-L-rhamnopyranosyl]-quinovic; 3-O-[β-Dglucopyranosyl-(1→4)-α-L-rhamnopyranosyl]-quinovic acid, 3-O-[β-D-glucopyranosyl-(1→3)-α-Lrhamnopyranosyl-] quinovic acid 28- β-D-glucopyranosyl ester Conclusion: Bioassay-directed fractionation using the carrageenin induced edema in the rat paw, follow by chromatographic isolation has led to the isolation of four glycosides from the most active fraction of the Coptosapelta tomentosa stems This is the first time these compounds are reported as the constituents of Coptosapelta tomentosa This study is also the premise for developing new anti inflammatory product in the future Keywords: Coptosapelta tomentosa, Rubiaceae, saponin, quinovic acid, isolation, anti-inflammatory ĐẶT VẤN ĐỀ NGUYÊN LIỆU-PHƯƠNG PHÁP NGHIÊN CỨU Các thuốc có nguồn gốc từ dược thảo ngày ưa chuộng sử dụng phổ biến giới Theo xu hướng đó, nhiều thuốc dân gian ý nghiên cứu để có sở khoa học cho việc sử dụng phổ biến lâu dài Nguyên liệu “Dây Khai” (Coptosapelta tomentosa (Blume) Vahl ex Heyne var dongnaiensis (Pit.) Phamh.) thuốc đồng bào dân tộc Re miền Nam Trung Theo kinh nghiệm dân gian, rễ Khai dùng để rửa vết thương phần mềm tránh nhiễm trùng, mau lên da non, đặc biệt tác dụng tốt sử dụng trị thấp khớp hay đau nhức (4,5) Các nghiên cứu hóa học tác dụng sinh học dây Khai tiến hành xác định thành phần hóa học có tác dụng kháng viêm saponin(2) Với mục đích nghiên cứu sâu thành phần hóa học tác dụng dược lí dược liệu tạo sở cho việc phát triển thuốc dân tộc tương lai, đề tài tiến hành khảo sát thành phần hóa học thân Khai theo định hướng tác dụng kháng viêm Nguyên liệu gồm thân rễ Khai thu hái người dân địa phương núi Yang lố, huyện Khánh vĩnh, Khánh hòa (10/2007) Mẫu định danh lưu môn Dược liệu, Khoa Dược, ĐH Y Dược TPHCM Phương pháp Thử hoạt tính kháng viêm: Theo mơ hình gây phù chân chuột carrageenin (Bộ mơn Dược lí, ĐH Y Dược TPHCM) Chuột gây phù bàn chân trái carrageenin 1% Trước sau gây phù, chân chuột đo độ phù máy Plethysmosmeter, chuột có độ phù >50% chọn chia lơ thí nghiệm Các đợt thử nghiệm ln có lô trắng (uống nước cất), lô chứng (uống diclofenac liều 10 mg/kg), lô thử (uống cao chiết) Theo dõi so sánh độ sưng phù chân chuột lô thử nghiệm lô chứng ngày Phương pháp chiết xuất phân lập chất: Dược liệu chiết xuất phương pháp ngấm kiệt với cồn 96% Phân tách phân đoạn chiết phân bố lỏng lỏng Xác định cấu trúc: Cấu trúc hóa học hợp chất phân lập xác định phổ MS thực máy Quattro Micro API kỹ thuật phổ NMR với máy Bruker Avance 500 sử dụng TMS (tetramethylsilan) làm chất chuẩn nội KẾT QUẢ NGHIÊN CỨU So sánh tác dụng kháng viêm hai phận dùng thân rễ Khai Thân rễ Khai chiết sơ với cồn 96% thu cao chiết toàn phần Cao toàn phần thân rễ tiến hành thử nghiệm hoạt tính kháng viêm với hai liều 500 mg/kg 1g/kg Kết cho thấy cao cồn 96% thân Khai thể hoạt tính kháng viêm có ý nghĩa thống kê liều 1g/kg (tương ứng với 8g dược liệu/kg), tác dụng thể cao so sánh với cao cồn rễ liều tương tự Vì thân Khai tiếp tục chiết tách, phân lập thành phần có tác dụng kháng viêm Tác dụng kháng viêm phân đoạn thân Khai 10 kg thân Khai ngấm kiệt với cồn 96% Dịch chiết dung mơi, thu cao cồn tồn phần Cao toàn phần thêm nước phân bố lỏng lỏng với dung mơi có độ phân cực tăng dần thu phân đoạn cao petrol ether (PE), benzen (Bz), ethyl acetat (EtOAc), nbutanol (BuOH) cao nước Các phân đoạn cao tiến hành thử hoạt tính kháng viêm với liều quy đổi theo liều cao tồn phần có hoạt tính thử nghiệm 8g dược liệu/ kg thể trọng chuột 80.00 70.00 Đ ộ phù chân chuột Phân tách chất kĩ thuật sắc kí cột chân khơng, sắc kí cột cổ điển, sắc kí rây phân tử phương pháp kết tinh lại 90.00 Chứng 60.00 Diclofenac 50.00 Cao Bz 40.00 Cao EtOAc Cao BuOH 30.00 Cao Nước 20.00 V3h: Độ phù chân chuột sau gây viêm 10.00 0.00 V3h Ngày Ngày Ngày Ngày Ngày Ngày Thời gian điều trị Hình 1: Sự thay đổi độ phù chân chuột theo thời gian lô chứng, diclofenac lô cao chiết liều tương ứng với g dược liệu/ kg thể trọng chuột Phân tách chất từ phân đoạn cao EtOAc Dựa kết thử nghiệm hoạt tính kháng viêm, cao EtOAc tiếp tục nghiên cứu để phân lập chất Thử nghiệm định tính cho thấy thành phần cao EtOAc saponin Phân đoạn cao EtOAc tinh chế dựa theo độ tan cao pH khác Cao EtOAc hòa NaOH 2%, chiết phân bố với ethyl acetat thu cao E1 Dịch kiềm lại acid hóa tới pH=3 thu tủa E2 Dịch acid lắc tiếp với n-butanol thu cao E3 Cao E1, xử lí tạp màu than hoạt kết tinh lại nhiều lần hỗn hợp ethylacetat metanol (1:1) thu chất Y tinh khiết Cao E2 phân đoạn có thành phần chủ yếu cao EtOAc phân tách kĩ thuật sắc kí cột chân khơng cho 17 phân đoạn Phân đoạn 11, 12, 17 loại tạp phân tách tiếp kĩ thuật sắc kí rây phân tử sắc kí cột cổ điển thu chất tinh khiết G, H M Kết thử nghiệm cho thấy cao EtOAc có hoạt tính kháng viêm mạnh phân đoạn, tiếp đến cao Bz Cao EtOAC Hòa NaOH 10% Chiết với EtOAc Acid hóa pH=10 Dịch kiềm EtOAc (E1) Chất Y Tủa E2 Dịch acid SKC chân không Lớp BuOH (E3) Lắc BuOH Hình 2: Sơ đồ phân tách chất từ cao EtOAc Xác định cấu trúc chất phân lập Chất Y: Chất Y bột vơ định hình màu trắng, tan ethyl acetat, methanol nước Khối phổ ESI-MS Y cho đỉnh [M+Na]+ 599,5 Tương ứng với phân tử khối Y 576,5 Phổ cộng hưởng từ 13C NMR cho thấy Y có 35 carbon ứng với cơng thức cơng thức phân tử C35H60O6 với độ bất bão hòa (Ω) Phân tích liệu phổ cho thấy Y steroid glycosid có 27C So sánh với liệu phổ chất công bố cho thấy liệu phổ Y hoàn toàn trùng khớp so sánh liệu phổ chất 3-O-β-D- glucopyranosyl sitosterol(3) Như vậy, Y xác định 3-O-βD- glucopyranosyl sitosterol Báng 1: Dữ liệu phổ chất Y (C5D5N) so sánh với 3-O-β-D-glucopyranosyl sitosterol(3) Carbon δC (ppm) δC TK Carbon δC (ppm) δC TK 10 11 12 13 14 15 16 17 18 37,25 t 29,75 t 78,83 d 38,93 t 140,97 s 121,53 d 31,85 t 31,91 d 50,28 d 36,6 s 21,01 t 39,81 t 42,30 s 56,73 d 24,14 t 28,05 t 56,4 d 11,66 q 37,5 30,2 78,5 40.0 140,9 121,8 32,1 32,1 50,3 36,9 21,3 39,3 42,5 56,9 24,5 28,6 56,3 12,0 19 20 21 22 23 24 25 26 27 28 29 1’ 2’ 3’ 4’ 5’ 6’ 18,74 q 35,91 d 19,05 q 34,07 t 26,57 t 45,99 d 29,53 d 19,54 q 19,05 q 24,14 t 11,82 q 101,85 d 74,37 d 77,41 d 71,06 d 77,13 d 62,11 t 19,4 36,4 19,1 34,5 26,5 46,1 29,5 19,2 20,0 23,4 12,2 102,5 75,2 78,3 71,7 78,2 62,8 metanol, aceton, ethanol, tan dung mơi phân cực Hình 3: Công thức chất 3-O-β-D-glucopyranosyl sitosterol Chất H: H tinh thể hình kim khơng màu, tan tốt dung môi phân cực Phổ cộng hưởng từ 13C-NMR cho thấy có 42 tín hiệu carbon Phổ khối ESI-MS cho đỉnh [M+Na]+ 817,5 tương ứng với phân tử khối H 794,5 Kết hợp hai liệu phổ cho thấy H có cơng thức ngun C42H66O14, với độ bất bão hòa phân tử (Ω) 10 Phổ cộng hưởng từ 13C-NMR DEPT H cho thấy chất có đặc điểm cấu trúc sau: 42 carbon có carbon bậc IV, 17 carbon bậc II, 10 carbon bậc II carbon bậc I, carbon nhóm carbonyl, Một nối đôi kiểu >C=CH- (δc 133.82 ppm, s; 128.70 ppm, d), nhóm methyl có nhóm methyl gắn carbon bậc III nhóm lại methyl góc, 12 carbon carbinol, có carbon anomer (δc 103,01 ppm, δH 5,02 ppm, δc 105,26 ppm, δH 5,15 ppm) Trong 10 carbon mang oxy lại, có carbon bậc II, tất carbon lại bậc III, Với đặc điểm trên, chất H có cấu trúc glycoside với đường hexose aglycon triterpen với 30 carbon Các liệu phổ NMR cho thấy H triterpen glycosid có cấu trúc khung ursendioic Từ kết phân tích liệu phổ COSY, HMBC, v; 75ppm, s) C-28 (δC 180,26 ppm, s) xác định tương tác quan sát carbon carboxyl với proton H-15, H-16 proton H-18 Nhóm lại khung nhóm OH vị trí C-3 Cấu trúc phần genin H xác định acid 3hydroxy-urs-12-en-27,28-dioic ( acid quinovic) Mạch đường xác định đường β-Dglucopyranose nối với α-L-rhamnopyranose qua liên kết 1→3 đường rhamnose trực tiếp nối với genin qua liên kết với nhóm OH vị trí C3 Cơng thức H xác định 3-O-[β-Dglucopyranosyl-(1→3)-α-L-rhamnopyranosylyl]- quinovic acid Chất G: G tinh thể hình kim khơng màu tan tốt dung mơi phân cực methanol, aceton, ethanol, tan dung môi phân cực Khối phổ ESI- MS cho đỉnh [M +Na+] 817,5 Phân tử khối G 794,5 Dữ liệu phổ G hoàn toàn giống chất H với cấu trúc dự kiến monodesmosid acid ursendioic với phần đường biosid gồm hexose 6-desoxyhexose Dựa liệu phổ thực nghiệm, xác định phần genin G acid quinovic mạch đường gồm đường β-Dglucopyranose nối với α-L-rhamnopyranosyle theo liên kết 1→4 Công thức G xác định 3-O-[β-Dglucopyranosyl-(1→4)-α-L-rhamnopyranosyl-] quinovic acid Chất H: R= Chất G: R= Hình 4: Cơng thức chất G H Bảng 2: Dữ liệu phổ 13 C –NMR chất H G so sánh với quinovic glycoside Carbon Chất H (C5H5N) Chất G (DMSO) TK Carbon Chất H (C5H5N) Chất G (DMSO) TK 10 11 12 13 14 15 16 17 18 19 20 21 38,34 t 25,34 t 87,81 d 38,52 s 54,96 d 18,10 t 36,87 t 39,51 s 46,64 d 36,55 s 22,81 t 128,70 d 133,82 s 56,22 s 24,93 t 25,71 t 48,32 s 54,36 d 37,16 d 38,82 d 29,98 t 38,26 t 24,94 t 87,58 d 39,01 s 54,82 d 17,84 t 35,82 t 39,90 s 46,08 d 36,22 s 22,36 t 127,88 d 132,57 s 55,26 s 23,96 t 24,85 t 47,24 s 53,62 d 36,48 d 38,26 d 29,76 t 38,8 25,7 88,1 38,7 55,3 18,1 37,2 39,8 47,0 36,9 23,2 128,7 133,9 56,6 26,2 25,3 48,5 54,8 37,5 39,2 30,4 22 23 24 25 26 27 28 29 30 1’ 2’ 3’ 4’ 5’ 6’ 1‘’ 2’’ 3’’ 4’’ 5’’ 6’’ 36,45 t 27,60 q 16,38 q 15,98 q 18,37 q 177,75 s 180,26 s 17,72 q 20,83 q 103,01 d 70,97 d 82,00 d 71,89 d 69,11 d 17,83 q 105,26 d 74,75 d 77,19 d 70,53 d 77,32 d 61,49 t 36,16 t 28,02 q 16,43 q 15,99 q 18,09 q 176,05 s 178,25 s 17,47 q 21,07 q 102,4 d 70,71 d 70,29 d 82,21 d 66,84 d 17,58 q 104,40 d 74,51 d 76,59 d 70,04 d 76,95 d 61,15 t 36,8 27,9 16,3 16,6 18,7 177,8 180,1 18,1 21,1 103,4 71,4 71,7 84,7 67,9 18,1 106,3 76,2 78,3 72,4 78,1 62,5 Giá trị tham khảo TK chất 3-O-[β-D-glucopyranosyl-(1→4)-α-L-rhamnopyranosyl-] quinovic acid đo C5D5N(1) trùng với tín hiệu tương ứng chất Chất M: Chất M dạng bột vi tinh thể, tan H Proton anomer đường thứ ( 6,03 cho tốt dung môi phân cực methanol, thấy tương tác rõ với carbon carboxyl (C aceton, ethanol, tan dung môi 176,9 So sánh với chất H, carbon có phân cực chuyển dịch 3,3 ppm phía trường Khối phổ ESI-MS cho đỉnh [M+Na] + 979,8 cao ester hóa Nhóm carboxyl Tương ứng với phân tử khối 956,8 Phổ cộng xác định C-28 tương tác với proton H-28 hưởng từ 13 C NMR DEPT cho thấy Mcó 43 quan sát HMBC so sánh 8đỉnh Công thức phân tử M chuyển dịch hóa học nhóm carboxyl C48H76O19 với độ bất bão hòa (Ω) 11 M với H M8221,,132,48129,19,83 104,76 ppm5,07 ppm102,76 ppm4,99 ppm 94,88 ppm 6,03 52Với đặc điểm cấu trúc trên, nhận thấy M có nhiều điểm tương đồng với H có nhiều H đơn vị đường hexose chất chung phần genin khác biệt phần đường Khảo sát cẩn thận liệu phổ cộng hưởng từ hạt nhân (HSQC, COSY, HMBC) M cho kết tín hiệu 42 carbon gồm phần genin đường rhamnose glucose gần Cấu trúc đơn vị đường thứ xác định O-β-D-glucopyranosid liệu phổ cộng hưởng từ hạt nhân so sánh với tài liệu công bố Như cấu trúc M xác định 3-O-[β-D-glucopyranosyl-(1→3)-α-Lrhamnopyranosyl-] quinovic acid 28- β-Dglucopyranosyl ester Bảng 3: Dữ liệu phổ 13 C –NMR chất M với chất H Carbon Chất M (C5H5N) Chất H (C5H5N) Carbon Chất M (C5H5N) Chất H (C5H5N) Carbon Chất M (C5H5N) Chất H (C5H5N) 10 11 12 13 14 15 16 38,23 t 25,23 t 87,83 d 38,42 s 54,88 d 17,99 t 35,77 t 39,58 s 46,50 d 36,36 s 22,75 t 129,19 d 132,48 s 56,16 s 24,89 t 25,42 t 38,34 t 25,34 t 87,81 d 38,52 s 54,96 d 18,10 t 36,87 t 39,51 s 46,64 d 36,55 s 22,81 t 128,70 d 133,82 s 56,22 s 24,93 t 25,71 t 17 18 19 20 21 22 23 24 25 26 27 28 29 30 1’ 2’ 48,56 s 53,98 d 36,87 d 38,42 d 29,60 t 36,74 t 27,51 q 16,28 q 15,95 q 18,47 q 177,89 s 176,90 s 17,48 q 20,60 q 102,76 d 70,82 d 48,32 s 54,36 d 37,16 d 38,82 d 29,98 t 36,45 t 27,60 q 16,38 q 15,98 q 18,37 q 177,75 s 180,26 s 17,72 q 20,83 q 103,01 d 70,97 d 3’ 4’ 5’ 6’ 1’’ 2’’ 3’’ 4’’ 5’’ 6’’ 1’’’ 2’’’ 3’’’ 4’’’ 5’’’ 6’’’ 81,68 d 71,69 d 68,98 d 17,49 q 104,97 d 74,47 d 77,33 d 70,28 d 77,01 d 61,47 t 94,88 d 72,97 d 78,11 d 70,27 d 76,87 d 60,25 t 82,00 d 71,89 d 69,11 d 17,83 q 105,26 d 74,75 d 77,19 d 70,53 d 77,32 d 61,49 t tính theo g dược liệu/kg thể trọng chuột Kết cho thấy cao EtOAc có hoạt tính mạnh Hình 5: Cơng thức chất M KẾT LUẬN VÀ BÀN LUẬN Đề tài khảo sát so sánh hoạt tính kháng viêm cao cồn 96% thân rễ Khai Kết cho thấy thân Khai thể hoạt tính kháng viêm có ý nghĩa thống kê liều 1g cao/kg thể trọng chuột, hoạt tính kháng viêm thân cao rễ thử nghiệm với liều giống Kết mở hướng sử dụng thân Khai làm thuốc thay sử dụng rễ theo kinh nghiệm dân gian Điều góp phần phát triển bền vững nguồn dược liệu khai thác rễ làm chết khai thác thân có sinh khối lớn tái sinh, không ảnh hưởng nhiều tới nguồn tài nguyên thuốc Từ cao cồn toàn phần chiết từ thân Khai phân tách phân đoạn theo dung mơi có độ phân cực tăng dần thử nghiệm tác dụng kháng viêm phân đoạn cao theo liều Từ cao EtOAc phân tách glycosid: 3-O-βD- glucopyranosyl sitosterol; 3-O-[β-Dglucopyranosyl-(1→4)-α-L-rhamnopyranosyl-] quinovic acid; -O-[β-D-glucopyranosyl-(1→3)α-L-rhamnopyranosyl-] quinovic acid; -O-[βD-glucopyranosyl-(1→3)-α-Lrhamnopyranosyl-] quinovic acid 28-O-β-Dglucopyranosyl ester Đây lần chất báo cáo có thành phần dây Khai TÀI LIỆU THAM KHẢO Fang S Y.; He Z S.; Gao J H (1995), “Triterpenoid glycosides from Adina rubella”, Phytochemistry, 39 (5), pp 1241-1243 Nguyễn Thướng, Trần Hùng (2002) ”Thăm dò số tác dụng sinh học in vitro dây Khai (Coptosapelta tomentosa (Blum.) Vahl Ex Hayen var dongnaiensis (Pit.) Phamh.)– Y học Thành phố Hồ Chí Minh Tập 6, Phụ 4, tr 96-101 Sakakibara J., Kaiya T.; Furuyo H (1983), “ 6β hydroxyursolic acid and other triterpenoids of Enkaianthus cernuus”, Phytochemistry, 22 (11), pp 2553 – 2555 Viện Dược Liệu (2004), Cây thuốc động vật làm thuốc Việt Nam, tập I, NXB Khoa học Kĩ Thuật, tr 645 Võ Văn Chi (1997), Từ điển thuốc Việt Nam, NXB Y Học, tr 383 ... biệt tác dụng tốt sử dụng trị thấp khớp hay đau nhức (4,5) Các nghiên cứu hóa học tác dụng sinh học dây Khai tiến hành xác định thành phần hóa học có tác dụng kháng viêm saponin(2) Với mục đích nghiên. .. nghiên cứu sâu thành phần hóa học tác dụng dược lí dược liệu tạo sở cho việc phát triển thuốc dân tộc tương lai, đề tài tiến hành khảo sát thành phần hóa học thân Khai theo định hướng tác dụng kháng. .. tách, phân lập thành phần có tác dụng kháng viêm Tác dụng kháng viêm phân đoạn thân Khai 10 kg thân Khai ngấm kiệt với cồn 96% Dịch chiết cô dung mơi, thu cao cồn tồn phần Cao tồn phần thêm nước