Sàng lọc và chẩn đoán trước sinh nhằm phát hiện các trường hợp di tật bẩm sinh ngày càng được quan tâm ở nhiều nước, đặc biệt ở các nước phát triển. Để góp phần tiến tới xây dựng chương trình sàng lọc trước sinh nhằm phát hiện sớm các thai phụ có nguy cơ sinh con bị các dị tật, chúng tôi khảo sát các giá trị trung vị của một số chỉ số sinh hoá như AFP, free beta hCG và uE3 trong huyết thanh thai phụ ở 3 tháng giữa của thai kỳ. Bước đầu thực hiện với 607 thai phụ có số tuần tuổi cuả thai nhi từ 14 tuần cho đến 22 tuần và xác định trung vị của AFP tại mỗi khoảng tuần tuổi của thai nhi.
Nghiên cứu Y học Y Học TP Hồ Chí Minh * Tập * Phụ Số * 2005 KHẢO SÁT GIÁ TRỊ TRUNG VỊ CỦA ALPHA FETOPROTEIN (AFP) TRONG HUYẾT THANH CỦA THAI PHỤ Ở THÁNG GIỮA THAI KỲ Đỗ Thò Thanh Thủy* TÓM TẮT Sàng lọc chẩn đoán trước sinh nhằm phát trường hợp di tật bẩm sinh ngày quan tâm nhiều nước, đặc biệt nước phát triển Để góp phần tiến tới xây dựng chương trình sàng lọc trước sinh nhằm phát sớm thai phụ có nguy sinh bò dò tật, khảo sát giá trò trung vò số số sinh hoá AFP, free beta hCG uE3 huyết thai phụ tháng thai kỳ Bước đầu thực với 607 thai phụ có số tuần tuổi cuả thai nhi từ 14 tuần 22 tuần xác đònh trung vò AFP khoảng tuần tuổi thai nhi SUMMARY STUDY ON MEDIAN OF ALPHA FETOPROTEIN IN PREGNANT WOMEN’SERA AT SECOND – TRIMESTER Do Thi Thanh Thuy * Hoc TP Ho Chi Minh * Vol * Supplement of No * 2005: 179 – 182 Prenatal screening and diagnosis for detection of inherited informality is now concerned in many countries, especialy in the developed ones For establishing a prenatal screening program, we have studied on median of AFP in 607 pregnant women’sera at second-trimester with gestational age from 14 to 22 ĐẶT VẤN ĐỀ Các phương pháp đònh lượng α fetoprotein (AFP) huyết thai phụ coi xét nghiệm sàng lọc trước sinh có vai trò quan trọng việc phát dò tật bất thường, chẳng hạn hội chứng Down, khiếm khuyết ống thần kinh tháng thai kỳ(1,4).ø Trong thập niên qua, nhiều nước giới, đặc biệt nước phát triển Anh Hoa kỳ, loại xét nghiệm sàng lọc AFP, double test, triple test quadrupt test… sử dụng rộng rãi phục vụ chương trình sàng lọc trước sinh, nhờ mà tỉ lệ trẻ bò dò tật bẩm sinh hội chứng Down, nứt đốt sống, vô sọ… sinh giảm hẳn nhờ tiến chương trình sàng lọc chẩn đoán trước sinh [3], [6] Ở Việt Nam, có số trung tâm y tế áp dụng đònh lượng AFP huyết mẹ, nhiên không đưa kết luận nguy việc đònh lượng AFP Để tiến tới góp phần vào việc xây dựng chương trình sàng lọc trước sinh, thực bước đầu khảo sát trò số AFP huyết thai phụ số tỉnh thành phía nam Mục tiêu nghiên cứu - Khảo sát xác đònh giá trò trung vò AFP huyết thai phụ tháng thai kỳ số tỉnh phía Nam PHƯƠNG PHÁP NGHIÊN CỨU Chọn mẫu 607 phụ nữ có thai từ tuần tuổi thứ 14 đến tuần thứ 22 thỏa mãn yêu cầu sau: 9ở lứa tuổi 9Cân nặng từ 40kg đến 60kg 9Có thai 9Không có tiền sử sẩy thai liên tiếp, * Bộ môn Sinh Hóa - Đại học Y Dược TP HCM 179 sinh bò hội chứng Down, nứt đốt sống 9Không bò tiểu đường Phương pháp nghiên cứu Lấy máu chống đông, tách huyết sau đến 4h, cất giữ mẫu –30oC Tiến hành đònh lượng AFP huyết kỹ thuật ELISA với thuốc thử hãng Gamma, Bỉ Nguyên tắc đònh lượng AFP huyết thai phụ test ELISA kẹp chả (ELISA sandwich): Các giếng phủ kháng thể kháng AFP bất động sau ủ với huyết chứa AFP rửa thành phần không gắn với kháng thể kháng AFP, thêm thành phần cộng hợp gồm kháng thể kháng AFP đơn dòng đặc hiệu HRP, phức hợp tạo thành Anti-AFP IgG thỏ *AFP* Cộng hợp kháng AFP chuột với peroxidase Cách tiến hành Huyết pha loãng ½ Trên plate có 96 giếng phủ kháng thể kháng AFP, cho 100μl nồng độ hiệu chuẩn khác từ 270 I.U/ml vào giếng từ B1 H1, giếng A1 làm ống trắng (Blank) Sau cho 100μl mẫu huyết pha loãng vào giếng Phủ plate lớp phim mỏng, ủ 37oC, sau rửa toàn giếng lần dung đòch rửa pha loãng Tiếp tục cho vào tất giếng 100μl cộng hợp anti-AFP peroxidase ngoại trừ giếng A1, ủ 37oC lại rửa sau ủ Cho 100 μl dung dòch TMP vào tất giếng, ủ 10 phút nhiệt độ phòng cho thêm 100μl dung dòch ngừng phản ứng Đọc kết Đo độ hấp thụ bước sóng 450nm bước sóng tham khảo 690nm vòng 15 phút sau phản ứng ngừng nồng độ hiệu chuẩn từ 270I.U/ml tất mẫu huyết khác Dùng phần mềm Ascent Software để vẽ biểu đồ chuẩn 180 tính nồng độ mẫu huyết KẾT QUẢ NGHIÊN CỨU Tổng số mẫu Tổng số có 607 mẫu huyết với tuần tuổi thai xác đònh siêu âm (dựa vào đo đường kính lưỡng đỉnh) dùng phần mềm Gamma (The Gamma Software) để có số tuần tuổi thai nhi sau: 14 tuần tuổi (từ 13 tuần ngày 14 tuần ngày): 32 trường hợp 15 tuần tuổi (từ 14 tuần ngày 15 tuần ngày) : 78 trường hợp 16 tuần tuổi (từ 15 tuần ngày 16 tuần ngày): 87 trường hợp 17 tuần tuổi từ 16 tuần ngày 17 tuần ngày): 85 trường hợp 18 tuần tuổi (từ 17 tuần ngày 18 tuần ngày): 92 trường hợp 19 tuần tuổi (từ 18 tuần ngày 19 tuần ngày): 82 trường hợp 20 tuần tuổi (từ 19 tuần ngày 20 tuần ngày): 74 trường hợp 21 tuần tuổi (từ 20 tuần ngày 21 tuần ngày): 77 trường hợp Các giá trò trung vò tuổi thai AFP tính theo phần mềm staticstica Median tuổi thai (tuaàn) 14,21 15,20 16,02 17,05 18,05 19,09 20,09 21 Median AFP (I.U/ml) N (số thai phụ) 26,10 34,22 40,77 53,17 58,69 75,19 77,71 100 32 78 87 85 92 82 74 77 Nghiên cứu Y học Y Học TP Hồ Chí Minh * Tập * Phụ Số * 2005 AFP tuổi thai Sơ đồ biểu thò mối liên quan tuổi thai giá trò trung vò AFP BÀN LUẬN Alpha Fetoprotein (AFP) huyết thai phụ tăng tháng thai kỳ có liên quan đến khuyết tật ống thần kinh thai nhi ngược lại thời kỳ huyết thai phụ có AFP giảm với tăng hCG uE3 thấp lại liên quan đến sinh bò hội chứng Down AFP, loại glycoprotein có trọng lượng phân tử khoảng 70000, tổng hợp ỡ túi noãn, đường tiêu hóa gan trình phát triển phôi thai Bình thường, AFP có nồng độ cao huyết thai nhi, đạt tới đỉnh cao lúc 14 tuần tuổi sau giảm dần Cơ chế lượng nhỏ AFP từ máu thai nhi vào nước ối chưa rõ, có giả thiết cho AFP vào nước ối từ nguồn nước tiểu thai nhi tượng thấm qua lớp biểu bì chưa trưởng thành Sau AFP từ nước ối qua thai vào máu mẹ với nồng độ thấp đo lường AFP huyết mẹ tăng nhiều từ tuần thứ thai kỳ tuần thứ 32, sau giảm dần[2,7] Như giá trò bình thường AFP nước ối hay huyết thai phụ thay đổi tùy theo tuần tuổi thai nhi Việc đo nồng độ AFP nước ối để phát trường hợp thai nhi bò khuyết tật ống thần kinh áp dụng từ lâu thai phụ có đầu bò dò tật ống thần kinh Nhưng việc chọc ối phát khoảng 10% trẻ bò dò tật, 90% thuộc đứa đầu, việc chọc ối để đo AFP trở nên không thực tế sàng lọc, người ta thay đo AFP huyết mẹ nghiên cứu sàng lọc phụ nữ có thai qui mô lớn Sự thay đổi nồng độ AFP huyết mẹ tháng giửa thai kỳ mô tả sử dụng xét nghiệm sàng lọc trước sinh phổ biến nước phát triển Trước năm 1980, sàng lọc hội chứng Down bò hạn chế đo số sinh hóa liên quan việc xác đònh tuổi thai phụ thuộc vào lời khai thai phụ ngày đầu kỳ kinh cuối, thông tin thường sai lệch dẫn tới xác đònh tuổi thai sai làm cho tỉ lệ thai phụ bò chọc ối tăng nhiều lần Ngày hầu hết bệnh viện phụ sản siêu âm để xác đònh tuổi thai nhằm hạn chế việc đònh sai tuổi thai, dẫn đến xác đònh nguy sai Việc sàng lọc xác 181 hiệu phụ thuộc vào việc xác lập nên giá trò trung vò số sinh hóa AFP; free bata hCG uE3 thai phụ Để thực chương trình sàng lọc trước sinh, số liệu trung vò số sinh hóa huyết thai phụ bình thường phải xác đònh, số bình thường thiết lập dựa vào dân số sàng lọc Với phần mềm xác đònh nguy cơ, thai phụ đánh giá nguy dựa vào yếu tố tuổi mẹ, số sinh hóa cân nặng mẹ, chủng tộc, đa thai hay đơn thai tình trạng mẹ bò tiểu đường phụ thuộc Insulin[6] Do bước khảo sát giá trò AFP thai phụ bình thường tháng thai kỳ Với 607 trường hợp chia vào khoảng tuần tuổi, từ khoảng tuần thứ 14 đến tuần thứ 21, khoảng tuần 14 có số lượng thai phụ 32 khoảng tuần 18 nhiều có 92 ca với giá trò trung vò AFP độ tuần tuổi So sánh số liệu với số báo nước ngoài, thấy giá trò trung vò AFP theo tuần tuổi có cao so với số liệu Hàn quốc (khoảng 10%) tuần tuổi từ 17 trở lên, ngang hay thấp chút (5%) so với số liệu Mỹ[5] Nhưng số liệu trung tâm khác cho số liệu khác phương pháp xác đònh dân số mà họ sàng lọc Dù kết ban đầu với số liệu nên chưa thể có kết luận đầy đủ số liệu AFP thai phụ tháng thai kỳ Chúng tiến hành tiếp tục với số lượng cao để có số liệu thoả đáng 182 KẾT LUẬN Để tiến tới thực chương trình sàng lọc trước sinh cho hội chứng Down dò tật bẩm sinh, việc khảo sát thiết lập trung vò cho số sinh hóa AFP, hCG uE3 huyết thai phụ tháng thai kỳ cần thiết Bước đầu khảo sát giá trò trung vò ứng với tuần tuổi thai từ từ 14 tuần thứ 21 phù hợp, đáp ứng yêu cầu chương trình sàng lọc, cần thực với số liệu nhiều rộng rãi TÀI LIỆU THAM KHẢO Haddow J E, Palomaki G E, Knight G J, Williams J at al (1992); Prenatal screening for Down Syndrome with use maternal serum markers; The new England Journal of medicine, vol 327 No 9, p588-593 Gardosi J, Mongelli (1993); Risk assessment adjusted for gestational age in meternal serum screening for Down syndrome; BMJ volume 306 5June 1993: 15091511 Lesin J; Skrablin; et al (2003), Screening for Down syndrome using triple marker testing in the second trimester of pregnancy; Lijec Vjesn, Mar-Apr; 125 (34): 55-60 Wald N J, Hackshaw A K, Geage L M (2000), Assay precision of serum α fetoprotein in antenatal screening for neural tube defects and Down’s syndrome Journal Med Screen 2000; 7: 74-77 Petter A.B; Jonathan M.C; Collins R (1997); Medians for second-trimester maternal serum AFP, hCG and uE3; differences between races or ethenic groups; Clinical Chemistry 43, N.2; 333-337 Stojilkovic-Mikic T, Rodeck CH (2003); Screening for chromosomal anomalies: first or second trimester, biochemical or ultrasound?; Ann Acad Med Singapore Sep; 32:583-8 Van Lith, Beekhuis J R, Loon A J at al (1991), α Fetoprotein in fetal serum, amniotic fluid and maternal serum; Prenatal diagnosis, vol 11, 625-628 ... AFP BÀN LUẬN Alpha Fetoprotein (AFP) huyết thai phụ tăng tháng thai kỳ có liên quan đến khuyết tật ống thần kinh thai nhi ngược lại thời kỳ huyết thai phụ có AFP giảm với tăng hCG uE3 thấp lại... dò tật bẩm sinh, việc khảo sát thiết lập trung vò cho số sinh hóa AFP, hCG uE3 huyết thai phụ tháng thai kỳ cần thiết Bước đầu khảo sát giá trò trung vò ứng với tuần tuổi thai từ từ 14 tuần thứ... hóa cân nặng mẹ, chủng tộc, đa thai hay đơn thai tình trạng mẹ bò tiểu đường phụ thuộc Insulin[6] Do bước khảo sát giá trò AFP thai phụ bình thường tháng thai kỳ Với 607 trường hợp chia vào khoảng