Bài giảng Cấy chuyền nuôi cấy thứ cấp tạo dòng tế bào động vật bao gồm những nội dung về cấy chuyền & nuôi cấy thứ cấp; hợp dòng (Confluency); tạo dòng tế bào động vật; phân lập các dòng tế bào và một số nội dung khác. Mời các bạn tham khảo.
CẤY CHUYỀN NI CẤY THỨ CẤP TẠO DỊNG Tế bào động vật dttloan@hcmus.edu.vn CẤY CHUYỀN & NUÔI CẤY THỨ CẤP - Tách TB khỏi môi trường cũ, xác định lại mật độ TB, tái nuôi cấy - Sự phù hợp mật độ TB – diện tích/khơng gian ni TB – thể tích mơi trường tối ưu TB tăng sinh tốt - Sự hợp dòng - Kìm hãm tiếp xúc - Passage - Chu kì TB – thời gian nhân đơi .American Type Culture Collection HỢP DỊNG (CONFLUENCY) • TB PHỦ KÍN BỀ MẶT NI CẤY • MẬT ĐỘ TẾ BÀO TỐI ƯU ĐỂ CẤY CHUYỀN ~80% • QUÁ ÍT, TB RƠI VÀO PHA LAG VÀ KHÔNG TĂNG SINH • QUÁ NHIỀU: TB NGỪNG PHÂN CHIA HOẶC CHỒNG LẤP LÊN NHAU VÀ HÌNH THÀNH CỤM TB GIỐNG KHỐI U KÌM HÃM TIẾP XÚC • KHI TB TIẾP XÚC VỚI NHAU NGỪNG TĂNG TRƯỞNG • TB DỪNG Ở PHA G0 CỦA CHU KÌ TẾ BÀO (CELL CYCLE) • THỜI GIAN NHÂN ĐƠI: DOUBLING-TIME • HOẶC CÁC TB BỊ BIẾN ĐỔI CÓ THỂ TIẾP TỤC TĂNG SINH VÀ CHỒNG LẤP LÊN NHAU • PHÁT TRIỂN QUÁ MỨC RỒI CHẾT PASSAGE • TB ĐƯỢC TÁCH LÊN BỀ MẶT PLASTIC VÀ CẤY (SEED) TRỞ LẠI • KÍ HIỆU: P# (SỐ PASSAGE) CLIP 3: CẤY CHUYỀN, NUÔI CẤY THỨ CẤP TẠO DỊNG TẾ BÀO ĐỘNG VẬT • CELL LINE • GENOTYPE • CELL STRAIN • GENE EXPRESSION • CELL CLONE • PHENOTYPE • CELL LINEAGE • MICRO/TISSUE ENVIRONMENT • CONTINOUS CELL LINE • IMMORTAL CELL LINE GENERATION NUMBER PASSAGE NUMBER • TRANSFORMED CELL LINE DOUBLING TIME • FINITE/INFINITE CELL LINE CELL CYCLE Phương pháp sử dụng ống syringe hay vòng nhẫn Nguyên tắc - Khi tế bào quan tâm quan sát thấy đĩa ni, sử dụng vòng nhẫn để tách biệt chúng với tế bào bên cạnh - Tế bào quan tâm bị tách biệt không gian với tế bào lại đĩa ni Trong vòng nhẫn, tế bào quan tâm ban đầu bắt đầu phân chia tạo thành tập đoàn - Thủy tinh, thép khơng rỉ, nhựa trung tính Phương pháp pha loãng tới hạn Nguyên tắc - Pha loãng huyền phù tế bào đến mức cho, bổ sung thể tích định huyền phù vào giếng ni giếng chứa tối đa tế bào (1 tế bào/giếng nuôi) (Counter-1 cell/200 µl) - Một tế bào giếng phát triển thành tập đoàn - Quan sát, đánh giá để chọn lựa giếng chứa tập đoàn quan tâm - Ni tập đồn tạo thành cell clone PHƯƠNG PHÁP ROBOT HÓA PHƯƠNG PHÁP MARKER BỀ MẶT FLOW CYTOMETRY ĐƯỜNG CONG TĂNG TRƯỞNG THỬ NGHIỆM ĐỘC TÍNH CỦA THUỐC/ HÓA CHẤT MTT xCell Ligence ... Dòng tế bào bị biến đổi Dòng tb Sự già yếu tb CELL LINE Các tế bào mô, quan ni cấy gọi dòng tế bào (?) Ni cấy sơ cấp -> cấy chuyền, tế bào ni cấy xem dòng tế bào (?) Một cell line có chứa tế. .. LẬP CÁC DỊNG TẾ BÀO Mơ Ni cấy tb đơn hay nuôi cấy mô in vitro Nuôi cấy sơ cấp Cấy chuyền Ni cấy thứ cấp Cấy chuyền Dòng tb Phân lập tb đơn Cell Line Cấy chuyền liên tục Sự tb Tạo dòng tb Mất kiểm... PASSAGE • TB ĐƯỢC TÁCH LÊN BỀ MẶT PLASTIC VÀ CẤY (SEED) TRỞ LẠI • KÍ HIỆU: P# (SỐ PASSAGE) CLIP 3: CẤY CHUYỀN, NI CẤY THỨ CẤP TẠO DỊNG TẾ BÀO ĐỘNG VẬT • CELL LINE • GENOTYPE • CELL STRAIN • GENE