Đang tải... (xem toàn văn)
Đề tài nhằm nghiên cứu khảo sát hoạt tính kháng khuẩn in‐vitro của thuốc gốc alfacef 1g (pymepharco, Việt Nam). Nghiên cứu tiến hành xác định nồng độ tối thiểu ức chế sự tăng trưởng trên các vi khuẩn chuẩn gram dương và gram âm thông dụng của thuốc gốc alfacef 1g (pymepharco, Việt Nam).
Nghiên cứu Y học Y Học TP. Hồ Chí Minh * Tập 17 * Phụ bản của Số 4 * 2013 THỬ NGHIỆM HOẠT TÍNH KHÁNG KHUẨN CỦA CHẾ PHẨM ALFACEF 1G Bùi Tùng Hiệp*, Nguyễn Hồng Thu Trang** TĨM TẮT Mục tiêu: Ceftazidime là một cephalosporin thế hệ 3, kháng sinh diệt khuẩn và có tác động chống lại nhiều vi khuẩn Gram dương và Gam âm, đặc biệt là Pseudomonas aeruginosa. Thị trường dược phẩm tại Việt nam hiện có hơn 60 chế phẩm chứa hoạt chất trên, bao gồm những biệt dược và thuốc gốc của nhiều quốc gia trên thế giới. Đề tài nhằm nghiên cứu khảo sát hoạt tính kháng khuẩn in‐vitro của thuốc gốc Alfacef 1g (Pymepharco, Việt nam). Phương pháp: xác định nồng độ tối thiểu ức chế sự tăng trưởng trên các vi khuẩn chuẩn Gram dương và Gram âm thông dụng của thuốc gốc Alfacef 1g (Pymepharco, Việt nam), so sánh với biệt dược Fortum 1g (GlaxoSmithKline, Úc). Kết quả: các nồng độ tối thiểu ức chế tăng trưởng của thuốc gốc Alfacef 1g trên 10 loại vi khuẩn chuẩn thông dụng, bao gồm 3 vi khuẩn Gram âm và 7 vi khuẩn Gram dương: Klebsiella pneumoniae CF 104, Bacillus subtilis ATCC 6633, Micrococcus luteus ATCC 9341, Enterococcus faecalis ATCC 51299, E. coli ATCC 25922, Pseudomonas aeruginosa ATCC 27853, Staphylococcus aureus ATCC 25923, Staphylococcus aureus ATCC 29213, Enterococcus faecalis ATCC 29212 và Corynebacterium diphtheriae ATCC 51696; cho thấy hồn tồn khơng khác biệt với thuốc biệt dược Fortum. Điều này giúp giảm chi phí điều trị và lệ thuộc vào thuốc ngoại nhập, hưởng ứng chủ trương: “Người Việt Nam dùng hàng Việt Nam”. Kết luận: Hoạt tính kháng khuẩn của 2 kháng sinh thử nghiệm trên các vi khuẩn chuẩn thơng dụng hồn tồn tương đương. Từ khố: Nồng độ tối thiểu ức chế, phương pháp pha lỗng trong mơi trường thạch ABSTRACT THE ANTIMICROBIAL ACTIVITY OF GENERIC DRUG ALFACEF 1G Bui Tung Hiep, Nguyen Hoang Thu Trang * Y Hoc TP. Ho Chi Minh * Vol. 17 ‐ Supplement of No 4 ‐ 2013: 116 ‐ 120 Objectives: Ceftazidime is a third‐generation cephalosporin antibiotic. Ceftazidime is bactericidal in action, exerting its effect by inhibition of enzymes responsible for cell‐wall synthesis. It is active against many Gram‐ positive and Gram‐negative bacteria, especially Pseudomonas aeruginosa. Pharmaceutical maket in Viet nam show more than 60 drugs contain this active ingredient, including various brand names and generic names of many countries in the world. The aim of this study to investigate the in‐vitro antimicrobial activity of generic drug Alfacef 1g (Pymepharco, Viet nam). Material and method: determining the minimum inhibitory concentrations on common Gram‐positive and Gram‐negative standard bacteria, compared with a brand name (Fortum 1g, GlaxoSmithKline, Australia). Results: The minimum inhibitory concentrations of Alfacef 1g on 10 common standard bacteria, including three Gram‐negative bacteria and seven Gram‐positive bacteria: Klebsiella pneumoniae CF 104, Bacillus subtilis ATCC 6633, Micrococcus luteus ATCC 9341, Enterococcus faecalis ATCC 51299, E. coli ATCC 25922, Pseudomonas aeruginosa ATCC 27853, Staphylococcus aureus ATCC 25923, Staphylococcus aureus ATCC 29213, Enterococcus faecalis ATCC 29212, and Corynebacterium diphtheriae ATCC 51696; have been * Bệnh viện Cấp cứu Trưng Vương Tác giả liên lạc: PGS.TS. Bùi Tùng Hiệp 116 ** Đại học Y Dược Tp.HCM ĐT: 0914187054 Email: buitunghiep@yahoo.com Hội Nghị Khoa Học Kỹ Thuật BV. Cấp Cứu Trưng Vương 2013 Y Học TP. Hồ Chí Minh * Tập 17 * Phụ bản của Số 4 * 2013 Nghiên cứu Y học demonstrated the equivalence of antimicrobial activity, compared with those of brand name Fortum. That can save the substantial cost of patients’s treatment and the dependence on foreign drugs, according to the govermental policy: “Vietnamese people use vietnamese products”. Conclusion: The antibacterial activity of two antibiotics on bacteria testing formal standards fully equivalent. Key words: Minimum inhibitory concentration, agar dilution method nhằm chứng minh hoạt tính kháng khuẩn của ĐẶT VẤN ĐỀ chế phẩm Alfacef chứa 1g hoạt chất ceftazidime Ceftazidime là một cephalosporin thế hệ 3, qua việc xác định nồng độ tối thiểu ức chế kháng sinh diệt khuẩn, đề kháng với hầu hết các (Minimum Inhibitory Concentration‐MIC) trên enzym bêta‐lactamase phổ hẹp và có tác động các vi khuẩn chuẩn thông dụng, so sánh với chống lại nhiều vi khuẩn gram âm và gram thuốc biệt dược Fortum (GlaxoSmithKline‐ Úc). dương. Do có phổ kháng khuẩn rộng, VẬT LIỆU VÀ PHƯƠNG PHÁP ceftazidime có thể được dùng đơn độc như một thuốc đầu tay, trong khi chờ đợi kết quả của các Vi khuẩn thử nghiệm thử nghiệm tính nhạy cảm. ceftazidime có tính Tổng cộng 10 vi khuẩn chuẩn được thử diệt khuẩn, tác động gây sự ức chế tổng hợp nghiệm, bao gồm 3 vi khuẩn chuẩn Gram âm và vách tế bào vi khuẩn. Bên cạnh những biệt dược 7 vi khuẩn Gram dương: Klebsiella pneumoniae của những hãng dược phẩm nổi tiếng trên thế CF 104, Bacillus subtilis ATCC 6633, Micrococcus giới như Fortum (GlaxoSmithKline‐ Úc) hoặc luteus ATCC 9341, Enterococcus faecalis ATCC Tazidime (Eli Lilly‐ Mỹ) thì thị trường dược 51299, E. coli ATCC 25922, Pseudomonas phẩm tại nước ta cũng có hiện diện đến hơn 60 aeruginosa ATCC 27853, Staphylococcus aureus thuốc gốc chứa hoạt chất trên với sự tham gia ATCC 25923, Staphylococcus aureus ATCC 29213, của rất nhiều hãng của những quốc gia khác Enterococcus faecalis ATCC 29212 và nhau, thuốc do Việt nam sản xuất rất ít. Có thể Corynebacterium diphtheriae ATCC 51696 được kể đến Cefitin (Lyka‐Ấn độ), Ceftazidime cung cấp tại Bộ môn Vi sinh‐Ký sinh‐ Khoa Sodium Inj (Austin Pharma‐ Hong Kong), Dược‐ Đại Học Y Dược TP Hồ Chí Minh. Bitazid (Sanavita‐Đức), Lacdi ceftazidime (Hebei Chế phẩm Alfacef 1g (Pymepharco ‐ Việt Zhangjiakou Pharm Co., Ltd – Trung Quốc), nam), lô 14810, hạn sử dụng đến 06/08/2013 và Ceftazidime Injection (Aurobindo Pharma‐ Ấn biệt dược Fortum 1g (GlaxoSmithKline ‐ Úc), lô độ), Bectozid (Cadila Healthcare Ltd‐ Ấn độ), 0017, hạn sử dụng đến 31/08/2013 được chúng Ceftazidime‐1000 (Flamingo Pharmaceuticals tôi sử dụng trong nghiên cứu. Ltd‐ Ấn độ), Orzid (Orchid Chemicals & Phương pháp xác định MIC Pharmaceutical Ltd‐ Ấn độ), Betazidim (Strides Arcolab‐ Ấn độ), Biocetum (Bioton‐ Ba Lan), Áp dụng phương pháp pha lỗng trong mơi Cefdim (Korea United Pharm‐ Hàn Quốc), trường thạch theo quy trình chuẩn của NCCLS Bicefzidim (Bidiphar‐ Việt nam) và Alfacef 2006 (National Committee for Clinical (Pymepharco‐ Việt nam) v v Thử nghiệm hoạt Laboratory Standard)(5). tính kháng khuẩn in‐vitro hoặc xác định hoạt lực Cân chính xác lượng kháng sinh ceftazidime thuốc trên vi sinh vật cần phải nghiên cứu trước (Alfacef hoặc Fortum), hòa tan trong đệm pH 7 hết để sàng lọc, kiểm tra, kiểm nghiệm những vô trùng (hoà tan 42,59g Na2HPO4 khan với kháng sinh mới hoặc thuốc kháng sinh do 27,22g KH2PO4 trong 1 lít nước) để pha giai mẫu những nhà sản xuất khác nhau, thể hiện thật sự khả năng kháng khuẩn, điều mà các phương kháng sinh có nồng độ giảm đi ½, có nồng độ (2,4,6) pháp Lý‐Hố khơng xác định Đề tài cuối từ 1024 – 0,125 μg/ml trong 25 ml mơi Hội Nghị Khoa Học Kỹ Thuật BV. Cấp Cứu Trưng Vương 2013 117 Y Học TP. Hồ Chí Minh * Tập 17 * Phụ bản của Số 4 * 2013 Nghiên cứu Y học trường thạch Mueller‐Hinton. Trộn đều, tạo bản chúng tơi đã xác định được nồng độ kháng sinh thạch bằng cách đổ ra hộp Petri đường kính 90 đầu tiên thấp nhất mà ở đó vi khuẩn bị ức chế mm, để đặc lại trên mặt phẳng ngang để có bản hồn tồn, đó chính là giá trị của MIC (Hình 1) thạch độ dày là 4 mm. F A Các vi khuẩn thử nghiệm được cấy phân lập trên môi trường Tryptic soy agar, ấp ở 37oC từ 18‐24 giờ. Chọn 3‐5 khóm vi khuẩn thuần khiết để tạo thành huyền dịch vi khuẩn trong mơi trường lỏng Mueller‐Hinton hay nước muối sinh lý vơ trùng để có độ đục tương đương McFarland 0.5 (~108 colony forming unit (CFU)/ml). Cũng có thể nuôi cấy lắc vi khuẩn trong môi trường Mueller‐Hinton lỏng trong nồi cách thủy từ 3‐5 giờ ở 37oC, sau đó điều chỉnh tạo lượng huyền dịch vi khuẩn tương đương độ đục McFarland 0.5. Thực hiện đếm sống để đảm bảo lượng vi khuẩn chuẩn ban đầu như sau: E. coli, P. aeruginosa, K. pneumoniae, B. subtilis và M. luteus từ 3.1‐ 5.5 x 108 CFU/ml; enterococci, 3.5‐ 6.0 x 108 CFU/ml; C. diphtheriae, staphylococci từ 4‐ 5.5 x 108 CFU/ml. Pha loãng vi khuẩn thử nghiệm 1/10 bằng mơi trường lỏng Mueller‐ Hinton hay nước muối sinh lý vơ trùng và chấm lên bản thạch (đã có kháng sinh) từ 1‐2 μl (~104 CFU trên vết chấm)(3). Hình 1. Xác định MIC bằng phương pháp pha lỗng trong thạch F và A: Bản thạch chứa Fortum và Alfacef cùng nồng độ. Ô 1: chấm vi khuẩn Klebsiella pneumoniae CF 104. Ô 5: chấm vi khuẩn Bacillus subtilis ATCC 6633. Ô 6: chấm Micrococcus luteus ATCC 9341. Ô 9: chấm Enterococcus faecalis ATCC 51299. Ô 11: chấm E. coli ATCC 25922. Ô 12: chấm Pseudomonas aeruginosa ATCC 27853. Ô 13: chấm Staphylococcus aureus ATCC 25923. Ô 14: chấm Staphylococcus aureus ATCC 29213. Ô 15: chấm Enterococcus faecalis ATCC 29212. Ô 16: chấm Corynebacterium diphtheriae ATCC 51696. Đọc kết qủa sau khi ấp ở 37oC từ 18‐24 giờ, Nhìn chung, kết qủa MIC trên cả 2 kháng quan sát bất cứ hiện diện của sự phát triển vi sinh thử nghiệm phù hợp với thơng tin của nhà khuẩn trên vết chấm. Xác định nồng độ MIC là sản xuất biệt dược. Có một số thay đổi về giá trị nồng độ kháng sinh đầu tiên thấp nhất mà ở MIC nhưng khơng có ý nghiã khác biệt(1,3,4). Hoạt đó vi khuẩn bị ức chế hồn tồn quan sát được chất ceftazidime cho thấy tác động rất tốt trên vi bằng mắt thường. Thử nghiệm được thực hiện khuẩn Gram âm (E.coli, Klebsiella pneumoniae và lặp lại ít nhất 3 lần cho mỗi chủng vi khuẩn Pseudomonas aeruginosa); MIC của những chủng khi xác định MIC. Giá trị MIC của các chủng vi này từ 0.25‐ 1 μg/ml. Ngược lại, giá trị MIC của khuẩn chuẩn được so sánh từng cặp giữa chế ceftazidime trên các vi khuẩn Gram dương phẩm thử và chế phẩm đối chiếu, được xem là (Bacillus subtilis ATCC 6633, Micrococcus luteus không khác biệt khi các giá trị này không khác ATCC 9341, Enterococcus faecalis ATCC 51299, biệt quá 4 lần(1,3,4). Staphylococcus aureus ATCC 25923, Staphylococcus KẾT QUẢ VÀ BÀN LUẬN Bằng cách quan sát bất cứ hiện diện của sự phát triển vi khuẩn trên vết chấm bằng mắt aureus ATCC 29213, Enterococcus faecalis ATCC 29212 và Corynebacterium diphtheriae ATCC 51696) cao hơn, MIC của những chủng này từ 0.25 cho đến 1024 μg/ml. thường, theo quy trình chuẩn của NCCLS, 118 Hội Nghị Khoa Học Kỹ Thuật BV. Cấp Cứu Trưng Vương 2013 Y Học TP. Hồ Chí Minh * Tập 17 * Phụ bản của Số 4 * 2013 Bảng 1. MIC của vi khuẩn thử nghiệm với Alfacef Thuốc gốc Alfacef Mã số 11 12 13 14 15 16 MIC (µg/ml) Klebsiella pneumoniae CF 104 0.25 Bacillus subtilis ATCC 6633 Micrococcus luteus ATCC 9341 Enterococcus faecalis ATCC 51299 1024 E coli ATCC 25922 0.5 Pseudomonas aeruginosa ATCC 27853 Staphylococcus aureus ATCC 25923 16 Staphylococcus aureus ATCC 29213 16 Enterococcus faecalis ATCC 29212 1024 Corynebacterium diphtheriae ATCC 51696 16 Vi khuẩn thử nghiệm Bên cạnh đó, so sánh tác động kháng khuẩn của thuốc Alfacef 1g và Fortum 1g đều cho thấy kết qủa hồn tồn tương đồng. Trên vi khuẩn Staphylococcus aureus ATCC 25923, Staphylococcus aureus ATCC 29213 và lâm sàng và/hoặc đa đề kháng kháng sinh thì mới có kết qủa đầy đủ và hồn chỉnh khi so sánh hoạt tính kháng khuẩn. Bảng 2. MIC của vi khuẩn thử nghiệm với Fortum Biệt dược Fortum Mã số 11 12 13 14 15 16 hai kháng sinh thử nghiệm hoàn toàn bằng nhau, tất cả là 16 μg/ml. Enterococcus faecalis mặc dù không nằm trong các vi khuẩn nhạy cảm với ceftazidime cũng được nhiều tác giả thử nghiệm(3). Trong khảo sát của chúng tôi, MIC của Enterococcus faecalis ATCC 51299 và ATCC 29212 đều rất cao, nhưng mặt khác khơng có sự khác biệt giữa 2 kháng sinh thử nghiệm, cả hai Hoạt tính kháng khuẩn của 2 kháng sinh thử nghiệm trên các vi khuẩn chuẩn thơng dụng là hồn toàn tương đương. Tuy vậy, cần thử nghiệm thêm các chủng vi khuẩn lâm sàng và/hoặc đa đề kháng kháng sinh thì mới có kết qủa đầy đủ và hồn chỉnh khi so sánh hoạt tính kháng khuẩn. TÀI LIỆU THAM KHẢO kháng sinh đều cho MIC cao tới 1024 μg/ml. Đối với Bacillus subtilis ATCC 6633, trên Alfacef cho MIC là 8 μg/ml, thấp hơn so với 16 μg/ml của Fortum. Với vi khuẩn E.coli ATCC 25922, thử nghiệm với Alfacef cho MIC cao hơn so với Fortum (0.25 μg/ml so với 0.5 μg/ml). Với tác nhân thường gây viêm phổi là Klebsiella pneumoniae và đặc biệt là Pseudomonas aeruginosa, Alfacef có giá trị MIC thấp hơn một ít hoặc hồn tồn tương đương với Fortum (Bảng 1 và Bảng 2). Có thể sơ bộ kết luận, hoạt tính kháng khuẩn của 2 kháng sinh thử nghiệm trên các vi khuẩn chuẩn thơng dụng hồn tồn tương đương. Tuy vậy, cần thử nghiệm thêm các chủng vi khuẩn MIC (µg/ml) Klebsiella pneumoniae CF 104 0.5 Bacillus subtilis ATCC 6633 16 Micrococcus luteus ATCC 9341 0.5 Enterococcus faecalis ATCC 51299 1024 E coli ATCC 25922 0.25 Pseudomonas aeruginosa ATCC 27853 Staphylococcus aureus ATCC 25923 16 Staphylococcus aureus ATCC 29213 16 Enterococcus faecalis ATCC 29212 1024 Corynebacterium diphtheriae ATCC 51696 16 Vi khuẩn thử nghiệm KẾT LUẬN Corynebacterium diphtheriae ATCC 51696 cho thấy giá trị MIC của Nghiên cứu Y học Chow AW, Bartlett KH (1981). Comparative in‐vitro activity of ceftazidime (GR 20263) and other β‐lactamase stable cephalosporins against Pseudomonas, effect of inoculum size and divalent cation supplementation. Journal of Antimicrobial Chemotherapy 1981; 8: 345‐348. Bộ Y tế (2002) Dược điển Việt nam 3 Phụ lục 10. Goldstein EJC, Citron DM, et al (1985). Comparative in vitro inhibitory and killing activity of Cefpirome, Ceftazidime, and Cefotaxime against Pseudomonas aeruginosa, enterococci, Staphylococcus epidermidis, and methicillin‐susceptible and ‐ resistant and tolerant and nontolerant Staphylococcus aureus. Antimicrobial Agents and Chemotherapy 1985; pp. 160‐162. Fritsche TR, Sader HS, Jones RN (2003). Comparative activity and spectrum of broad‐spectrum beta‐lactams (cefepime, ceftazidime, ceftriaxone, piperacillin/ tazobactam) tested against 12,295 staphylococci and streptococci: report from the SENTRY antimicrobial surveillance program (North America: 2001‐2002). Diagn Microbiol Infect Dis. 2003; 47(2): 435‐40. National Committee for Clinical Laboratory Standards (2006). Performance standards for antimicrobial disk susceptibility tests; approved standard, 9th ed. 2006. Wayne, PA: NCCLS; document M100‐ S16. Yutaka U, Katsunori K, et al (2005). In vitro and in vivo antibacterial activities of SM‐216601, a new broad‐spectrum Hội Nghị Khoa Học Kỹ Thuật BV. Cấp Cứu Trưng Vương 2013 119 Y Học TP. Hồ Chí Minh * Tập 17 * Phụ bản của Số 4 * 2013 Nghiên cứu Y học parenteral carbapenem. Antimicrobial Agents and Chemotherapy 2005; 49(10): 4185–4196. Ngày nhận bài 20/08/2013. Ngày phản biện nhận xét bài báo 29/08/2013. Ngày bài báo được đăng: 10/10/2013 120 Hội Nghị Khoa Học Kỹ Thuật BV. Cấp Cứu Trưng Vương 2013 ... thuốc đầu tay, trong khi chờ đợi kết quả của các Vi khuẩn thử nghiệm thử nghiệm tính nhạy cảm. ceftazidime có tính Tổng cộng 10 vi khuẩn chuẩn được thử diệt khuẩn, tác động gây sự ức chế tổng hợp nghiệm, bao gồm 3 vi khuẩn chuẩn Gram âm và ... minh hoạt tính kháng khuẩn của ĐẶT VẤN ĐỀ chế phẩm Alfacef chứa 1g hoạt chất ceftazidime Ceftazidime là một cephalosporin thế hệ 3, qua việc xác định nồng độ tối thiểu ức chế ... diphtheriae ATCC 51696 16 Vi khuẩn thử nghiệm Bên cạnh đó, so sánh tác động kháng khuẩn của thuốc Alfacef 1g và Fortum 1g đều cho thấy kết qủa hoàn toàn tương đồng. Trên vi khuẩn Staphylococcus aureus ATCC 25923, Staphylococcus