Hai hợp chất alcaloid phân lập từ cây Dây đau xương (Tinospora sinensis (Lour.) Merr) trồng tại tỉnh Vĩnh Phúc

Bài viết này trình bày về phân lập và xác định cấu trúc hóa học của hai hợp chất benzophenanthridin mới được phân lập từ dây đau xương trồng tại Vĩnh Phúc, Việt Nam. Mời các bạn cùng tham khảo.

Tạp chí Khoa học ĐHQGHN: Khoa học Y Dược, Tập 33, Số (2017) 56-61 Hai hợp chất alcaloid phân lập từ Dây đau xương (Tinospora sinensis (Lour.) Merr) trồng tỉnh Vĩnh Phúc Vũ Đức Lợi1,*, Nguyễn Thị Mai Trang1, Trương Thị Vân Hoài1, Nguyễn Thúc Thu Hương1, Nguyễn Thành Nam2 Khoa Y Dược, Đai học Quốc gia Hà Nội, 144 Xuân Thủy, Cầu Giấy, Hà Nội, Việt Nam Khoa Dược, Bệnh viện quân y, 7A, 466 Nguyễn Trãi, Quận 5, Hồ Chí Minh, Việt Nam Nhận ngày 03 tháng năm 2017 Chỉnh sửa ngày 24 tháng năm 2017; Chấp nhận đăng ngày 06 tháng 12 năm 2017 Tóm tắt: Cây dây đau xương (Tinospora sinensis (Lour.) Merr) trồngở Vĩnh phúc thuốc phổ biến có giá trị sử dụng cao đời sống Trong chương trình nghiên cứu phát triển dược liệu, sở sử dụng phương pháp sắc kí phân lập hai hợp chất từ dây đau xương thu hái Vĩnh Phúc Câu trúc hóa học hai hợp chất xác định làdecarin (1) iwamid (2) dựa liệu phổ khối lượng cộng hưởng từ hạt nhân kết hợp so sánh với liệu phổ công bố tài liệu tham khảo Đây công bố thành phầnbenzophenanthridine dây đau xương trồng Việt Nam Từ khóa: Dây đau xương, Tinospora sinensis, decarin, iwamid Đặt vấn đề  Dây đau xương có chứa số nhóm chất như: chứa steroid, flavonoid, alkaloid, glycoside, sốhợp chất như: Magnoflorine, berberine, tinosporicide, menispermacide, palmatine, (+) - malabarolide tinosinen I,tinosposide A B tinosposide [5-8] Tuy nhiên, nước ta có nghiên cứu thành phần hóa học tác dụng sinh học dược liệu dây đau xương Vì vậy, cần có nghiên cứu thành phần hóa học, tác dụng sinh học để bổ sung them liệu loài này, giúp sử dụng hiệu Bài báo trình bày phân lập xác định cấu trúc hóa học hai hợp chất benzophenanthridin phân lập từdây đau xương trồng Vĩnh Phúc, Việt Nam Cây Dây đau xương (Tinospora sinensis (Lour.) Merr), gọi khoan cân đằng, lồi thực vật sống lâu năm thuộc họ tiết dê Menispermaceae [1] Ở Việt Nam, mọc nhiều vùng Tây bắc, mọc hoang khắp nơi miền núi đồng [1] Trong y học cổ truyền, thân dây đau xương sử dụng chữa sốt, phong thấp, chứng đau nhức gân cốt, đau dây thần kinh hông, đòn ngã tổn thương để bồi bổ sức khỏe Lá tươi dùng đắp chỗ đau nhức gân cốt trị rắn cắn [2] Các nghiên cứu khoa học đại chứng minh dây đau xương có tác dụng sốt rét, hạ sốt, kháng khuẩn, sát khuẩn, kháng u hoạt tính antiprotozoal (Leishmania) [3, 4] Các nghiên cứu thành phần hóa học cho thấy Đối tượng phương pháp nghiên cứu _  Tác giả liên hệ ĐT.: 84-917879959 Email: ducloi82@gmail.com https://doi.org/10.25073/2588-1132/vnumps.4083 2.1 Đối tượng nghiên cứu 56 V.Đ Lợi nnk / Tạp chí Khoa học ĐHQGHN: Khoa học Y Dược, Tập 33, Số (2017) 56-61 Mẫu Dây đau xương thu hái vào tháng năm 2017 thị trấn Tam Đảo, tỉnh Vĩnh Phúc Mẫu thực vật giám định tên khoa học là: Tinospora sinensis (Lour.) Merr, họ tiết dê Menispermaceae, mẫu lưu giữ Khoa Y Dược, ĐHQGHN 2.2 Dung môi, hóa chất Các dung mơi dùng chiết xuất, phân lập methanol (MeOH), n-hexan, ethyl acetat (EtOAc), dicloromethan (DCM) đạt tiêu chuẩn công nghiệp chưng cất lại trước dùng Dung mơi phân tích gồm MeOH, n-hexan, EtOAc, H2O dùng để phân tích sắc ký đạt tiêu chuẩn phân tích Pha tĩnh dùng sắc ký cột silica gel pha thường (0,040 - 0,063 mm, Nicalai Tesque Inc., Nhật Bản), YMC ODS-A (50μm, YMC Co Ltd., Nhật Bản) Bản mỏng tráng sẵn đế nhôm loại pha thường Kieselgel 60 F254 pha đảo TLC Silica gel 60 RP-18 F254S (Merck, Damstadt, Đức) Phát chất đèn tử ngoại hai bước sóng 254 nm 365 nm dùng thuốc thử dung dịch H2SO4 10 % hơ nóng để phát vết chất 57 1,5lít) Các dịch chiết n- hexane, ethylacetate cất thu hồi dung môi áp suất giảm thu cặn dịch chiết tương ứng n- hexan (H32,4 g) (E, 36,0 g) lớp nước (N, 20,6 g) Cặn chiết ethylacetate (36,0g) hòa tan với lượng tối thiểu ethyl acetat sau tiến hành phân tách cột sắc ký silica gel pha thường, rửa giải hệ dung môi chloroform/methanol (20/1→ 1/1)thu bốn phân đoạn E1 (9,6 g), E2(8,3 g), E3(6,1 g), E4(4,2 g) Từ p hân đ oạ n E1 tiếp tục phân tách cộtsilica gel pha thường với hệ dung môi n-hexane/ethylacetate (2/1) thu phân đoạn nhỏ E1.1(2,4g), E1.2(1,8g), E1.3(2,6g), E1.4 (1,2 g) Phân đoạn nhỏ E1.1 phân tách t i ế p cột sắc ký silicagel pha thường với hệ dung môi rửa giải chloroform /ethylacetate (3/1) thu hợp chất L1 (10mg) Phân đoạn E1.3 phân tách sắc ký cột silica gel pha thường rửa giải hệ dung môi n-hexane/n-butanol (3/1) thu hợp chất L2 (12 mg) 2.3 Thiết bị, dụng cụ 3.Kết bàn luận Điểm nóng chảy đo máy Stuart SMP3 (Sanyo, Nhật Bản) Phổ khối ion hóa phun mù điện tử (ESI-MS) đo máy AGILENT 1260 Series LC-MS ion Trap (Agilent Technologies, Hoa Kỳ) Phổ cộng hưởng từ hạt nhân hai chiều đo máy JEOL ECX 400 (Jeol, Nhật Bản) sử dụng dung môi CDCl3/CD3OD, chất nội chuẩn tetramethylsilan (TMS) 3.1 Hợpchất L1:Decarin 2.4 Chiết tách phân lập chất Mẫu phơi khô, nghiền thành bột (1,2kg), chiết methanol (3 lần x lít), thiết bị chiết siêu âm (40oC,3h) Dịch chiết lọc qua giấy lọc, gộp lại cất loại dung môi áp suất giảm thuđược 108,0g cặn chiết methanol Cặn chiết hòa tan vào nước cất tiến hành chiết phân bố với n-hexane ethylacetate (mỗi loại × Hình Cấu trúc hợp chất L1 Chất dạng tinh thể hình kim, màu vàng Nhiệt độ nóng chảy: 242-245oC CTPT: C19H13NO4; KLPT M = 319 Số liệu phổ1 H-NMR 13C-NMR (DMSOd6) trình bày Bảng 58 V.Đ Lợi nnk / Tạp chí Khoa học ĐHQGHN: Khoa học Y Dược, Tập 33, Số (2017) 56-61 Bảng Số liệu phổ NMR L1 hợp chất tham khảo Vị trí C 4a 4b 6a 10 10a 10b 11 12 12a -OCH2O7-OCH3 8-OH S δC 104,4 148,1 147,9 100,8 128,4 138,7 145,7 121,4 142,1 147,5 123,5 118,5 126,4 120.0 118,5 127,0 129,2 101,4 61,1 - δC 104,5 148,1 147,8 100,9 128,3 138,6 145,8 121,6 142,1 147,5 123,6 118,6 126,4 119,9 118,7 127,0 129,2 101,4 61,2 - DEPT CH C C CH C C CH C C C CH CH C C CH CH C CH2 CH3 δH (J=Hz) 7,53 (s) 8,52 (s) 9,56 (s) 7,56 (d,8,5) 8,47 (d,8,5) 8,52 (d,9,0) 7,94 (d,9,0) 6,20 (s) 4,01 (s) 10,10 (s) HMBC (H→C) 2, 3, 4a 4b,6a, 10a 7, 10a 6a, 4b,10a,12,12a 10b, 4a,1 2, 7, 8, S δC decarin đo DMSO [9] Hợp chất L1 thu dạng tinh thể hình kim, màu vàng nâu màu vàng TLC dùng thuốc thử Dragendorff cho thấy alcaloid Trên phổ HNMR L1 xuất tín hiệu proton vòng thơm có: nhóm methoxy δH 4,01(s); cặp tín hiệu dạng doublet δH 7,56 (d,J=8,5Hz) 8,48 (d,J=8,5Hz); 8,52 (d,J=9,0Hz) 7,94 (d,J=9,0Hz); nhóm dioximethylen (-OCH2O-) δH 6,20(s); nhóm hydroxyl δH 10,10(s); tín hiệu dạng singlet δH7,53(s), 8,52(s) 9,56(s) Phổ 13CNMR phổ DEPT xuất tín hiệu 19 nguyên tử carbon có carbonmethyl, carbonmethylen, carbonmethine 10 carbon bậc bốn Thông qua tương tác trực tiếp H-C phổ HSQC độ chuyển dịch hóa học proton gán với carbon tương ứng Trên phổ HMBC thấy có tương tác 8-OH (δH10,10) với C-7 (δC142,1)/C-8 (147,5)/C-9 (123,6); tương tác proton nhóm methoxy (OCH3) δH 4,01 với C-7 (δC 142,1) cho phép khẳng định vị trí nhóm hydroxy methoxy C-8 C-7 So sánh liệu phổ NMR L1 hoàn toàn trùng khớp với decarin [9] Như vậy, L1 xác định xác decarin 3.2 Hợpchất Chất bột vơ định hình, màu nâu Nhiệt độ nóng chảy:270-274oC CTPT: C20H17NO6; KLPT M = 367 Số liệu phổ 1H-NMR 13C-NMR (DMSOd6) trình bày Bảng 2: V.Đ Lợi nnk / Tạp chí Khoa học ĐHQGHN: Khoa học Y Dược, Tập 33, Số (2017) 56-61 59 Bảng Số liệu phổ NMR L2 hợp chất tham khảo Vị trí C # δC DEPT δH(J=Hz) 10 11 12 13 14 15 16 17 18 N-CH3 -OCH2O10-OH 11-OCH3 12-OH 99,8 148,5 149,6 103,7 127,6 128,5 164,3 104,7 149,7 137,7 153,6 135,5 136,7 129,4 131,7 123,8 115,6 33,0 102,2 60,5 98,6 147,8 148,8 104,1 126,8 127,7 163,2 107,2 150,1 135,5 147,5 134,6 135,4 128,0 130,4 124,6 117,8 32,7 101,5 59,9 - CH C C CH CH CH CH CH C C C C C C C CH C CH3 CH2 6,98 (s) 7,45 (s) 7,80 (d,8,0) 7,21 (d,8,5) 7,95 (s) 6,36 (d,8,5) 6,59 (d,8,0) 2,88 (s) 6,16 (d,2,5) 9,34(s) 3,69 (s) 8,72(s) δC CH3 HMBC (H→C) 2, 3, 16 3, 5,15 13,16 13,14,18 10,18 10,12,13 8, 14 2, 11 11 18 # Giá trị δC iwamid đo CDCl3 [10] Hình Cấu trúc hợp chất L2 Hợp chất L2 thu dạng bột vô định hình, màu nâu màu vàng TLC dùng thuốc thử Dragendorff cho thấy alkaloid Phổ 1H-NMR L2 xuất tín hiệu của: nhóm hydroxyl δH 8,72(s) 9,34 (s); nhóm methoxy δH 3,69(s); proton thuộc vòng thơm δH6,98 (s), 7,45(s), 7,21(d,J=8,5Hz), 7,80(d,J=8,0Hz), 6,36(d,J=8,5Hz) 6,59 (d, J =8,0Hz); nhóm N-methyl δH 2,88(s) tín hiệu nhóm dioximethylen (-OCH2O-) δH 6,16(d, J = 2,5Hz); proton nhóm aldehyde δH 7,95(s) Phổ 13C-NMR phổ DEPT L2 xuất tín hiệu 20 nguyên tử carbon có carbonmethine, carbonmethylen, 10 60 V.Đ Lợi nnk / Tạp chí Khoa học ĐHQGHN: Khoa học Y Dược, Tập 33, Số (2017) 56-61 carbon bậc bốn carbonmethyl Tín hiệu nhóm carbonyl δC 163,2(C-8) bị dịch chuyển phía trường mạnh dự đốn nhóm carbonyl nối với nitơ (-NCHO) Bên cạnh đó, phổ xác nhận tín hiệu nhóm methoxy δC59,9 (11OCH3) nhóm N-methyl δC 32,7 Thơng qua tương tác trực tiếp phổ HSQC độ chuyển dịch hóa học nguyên tử proton gán với carbon tương ứng So sánh số liệu phổ NMR L2 với hợp chất 10-O-demethyl-12-O-methylarnottianamide [11] thấy độ chuyển dịch hóa học hầu hết vị trí phù hợp trừ độ chuyển dịch hóa học vị trí C-12 (147,5so với 153,6) Kết hợp với phân tích khẳng định có demethyl hóa vị trí C-12 hợp chất 10-O-demethyl12-O- methylarnottianamide Các tương tác HMBC chi tiết liệt kê Bảng Hình Từ liệu kết hợp so sánh với số liệu công bố tài liệu tham khảo [10], hợp chất L2 xác định iwamid 4.Kết luận Bằng phương pháp sắc ký kết hợp với phương pháp phân tích phổ đại, phân lập xác định cấu trúc phân tử hợp chất benzophenanthridinelà decarin (1) vàiwamid (2) Đây công bố thành phần triterpen có dây đau xương trồng Việt Nam hợp chất lần phân lập từ dây đau xương chi Tinospora Tài liệu tham khảo [1] Đỗ Tất Lợi (2004), Cây thuốc vị thuốc Việt Nam, NXB Y học: 492-493 [2] Võ Văn Chi (2003), Từ điển thực vật thông dụng, NXB KH & KT, Hà Nội [3] Patani A, editor (2002), Indian Herbal Pharmacopoeia Revised New ed Mumbai: Indian Drug Manufactures Association [4] Budavari S, editor (2001), The Merck Index 13th ed Whitehouse Station, NJ: Merck and Co Inc [5] Rastogi RP, Mehrotra BN, editors (1993), Compendium of Indian Medicinal Plants Vol PID, New Delhi: CSIR [6] Rastogi RP, Mehrotra BN, editors (1995), Compendium of Indian Medicinal Plants Vol PID, New Delhi: CSIR [7] Rastogi RP, Mehrotra BN, editors (1998), Compendium of Indian Medicinal Plants Vol PID, New Delhi: CSIR [8] G.V.Srinivasan, K.P Unnikrishnan, A.B Rema Shree, and Indira Balachandranm (2008), “HPLC Estimation of berberine in Tinospora cordifolia and Tinospora sinensis”, Indian J Pharm Sci 70(1): 96-99 [9] Martinb, M.T., Rasoanaivo, L H., Raharisololalao, A (2005), “Phenanthridine alkaloids from Zanthoxylummadagascariense”, Fitoterapia, 76, 590 [10] Ngoumfo,R.M.,Jouda,J.-B., Mouafo,F.T., Komguem,J., Mbazoa,C.D., Shiao, T.C., Choudhary,M.I., Laatsch,H., Legault,J., Pichette,A., Roy,R., (2010), “In vitrocytotoxic activity of isolatedacridones alkaloids from Zanthoxylum leprieurii Guill et Perr.”, Bioorg Med Chem.18, 3601-3605 [11] Hisashi Ishii, Tsutomu Ishikawa, Sheng-Teh Lu and Ih-Sheng Chen (1984), “Baeyer–Villigertype oxidation of an immonium group: the structural establishment of naturally occurring amides related to benzo[c] phenanthridine alkaloids”, J Chem Soc., 1, pp 1769-1774 V.Đ Lợi nnk / Tạp chí Khoa học ĐHQGHN: Khoa học Y Dược, Tập 33, Số (2017) 56-61 61 Two Alkaloid Compounds Isolated from Tinospora sinensis (Lour.) Merr) Growing in Vinh Phuc Province, Vietnam Vu Duc Loi1, Nguyen Thi Mai Trang1, TruongThi Van Hoai, Nguyen Thuc Thu Huong1, Nguyen Thanh Nam2 VNU School of Medicine and Pharmacy, 144 Xuan Thuy, Cau Giay, Hanoi, Vietnam Department of Pharmacy, Military Hospital 7A, 466 Nguyen Trai, District, Ho Chi Minh city, Vietnam Abstract: Tinospora sinensis (Lour.) Merr) grown in Vinh Phuc, Viet Nam is one of the most popular and valuable medicinal medicinal plants in the life In the research and development program of medicinal materials, based on the use of chromatography methods, have isolated two compounds from bone pain harvests collected in Vinh Phuc The chemical structure of the two compounds is determined to be decarine (1) and iwamide (2) based on mass spectral and nuclear magnetic resonance data comparing to the spectral data published in the literature refer This is the first publication of the benzophenanthridine of Tinospora sinensis in Vietnam Keywords: Tinospora sinensis, decarine, iwamide  ... hợp với phương pháp phân tích phổ đại, chúng tơi phân lập xác định cấu trúc phân tử hợp chất benzophenanthridinelà decarin (1) vàiwamid (2) Đây công bố thành phần triterpen có dây đau xương trồng. .. trồng Việt Nam hợp chất lần phân lập từ dây đau xương chi Tinospora Tài liệu tham khảo [1] Đỗ Tất Lợi (2004), Cây thuốc vị thuốc Việt Nam, NXB Y học: 492-493 [2] Võ Văn Chi (2003), Từ điển thực... Dược, Tập 33, Số (2017) 56-61 Mẫu Dây đau xương thu hái vào tháng năm 2017 thị trấn Tam Đảo, tỉnh Vĩnh Phúc Mẫu thực vật giám định tên khoa học là: Tinospora sinensis (Lour.) Merr, họ tiết dê Menispermaceae,