Nội dung bài viết với mục tiêu xây dựng được kỹ thuật lưu giữ kỹ sinh trung lâu dài trong bệnh phẩm ướt lên tiêu bản và ứng dụng vào thực tế. Mời các bạn cùng tham khảo bài viết để nắm rõ nội dung chi tiết.
Y Học TP. Hồ Chí Minh * Tập 17 * Phụ bản của Số 4 * 2013 Nghiên cứu Y học NGHIÊN CỨU TẠO TIÊU BẢN SỬ DỤNG LÂU DÀI MỘT SỐ LOẠI TRỨNG GIUN, SÁN, ẤU TRÙNG KÝ SINH TRÙNG ĐƯỜNG RUỘT Nguyễn Hồ Phương Liên*, Trịnh Tuyết Huệ*, Võ Thị Mỹ Dung*, Nguyễn Thị Tường Vân*, Phạm Trương Trúc Giang*, Nguyễn Nhật Minh Thư* TÓM TẮT Đặt vấn đề: Số lượng học sinh, sinh viên ngày tăng, mẫu bệnh phẩm thu thập ngày đi, hao hụt qua trình giảng dạy thực hành ký sinh trùng(KST) ngày nhiều, cần có kỹ thuật bảo quản tiêu lâu dài Mục tiêu: Xây dựng kỹ thuật lưu giữ KST lâu dài bệnh phẩm ướt lên tiêu ứng dụng vào thực tế Phương pháp nghiên cứu: Nghiên cứu ứng dụng kết Kết quả: 700 tiêu loại KST làm với 77% tiêu không khô 88,29% tiêu đẹp sau năm quan sát Có 100 tiêu đưa vào sử dụng để lấy ý kiến phản hồi, 90% đơn vị nhận xét đáp ứng tốt nhu cầu Qui trình thực tiêu tối ưu: phương pháp Ritchie lựa chọn để xử lý mẫu phân, dung dịch bảo quản formaline 10%, thể tích mẫu sử dụng 10‐15 µl, sử dụng keo phủ Baumme Canada với thể tích 80µl, thời gian chờ khô keo tốt 21‐30 ngày nhiệt độ phòng Kết luận: Đã xây dựng kỹ thuật lưu giữ KST lâu dài bệnh phẩm ướt lên tiêu Từ khóa: Tiêu KST đường ruột, KST đường ruột, bệnh phẩm ABSTRACT STUDY TO MAKING INTESTINAL PARASITES LAMELLA WHICH USE LONG TERM Nguyen Ho Phuong Lien, Trinh Tuyet Hue, Vo Thi My Dung, Nguyen Thi Tuong Van, Pham Truong Truc Giang, Nguyen Nhat Minh Thu * Y Hoc TP. Ho Chi Minh * Vol. 17 ‐ Supplement of No 4 ‐ 2013: 256 ‐ 262 Background: The number of student increase day by day, the less lamella is since teaching parasitology Therefore, we need to create a new technic that helps to keep lamella in good condition Purpose: create the new technic that keeps parasites long term from wet medical waste on lamella and apply the result Methods: Applied research Results: 700 lamellas from kinds of parasites with 77% wet lamella 88.29% these lamellas remain good condition after year 100 lamellas were issued for get the feedback 90% of them are meeting the purpose The process: method Richie was used for dispose specimen, maintenance’s solution is 10 – 15 µl of formalin 10% and 80 µl Baume Canada The length of dry lamella change from 21 to 30 days in room temperature Conclusion: we just have created the new technique that keeps parasites long term from wet medical waste on lamella Keywords: intestinal parasites lamella, intestinal parasites, medical waste * Bộ mơn Xét Nghiệm ‐ Đại Học Y Dược Thành phố Hồ Chí Minh. Tác giả liên lạc: CN Nguyễn Hồ Phương Liên ĐT: 0903144575 Email: phuonglien20051977@gmail.com 256 Chuyên Đề Điều Dưỡng Kỹ Thuật Y Học Y Học TP. Hồ Chí Minh * Tập 17 * Phụ bản của Số 4 * 2013 ĐẶT VẤN ĐỀ Nhiễm ký sinh trùng (KST) hiện nay nói chung đang có xu hướng tăng lên phần lớn là do KST từ động vật qua người, nhưng nhiễm ký sinh trùng đường ruột (KSTĐR) lại đang có xu hướng giảm đi trong cộng đồng(2,3,4). Việc chẩn đoán và phát hiện bệnh do KSTĐR thường đi sau các chẩn đốn khác khơng rõ ngun nhân và khơng đáp ứng điều trị, kéo theo đó nguồn bệnh phẩm thu thập được ngày càng ít đi. Trong thực hành KSTĐR, phương pháp giảng dạy lý thuyết sng khơng hiệu quả bằng “nhìn tận mắt, sờ tận tay” vậy nên để hiệu quả, dễ nhớ, ấn tượng và lơi cuốn học sinh, sinh viên cần phải có bệnh phẩm, có tiêu bản mẫu. Tiêu bản phục vụ giảng dạy thực hành KSTĐR chính là các loại trứng giun sán, ấu trùng … được lưu giữ trên lame. Tại bộ môn Xét Nghiệm, tiêu bản soi tươi KSTĐR sau khi học xong phải bỏ đi do chưa áp dụng được kỹ thuật bảo quản tiêu bản lâu dài. Trước tình hình số lượng học sinh, sinh viên ngày càng tăng, mẫu bệnh phẩm thu thập được ngày càng ít đi, hao hụt qua q trình giảng dạy ngày càng nhiều, chúng tơi nhận thấy tiêu bản là vấn đề bức thiết. Đứng trước những lí do đó, chúng tơi tiến hành nghiên cứu phát triển kỹ thuật lưu giữ KST lâu dài trong bệnh phẩm ướt(1) lên tiêu bản với đề tài “ Nghiên cứu tạo tiêu bản sử dụng lâu dài một số loại trứng giun, sán, ấu trùng KSTĐR” với hy vọng HS‐SV được học, được tận mắt nhìn thấy những hình ảnh KST trên mà khơng bị lạc hậu với những kiến thức đang đổi mới hằng ngày. Bên cạnh những tiến bộ về khoa học kỹ thuật cập nhật liên tục trên internet chúng tôi mong muốn thực hiện đề tài này nhằm góp một phần vào công việc dạy và học hiện tại, bổ sung thêm một số lượng tiêu bản mới, thật, rõ, đẹp do chính mình làm ra. Đồng thời lưu trữ được những bệnh phẩm và tiêu bản thuộc loại bệnh hiếm làm tài liệu nghiên cứu khoa học và giảng dạy cũng như trau dồi nghiệp vụ và giúp đỡ được các đồng nghiệp trong công Chuyên Đề Điều Dưỡng Kỹ Thuật Y Học Nghiên cứu Y học tác giảng dạy KST nói riêng. Hy vọng rằng những tiêu bản của chúng tôi là một trong những giáo cụ trực quan thật sự cần thiết trong công việc dạy và học KST ĐR. Mục tiêu nghiên cứu:Xây dựng được kỹ thuật lưu giữ KST lâu dài trong bệnh phẩm ướt lên tiêu bản. ĐỐI TƯỢNG‐PHƯƠNG PHÁP NGHIÊN CỨU Phương pháp nghiên cứu Nghiên cứu ứng dụng. Thời gian thực hiện Từ tháng 5/2009 đến tháng 12/2012 Dân số mục tiêu Mẫu phân, mẫu bệnh phẩm KST đường ruột dương tính từ các bệnh viện trong thành phố và các tỉnh lân cận gởi về bộ mơn Xét nghiệm. Cỡ mẫu 700 tiêu bản chia đều cho 7 loại trứng, ấu trùng giun sán đường ruột. Tiêu chí đưa vào Những mẫu phân dương tính với KSTĐR tại các bệnh viện được gởi về bộ mơn Xét nghiệm trong vòng 24 giờ. Tiêu chí loại Những mẫu phân dương tính có mỡ, nhiều nhầy nhớt. Phương pháp thực hiện Thu thập bệnh phẩm (tìm nguồn bệnh phẩm từ các bệnh viện trong thành phố và các tỉnh lân cận). Xử lý bệnh phẩm (Ritchie, lắng trọng lực, làm rã tự nhiên)(1) Mẫu phân dương tính sau khi được lọc bã thô sẽ được làm phương pháp tập trung Ritchie đối với những mẫu dương tính (+) nhằm mục đích phong phú hóa KST. Đối với những mẫu dương tính (++) trở lên xử lý bằng cách vớt bã thô rồi lắng trọng lực để tách bỏ cặn, cát trong phân. Đối với mẫu đốt sán và con trưởng thành sau khi nhận mẫu về cho vào NaCl 0,85% để 1 257 Nghiên cứu Y học Y Học TP. Hồ Chí Minh * Tập 17 * Phụ bản của Số 4 * 2013 Đặc điểm Con trưởng thành Tăm bơng quệt hậu môn PP xử lý mẫu PP Ritchie Lắng trọng lực Rã tự nhiên Điều kiện để khô Nhiệt độ PTN 40oC DD bảo quản Formaline 10% F2AM Thể tích mẫu 8-10 µl 10-15 µl >15 µl Loại keo phủ ngồi Baumme Canada Entellan Thể tích keo phủ ngồi 70 µl 80 µl 90 µl Thời gian chờ khơ keo 2-6 ngày 7-20 ngày 21-30 ngày tuần chờ rã tự nhiên, sau đó nghiền hổ trợ và loại bỏ bã thơ. Lên tiêu kỹ thuật làm tiêu vĩnh viễn Dùng Micropipette hút 8‐15µl dung dịch mẫu đã xử lý lên tấm lame sạch. Đậy giọt dung dịch bằng lamelle 15x15mm và chờ khơ tự nhiên. Sau đó hút 70‐90µl dung dịch keo Baumme Canada đã pha loãng lên trên lamelle vừa đậy. Tiếp tục dùng lamelle 22x22 đậy nhẹ nhàng lên lamelle nhỏ và để khơ tự nhiên. Kiểm tra và theo dõi độ bền và độ ổn định, các yếu tố hình thái, cấu trúc,…của tiêu bản. Triển khai thực nghiệm tiêu bản mẫu cho một số trường, đơn vị đang làm công tác giảng dạy KSTĐR. Xin ý kiến phản hồi từ các đơn vị thực nghiệm.Tổng kết ý kiến phản hồi và kết luận Xử lý số liệu: Phần mềm Stata 11.0. KẾT QUẢ VÀ BÀN LUẬN Bảng 1: Mô tả đặc điểm Đặc điểm Loại tiêu Trứng giun đũa Trứng giun tóc Trứng giun móc Trứng giun kim Trứng sán dải bò heo Trứng sán gan nhỏ Ấu trùng giun lươn Loại mẫu ban đầu Phân dương tính với KST Đốt sán N(%) 100 (14,29%) 100 (14,29%) 100 (14,29%) 100 (14,29%) 100 (14,29%) 100 (14,29%) 100 (14,29%) 500 (71,43%) 50 (7,14%) N(%) 50 (7,14%) 100 (14,29%) 368 (52,57%) 232 (33,14%) 100 (14,29%) 386 (55,14%) 314 (44,86%) 537 (76,71%) 163 (23,29%) 242 (34,57%) 393 (56,14%) 65 (9,29%) 550 (78,57%) 150 (21,43%) 211 (31,14%) 442 (63,14%) 47 (6,71%) 247 (25,29%) 166 (23,71%) 287 (41,00%) Bảng 1 cho thấy mẫu phân dương tính chiếm 71,43%, phương pháp xử lý mẫu Ritchie chiếm 52,57%, lắng trọng lực chiếm 33,14%. Điều kiện để khơ keo ở nhiệt độ phòng (55,14%) và 40oC (44,86%). Dung dịch bảo quản Formaline 10% chiếm đa số (76,71%). Với 3 mức độ thể tích hút mẫu, 10‐15µl chiếm 56,14%). Trong khi đó thể tích keo phủ ngồi 80µl là 63,14%. Thời gian chờ khô keo từ 21‐30 ngày (41%) so với 2‐6 ngày (25,29%). Bảng 2: Mô tả độ khô tiêu theo thời gian Thời gian Tháng Tháng Năm Không khô N (%) 577 (82,43%) 555 (79,29%) 544 (77,71%) Keo ăn nhẹ vào mép 5-10% N (%) 66 (9,43%) 79 (11,29%) Keo ăn rộng vào mép lame >10% N(%) 57 (8,14%) 66 (9,42%) 83 (11,86%) 73 (10,43%) Bảng 2 cho thấy độ khơ nền tiêu bản sau 1 tháng đạt 82,43%, sau 1 năm tỉ lệ này giảm còn 258 77,71%. Sự chênh lệch này là 4,6% cho thấy rằng các tiêu bản làm ra có độ ổn định tương đối cao. Chun Đề Điều Dưỡng Kỹ Thuật Y Học Y Học TP. Hồ Chí Minh * Tập 17 * Phụ bản của Số 4 * 2013 Nghiên cứu Y học Bảng 3: Mơ tả chất lượng tiêu theo thời gian Thời gian Đẹp N (%) Trứng, ấu trùng vỡ N (%) Tháng Tháng Năm 631 (90,14%) 622 (88,86%) 618 (88,29%) 38 (5,43%) 38 (5,43%) 38 (5,43%) Bảng 3 cho thấy chất lượng của tiêu bản ít bị biến đổi trong 1 năm khảo sát. Trong tháng đầu tỉ lệ tiêu bản đẹp là 90,14% đến 1 năm tỉ lệ này là 88,29%, sự chênh lệch là 1,85%. Sự thay đổi chỉ xảy ra ở dạng teo hoặc dạng phình, và sau khi tiêu bản đã ổn định sau 1 tháng thì khơng xảy ra trường hợp trứng hoặc ấu trùng bị vỡ. Trứng ấu trùng biến dạng teo N (%) 17 (2,43%) 23 (3,29%) 23 (3,43%) Trứng, ấu trùng biến dạng dạng phình N (%) 14 (2,00%) 17 (2,43%) 20 (2,86%) 70%. Ngồi ra ta còn thấy các tiêu bản trứng giun đũa, tóc, trứng Taenia sp, sán lá gan nhỏ và ấu trùng giun lươn có tỉ lệ khơng khơ khơng đổi trong suốt 1 năm. Biểu đồ 2: Mơ tả tiêu đẹp theo thời gian Biểu đồ 1: Mô tả tỉ lệ lame không khô theo loại tiêu Biểu đồ này cho thấy: có 2 loại tiêu bản bị giảm tỉ lệ khơng khơ theo thời gian là giun kim và giun móc. Trong tháng đầu tỉ lệ tiêu bản không khô nhiều nhất là giun kim với hơn 90% và thấp nhất là giun lươn hơn 70%. Sau 1 năm tỉ lệ tiêu bản không khô nhiều nhất là ở tiêu bản giun đũa với hơn 80% và thấp nhất là giun móc Biểu đồ này tương tự cho thấy tỉ lệ lame đẹp cũng chỉ giảm ở tiêu bản trứng giun móc và giun kim. Trong tháng đầu tiên, tỉ lệ đạt tiêu chuẩn đẹp ở tiêu bản trứng giun móc và giun kim là 100% nhưng sau 1 năm chỉ còn vào khoảng hơn 90%.Trong khi đó các tiêu bản các loại khác khơng thay đổi trong suốt thời gian 1 năm Bảng 4: Mối liên hệ đặc điểm lame độ khô Đặc điểm PP xử lý DD bảo quản Thể tích mẫu Loại keo phủ ngồi Để rã tự nhiên Lắng trọng lực PP Ritchie Formaline 10% F2AM 8-10 µl 10-15 µl >15 µl Baumme Canada Entelant Tháng RR (KTC95%) 1,02 (0,94- 1,11) 1,15 (1,05- 1,25)** 0,86 (0,78- 0,95)* 1,07 (0,99- 1,15) 0,49 (0,36- 0,67)*** 0,74 (0,07- 0,32) Chuyên Đề Điều Dưỡng Kỹ Thuật Y Học Tháng RR (KTC 95%) 1,00 (0,92- 1,09) 1,16 (1,07- 1,26)** 0,88 (0,79- 0,98)* 1,05 (0,97- 1,13) 0,43 (0,31- 0,61)*** 0,76 (0,67- 0,86)*** Năm RR (KTC 95%) 0,99 (0,91- 1,09) 1,19 (1,09- 1,30)*** 0,90 (0,01- 1,00) 1,02 (0,94- 1,10) 0,40 (0,28- 0,57)*** 0,78 (0,68- 0,88)*** 259 Y Học TP. Hồ Chí Minh * Tập 17 * Phụ bản của Số 4 * 2013 Nghiên cứu Y học Đặc điểm Thể tích keo phủ ngồi Thời gian chờ khô keo Điều kiện để khô 70 µl 80 µl 90 µl 2-6 ngày 7-20 ngày 21-30 ngày Nhiệt độ PTN 40oC Tháng RR (KTC95%) 1,09 (1,02- 1,15)* 0,15 (0,72- 0,32)*** 0,92 (0,83- 1,01) 1,27 (1,19- 1,25)*** 0,89 (0,83- 0,96)* Tháng RR (KTC 95%) 1,12 (1,05- 1,19)** 0,16 (0,07- 0,33)*** 0,87 (0,78- 0,96) 1,27 (1,19- 1,35)*** 0,92 (0,85- 0,99)* Năm RR (KTC 95%) 1,15 (1,09- 1,23)*** 0,16 (0,07- 0,33)*** 0,81 (0,72- 0,91) 1,27 (1,19- 1,35)*** 0,96 (0,88- 1,04) p: *: