Nghiên cứu tác dụng kháng khuẩn, kháng viêm của dịch chiết Ngũ sắc và Đại bi trên chuột nhắt trắng; và còn nghiên cứu thực nghiệm bệnh - chứng, lựa chọn ngẫu nhiên, thực hiện tại phòng thí nghiệm Khoa Y Học Cổ Truyền, Đại học Y Dược Tp. HCM từ tháng 03/2008-09/2009.
NGHIÊN CỨU TÁC DỤNG KHÁNG KHUẨN, KHÁNG VIÊM CỦA DỊCH CHIẾTCỎ NGŨ SẮC (AGERATUMCONYZOIDES) VÀ ĐẠI BI (BLUMEA BALSAMIFERA)TRÊN MÔ HÌNH VIÊM MŨI XOANG THỰC NGHIỆM Nguyễn Thái Linh∗, Nguyễn Phương Dung** TĨM TẮT Tình hình mục đích nghiên cứu: Nghiên cứu tác dụng kháng khuẩn, kháng viêm dịch chiết Ngũ sắc Đại bi chuột nhắt trắng Thiết kế nghiên cứu: Nghiên cứu thực nghiệm bệnh - chứng, lựa chọn ngẫu nhiên, thực phòng thí nghiệm Khoa Y Học Cổ Truyền, Đại học Y Dược Tp HCM từ tháng 03/2008 – 09/2009 Đối tượng nghiên cứu: 150 chuột chủng Mus musculus var albino, trọng lượng từ 16-22g mua Viện Pasteur Tp Hồ Chí Minh Phương tiện ñánh giá: Mức ñộ mọc vi khuẩn, mơ học, kích thước u hạt Sử dụng phép kiểm t – Student ñể thống kê số liệu thực nghiêm Kết quả: Dịch chiết Etanol Cỏ Ngũ sắc Đại bi làm giảm mức độ nhiễm khuẩn, tình trạng viêm mơ học với liều 40g/kg có tác dụng làm giảm u hạt LD50 ñường uống dịch chiết Ethanol 1,056mg/kg thể trọng Khi sử dụng liên tục 60 ngày (uống liều 40g/kg 80g/kg) không làm thay đổi số số sinh hóa, huyết học, cấu trúc vi thể gan thận cuả chuột nhắt dùng thử nghiệm Kết luận: Cỏ Ngũ sắc Đại bi có tác dụng kháng khuẩn, kháng viêm mơ hình viêm mũi xoang chuột gây Streptococcus pneumoniae mơ hình gây u hạt thực nghiệm Từ khóa: Cỏ ngũ sắc, Đại bi, viêm mũi xoang ABSTRACST ANTIBACTERIAL ACTIVITY AND ANTI-INFLAMMATORY EFFECTs OF (Ageratum conyzoides ) AND(Blumea balsamifera) ON RHINOSINUSITIS IN A MURINE MODEL Nguyen Thai Linh, Nguyen Phuong Dung Background and Aims:Based on the Vietnamese popular experience as well as the researchs of Ageratum conyzoides and Blumea balsamifera on the experimental antibacterial and anti-inflamatory effects, respectively The present study was designed to evaluate the antibacterial and anti-inflamatory effects of the combination of these medicinal herbsin a Murine model Materials and method: An experimental study was carried out on swiss albino mice were given Blumea balsamifera extract (2:1)/ethanol 90% ethanol 70% The percentage of granuloma inhibition, infection levels of S pneumoniae, the level of inflammatory sinus nasal mucosa of mice caused by S pneumonia are outcome measurements Result: The ethanolic extracts of Ageratum conyzoides and Blumea balsamifera leaves reduced in bacterial growth was similar to the controls, reduced histopathology score and the results showed that the group of rats treaded with extracts of A and B leaves(40g/kg) had a 21.04% (p< 0.05) reduction cotton-pellet granuloma.The extracts did not change hematological, biochemical index, microstructure of livers and kidneys of rats using daily oral doses of (40g/kg or 80g/kg body wt) during 60 days Conclusion:The extracts of Ageratum conyzoides and Blumea balsamifera (40g/kg) have antibacterial and anti-inflammatory effects on experimental models Key words: Ageratum conyzoide, Blumea balsamifera, rhinosinusitis ĐẶT VẤN ĐỀ Ở Việt Nam, có cơng trình nghiên cứu ñã chứng minh hiệu chế phẩm chiết xuất từ cỏ Ngũ sắc bệnh lý viêm mũi xoang mạn, viêm mũi xoang dị ứng 6, 7, Một số nghiên cứu cho thấy Đại bi có tác 1, dụng kháng khuẩn, hoạt chất chống viêm Hầu hết nghiên cứu ñều thực dược liệu Trong đó, nhân dân miền Đơng Nam Bình Dương, Đồng Nai, quận ngọai thành Hóc Mơn, Thủ Đức, Củ Chi lại có kinh nghiệm sử dụng kết hợp dược liệu nói điều trị viêm mũi xoang ∗ ,** Khoa Y học Cổ truyền- Đại học Y Dược Tp HCM Đòa liên hệ: BS Nguyễn Thái Linh ÑT: 0909979717 Email: bsthailinh@gmail.com 106 Để có sở khoa học chứng minh hiệu phương pháp ñiều trị viêm mũi xoang từ kinh nghiệm dân gian, chúng tơi thực đề tài nhằm nghiên cứu chế phẩm từ cỏ Ngũ sắc Đại bi ñể ứng dụng ñiều trị bệnh viêm mũi xoang VẬT LIỆU VÀ PHƯƠNG PHÁP NGHIÊN CỨU Nguyên liệu Lá cỏ Ngũ sắc, Đại bi ñược thu hái Quận Thủ Đức, sấy nhiệt độ 45 – 500C đến khơ Mỗi dược liệu ñược chiết xuất riêng phương pháp ngấm kiệt với ethanol 96% 70% (tỷ lệ 15:1, dung môi:dược liệu) Lấy dịch chiết cồn bốc cồn nhiệt độ 50oC, thu dịch chiết 50oC có dịch chiết 2:1 (2 g dược liệu: ml dịch chiết), phối hợp lại Động vật thí nghiệm Chuột nhắt trắng ñực, Mus musculus var albino, trọng lượng từ 16 – 22g mua Viện Pasteur TP Hồ Chí Minh, ni điều kiện ổn định, chuột uống 0,2ml/10g thể trọng Độc tính cấp Trước tiến hành thí nghiệm 14 giờ, khơng cho chuột ăn, uống cho uống nước tự Chia ngẫu nhiên chuột nhắt làm lô, lô – 10 chuột Dùng kim ñầu tù ñể cho chuột uống liều thuốc thử nghiệm khác nhau: -Lô 1: chuột uống 500 g dược liệu tươi /kg thể trọng -Lô 2: chuột uống 700 g dược liệu tươi /kg thể trọng -Lô 3: chuột uống 1,000 g dược liệu tươi/kg thể trọng -Lô 4: chuột uống 1,100 g dược liệu tươi/kg thể trọng -Lô 5: chuột uống 1,500 g dược liệu tươi/kg thể trọng Theo dõi tỷ lệ chuột chết 48 sau uống thuốc Tính LD50 theo cơng thức Behrens- Karber Độc tính bán trường diễn Chia ngẫu nhiên chuột nhắt trắng thành lơ, lơ 10 con: -Lơ bình thường (BT): uống nước cất, thể tích 0,2 ml/10 g thể trọng -Lô nghiên cứu (NC1): uống thuốc nghiên cứu 80g dược liệu tươi/kg thể trọng -Lô nghiên cứu (NC2): uống thuốc nghiên cứu 40g dược liệu tươi/kg thể trọng Thời gian dùng thuốc liên tục 60 ngày Các tiêu theo dõi: -Thể trọng (g) - Huyết học: số lượng hồng cầu (triệu/mm3), số lượng bạch cầu (ngàn/mm3), hemoglobin (g/L), hematocrit (%) - Sinh hóa máu: SGOT (U/L), SGPT (U/L), ure (mg/dL), creatinin (mg/dL), glucose (mg/dL) - Vi thể: gan, thận Tác dụng kháng viêm mũi xoang (theo Kelly Bomer) 3, 10 Gây viêm mũi xoang chuột nhắt trắng S pneumoniae theo mơ hình Kelly Bomer Chuột nhắt trắng ñực, trọng lượng từ 16 – 18 g, chia làm nhóm, rữa mũi NaCl 0,9% trải dịch rữa mũi môi trường thạch máu Ủ 370C 48 quan sát hệ vi khuẩn mọc ñược Một ngày sau, nhỏ mũi chuột với 10µl dịch vi khuẩn S pneumoniae Sau đó, hàng ngày chuột nhóm cho uống nước cất, chuột nhóm cho uống Ampicillin phối hợp với prednisone, chuột nhóm uống thuốc nghiên cứu (40g/kg), chuột nhóm ñược nhỏ mũi (1,177mg/kg), dùng liên tục ngày Ngày thứ chuột ñược gây mê thiopental với liều truỵ hơ hấp ( 120mg/kg), sau sát trùng phần ngồi khoang miệng đầu, rữa mũi NaCl 0,9% Dịch rửa mũi ñược nhỏ giọt trực tiếp ñĩa thạch BA chứa gentamycin, cấy vạch chiều ủ 370 C 24 Lượng S.pneumoniae ñược ñánh giá cấp ñộ: cấp ñộ = khơng mọc; cấp độ = mọc chiều (khóm ít); cấp độ = mọc chiều (khóm vừa); cấp độ = mọc chiều (khóm nhiều) Nhanh chóng cắt lấy phần đầu chuột tim đập ngâm dung dịch cố ñịnh mẫu formol 10% ngày Lọc bỏ da cơ, mắt, hàm lưỡi, phần lại cho vào HNO3 5%, ngâm qua đêm Dùng dao lam cắt phần trước mũi não thành phần cho phần xoang mũi từ trước tới sau dài khoảng 8mm, mẫu ñược gửi khoa Giải phẫu bệnh –ĐH Y Dược TP Hồ Chí Minh 107 Tác dụng ức chế tạo u hạt thực nghiệm amian (theo Ducrot, Julou – 1963) [1] Cắt amian thành ñoạn ngắn, trọng lượng 20 ± mg, vê tròn, sấy khơ Cạo lơng vùng lưng chuột, dùng đầu kéo bấm lỗ nhỏ ñể tách da lưng khỏi lớp cơ, cấy amian Khâu ñể nối liền vết mổ Chia ngẫu nhiên chuột thành lô, lô 10 chuột: - Lô chứng (C): chuột uống nước cất 0,2 ml/10 g thể trọng - Lô ñối chứng (As): chuột uống aspirin liều 240 mg/kg thể trọng - Lô nghiên cứu (NC): chuột uống dịch chiết 40g dược liệu tươi/kg thể trọng Cho chuột dùng thuốc liên tiếp ngày Chiều ngày thứ 5, bóc tách u hạt cân tươi u hạt Sau đó, sấy khơ u hạt 1600C đến trọng lượng khơng đổi Cân u hạt sấy khô Trọng lượng thực u hạt (tươi, khô) cách trừ ñi trọng lượng viên amian (20 mg) Tác dụng ức chế u hạt ñược biểu thị tỷ lệ % giảm trọng lượng trung bình u hạt lô dùng thuốc so với lô chứng KẾT QUẢ VÀ BÀN LUẬN Độc tính cấp Tính theo cơng thức Behrens – Karber, có liều gây chết 50% súc vật thử nghiệm là: LD50 = 1,056 g dược liệu tươi /kg Chúng tơi tham khảo số tài liệu LD50 cỏ Ngũ sắc sau: cao chiết nước có LD50 = 82 g/kg 7; cao chiết cồn 96% có LD50 = 10,1 g/kg Đối chiếu với LD50 theo cơng bố trước đây, thấy phối hợp làm gia tăng liều gây chết 50% súc vật thử nghiệm khoảng 52 lần dịch chiết cồn 96% Như vậy, phối hợp dược liệu cỏ Ngũ sắc Đại bi có khả làm giảm độc tính cấp so với dùng ñộc vị cỏ Ngũ sắc Đây sở góp phần chứng tỏ hiệu an tồn phối hợp nhiều vị thuốc y học cổ truyền Độc tính bán trường diễn Sau tháng uống liều 80 40 g dược liệu tươi/kg cho thấy dịch chiết phối hợp cỏ Ngũ sắc Đại bi khơng làm thay đổi số lượng hồng cầu, bạch cầu, Hb, Hct, SGPT, SGOT, ure, creatinin, glucose huyết cấu trúc vi thể gan, thận so với lơ bình thường Riêng lô chuột uống liều 80g/kg, trọng lượng chuột giảm 32,47% (P