Bài viết phân tích đánh giá tỷ lệ sống của tinh trùng sau rã đông chọc hút từ mào tinh và đánh giá hiệu quả của phương pháp tiêm tinh trùng đông lạnh thu nhận từ mào tinh vào bào tương noãn.
2015 TẠP CHÍ NGHIÊN CỨU Y HỌC KẾT QUẢ BƯỚC ðẦU PHƯƠNG PHÁP TIÊM TINH TRÙNG TRỮ LẠNH TỪ MÀO TINH VÀO BÀO TƯƠNG NỖN TRONG ðIỀU TRỊ VƠ SINH NAM Vũ Thị Bích Loan1, Nguyễn Viết Tiến2, Vũ Văn Tâm 1 Bệnh viện Phụ sản Hải Phòng; 2Trường ðại học Y Hà Nội Nghiên cứu ñược thực nhằm ñánh giá tỷ lệ sống tinh trùng sau rã đơng chọc hút từ mào tinh hiệu phương pháp tiêm tinh trùng đơng lạnh thu nhận từ mào tinh vào b tương noãn Nghiên cứu tiến cứu can thiệp ñược thực 89 cặp vợ chồng vơ sinh trữ - rã đơng tinh trùng chọc hút từ mào tinh 79 trường hợp có đủ tinh trùng sống thực ICSI chiếm 88,8%, 10 trường hợp tinh trùng chết 100% chiếm 11,2%, 72 trư ờng hợp chuyển phơi có 43 trường h ợp có thai lâm sàng đạt 59,7%, trường hợp đơng phơi tồn b ộ q kích b uồng trứng, tỷ lệ làm tổ đạt 19 ,2% Như vậy, b ước ñầu áp dụng kỹ thuật tiêm tinh trùng đơng lạnh từ mào tinh vào bào tương nỗn có hiệu khơng có khác b iệt so với sử dụng tinh trùng tươi chọc hút từ mào tinh cho b ệnh nhân vô sinh b ế tắc Từ khóa: tinh trùng đơng lạnh từ mào tinh, tiêm tinh trùng vào bào tương noãn I ðẶT VẤN ðỀ Vơ tinh tình trạng khơng có tinh trùng tinh dịch xuất tinh ðây ñược xem giới từ năm 1985 Temple - Smith [3] dạng bất thường nặng t rong bất ống nghiệm (IVF) thành cơng với tinh thường nam giới Nghiên cứu cho thấy có trùng thu nhận từ mào tinh Tuy nhiên, khoảng 1% dân số khoảng 10 - 20% bệnh nhân vơ sinh nam chẩn đốn vơ tinh phương pháp cho tỷ lệ thành công thấp chất lượng tinh trùng hút từ mào tinh Nguy ên nhân tắc nghẽn đường di nên thường xảy thất bại thụ tinh [4; 5] Với chuyển tinh trùng (vô tinh bế tắc) sự ñời kỹ thuật tiêm tinh trùng vào bào giảm sinh tinh (vô tinh không bế tắc) [1; 2] tương noãn (ICSI), tỷ lệ thụ tinh tỷ lệ t hai Các nguyên nhân vô tinh bế tắc thường lâm sàng sử dụng tinh trùng từ mào tinh bao gồm: tiền sử thắt ống dẫn tinh, bất sản ñã ñược cải thiện ñáng kể cộng báo cáo trường hợ p thụ tinh ống dẫn tinh, viêm mào tinh hoàn hay số Với thành công này, số trung tâm nguyên nhân gặp khác hội ng ñã sử dụng tinh trùng từ mào tinh trữ lạnh - rã Young, tổn thương tinh hồn đơng Việc làm giúp giảm số lần thực Việc thụ tinh ống nghiệm sử dụng tinh trùng từ phẫu t huật ñã ñược biết ñến phẫu thuật cho nam giới biến chứng phẫu thuật: tổn thương mào tinh, gây mê, áp lực tâm lý cho bệnh nhân chi phí ðịa liên hệ: Vũ Thị Bích Loan, Bệnh viện Phụ sản Hải Phòng Email: vtbloan@yahoo.com Ngày nhận: 03/12/2014 Ngày ñược chấp thuận: 18/5/2015 TCNCYH 93 (1) - 2015 Tại Việt Nam, lĩnh vực hỗ trợ sinh sản non trẻ, nghiên cứu tiêm tinh trùng đơng lạnh lấy từ mào tinh vào bào tương nỗn mới, s ố liệu ðề t ài tiến TẠP CHÍ NGHIÊN CỨU Y HỌC hành với mục tiêu: ðánh giá tỷ lệ sống tinh trùng sau rã đơng chọc hút từ mào tinh ðánh giá hiệu phương pháp phòng 10 phút Quy trình đơng lạnh thực theo phươ ng pháp đơng lạnh thủ cơng Rã đơng tinh trùng: để mẫu tan tự nhiên nhiệt độ phòng 10 - 15 phút Sau mẫu tiêm tinh trùng đơng lạnh thu nhận từ mào tinh vào bào tương noãn rã đơng hồn tồn rửa lại với mơi II ðỐI TƯỢNG VÀ PHƯƠNG PHÁP ni cấy - trước sử dụng trường IVF Mẫu tinh trùng sau chuẩn bị Kích thích buồng trứ ng ñược thực ðối tượng với phác ñồ GnRH ñối vận hay ñồng vận, liều ðối tượng nghiên cứu gồm bệnh ñầu FSH ñược xác ñịnh dự a t uổi c nhân thụ tinh ống nghiệm bệnh viện bệnh nhân, AMH, AFC…khi có nang Phụ sản Trung ương thực với ≥ 17mm, hCG ñược sử dụng ñể gây trưởng phương pháp chọc mào tinh có tinh trùng thành nang nỗn Chọc hút nang tiến đơng lạnh hành 36h sau tiêm hCG Phương pháp: nghiên cứu tiến cứu c an thiệp Tiêu chu(n ch*n m,u Các cặp vợ chồng vơ sinh chồng khơng có tinh trùng tắc nghẽn, chọc hút tinh Tiêm tinh trùng vào bào tương noãn: noãn sau chọc hút ñược tách bỏ lớp tế bào hạt xung quanh trước ñược tiêm tinh trùng vào bào tương Sau ICSI, nỗn ni cấy mơi trường ni cấy trùng từ mào tinh, có > tinh trùng sống Chuy ển phơi: phơi chuyển sau vi t rường vật k ính 10 k ính hiển vi đảo ngược tư vấn trữ lạnh ngày chọc hút nỗn Các phơi tốt lại điều trị phương pháp PESA/ICS I sử dụng tinh trùng đơng lạnh từ mào tinh Chúng tơi thu 89 cặp vợ chồng trữ rã tinh trùng từ mào tinh, có 79 c ặp thực kỹ thuật ICSI ñược ñông lạnh ñể chuyển lần sau ðạo ñức nghiên cứu Các ñối tượng t ham gia nghiên cứu ñều tự nguyện, ñồng ý tham gia nghiên cứu Danh sách thơng tin bệnh nhân bảo mật Ph./ng pháp ðược Giám ñốc trung tâm Hỗ trợ sinh sản cho phép thực hiện, nghiên cứu theo ñề cương ñã Sau mẫu ñược lấy từ mào tinh ñược phê duyệt ñánh giá chất lượng trước ñông Mẫu có tinh t rùng sống khơng lẫn tế bào khác tạp khuẩn cân mẫu với mơi trường trữ lạnh đơng tinh III KẾT QUẢ ðặc điểm cặp vợ chồng vơ sinh Mẫu có tinh trùng sống lẫn tế bào Trong nghiên cứu này, thực khác tạp khuẩn t hì lọc rửa t rước sau 79 trường hợp tiêm tinh trùng đơng lạnh từ cân mẫu đơng tinh mào tinh vào bào tương noãn Tuổi vợ trung Trữ lạnh tinh trùng từ mào tinh: bổ sung bình 27,72 ± 4,58 tuổi chồng trung bình chất bảo quản đơng lạnh (S perm Freeze), cho 31, 59 ± 6,92, thời gian vơ sinh trung bình vào ống trữ lạnh (cryovial) ñể nhiệt ñộ 4,23 ± 3,61 (bảng 1) TCNCYH 93 (1) - 2015 2015 TẠP CHÍ NGHIÊN CỨU Y HỌC Bảng ðặc ñiểm cặp vợ chồng vơ sinh X ± SD ðặc điểm Min Max Tuổi vợ 27,72 ± 4,58 20 42 Tuổi chồng 31,59 ± 6,92 21 70 4,23 ± 3,61 18 Thời gian vơ sinh ðặc điểm nội tiết cặp vợ chồng vơ sinh Bảng ðặc điểm nội tiết cặp vợ chồng vô sinh X ± SD Chỉ số Nồng ñộ hormon vợ Nồng ñộ hormon chồng FSH ± 1,78 LH 5,31 ± 3,37 E2 33,89 ± 1,35 Prolactin 421,1 ± 22 FSH 4,6 ± 2,8 LH 3,85 ± 2,24 Testosteron 18,26 ± 5,53 Nồng ñộ hormon cặp vợ chồng ngưỡng giới hạn bình thường ðặc điểm chu kỳ kích thích buồng trứng Bảng ðặc điểm chu kỳ kích thích buồng trứng Chỉ số X ± SD Min Max 1793,4 ± 694,2 750 3600 Số ngày dùng FS H 9,67 ± 0,91 12 Tổng số noãn 11,34 ± 5,46 29 Tỷ lệ thụ tinh 83,59% ± 16,3% 25% Tỷ lệ phôi tốt 61,19% ± 33,6% 16 Niêm mạc tử cung 11,56 ± 4,2 16 Số phôi chuy ển 2,91 ± 0,86 Số phơi đơng lạnh 3,58 ± 3,96 16 Tổng liều FSH Tỷ lệ làm tổ TCNCYH 93 (1) - 2015 100% 19,2% TẠP CHÍ NGHIÊN CỨU Y HỌC Tỷ lệ sống sau rã đơng 11,2% chết 100% sống 88,8% Biểu ñồ Tỷ lệ sống sau rã đơng Trong nghiên cứu chúng t có 89 trường hợp rã đơng tinh trùng chọc hút từ mào tinh, có 10 trường hợp tinh trùng chết 100% chiếm tỷ lệ 11,2%, 79 trường hợp có ñủ tinh trùng sống ñể thực ICSI chiếm 88,8% Tỷ lệ có thai lâm sàng Biểu đồ Tỷ lệ có thai lâm sàng Tổng cộng có 79 trường hợp thực ICSI với tinh t rùng trữ lạnh từ mào tinh, có 43 trường hợp có thai lâm sàng chiếm tỷ lệ 59,7%, 29 trường hợp thai chiếm tỷ lệ 40,3%, trường hợp đơng phơi tồn q kích buồng trứng TCNCYH 93 (1) - 2015 2015 TẠP CHÍ NGHIÊN CỨU Y HỌC IV BÀN LUẬN Sự ñời phương pháp ICS I đem đến hội điều trị vơ sinh cho bệnh nhân vơ sinh khơng có tinh trùng bế tắc ðối với trường hợp này, PESA phương pháp ñiều trị ñược chọn lựa nhiều ñơn giản, dễ thực nhanh chóng Việc sử dụng tinh trùng thu nhận từ mào tinh đơng lạnh - rã đơng lựa chọn nhờ vào ưu ñiểm như: giảm tổn thương, giảm chi phí áp lực tâm lý cho bệnh nhân, chủ ñộng ñiều trị Trong nghiên cứu này, tuổi trung bình người vợ 27,72 ± 4,59, người tuổi 20 tuổi, cao t uổi 42 tuổi Ở ñộ tuổi dự trữ buồng trứng tốt, thuận lợi kiểm tra tế bào IVF Tuổi trung bình c chồng 31,59 ± 6,92 tương tự ñộ tuổi c cặp vợ chồng ñược ñiều trị phương pháp PESA/ ICS I tinh t rùng tươi t rong nghiên cứu Hồ Sỹ Hùng (2014) 28, 44 ± 32,37 ± 5,6 [ 6] Thấp so với ñộ tuổi bệnh nhân t rong nghiên cứu c Mai Quang Trung (2010) [7] 33,1 ± 4, 95 36,8 ± 4, 85, khác biệt bệnh nhân nghiên u c húng tơi khám, chẩn đốn điều trị sớm hơ n Trên lâm sàng c hỉ số ñể ñánh giá dự t rữ buồng trứ ng bao gồm FS H, LH, E2, nghiên cứu ± 1, 78, Chúng tiến hành rã đơng 89 trường hợp chọc hút từ mào tinh, 10 trường hợp tinh trùng chết 100% chiếm tỷ lệ 11,2%, 79 trường hợp ñủ tinh t rùng sống chiếm tỷ lệ 88,8% ñể thực kỹ thuật ICS I Thấp so với nghiên cứu c Friedlet (2002) [ 8] tỷ lệ tinh trùng sống sau k hi rã đơng 98, 8% cao so với nghiên cứu Hồ Sỹ Hùng (2014) 73,1% Bước đầu kết chúng tơi cho thấy mẫu tinh trùng chọc hút từ mào t inh c ó t hể trữ lạnh tỷ lệ s ống cao sau rã đơng đủ để t hực ICS I Hiệu c kỹ thuật ICS I thể tỷ lệ thụ tinh, tỷ lệ tạo phôi, số phôi tốt, tỷ lệ thai lâm sàng tỷ lệ làm tổ Trong nghiên cứu chúng tơi có 79 trường hợp ñủ tinh trùng thực ICS I, tỷ lệ thụ tinh ñạt 83,59% tương tự nghiên cứu Jin (2006) [9], cao hơ n so với nghiên cứu Hồ Sỹ Hùng (2014) 72,47% Vũ Nhật Khang (2014) 71,8% [10] Tỷ lệ có thai lâm sàng nghiên cứu ñạt 59,7%, tỷ lệ làm tổ 19,2%, tỷ lệ tương tự nghiên cứu Van Steirt eghem (1998) [11] Kovac (2013) 54,7% 18,7%, 54,5% [12] Các số liệu cho ñến y văn ñều cho t hấy khơng có khác biệt hiệu ñiều trị sử dụng tinh trùng tươi hay tinh t rùng sau rã đơng cho trường hợp tinh trùng có nguồn gốc từ mào tinh Tỉ lệ thai lâm sàng từ báo cáo c 5,31 ± 3,37, 33,89 ± 1,35, giới hạn chúng tơi tương đươ ng cao đa số bình thườ ng ng tỏ ñáp ứng buồng t rứng báo cáo y văn giới ðiều cho tốt Xét nghiệm nội tiết người chồng thấy hiệu qui trình đơng lạnh tinh quan trọng ñể tiên ñoán k ết chọc hút trùng từ mào tinh chúng tơi xây dựng tinh trùng từ mào tinh, số FSH, LH, ñiều kiện Việt Nam tương đươ ng Testosteron 4,6 ± 2, 8, 3,85 ± 2, 24, với qui trình giới 18,26 ± 5,53 Kết tương tự nhóm Hiện nay, số sở y tế thực thủ chọc hút ñược tinh t rùng từ mào tinh thuật PESA chẩn đốn khơng có điều kiện nghiên u c Hồ Sỹ Hùng (2014) 4,76 ± không áp dụng đơng lạnh để lư u trữ tinh 2,7, 4, 69 ± 2,7, 19,59 ± 6,2 [6] trùng thời ñiểm sau lấy mẫu lãng TCNCYH 93 (1) - 2015 TẠP CHÍ NGHIÊN CỨU Y HỌC phí tạo nguy khơng đáng có cho Temple – Smith PD, S outhwick GJ, bệnh nhân phải làm thủ thuật lại lần ñiều Yate s CA et al (1985) Human pregnancy by trị sau Ngồi ra, thực lại PESA để IVF using sperm aspirated from the epididymis ñiều trị, bệnh nhân mơ hơ n số In vitro Fertil Embryo trasfer; 2, 119 - 122 lượng tinh trùng giảm ñi ảnh hưởng c lần sinh thiết trước Do đó, cần xem xét hạn (1991) chế việc chẩn đốn sinh tinh giải phẫu conjunction bệnh lý, khơng có nhu cầu thật Trữ embryo transfer in cases with obstructive lạnh mơ tinh hồn giúp tiết kiệm chi phí, tiết azoospermia Hum Reprod; 6, 1284 - 1287 kiệm nguồn mơ q bệnh nhân, giảm nguy cho bệnh nhân phải thực thủ thuật Silber SJ, Nagy ZP, Liu J et al (1994) Conventional in vitro fertilization versus nhiều lần intracytoplasmic sperm injection for patients V KẾT LUẬN Bladou F, Grillo JM, Rossi D et al Epididymal sperm with in aspiration in vitro fertilization and requiring microsurgical sperm aspiration Hum Reprod; 9, 1701 - 1709 Qua nghiên cứu 89 trường hợp rã đơng S.Friedler, A.Raziel, D.Strassburger et tinh trùng ñược chọc hút từ mào tinh 79 al (2002) Factors influencing the outcome of cặp vợ chồng ñược thực ICS I với tinh ICS I trùng rã đơng, số kết luận sau ñược rút ra: non - obstructive azoospermia: a comparative - Tỷ lệ tinh trùng sống sau rã đơng đạt 88,8% in patients with obstructive and study Human Reproduction, 17(12), 3114 - 3121 Jin L, Jiang LY, Zhu GJ et al (2006) Comparison between the results of ICSI with - Tỷ lệ có thai lâm s àng 59,7%, tỷ lệ làm tổ 19,2% fresh and with frozen-thawed sperm obtained by PESA to treat azoospermia Zhonghua Nan Lời cám ơn Ke Xua; 12(5), 443 - 445, 449 Chúng xin chân thành cảm ơn ñồng Vũ Nhật Khang, Lê Văn Khánh, Hồ Mạnh Tường (2014) Kết tiêm tinh trùng ý tham gia nghiên cứu bệnh nhân, vào bào tương noãn với tinh t rùng từ mào tinh giúp đỡ nhiệt tình cán bộ, nhân trữ lạnh Hội nghị vô sinh nam nam học lần viên trung tâm hỗ trợ sinh sản bệnh viện P hụ sản Trung ương TÀI LIỆU THAM KHẢO Trần Thị Phương Mai, Nguyễn Thị Ngọc Phượng (2002) Hiếm muộn – vô sinh kỹ thuật hỗ trợ sinh sản Nhà xuất Y học, 258 - 269 III; 89 - 95 Van Sterteghem AC, Liu J, Jori s H et al (1998) Higher success rate by intracytoplasmic sperm injection than by subzonal insemination Report of a second series of 300 consecutive treatment cycles Hum Reprod; 8, 1055 - 1060 10 Kovac JR, Lehmann K, Fi scher MA (2013) A singer-cent er srudy examining t he Jarow JR, Espeland MA, Lipshultz LI outcomes of percutaneous epididymal sperm (1989) E valuation of the azoospermic patient aspiration in the treatment of obstructive J Urol, 142, 62 - 65 azoospermia Urol Ann; 6(1), 41 - 45 TCNCYH 93 (1) - 2015 2015 TẠP CHÍ NGHIÊN CỨU Y HỌC Summary INITIAL RESULTS OF THE METHOD OF INJECTING FROZENTHAW ED EPIDIDYMIS SPERM INTO INTRA - CYTOPLASMIN FOR TREATMENT OF MALE INFERTITY The purpose of this study was t o assess the rate of survival of frozen epididymis sperms after being thawed and to evaluate the effectiveness of the method of injecting frozen - t hawed epididymis sperm into intra - cytoplasmin Clinical int erventional trial: of 89 couples whose epididymis sperm was frozen - thawed, 79 cases had enough survival sperm for ICS I representing approximately 88.8%; there are 10 cases of 100% sperm dead representing approximately 11.2%; in 72 cases whose embryos were transferred, there were 43 clinical pregnancy cases representing approximately 59.7%, cases whose embry os were totally frozen becaus e of ovarian hyper - stimulation syndrome The preliminary results on applying tec hnique of injecting frozen - thawed epididymis sperm into intra - cytoplasm have shown that this method was effective and there were no difference comparing to the method of using fresh epididymis sperm Keyword: frozen-thawed epididymis sperm, obstructive azoospermia TCNCYH 93 (1) - 2015 ... tiêm tinh trùng ý tham gia nghiên cứu bệnh nhân, vào bào tương noãn với tinh t rùng từ mào tinh giúp ñỡ nhiệt tình cán bộ, nhân trữ lạnh Hội nghị vô sinh nam nam học lần viên trung tâm hỗ trợ sinh. .. trữ lạnh đơng tinh III KẾT QUẢ ðặc điểm cặp vợ chồng vơ sinh Mẫu có tinh trùng sống lẫn tế bào Trong nghiên cứu này, thực khác tạp khuẩn t hì lọc rửa t rước sau 79 trường hợp tiêm tinh trùng đơng... sống sau rã đơng Trong nghiên cứu chúng t có 89 trường hợp rã đơng tinh trùng chọc hút từ mào tinh, có 10 trường hợp tinh trùng chết 100% chiếm tỷ lệ 11,2%, 79 trường hợp có đủ tinh trùng sống