Mục tiêu của luận án là xác định đặc điểm ngoại hình và đánh giá đa dạng di truyền giữa các nhóm gà Nòi tại ĐBSCL. Xác định sự ảnh hưởng của một số gen ứng viên liên quan đến năng suất sinh sản ở gà Nòi. Chọn tạo để cải thiện năng suất sinh sản gà Nòi.
BỘ GIÁO DỤC VÀ ĐÀO TẠO TRƯỜNG ĐẠI HỌC CẦN THƠ TÓM TẮT LUẬN ÁN TIẾN SĨ Chuyên ngành: Chăn nuôi Mã ngành: 62.62.01.05 CHÂU THANH VŨ ĐẶC ĐIỂM NGOẠI HÌNH, ĐA HÌNH GEN VÀ ỨNG DỤNG CHỈ THỊ PHÂN TỬ TRONG CHỌN LỌC CẢI THIỆN NĂNG SUẤT SINH SẢN CỦA GÀ NỊI Cần Thơ- 2018 CƠNG TRÌNH ĐƯỢC HỒN THÀNH TẠI TRƯỜNG ĐẠI HỌC CẦN THƠ Người hướng dẫn khoa học: PGS.TS NGUYỄN TRỌNG NGỮ TS NGUYỄN THỊ HỒNG NHÂN Luận án bảo vệ trước hội đồng chấm luận án tiến sĩ cấp trường Họp tại: phòng khu II, Trường Đại học Cần Thơ Vào lúc ngày tháng năm Phản biện 1: Phản biện 2: Phản biện 3: Xác nhận xem lại Chủ tịch Hội đồng Có thể tìm hiểu luận án thư viện: Trung tâm Học liệu, Trường Đại học Cần Thơ Thư viện Quốc gia Việt Nam DANH MỤC LIỆT KÊ CÁC BÀI BÁO ĐÃ CÔNG BỐ Các báo đăng tạp chí: Chau Thanh Vu and Nguyen Trong Ngu, 2016 Single nucleotide polymorphisms in candidate genes associated with egg production traits in native Noi chicken of Vietnam International Journal of Plant, Animal and Environmental Sciences, Volume-6, Issue-1, 162-169 Châu Thanh Vũ, Nguyễn Thị Hồng Nhân Nguyễn Trọng Ngữ, 2017 Đa hình GH/MSPI liên kết với tính trạng sản xuất trứng gà Nòi Tạp chí KHKT Chăn ni số 220 Chương I GIỚI THIỆU 1.1 Tính cấp thiết luận án Trong chăn nuôi gia cầm, suất sinh sản chỉ tiêu kinh tế quan trọng và bị chi phối yếu tố môi trường, thành phần dinh dưỡng thức ăn (Liu et al., 2004; Lewis and Gous, 2006) nội tiết (Kim et al., 2004 Nhiều nghiên cứu cho thấy yếu nội tiết liên quan đến suất sinh sản đươ ̣c điều khiển nhiều gen khác (Emsley, 1997; Luo et al., 2007): gen Prolactin (Cui et al., 2006), Vasoactive Intestinal Poly-peptide (Li et al 2009; Caldwellet al., 1999; Zhou et al., 2010), Gen Bone Morphogenntic Poteins (Zhang et al., 2008), Neuropeptide Y (Fatemi et al., 2012), Melatonin Receptor (Li et al., 2013) Việc đánh giá tác động đa hình gen đến suất sinh sản gà đẩy nhanh tốc độ nâng cao đồng trình chọn giống nhằm nâng cao suất sinh sản chúng Thêm vào đó, gà Nòi nghiên cứu di truyền mức độ phân tử chưa có cơng bố tính đa dạng di truyền vai trò số gen ứng viên liên quan đến tiềm sinh sản dòng gà địa phương Vì việc nghiên cứu đa hình di truyền sử dụng thị phân tử chọn lọc để nâng cao tính trạng suất sinh sản cần thiết Chính lý đề tài “Đặc điểm ngoại hình, đa hình gen ứng dụng thị phân tử chọn lọc cải thiện suất sinh sản gà Nòi” thực 1.2 Mục tiêu luận án -Xác định đặc điểm ngoại hình đánh giá đa dạng di truyền nhóm gà Nòi ĐBSCL - Xác định ảnh hưởng số gen ứng viên liên quan đến suất sinh sản gà Nòi - Chọn tạo để cải thiện suất sinh sản gà Nòi 1.3 Những đóng góp luận án (i) Đề tài xác định số đặc điểm ngoại hình nhóm gà Nòi ni tỉnh Cần Thơ, Sóc Trăng, Kiên Giang, Bến Tre, Trà Vinh, Đồng Tháp thuộc Đồng sông Cửu Long Bên cạnh đó, đề tài xác định tính đa dạng di truyền nhóm gà Nòi ĐBSCL góp phần việc nhận biết mối quan hệ mặt di truyền nhóm gà khảo sát (ii) Sử dụng phương pháp phân tử để xác định đột biến gen ứng viên ảnh hưởng chúng đến khả sinh sản gà Nòi Qua tìm mối liên quan số đa hình gen đến suất sinh sản gà Nòi (iii) Dựa vào mối liên kết đốt biến với tính trạng kiểu hình chọn lọc cá thể gà Nòi mang kiểu gen cho suất sinh sản cao 1.4 Ý nghĩa thực tiễn khả ứng dụng luận án Xác định tính đa dạng di truyền chọn lọc nhóm gà Nòi có khả sinh sản cao thị phân tử nhằm phục vụ cho ngành chăn nuôi gà ĐBSCL Chương PHƯƠNG TIỆN VÀ PHƯƠNG PHÁP NGHIÊN CỨU Đề tài thực nội dung: 3.1 Nội dung 1: Điều tra đặc điểm ngoại hình phân tích đa dạng di truyền nhóm gà Nòi ĐBSCL 3.1.1 Ghi nhận đặc điểm ngoại hình gà Nòi * Địa điểm điều tra: Đồng Tháp; Bến Tre; Trà Vinh; Kiên Giang; Sóc Trăng, Cần Thơ * Phương pháp chọn hộ điều tra: Cho ̣n ngẫu nhiên 20 hô ̣/tin̉ h với tiêu chí kinh nghiê ̣m chăn nuôi năm và qui mô chăn nuôi từ 100 con/hộ * Chọn gà: xác định đặc điểm ngoại hình 60 cá thể gà Nòi/tỉnh (3 cá thể/hộ) từ đến năm tuổi * Chỉ tiêu ghi nhận: đặc điểm ngoại hình xác định theo Bùi Hữu Đồn ctv (2011) 3.1.2 Đánh giá đa dạng di truyền nhóm gà Chọn ngẫu nhiên 60 cá thể gà Nòi (10 cá thể/tỉnh * tỉnh) để xác định đa dạng di truyền cách sử dụng 10 primer microsatellite *Tách chiết ADN từ lông: mẫu lông tách chiết proteinase K, sử dụng nồng độ muối cao để loại bỏ protein *Phương pháp PCR: Trình tự primer microsallite nghiên cứu sử dụng theo khuyế n cáo của ISAG/FAO dùng cho phân tić h đa da ̣ng di truyề n gà (Bảng 3.1) Bảng 3.1: Thông tin thị microsatellite sử dụng theo khuyến cáo ISAG/FAO Tên NST ADL 0268 MCW0081 MCW0183 MCW0067 10 MCW0330 17 MCW0069 23 MCW0034 MCW0016 ADL 112 10 MCW 216 13 Trình tự mồi(5’->3’) F: CTCCACCCCTCTCAGAACTA R: CAACTTCCCATCTACCTACT F: GTTGCTGAGAGCCTGGTGCAG R: CCTGTATGTGGAATTACTTCTC F: ATCCCAGTGTCGAGTATCCGA R: TGAGATTTACTGGAGCCTGCC F: GCACTACTGTGTGCTGCAGTTT R: GAGATGTAGTTGCCACATTCCGAC F: TGGACCTCATCAGTCTGACAG R: AATGTTCTCATAGAGTTCCTGC F: GCACTCGAGAAAACTTCCTGCG R: ATTGCTTCAGCAAGCATGGGAGGA F: TGCACGCACTTACATACTTAGAGA R: TGTCCTTCCAATTACATTCATGGG F: ATGGCGCAGAAGGCAAAGCGATAT R: TGGCTTCTGAAGCAGTTGCTATGG F: GGCTTAAGCTGACCCATTAT R: ATCTCAAATGTAATGCGTGC F: GGGTTTTACAGGATGGGACG R: AGTTTCACTCCCAGGGCTCG Tm (°c)* 60 Vùng alen(bp) 102-116 60 112-135 58 296-326 60 176-186 60 256-300 60 158-176 60 212-246 60 162-206 58 120-134 58 139-149 F: mồi xuôi; R: Mồi ngược; *: Nhiệt độ bắt cặp Thành phần cho phản ứng PCR bao gồm: 1X PCR buffer, 2,5 mM MgCl2, 0,25 mM dNTP, 0,25 pmol mồi, 0,5 U Taq ADN polymerase, 100 ng ADN mẫu thêm nước vừa đủ 10 µl Chu trình nhiệt cho phản ứng PCR: biến tính ban đầu 95oC phút, 35 chu kỳ bao gồm 95oC cho 45 giây, nhiệt độ tối ưu cho primer 45 giây, kéo dài 72oC 45 giây kéo dài cuối 72oC 10 phút Điên di gel polyacrylamide: Sản phẩm PCR điện di gel polyacrylamide 10%, kết đọc dựa vào kích thước đoạn ADN gel 3.2 Nội dung 2: Xác định đa hình gen ứng viên đánh giá suất sinh sản gà Nòi hệ xuất phát 3.2.1 Đánh giá suất sinh sản gà Nòi *Gà thí nghiệm: 2.000 gà Nòi ngày tuổi (thu thập từ sở ấp trứng gà Nòi, điểm 500 con) ni dưỡng chế độ chăm sóc Giai đoạn 1-15 tuần tuổi: nuôi nhốt tập trung, mật độ con/m2 Chọn lọc 240 gà Nòi (200 mái 40 trống) dựa vào đặc điểm kiểu hình tiêu chuẩn giống lúc 16 tuần tuổi Giai đoạn 16-21 tuần tuổi: gà nuôi nhốt tập trung với mật độ con/m2 Giai đoạn 22-75 tuần tuổi: Gà thí nghiệm ni chuồng lồng dành cho gà mái đẻ công nghiệp Ghi nhận tiêu suất sinh sản 12 tháng đẻ Các tiêu tính theo Bùi Hữu Đồn ctv (2011) 3.2.2 Xác định đa hình gen ứng viên Gà nghiên cứu (200 gà mái 40 gà trống) thu mẫu, ly trích kiểm tra chất lượng ADN tương tự nội dung Bảng 3.2 Trình tự mồi gen nghiên cứu Gen PRL VIP BMPRIB MTRN1C GH NPY Kích thước Trình tự mồi (5’ – 3’) Enzyme TK (bp) F:AGAGGCAGCCCAGGCATTTTAC R:CCTGGGTCTGGTTTGGAA ATTG F:AGAGGCAGCCCAGGCATTTTAC R:CCTGGGTCTGGTTTGGAA ATTG F: GCTTGGACTGATGCGTACTT R: GTATCACTGCAAATGCTCTGC F: CCATAGCAAAACAGATTCAG R: TCAGGA CAGTTTGGTAGATT F: GGTGTATCCGTATCCTCTAA R: GACAGTGGGACAATGAAGT F: CTAAAGGACCTGGAAGAAGGG R: AACTTGTCGTAGGTGGGTCTG F: CTAAAGGACCTGGAAGAAGGG R: AACTTGTCGTAGGTGGGTCTG F: TCTCAGAGCTCCAACGTATGA R:ATATTTCTGTGCCTGAACAACA AluI 439 Csp6I 520 ApoI Xu et al., 2011b 581 Hind III Zhang et al 2008 373 MboI Liet al., 2013 1164 SacI 1164 MspI 240 DraI Makhsous et al., 2013 Makhsous et al., 2013 Xu et al., 2011b F: mồi xuôi; R: mồi ngược; TK: tài liệu tham khảo Cui et al., 2006 439 Gà thí nghiệm phân tích kiểu gen phương pháp PCRRFLP Phương pháp PCR thực tương tự nội dung khác trình tự primer (Bảng 3.2) chu trình nhiệt (Bảng 3.3) Sản phẩm PCR ủ với enzyme chuyên biệt cho cặp mổi Sau đó, sản phẩm kiểm tra gel agarose 2% Bảng 3.3: Chu trình nhiệt cho phản ứng PCR tối ưu cho đa hình Giai đoạn PRL 94oC –5’ 94oC – 30’’ 58oC – 60’’ 72oC – 30’’ 72oC – 5’ VIP BMPR-IB 94oC – 4’ 94oC – 60’’ 57oC – 45’’ 72oC – 60’’ 72oC – 10’ Đa hình MTRN1C GH NPY 94oC –5’ 94oC – 30’’ 57oC – 45’’ 72oC – 50’’ 72oC – 5’ 94oC –5’ 94oC – 30’’ 58oC – 30’’ 72oC – 2’ 72oC – 10’ 94oC – 4’ 94oC – 45’’ 56oC – 45’’ 72oC – 45’’ 72oC – 5’ Chu kỳ 3.3 Nội dung 3: Chọn tạo để cải thiện suất sinh sản đánh giá suất sinh sản gà Nòi hệ Chọn tạo gà Nòi mang kiểu gen cho suất trứng cao Quần thể gà Nòi nghiên cứu (nội dung 2) chọn lọc định hướng nhằm nâng cao suất trứng số lượng gà sinh ra/gà mái Dựa vào kết từ nội dung chọn cá thể gà trống mái Nòi hệ xuất phát để chọn tạo thu hệ - Đối với gà mái: Sau kết thúc nội dung tiến hành chọn 24 gà mái với tỷ lệ chọn lọc 12% (chọn 24 mái/200 mái), gà mái chọn phải thỏa điều kiện sau: Mang kiểu gen cho suất trứng số lượng gà sinh cao (gà mang kiểu gen đồng hợp DD đa hình NPY/DraI ) Từ 67 gà mái mang kiểu gen DD đa hình NPY/DraI chọn 24 gà mái cho suất trứng cao - Đối với gà trống: chọn gà trống mang kiểu gen giống với gà mái chọn để tạo dòng gà mái có kiểu gen Sơ đồ bố trí thí nghiệm: Ghép cá thể gà chọn thành gia đình (1 trống mái/gia đình, Bảng 3.4) Mỗi gia đình tạo 22 gà mái theo dõi suất sinh sản đến tháng đẻ thứ 35 Bảng 3.4 Sơ đồ bố trí thí nghiệm Chỉ tiêu Số gà mái/gà trống Số gà con/gà trống A 22 Gà trống B 22 C 22 Tổng 24 66 Theo dõi tiêu sinh sản gà Nòi hệ 1: chế độ nuôi dưỡng, tiêu theo dõi suất sinh sản gà mái gia đình tương tự nội dung 3.3 Xử lý số liệu Sử dụng phần mềm Minitab 16 để phân tích mối liên kết kiểu gen tiêu ghi nhận theo mơ hình thống kê: Yij = µ + Ai+ij Trong đó: Yij: Tính trạng quan sát, µ trung bình chung, Ai tác động kiểu gen, , ij sai số ngẫu nhiên Số liệu xử lý sơ phần mềm Microsoft Excel; phân tích đa dạng di truyền phần mềm Biodiversity Pro; tần số alen, tần số kiểu gen, kiểu gen dị hợp tử mong đợi (He), kiểu gen dị hợp tử quan sát (Ho), đánh giá mức khác biệt bên quần thể, giá trị thống kê F (FIS, FST); test cân Hardy–Weinberg (HWE) xác định phần mềm Genpop V4.2 phần mềm Fstat V2.9.3 Chương IV KẾT QUẢ VÀ THẢO LUẬN 4.1 Đặc điểm ngoại hình phân tích đa dạng di truyền nhóm gà Nòi ĐBSCL 4.1.1 Đặc điểm ngoại hình Nghiên cứu tiến hành điều tra khảo sát đặc điểm ngoại hình 815 cá thể gà (268 gà trống 547 gà mái) tỉnh ĐBSCL Kết ghi nhận trình bày Bảng 4.1 Hình 4.1 Đặc điểm ngoại hình gà Nòi phong phú đa dạng, nhiên phân bố tính trạng khơng đồng chi phối trình lai tạo chọn lọc nhân tạo Có thể thấy đặc điểm màu lơng kiểu mào chịu chi phối rõ rệt giới tính, điều có ý nghĩa quan trọng việc lai tạo nhóm gà Nòi nhằm vào mục đích khác Hình 4.1 Một số kiểu hình đặc trưng màu sắc lơng, màu mắt, màu mỏ, màu da chân kiểu mào gà Nòi Lê Thị Thúy (2010) số giống gà địa Việt Nam, Nguyễn Trọng Bình ctv (2008) gà Hà Giang Hình 4.2 Khuếch đại ADN gà Nòi 10 cặp mồi (gel agarose 5% polyacrylamide 10%) 10 4.1.4 Đa hình locus microsatellite quần thể gà Nòi Xét locus microsatellite cho thấy hầu hết locus thể giá trị He cao giá trị Ho, ngoại trừ hai locus MCW0016 MCW0034 Kết phân tích Bảng 4.3 cho thấy tần số dị hợp tử quan sát thể cao locus MCW0034 (0,924) thấp locus MCW0183 (0,146), tần số dị hợp tử mong đợi thể cao locus MCW0016 (0,846) thấp locus MCW0067 (0,400) Bảng 4.3 cho thấy locus MCW0016, ADL0268, MCW0081, MCW0216, ADL0112 MCW0034 có mức độ dị hợp tử tồn quần thể cao Bảng 4.3: Tần số dị hợp tử quan sát (Ho) mong đợi (He), Fis microsatellite quần thể gà Nòi LocName ADL0268 MCW0081 MCW0183 MCW0067 MCW0330 MCW0069 MCW0034 MCW0016 ADL0112 MCW0216 Trung bình Số alen 5 3 3,8 Ho He Fis Fst 0,773 0,692 0,146 0,257 0,381 0,499 0,924 0,876 0,751 0,582 0,588 0,692 0,755 0,431 0,400 0,421 0,720 0,698 0,846 0,765 0,651 0,643 -0,117 0,084 0,661 0,357 0,094 0,307 -0,324 -0,035 0,018 0,106 0,085 0,023 0,000 0,036 0,16 0,027 0,039 0,158 -0,013 -0,029 0,064 0,044 P-value 0,930 0,122 0,002 0,014 0,310 0,002 0,986 0,760 0,420 0,158 0,006 Bên cạnh đó, hệ số cận huyết locus có sai khác dao động từ -0,324 đến 0,661 (Bảng 4.3) Xét vị trí microsatellite, giá trị Fis cao trình khảo sát locus MCW0183 với giá trị Fis 0,661; locus MCW0067 giá trị Fis 0,357; locus MCW0069 giá trị Fis 0,307 Trong locus lại giá trị Fis thấp 0,2 (Bảng 4.3) Qua kết cho thấy có cảnh báo mức độ thiếu hụt dị hợp tử locus MCW0183, MCW0067 MCW0069 11 4.1.5 Khoảng cách di truyền gà Nòi sáu tỉnh Đồng sơng Cửu Long Kết phân tích cho thấy, nhóm gà Nòi thuộc tỉnh Trà Vinh, Sóc Trăng, Bến Tre Kiên Giang có khoảng cách di truyền dao động từ 18,42%-27,03% Trong nhóm gà tỉnh Bến Tre Kiên Giang thể khoảng cách di truyền gần 18,42% với giá trị tương đồng khoảng 81,56% thể tương đồng 81,15% so với nhóm gà Trà Vinh Sóc Trăng Xét tổng thể nhóm gà Nòi tỉnh ĐBSCL thể mức độ tương đồng mặc di truyền cao (80,12%) (Bảng 4.4) Bảng 4.4:Khoảng cách di truyền nhóm gà Nòi ĐBSCL (%) Kiên Giang Sóc Trăng Cần Thơ Đồng Tháp Trà Vinh Bến Tre Kiên Giang * * * * * * Cần Thơ 27,03 20,00 * * * * Sóc Trăng 18,92 * * * * * Đồng Tháp 24,32 22,22 15,15 * * * Trà Vinh 18,92 21,62 34,21 31,58 * * Bến Tre 18,42 21,05 24,32 21,62 21,05 * Hình 4.3 Cây quan hệ di truyền nhóm gà Nòi dựa số liệu phân tích ADN với 10 thị microsatellte Cây phân loại di truyền nhóm gà Nòi thuộc tỉnh ĐBSCL xây dựng dựa khoảng cách di truyền phần mềm Biodiversity Pro Kết cho thấy, mức độ tương đồng di truyền 80,12% Các nhóm gà nghiên cứu chia làm hai dòng chính: dòng gồm nhóm gà Cần Thơ, Đồng Tháp dòng gồm 12 nhóm gà Trà Vinh, Sóc Trăng, Bến Tre Kiên Giang Khoảng cách di truyền nhóm gà dao động từ 15,15% đến 34,21% 4.2 Đánh giá suất sinh sản gà Nòi hệ xuất phát xác định đa hình gen ứng viên 4.2.1 Đánh giá suất sinh sản gà Nòi hệ xuất phát Kết Bảng 4.5 cho thấy tổng số trứng qua 12 tháng đẻ gà Nòi 94,5 với khối lượng trứng trung bình 45,4 g, tỷ lệ có phơi đạt 83,3%, tỷ lệ nở/trứng có phơi 85,3% số gà sinh 61,1 Bảng 4.5: Năng suất sinh sản gà Nòi qua 12 tháng đẻ Chỉ tiêu Tổng số trứng (quả) Khối lượng trứng (g) Dài trứng (mm) Rộng trứng (mm) Chỉ số hình dáng (%) Tỷ lệ trứng có phơi (%) Tỷ lệ trứng nở (%)/trứng có phơi Số sinh (con) X±SE 94,5±2,24 45,4±0,24 5,3±0,02 4,0±0,01 75,9±0,29 83,3±0,75 85,3±0,69 61,1±2,19 4.2.2 Tác động đa hình số gen tiềm lên suất sinh sản gà Nòi Hình 4.4 cho thấy kết điện di sản phẩm PCR cắt enzyme chuyên biệt cho tùng đa hình Các kiểu gen khác cho kích thước băng khác gel Kết nhận diện đa hình nghiên cứu kỹ thuật PCR PCR-RFLP trình bày Hình 4.4 13 TT TT CC TT TT TC TC TT TT TT TT TT TC TT MK PRL/AluI - C2402T TT: 304 TC: 304/160/144/81/54 CC: 160/144/81/54 304 bp 160/144 bp 81 bp Đa hình PRL/AluI MK CG CG GG CG CG GG GG GG GG CG CG PRL/Csp6I - C2161G CC: 439 CG: 439/405/34 GG: 405/34 CG 439 bp 405 bp PRL/Csp6I MK TG GG TG TT GG TG TG TG TT TT TG TT TT VIP/ApoI - G51389822T GG: 520 TG: 520/486 TG TT: 486 520 bp 486 bp VIP/ApoI BMPR-IB/HindIII MK AG GG GG GG AG AG GG GG AG GG AG GG GG GG GG MTRN1C/MboI - 294G>A AA: 372 AG: 372/333 GG: 333 372 bp 333 bp MTRN1C/MboI Hình 4.4 Nhận diện đa hình PCR-RFLP MK: Thang chuẩn 100bp; TT, CT, CC, CG, GG, TG, AA, CA, AG, AB, ABC, BB, DD, ID, II: kiểu gen GH/SacI GH/MspI NPY/DraI 14 4.2.3 Tần số kiểu gen tần số alen Việc phát tần số alen kiểu gen đóng vai trò quan trọng việc lựa chọn giống vật nuôi Dựa tần số mối liên quan chúng với đặc điểm kiểu hình hỗ trợ tạo cá thể với kiểu gen kiểu hình mong muốn Các tần số đa hình gen PRL, VIP, BMPR-IB, MTNR1C, GH, NPY trình bày Bảng 4.6 Bảng 4.6: Tần số alen kiểu gen đa hình Gen PRL/AluI (n=218) PRL/Csp6I (n=211) VIP/ApoI (n=204) BMPRIB/HindIII (n=205) MTRN1C/MboI (n=207) GH/SacI (n=214) NPY/DraI (n=130) Quan sát Kiểu gen TT CT CC Alen Mong đợi Kiểu gen TT CT CC HWE NS T C 0,17 C 0,33 G 0,69 CC 0,11 0,28 CG 0,44 0,03 GG 0,45 TT GT GG 0,69 CC 0,10 0,28 CG 0,45 0,03 GG 0,45 TT GT GG 0,83 G 0,67 T 0,50 AA 0,18 0,38 GA 0,47 0,11 GG 0,36 0,56 A 0,41 0,44 G 0,59 0,49 AA 0,17 0,19 GA 0,48 0,32 GG 0,35 AA 0,06 AA AG 0,40 AB G 0,74 B 0,01 AG 0,39 AB GG 0,54 BB NS 0,02 A 0,26 A 0,99 AA 0,07 AA 0,98 GG 0,54 BB 0,00 0,98 0,02 0,00 NS NS 0,05) Đối với đa hình PRL/Csp6I cho thấy, cá thể mang kiểu gen CC có tuổi đẻ trứng đầu thấp hai kiểu gen lại thể khối lượng gà mái vào đẻ (1,97 kg) khối lượng trứng (47,4 g) cao khác biệt có ý nghĩa so với cá thể mang kiểu gen GG (1,71 kg 44,9 g) Vì cá thể mang kiểu gen CC xem marker di truyền việc nâng cao suất trứng nhóm gà Nòi thí nghiệm 16 Bảng 4.8 Tác động đa hình PRL/Csp6Iđến suất sinh sản Chỉ tiêu Kiểu gen P CC (n=17) CG (n=75) GG (n=78) Tuổi đẻ trứng đầu (ngày) 170,4b±3,9 174,9b±3,7 181,9a±4,1 0,005 Khối lượng gà mái vào đẻ (kg) 1,97a±0,08 1,76b±0,04 1,71b±0,04 0,013 Khối lượng trứng (g) 47,4a±0,8 46,0ab±0,4 44,9b±0,4 0,012 Chỉ số hình dáng trứng (%) 76,3±0,9 75,9±0,5 76,9±0,5 0,314 Tổng số trứng (quả) 94,3±7,5 101,6±3,6 97,2±3,5 0,553 Tỷ lệ trứng có phơi (%) 87,5±2,3 86,5±1,1 84,2±1,1 0,204 Tỷ lệ nở/trứng có phơi (%) 91,1±2,4 87,3±1,2 85,5±1,1 0,089 Số gà nở (con) 76,6±6,6 77,8±3,1 70,1±3,1 0,200 ab chữ hàng giống khác biệt khơng có ý nghĩa thống kê (P>0,05) 4.2.4.2 Đa hình VIP/ApoI Kết nghiên cứu đa hình VIP/ApoI gà Nòi thí nghiệm thể qua Bảng 4.9, cho thấy đa hình tác động gần có ý nghĩa thống kê (P=0,060) đến tiêu tổng số trứng qua 12 tháng đẻ, kiểu gen AG thể suất cao với 104,4 quả), không khác biệt so với kiểu gen GG (88,7 quả) TT (94,8 quả) Bảng 4.9: Tác động đa hình VIP/ApoI đến suất sinh sản Chỉ tiêu Kiểu gen P GG (n=16) GT (n=68) TT (n=82) Tuổi đẻ trứng đầu (ngày) 177,3±4,2 177,6±2,0 177,1±2,1 0,883 Khối lượng gà mái vào đẻ (kg) 1,87±0,08 1,77±0,04 1,73±0,04 0,306 Khối lượng trứng (g) 44,9±0,9 45,6±0,4 45,9±0,4 0,621 Chỉ số hình dáng trứng (%) 75,8±1,0 76,3±0,5 76,4±0,5 0,851 Tổng số trứng (quả) 88,7±7,4 104,4±3,6 94,8±3,3 0,060 Tỷ lệ trứng có phơi (%) 83,1±2,3 85,8±1,1 86,1±1,0 0,498 Tỷ lệ nở/trứng có phơi (%) 82,9±2,4 86,2±1,2 88,1±1,1 0,135 Số gà nở (con) 62,2±6,6 78,0±3,2 72,4±2,9 0,080 ab chữ hàng giống khác biệt khơng có ý nghĩa thống kê (P>0,05) 4.2.4.3 Đa hình BMPR-IB/HindIII Nghiên cứu khơng tìm thấy tác động đa hình gen BMPR-IB đến suất sinh sản gà Nòi thí nghiệm 17 Bảng 4.10: Tác động đa hình BMPR-IB/HindIII đến suất sinh sản Chỉ tiêu Kiểu gen AA (n=29) GA (n=76) Tuổi đẻ trứng đầu (ngày) 172,2±3,1 176,8±1,9 Khối lượng gà mái vào đẻ (kg) 1,84±0,06 1,75±0,037 Khối lượng trứng (g) 46,3±0,6 45,6±0,4 Chỉ số hình dáng trứng (%) 75,6±0,8 76,7±0,5 Tổng số trứng (quả) 97,4±5,6 98,1±3,4 Tỷ lệ trứng có phơi (%) 85,1±1,8 85,3±1,1 Tỷ lệ nở/trứng có phơi (%) 86,5±1,8 86,2±1,1 Số gà nở (con) 71,9±4,9 73,6±3,0 a b chữ hàng giống khác biệt thống kê (P>0,05) P GG (n=61) 180,0±2,1 0,112 1,75±0,041 0,355 45,6±0,4 0,604 76,2±0,5 0,500 100,3±3,8 0,872 86,4±1,2 0,758 87,8±1,3 0,650 75,9±3,4 0,770 khơng có ý nghĩa 4.2.4.4 Đa hình MTRN1C/MboI Qua Bảng 4.11 cho thấy, đa hình gen MTRN1C/MboI khơng thể sử dụng cơng tác chọn giống gà Nòi cho suất sinh sản cao, kiểu gen dị hợp tử AG không ổn định chọn giống hai kiểu gen AA GG thể khối lượng trứng tỷ lệ trứng có phơi thấp so với đa hình khác nghiên cứu Bảng 4.11: Tác động đa hình MTRN1C/MboIđến suất sinh sản Chỉ tiêu AA (n=12) Tuổi đẻ trứng đầu (ngày) 175,9ab±4,7 Khối lượng gà mái vào đẻ (kg) 1,67±0,09 Khối lượng trứng (g) 43,4b±0,9 Chỉ số hình dáng trứng (%) 76,6±1,2 Tổng số trứng (quả) 111,5±8,9 Tỷ lệ trứng có phơi (%) 83,6ab±2,7 Tỷ lệ nở/trứng có phơi (%) 85,2±2,9 Số gà nở (con) 79,9±7,8 a b chữ hàng giống thống kê (P>0,05) 18 Kiểu gen AG (n=68) 174,2b±2,0 1,81±0,04 46,3a±0,4 75,9±0,5 99,1±3,7 87,9a±1,1 87,3±1,2 76,3±3,3 khác biệt P GG (=86) 180,7a±1,8 0,055 1,73±0,03 0,156 45,5ab±0,4 0,019 76,6±0,4 0,582 97,3±3,3 0,325 b 84,3 ±0,9 0,040 86,9±1,1 0,793 72,4±2,9 0,516 khơng có ý nghĩa 4.2.4.5 Đa hình gen GH a Đa hình GH/SacI Kết phân tích cho thấy, đa hình GH/SacI khơng tác động đến tính trạng sinh sản gà Nòi thí nghiệm Bảng 4.12 Tác động đa hình GH/SacI đến suất sinh sản Chỉ tiêu Kiểu gen P AA (n=164) AB (n=5) Tuổi đẻ trứng đầu (ngày) 177,9±1,3 172,4±7,5 0,474 Khối lượng gà mái vào đẻ (kg) 1,76±0,03 1,76±0,15 0,987 Khối lượng trứng (g) 45,6±0,3 46,5±1,5 0,589 Chỉ số hình dáng trứng (%) 76,4±0,3 76,4±1,9 0,993 Tổng số trứng (quả) 99,2±2,4 93,7±13,8 0,696 Tỷ lệ trứng có phơi (%) 85,5±0,7 88,4±4,2 0,498 Tỷ lệ nở/trứng có phơi (%) 86,9±0,8 91,2±4,3 0,335 Số gà nở (con) 74,6±2,1 74,3±12,1 0,980 a b chữ hàng giống khác biệt khơng có ý nghĩa thống kê (P>0,05) b Đa hình GH/MspI Tuy nhiên, nghiên cứu tại, khơng tìm thấy tác động đa hình GH/MspI đến tuổi đẻ trứng đầu, khối lượng gà mái vào đẻ khối lượng trứng số hình dáng trứng nhóm gà Nòi thí nghiệm (P>0,05) Bảng 4.13: Tác động đa hình GH/MspI đến tuổi đẻ trứng đầu, khối lượng gà mái chất lượng trứng Kiểu gen Tuổi đẻ trứng đầu (ngày) AA (n=116) 178,1±2,3 AB (n=35) 182,2±4,0 ABC (n=8) 173,8±8,3 AC (n=26) 173,7±4,7 BB (n=5) 177,0±10,3 CC (n=4) 182,8±11,5 P 0,771 a b chữ cột thống kê (P>0,05) Khối lượng Khối lượng Chỉ số gà mái vào trứng (g) hình dáng đẻ (kg) trứng (%) 1,80±0,03 45,8±0,4 76,1±0,5 1,80±0,06 45,5±0,6 76,4±0,9 1,91±0,10 46,2±1,3 77,3±1,8 1,68±0,07 46,3±0,7 74,9±1,0 1,74±0,12 47,0±1,6 77,6±2,2 1,65±0,22 46,6±1,8 72,9±2,5 0,412 0,911 0,531 giống khác biệt khơng có ý nghĩa 19 Kết nghiên cứu cho thấy, đa hình GH/MspI có tác động đến suất trứng số gà nở 12 tháng đẻ gà Nòi thí nghiệm (Bảng 4.14) Qua đó, cá thể gà mang kiểu gen BB cho tổng số trứng cao (137,8 quả/12 tháng đẻ) khác biệt so với cá thể gà mang kiểu gen lại Tuy nhiên, kiể u gen BB chỉ chiế m khoảng 3% quầ n thể gà Nòi, đó cầ n phải có kế hoa ̣ch trì và phát triể n số lươ ̣ng nhóm gà mang kiể u gen này Bảng 4.14: Tác động đa hình GH/MspI đến suất tiêu ấp nở Kiểu gen Tổng số Tỷ lệ trứng Tỷ lệ nở/trứng Số gà trứng (quả) có phơi (%) có phơi (%) nở (con) AA (n=108) 90,7b±3,2 84,3±1,1 86,7±1,0 67,8b±2,9 b AB (n=32) 87,3 ±5,5 85,0±1,9 87,6±1,8 66,2b±4,9 b ABC (n=7) 71,8 ±11,5 90,3±4,0 91,9±3,7 61,6b±10,4 a AC (n=25) 113,1 ±6,2 86,8±2,3 91,0±2,1 85,8ab±5,6 a BB (n=5) 137,8 ±13,4 82,5±4,9 82,5±4,6 93,2a±12,1 ab CC (n=3) 95,7 ±17,3 83,5±5,6 89,2±5,1 77,7ab±15,6 P 0,000 0,669 0,272 0,017 a b chữ cột giống khác biệt khơng có ý nghĩa thống kê (P>0,05) 4.2.4.6 Đa hình NPY/DraI Kết nghiên cứu cho thấy, cá thể gà mang kiểu gen đồng hợp DD thể tổng số trứng cao có tuổi đẻ trứng đầu thấp lại cho khối lượng gà bắt đầu đẻ cao so với kiểu gen đồng hợp II Vì vậy, nên ý chọn lọc đàn gà giống cho suất sinh sản cao Bảng 4.15 Tác động đa hình NPY/DraI đến suất sinh sản Chỉ tiêu Tuổi đẻ trứng đầu (ngày) Khối lượng gà mái vào đẻ (kg) Khối lượng trứng (g) Chỉ số hình dáng trứng (%) Tổng số trứng (quả) Tỷ lệ trứng có phơi (%) Tỷ lệ nở/trứng có phôi (%) Số gà nở (con) DD (n=67) 178,5b ±2,6 1,8a±0,04 46,1a±0,5 76,1±0,6 100,0a±3,9 84,3a± 1,4 86,2±1,3 72,1a± 3,4 20 Kiểu gen ID (n=83) II (n=31) 178,0b ±2,4 1,8a±0,04 46,2a±0,4 76,3±0,5 96,4ab±3,6 86,2a±1,3 86,3±1,2 72,2a±3,1 190,5a ±3,9 1,6b±0,06 42,5b± 0,6 75,6±0,9 81,2b±6,0 77,9b±1,9 82,3±1,9 51,9b± 5,1 P 0,017 0,033 0,000 0,780 0,030 0,002 0,179 0,002 chữ hàng giống khác biệt khơng có ý nghĩa thống kê (P>0,05) ab Nhìn chung, qua phân tích tác động đa hình gen đến suất sinh sản gà Nòi thí nghiệm cho thấy, đa hình PRL/AluI, PRL/Csp6I, Vip/ApoI, BMPR-IB/HindIII, MTRN1C/MboI GH/SacI không tác động đến tổng số trứng gà Nòi thí nghiệm qua 12 tháng đẻ khảo sát, hai đa hình GH/MspI NPY/DraI tác động có ý nghĩa lên tổng số trứng gà thí nghiệm Qua cho thấy kiểu gen BB đa hình GH/MspI cho suất trứng tương đối cao (137,8 quả/12 tháng đẻ), nhiên số cá thể quần thể tương đối thấp khoảng 3% Đối với đa hình NPY/DraI, ngồi việc tác động có ý nghĩa đến tổng số trứng tiêu khảo sát đa hình gen NPY/DraI tác động có ý nghĩa đến tiêu khảo sát Vì vậy, thấy đa hình gen có tác động mạnh đến suất sinh sản gà Nòi thí nghiệm Thêm vào đó, kiểu gen tìm cá thể gà mang kiểu gen DD ln thể suất vượt trội so với kiểu gen II Chính vậy, nghiên cứu chọn cá thể gà mang kiểu gen DD đa hình NPY/DraI kiểu gen tiềm trình chọn tạo giống gà Nòi cho suất sinh sản cao tiến hành chọn tạo cá thể mang kiểu gen để tiến hành khảo sát nội dung 4.3 Chọn tạo để cải thiện suất sinh sản đánh giá suất sinh sản gà Nòi hệ Gà Nòi hệ theo dõi suất sinh sản nhằm so sánh với gà Nòi hệ xuất phát Kết theo dõi suất sinh sản qua hệ trình bày qua Bảng 4.16 Kết cho thấy hầu hết tiêu suất trứng, hệ thể cao so với hệ xuất phát ban đầu Trong đó, tiêu khối lượng trứng, tổng số trứng số gà nở hệ (lần lượt 48,2 g; 63,9 48,8 con) thể cao khác biệt có ý nghĩa thống kê so với hệ xuất phát (45,7 g; 57,4 42,3 con) 21 Bảng 4.16: Năng suất Sinh sản gà hệ THXP TH1 qua tháng thí nghiệm Chỉ tiêu Thế hệ xuất phát (n=172) Thế hệ (n=66) P Tuổi đẻ trứng đầu (ngày) 179,8±1,44 174,3±2,32 Khối lượng gà mái vào đẻ (g) 1.899±41 1.765±25 Khối lượng trứng (g) 45,7±0,27 48,2±0,43 Chỉ số hình dáng trứng (%) 75,8±0,37 75,6±0,60 Tổng số trứng (quả) 57,4±1,05 63,9±1,69 Tỷ lệ trứng có phơi (%) 84,2±0,88 85,7±1,42 Tỷ lệ nở/trứng có phơi (%) 86,0±0,79 87,9±1,28 Số gà nở (con) 42,3±1,07 48,8±1,72 XP: Xuất phát; XPC: Xuất phát chọn lọc; TH1: Thế hệ 0,048 0,006 0,000 0,702 0,001 0,392 0,214 0,002 Trong nghiên cứu (Bảng 4.27), việc chọn lọc giống dựa vào kiểu gen giúp cải thiện đáng kể suất trứng gà Nòi thí nghiệm Qua chọn lọc cho thấy, cá thể mang kiểu gen DD (63,92 quả) hệ thể tổng số trứng qua tháng khảo sát cao hệ xuất phát Cụ thể, cao cá thể mang kiểu gen DD 2,76 trương ứng tăng 4,37%, ID 6,07 (10,50%), II 16,66 (35,25%) toàn đàn 6,51 (11,34%) Tuy nhiên thấp so với cá thể mang kiểu gen DD chọn lọc từ hệ xuất phát 14,29 (18,27%), cá thể DD chọn lọc cá thể cho suất trứng vượt trội quần thể Bảng 4.17 Tổng số trứng kiểu gen DD hệ so với kiểu gen hệ xuất phát Thế hệ Tổng số trứng (quả) Xuất phát Thế hệ DD ID II Toàn đàn DD 61,16 57,83 47,26 57,41 63,92 Chỉ tiêu Số trứng TH1 tăng so với THXP (quả) 2,76 6,07 16,66 6,51 Số trứng TH1 tăng so với THXP (%) 4,37 10,50 35,25 11,34 Chọn lọc làm thay đổi đặc tính di truyền đàn giống, tạo hệ sau có suất chất lượng sản phẩm cao hệ trước Trong 22 nghiên cứu tại, gà Nòi mang kiểu gen DD đa hình NPY/DraI chọn lọc theo hướng tăng suất sinh sản Qua Bảng 4.28 cho thấy, tổng sản lượng trứng tháng đẻ hệ xuất phát 57,4 TH1 63,92 cao so với hệ xuất phát ban đầu với hiệu chọn lọc 6,49 tăng 11,3% so với hệ xuất phát Kết Bảng 4.28 cho thấy khoảng cách hệ gà Nòi nghiên cứu 1,2 với độ lệch chuẩn kiểu hình 15,66, cường độ chọn lọc 1,33 tiến di truyền hệ so với hệ xuất phát 5,42 ly sai chọn lọc 20,8 hệ số di truyền h2 0,31 Bảng 4.18: Hiệu chọn lọc tăng suất sinh sản hệ so với hệ xuất phát Thế hệ Xuất phát Xuất phát chọn Thế hệ Chỉ tiêu Tổng số trứng/mái (quả) Tổng số trứng/mái (quả) Tổng số trứng/mái (quả) Ly sai chọn lọc, S (quả) Hiệu chọn lọc, R (quả) Hiệu chọn lọc % Hệ số di truyền thực tế (h2) Khoảng cách hệ Độ lệch chuẩn kiểu hình (SD) Cường độ chọn lọc (i) Tiến di truyền (Delta g) N 172 24 66 Mean 57,41 78,21 63,92 20,8 6,51 11,3 0,313 1,2 15,66 1,33 5,42 SE 1,19 2,43 0,89 Với kết thu tổng số trứng hệ cao hệ xuất phát (11,3%) cho thấy cần tiếp tục chọn lọc hệ để tạo hệ nhằm cao ổn định tính trạng sản lượng trứng gà Nòi, từ tạo thành dòng gà Nòi cho suất sinh sản cao phục vụ cho vùng ĐBSCL Chương KẾT LUẬN VÀ KIẾN NGHỊ Kết luận Đặc điểm ngoại hình đa dạng di truyền gà Nòi: Gà Nòi ĐBSCL có ngoại hình đa dạng với nhiều màu sắc lơng, màu mắt, màu da chân, kiểu mào, màu mỏ Trong đó, màu lơng đỏ đen chiếm đa số (42,2%) gà trống, màu lông nâu phổ biến gà mái (55,6%) Qua phân tích 10 microsatellite chia gà Nòi tỉnh ĐBSCL thành nhóm chính: nhóm gồm nhóm gà Đồng Tháp Cần Thơ; nhóm gồm nhóm gà Bến Tre, Trà Vinh, Sóc Trăng Kiên Giang 23 Đa hình gen ứng viên liên quan đến suất sinh sản gà Nòi: tìm thấy đột biến điểm C2402T, C2161G, G51389822T, A287G, G294A, C2983T, C2896T I31391359D đa hình gen PRL/AluI, PRL/Csp6I, VIP/ApoI, BMPR-IB/HindIII, MTRN-1C/MboI, GH/SacI, GH/MspI NPY/DraI Trong đa hình PRL/Csp6I tác động đến tuổi đẻ trứng đầu, khối lượng gà mái bắt đầu đẻ khối lượng trứng; MTRN-1C/MboI tác động đến khối lượng trứng tỷ lệ trứng có phơi; GH/MspI tác động đến tổng số trứng số gà nở ra; NPY/DraI tác động đến tuổi đẻ trứng đầu, khối lượng gà mái bắt đầu đẻ, khối lượng trứng, tổng số trứng, tỷ lệ trứng có phơi, số gà nở ra, gà mang kiểu gen DD cho tổng sản lượng trứng cao sử dụng chọn giống nhằm cải thiện suất sinh sản gà Nòi Chọn tạo gà Nòi cho suất sinh sản cao: gà sau tuyển chọn thị phân tử với kiểu gen DD đa hình NPY/DraI từ hệ xuất phát tạo hệ cho tổng sản lượng trứng cao so với hệ xuất phát 11,3% với hệ số di truyền h2=0,313 Đề nghị Nhân rộng cá thể gà mang kiểu gen vượt trội suất trứng (kiểu gen DD đa hình NPY/DraI ) vào trình sản xuất để nâng cao suất gà Nòi Đồng Bằng Sơng Cửu Long Đề nghị tiếp tục chọn lọc gà Nòi để tạo hệ 2, có suất trứng cao ổn định mặc di truyền Từ tạo dòng gà Nòi cho suất trứng cao cho vùng ĐBSCL 24 ... gà địa phương Vì việc nghiên cứu đa hình di truyền sử dụng thị phân tử chọn lọc để nâng cao tính trạng suất sinh sản cần thiết Chính lý đề tài Đặc điểm ngoại hình, đa hình gen ứng dụng thị phân. .. cho tổng sản lượng trứng cao sử dụng chọn giống nhằm cải thiện suất sinh sản gà Nòi Chọn tạo gà Nòi cho suất sinh sản cao: gà sau tuyển chọn thị phân tử với kiểu gen DD đa hình NPY/DraI từ hệ... trình chọn tạo giống gà Nòi cho suất sinh sản cao tiến hành chọn tạo cá thể mang kiểu gen để tiến hành khảo sát nội dung 4.3 Chọn tạo để cải thiện suất sinh sản đánh giá suất sinh sản gà Nòi hệ Gà