Luận án được nghiên cứu với mục tiêu nhằm xác định loài nấm ký sinh có hiệu lực phòng trị SKL cao trong điều kiện phòng thí nghiệm. Đánh giá hiệu quả phòng trị của pheromone giới tính tổng hợp và nấm ký sinh đối với SKL ở điều kiện ngoài đồng.
BỘ GIÁO DỤC VÀ ĐÀO TẠO TRƢỜNG ĐẠI HỌC CẦN THƠ TÓM TẮT LUẬN ÁN TIẾN SĨ Chuyên ngành: BẢO VỆ THỰC VẬT Mã ngành: 62 62 01 12 PHẠM KIM SƠN NGHIÊN CỨU PHEROMONE GIỚI TÍNH VÀ NẤM KÝ SINH TRONG PHÕNG TRỊ SÙNG KHOAI LANG (CYLAS FORMICARIUS FABRICIUS) TẠI ĐỒNG BẰNG SÔNG CỬU LONG Cần Thơ, 2017 CÔNG TRÌNH ĐƢỢC HỒN THÀNH TẠI TRƢỜNG ĐẠI HỌC CẦN THƠ Người hướng dẫn chính: PGs.Ts Trần Văn Hai Luận án bảo vệ trước Hội đồng chấm luận án tiến sĩ cấp Trường Họp tại: …………………………………………… Vào lúc … … ngày … tháng … năm … Phản biện 1: Phản biện 2: Phản biện 3: Có thể tìm hiểu luận án thư viện: Trung tâm Học liệu, Trường Đại học Cần Thơ Thư viện Quốc gia Việt Nam DANH MỤC CÁC CƠNG TRÌNH ĐÃ CƠNG BỐ CÓ LIÊN QUAN TỚI LUẬN ÁN Phạm Kim Sơn, Châu Nguyễn Quốc Khánh, Huỳnh Thị Ngọc Linh Lê Văn Vàng, 2010 Khảo sát ảnh hưởng nấm Metarhizium anisopliae Sorokin sùng khoai lang (bọ hà) Cylas formicarius Fabricius điều kiện phòng thí nghiệm Tạp chí Cơng nghệ Sinh học, 8(3A): 561 – 566 Phạm Kim Sơn, Châu Nguyễn Quốc Khánh Lê Văn Vàng, 2012 Tổng hợp đánh giá hấp dẫn đồng pheromone giới tính sùng khoai lang, Cylas formicarius Fab Tạp chí Khoa học Trường Đại học Cần Thơ, 21b: 116 – 123 Huỳnh Thị Ngọc Linh, Châu Nguyễn Quốc Khánh, Nguyễn Thị Huyền Trang, Phạm Kim Sơn Lê Văn Vàng, 2012 Nghiên cứu điều kiện thích hợp cho việc áp dụng pheromone giới tính sùng khoai lang, Cylas formicarius Fab., đồng ruộng Tạp chí Khoa học Trường Đại học Cần Thơ, 21b: 54 – 61 Phạm Kim Sơn, Châu Nguyễn Quốc Khánh, Huỳnh Thị Ngọc Linh Lê Văn Vàng, 2013 Khảo sát diễn biến mật số quần thể sùng khoai lang (Cylas formicarius) bẫy pheromone giới tính tỉnh Vĩnh Long Tạp chí Khoa học Trường Đại học Cần Thơ, 28: 125 – 129 Phạm Kim Sơn, Lê Văn Vàng Trần Văn Hai, 2016 Khả gây bệnh nấm ký sinh thành trùng sùng khoai lang, Cylas formicarius Fabr (Coleoptera: Curculionidae) Tạp chí Khoa học Trường Đại học Cần Thơ, 44b: 31-37 Chƣơng 1: MỞ ĐẦU 1.1 Tính cấp thiết đề tài Sùng khoai lang (SKL) đối tượng gây hại quan trọng vùng trồng khoai lang nhiều nước giới Tại ĐBSCL, diện tích trồng khoai lang ngày phát triển, huyện Bình Tân, tỉnh Vĩnh Long trở thành vùng trồng khoai lang lớn nhất, diện tích năm 2014 (10.671,6 ha), sản lượng năm 2014 (307.602 tấn) Trong trình canh tác, SKL trùng gây hại từ lúc khoai hình thành củ đến thu hoạch đồng sau thu hoạch ảnh hưởng đến suất chất lượng củ Sùng chủ yếu gây hại giai đoạn ấu trùng, thiệt hại từ 35-95% suất Việc phòng trừ SKL chủ yếu dựa vào thuốc trừ sâu hóa học, nơng dân phải phun thuốc liên tục nhiều lần suốt vụ Do sùng đục vào bên củ nên biện pháp hóa học khơng ảnh hưởng môi trường người mà hiệu khơng cao tốn chi phí Do đó, việc nghiên cứu áp dụng biện pháp sinh học an toàn, thân thiện với môi trường sinh thái để quản lý SKL theo hướng hạn chế thay dần việc áp dụng thuốc trừ sâu hóa học cần thiết Trong việc tìm phương pháp để quản lý lồi gây hại biện pháp sử dụng bẫy pheromone giới tính đáp ứng nhu cầu So với thuốc trừ sâu pheromone giới tính có tính chọn lọc cao không ảnh hưởng tới thiên địch Nấm ký sinh côn trùng phát triển nhiều nước tác nhân phòng trừ sinh học trùng, khắc phục nhược điểm thuốc trừ sâu hóa học gây Trong đó, nấm xanh (Metarhizium anisopliae) nhà khoa học nghiên cứu ứng dụng phòng trừ nhiều sâu hại trồng Tuy nhiên, hiệu nấm xanh SKL nghiên cứu đến Trên sở đó, đề tài thực nhằm giới thiệu biện pháp thân thiện, an tồn với mơi trường để phổ biến áp dụng pheromone giới tính tổng hợp nấm ký sinh xem công cụ hữu hiệu quản lý gây hại SKL ĐBSCL góp phần giảm thiểu việc sử dụng thuốc trừ sâu hóa học 1.2 Mục tiêu nghiên cứu - Tổng hợp, điều chế mồi pheromone giới tính SKL theo hướng đơn giản, rẽ tiền, cho hiệu suất cao, phù hợp với điều kiện phòng thí nghiệm - Xác định lồi nấm ký sinh có hiệu lực phòng trị SKL cao điều kiện phòng thí nghiệm - Đánh giá hiệu phòng trị pheromone giới tính tổng hợp nấm ký sinh SKL điều kiện đồng 1.3 Đối tƣợng phạm vi nghiên cứu * Đối tượng nghiên cứu - Côn trùng gây hại: Sùng khoai lang (Cylas formicarius Fabricius) - Cây trồng: khoai lang giống Tím Nhật, Trắng Sữa * Phạm vi nghiên cứu - Thực thí nghiệm phòng thí nghiệm Bộ môn Bảo vệ Thực vật, Khoa Nông nghiệp Sinh học ứng dụng, Trường Đại học Cần Thơ - Thực thí nghiệm ngồi đồng số ruộng khoai lang nơng dân huyện Bình Tân Bình Minh, Vĩnh Long, huyện Cù Lao Dung, Sóc Trăng, huyện Duyên Hải, Trà Vinh, huyện Tri Tôn, An Giang 1.4 Những điểm luận án - Đề tài cơng trình xây dựng qui trình tổng hợp, điều chế áp dụng pheromone giới tính để phòng trị SKL theo hướng đơn giản, rẽ tiền, có hiệu cao, phù hợp với điều kiện ĐBSCL, tạo sản phẩm pheromone giới tính có độ tinh khiết cao, sử dụng hóa chất qui trình tổng hợp an tồn so với qui trình tổng hợp trước - Ứng dụng sinh học phân tử việc xác định loài nấm xanh (Metarhizium anisopliae) ký sinh trùng thu thập ngồi tự nhiên dựa vào giải trình tự vùng ITS-rDNA so với mẫu phân lập giới từ sở liệu ngân hàng gen - Dựa vào kết tìm đề tài mở hướng sử dụng pheromone giới tính kết hợp với nấm xanh phòng trị SKL có hiệu bền vững nhằm giảm thiểu thay dần việc sử dụng thuốc trừ sâu hóa học 1.5 Ý nghĩa khoa học thực tiễn luận án * Ý nghĩa khoa học - Thông qua báo cáo khoa học, cung cấp thêm sở liệu nghiên cứu ứng dụng pheromone giới tính SKL ngồi nước - Nâng cao lực nghiên cứu khoa học cho cán tham gia đề tài - Cung cấp thông tin khoa học cho việc cập nhật bổ sung kiến thức giảng dạy lĩnh vực Sinh thái học hóa chất ứng dụng sản xuất nông nghiệp * Ý nghĩa thực tiễn - Xây dựng qui trình tổng hợp pheromone giới tính SKL theo hướng đơn giản, giá thành rẽ, hiệu suất cao, phù hợp với điều kiện phòng thí nghiệm - Xây dựng qui trình áp dụng bẫy pheromone giới tính SKL ngồi đồng theo hướng đơn giản, rẽ tiền, hiệu cao, phù hợp với điều kiện ĐBSCL - Áp dụng pheromone giới tính kết hợp với nấm xanh cho hiệu phòng trị SKL tương đương so với tập qn phòng trị sùng nơng dân - Khi thu hoạch, ruộng khoai lang có áp dụng bẫy pheromone giới tính tổng hợp kết hợp với nấm xanh có tỉ lệ thiệt hại củ thấp tương đương so với đối chứng (nông dân) Có thể tập huấn chuyển giao qui trình cho nông dân trồng khoai lang ứng dụng quản lý SKL ngồi đồng - Góp phần làm giảm thiểu lượng thuốc trừ sâu hóa học sử dụng vùng canh tác khoai lang; an toàn cho người mơi trường sinh thái - Góp phần tăng thu nhập cho người trồng khoai lang thông qua việc giảm chi phí mua thuốc trừ sâu hóa học cơng lao động để phòng trị SKL Chƣơng 2: TỔNG QUAN TÀI LIỆU 2.1 Tập quán sinh sống cách gây hại sùng khoai lang Các giai đoạn sinh trưởng SKL sinh sống ký chủ, ấu trùng thành trùng gây hại củ dây khoai Thiệt hại chủ yếu ấu trùng phát triển củ thiệt hại suất, lên đến 90% (Sutherland, 1986) Thành trùng có xu tính yếu ánh nắng, ban ngày chúng thường lẫn trốn tia nắng trực xạ (Nguyễn Đức Khiêm, 2006) Hoạt động bay di chuyển sùng có liên quan đến tuổi thọ, giới tính thiếu thức ăn Sùng đực có khả bay cao nhiều so với sau thoát khỏi củ khoai Sự di chuyển sùng đực cao nhiều so với Sau thu hoạch, sùng sống tiếp tàn dư khoai (thân, củ) trở thành nguồn lưu tồn lây lan cho vụ sau, ruộng trồng khoai liên tục nhiều năm thường bị sùng gây hại nặng (Talekar, 1983) Sùng thường phân bố theo mùa vụ chủ yếu Vào đầu vụ, ấu trùng tìm thấy thân dây, đến cuối vụ tìm thấy củ khoai, thích củ khoai, củ nhô khỏi mặt đất hay lộ qua kẻ đất nứt dễ bị sùng gây hại Nếu gây hại sớm, củ không phát triển, bị lép, giảm suất Nếu gây hại trễ, suất không giảm nhiều phẩm chất củ giảm phần thịt xung quanh đường đục bị chuyển sang màu tím, có mùi vị đắng (Nguyễn Văn Huỳnh Lê Thị Sen, 2011) 2.2 Tình hình nghiên cứu ứng dụng pheromone giới tính SKL Pheromone giới tính SKL Heath et al (1986) xác định có thành phần hợp chất (Z)-3-dodecenyl-(E)-2-butenoate sùng tiết để thu hút sùng đực tổng hợp thành công đường thông qua phản ứng bắt cặp từ chất ban đầu Ethylene oxide (Heath et al., 1986) Sau đó, Mithran Subbaraman (1999) tổng hợp thành công hợp chất từ chất ban đầu Oleic acid với đường thông qua phản ứng Wittig gồm bước Tại Nam Florida, Jansson et al (1989) xác định tiềm pheromone giới tính tổng hợp hấp dẫn sùng đực để theo dõi biến động mật số quần thể SKL C formicarius Pheromone giới tính tổng hợp dùng làm bẫy quấy rối bẫy tập hợp chứng tỏ tiềm to lớn quản lý quần thể SKL (C formicarius) Đài Loan (Hwang and Hung, 1991; Hwang, 2000), Ấn Độ (Pillai et al., 1993), Nhật Bản (Yasuda, 1995) Pheromone giới tính SKL nghiên cứu điều kiện đồng (Heath et al., 1991; Jansson et al., 1991) Jansson et al., (1991) cho sùng đực nhạy cảm với pheromone giới tính tiết ra, cần hàm lượng nhỏ thu hút số lượng lớn sùng đực đêm Jansson et al (1992) xác định bẫy dạng phễu bẫy kiểu Unitrap bắt dính sùng đực nhiều so với kiểu hình nang có mái che hình nón Số lượng sùng đực bắt dính cao 60 con/bẫy/đêm Đánh giá hiệu hấp dẫn 10 loại bẫy pheromone giới tính kiểm soát SKL C formicarius Jackson Bohac Nam Carolina từ 2001-2002 loại bẫy nước với xà phòng đạt hiệu cao so với loại bẫy khác (Jackson and Bohac, 2007) Huỳnh Thị Ngọc Linh ctv (2012) bẫy nước với xà phòng có hiệu lực giết sùng tốt điều kiện đồng Heath (1992) đánh giá thời gian hấp dẫn mồi pheromone ruộng khoai Okinawa, cho thấy tuýp cao su (mồi) với lượng mg pheromone hấp dẫn sùng đực kéo dài tháng (Braun and Van De Fliert, 1999) Khi áp dụng pheromone bẫy/1.000 m2 phòng trị sùng Đài Loan làm giảm thiệt hại sùng gây từ 57-65% (Hwang, 2000) Kakizaki (2007) khẳng định pheromone giới tính tổng hợp với mật độ 4-25 bẫy/ha xung quanh ruộng khoai làm giảm đáng kể mật số sùng đực Nhật Ấn Độ Ở Việt Nam, kết đồng tỉnh Thanh Hóa, Hà Nội, Bắc Giang Hà Tây năm 2002 cho thấy bẫy pheromone giới tính tổng hợp có khả hấp dẫn sùng cao, số lượng sùng đực vào bẫy trung bình 213 con/bẫy/ngày (Nguyễn Văn Đĩnh, 2002) Bẫy pheromone giới tính có triển vọng khảo sát diễn biến mật số quần thể sùng suốt vụ Ruộng khoai có đặt bẫy pheromone giới tính tỉ lệ giới tính quần thể sùng có khuynh hướng nghiêng phía tỉ lệ bắt cặp sùng giảm dần Mật số sùng giảm nhiều ruộng đặt bẫy, sùng đực bị tiêu diệt nhiều nên hạn chế bắt cặp với sùng Cho thấy đặt bẫy pheromone tập hợp có nhiều triển vọng quản lý SKL đồng (Yasuda, 1995) 2.3 Đặc điểm ứng dụng nấm ký sinh côn trùng Nấm ký sinh trùng lồi nấm lây nhiễm bệnh lên côn trùng khỏe mạnh, gây bệnh tiêu diệt ký chủ (Samson et al., 1988) Nhiều nấm ký sinh côn trùng ứng dụng rộng rãi đấu tranh sinh học kiểm soát dịch hại, phổ biến loài Beauveria bassiana Metarhizium anisopliae Nấm xanh M anisopliae có bào tử màu xanh lục, xanh gọi nấm lục cương Nấm tìm thấy khắp châu lục với 200 loài côn trùng ký chủ (Ferron, 1978) Khi bào tử nấm xanh dính vào trùng, gặp điều kiện nhiệt độ, ẩm độ thích hợp, nẩy mầm mọc xuyên qua lớp vỏ kitin trùng hình thành độc tố trình phát triển (Phạm Thị Thùy, 2004) Điều kiện thích hợp cho nấm xanh phát triển 25-300C 80-90% Tại Đài Loan, Kao et al (1998) nấm B bassiana phân lập từ đất canh tác sử dụng phòng trị SKL Ở ngồi đồng, phun dung dịch B bassiana với 1,6x104 bào tử/ml thời điểm trồng hay giai đoạn tạo củ rãi nấm (109 bào tử/g) thời điểm trồng có hiệu phòng trị SKL Jansson (1992) có chủng B bassiana gây bệnh SKL C formicarius phân lập Cuba vào 1984 Hiệu nấm B bassiana kết hợp pheromone giới tính quản lý SKL Yasuda (1999) Nhật Bản cho thấy kết hợp bẫy pheromone giới tính với nấm B bassiana ruộng khoai nơi đặt bẫy có tỉ lệ sùng đực chết cao nhiễm nấm 96,2% thời điểm 21 NSKXL Tuy nhiên, điều kiện đồng, nấm ký sinh tạo thành dịch bệnh SKL (Capinera, 1998) Tại Việt Nam, Nguyễn Văn Đĩnh (2005) ghi nhận nấm B bassiana ký sinh phổ biến SKL vào tháng Xuân Hè ruộng khoai tỉnh Hà Tây, Hà Nội, Bắc Giang, Thanh Hóa Nấm B bassiana sử dụng nồng độ 3-5x106-108 bào tử/ml phòng trị SKL đạt hiệu từ 58,9-75,6% sau 7-10 ngày phun phần lớn sùng chết có diện nấm B bassiana mọc trở lại (Phạm Thị Thùy, 2004) Khảo sát chủng B bassiana chủng M anisopliae lên khả sinh sản sức sống trứng C puncticollis PTN Ondiaka et al (2008) cho thấy phương pháp sử dụng để chủng nhiễm nấm phun dung dịch nấm với 1x107 bào tử/ml tháp phun Bergerjon, tỉ lệ sùng chết từ 77,5-84,2% với chủng B bassiana từ 62,5-89,2% với chủng M anisopliae (26 NSKXL) Khi lây nhiễm với nấm M anisopliae 3x107 1x108 bào tử/ml sùng tiêu thụ thức ăn so với nấm B bassiana nồng độ Villacarlos Polo (1989) tiềm nấm M anisopliae phòng trị SKL nhà lưới đồng Visca, Baybay, Leyte, Philippines cho thấy tỉ lệ củ khoai không bị nhiễm sùng NT xử lý nấm M anisopliae cao so với đối chứng không xử lý NT xử lý thuốc Carbofuran Khi gặp ẩm độ mật số sùng cao, nấm M anisopliae ký sinh, lây nhiễm sùng đạt tỷ lệ chết cao tương tự nấm B bassiana Chƣơng 3: NỘI DUNG VÀ PHƢƠNG PHÁP NGHIÊN CỨU 3.1 Nội dung phƣơng pháp nghiên cứu Nghiên cứu gồm có nội dung trình bày theo nội dung phương pháp cụ thể bên 3.1.1 Điều tra tình hình canh tác khoai lang khảo sát trùng gây hại thiên địch ruộng khoai lang Bình Tân, Vĩnh Long, năm 2010 Nhằm tìm hiểu kỹ thuật canh tác, tình hình dịch hại khoai lang phòng trị nơng dân, hiểu biết pheromone giới tính Điều tra vấn trực tiếp 100 nơng hộ có diện tích canh tác khoai lang tối thiểu 1.000 m2 theo phiếu điều tra soạn sẳn huyện Bình Tân, Vĩnh Long phân bố xã Thành Đông (40), Thành Trung (30), Tân Thành (30) Nội dung vấn kỹ thuật canh tác, tình hình dịch hại, SKL, biện pháp phòng trị, hiểu biết nơng dân pheromone giới tính hấp dẫn SKL Khảo sát thực tế ngòai đồng ruộng khoai lang xã Thành Đông Thành Trung, huyện Bình Tân ghi nhận thành phần côn trùng gây hại thiên địch ruộng khoai định kỳ tuần/lần suốt vụ, ruộng điều tra chọn điểm cố định theo đường chéo góc, xác định mức độ phổ biến lồi 3.1.2 Nghiên cứu pheromone giới tính tổng hợp sùng khoai lang 3.1.2.1 Tổng hợp pheromone giới tính SKL phòng thí nghiệm Con đường tổng hợp thành hợp chất (Z)-3-dodecenyl (E)-2-butenoate thông qua phản ứng Wittig Sau Brom hóa nhóm chức -OH hợp chất 1,3-propanediol (1), nhóm chức -OH lại bảo vệ Ether hợp chất Dimethoxymethane (-MOM) (2) Đun hợp chất (2) với Tri phenylphosphine Benzen 1100C 48 thu muối Phosphorane (3) Hợp chất (3) kết hợp với chất 1-nonanal thông qua phản ứng Wittig với Sodiumbis(trimethylsilyl) amide làm môi trường bazơ thu hợp chất MOM-ether hợp chất (Z)-3-dode cenyl-1-ol (4) Sau loại bỏ bảo vệ nhóm chức OH hợp chất MOMether, thu hợp chất (Z)-3-dodecenyl-1-ol (5), sau hợp chất (5) kết hợp với hợp chất Crotonyl chloride phản ứng ester hóa dung mơi CH2Cl2 mơi trường kiềm chất xúc tác Pyridine để tạo thành hợp chất (Z)-3dodecenyl (E)-2-butenoate (6), pheromone giới tính tổng hợp (3Z-12:E2) Sản phẩm tổng hợp pha lỗng dung mơi n-Hexane nồng độ 10 mg/ml Dùng bơm microsyringe có dung tích 25 µl hút dung dịch pha lỗng bơm vào tuýp cao su đưa vào tủ hút khoảng 10 phút để dung mơi bay Sau đó, cao su không thêm chất ổn định hay chất chống oxy hóa nào, gói lại giấy nhơm, dán nhãn lưu trữ điều kiện lạnh 3.1.2.2 Ứng dụng pheromone giới tính tổng hợp ngồi đồng Mục tiêu: nhằm đánh giá khả hấp dẫn hiệu pheromone giới tính tổng hợp ruộng khoai lang huyện Bình Tân, Vĩnh Long a) Khảo sát khả hấp dẫn pheromone giới tính tổng hợp SKL điều kiện ngồi đồng huyện Bình Tân, Vĩnh Long, năm 2010 * Đánh giá hiệu hấp dẫn pheromone giới tính tổng hợp nồng độ khác SKL đồng Nhằm xác định nồng độ pheromone giới tính tổng hợp cho hiệu hấp dẫn cao sùng khoai lang điều kiện đồng Thí nghiệm gồm nghiệm thức, lần lặp lại Nghiệm thức từ A-1 đến A-6 dãy nồng độ từ 0,1-1 mg Z3-12:E2/bẫy đối chứng n-Hexane * Khảo sát ảnh hưởng kiểu tuýp mồi lên hiệu hấp dẫn pheromone giới tính sùng khoai lang đồng So sánh kiểu tuýp cao su Aldrich với ống cao su non Việt Nam làm mồi phóng thích pheromone giới tính tổng hợp nhằm tìm vật liệu thay tuýp cao su ngoại nhập theo hướng đơn giản, rẽ tiền, hiệu cao Thí nghiệm gồm nghiệm thức, lần lặp lại, kiểu tuýp mồi Aldrich ống cao su non (ghép cà chua) chứa 0,5 mg/mồi, đối chứng bẫy mồi * Khảo sát ảnh hưởng kiểu bẫy lên khả hấp dẫn pheromone giới tính tổng hợp sùng khoai lang đồng Nhằm so sánh kiểu bẫy để chọn kiểu bẫy cho hiệu hấp dẫn cao sùng đực, làm sở khuyến cáo áp dụng đồng Thí nghiệm gồm nghiệm thức, lần lặp lại, có kiểu bẫy (bẫy nước bẫy dính), kiểu bẫy gồm nghiệm thức mồi pheromone (0,3 mg/mồi) mồi dung môi n-Hexane (0,3 ml/mồi) * Khảo sát ảnh hưởng màu sắc bẫy lên khả hấp dẫn pheromone giới tính tổng hợp sùng khoai lang đồng Nhằm khảo sát hiệu lực hấp dẫn mồi pheromone giới tính kết hợp với màu sắc bẫy sùng đực ngồi đồng, làm sở chọn lựa phù hợp Thí nghiệm gồm nghiệm thức, lần lặp lại, bẫy nước, bẫy dán băng keo màu xanh, bẫy dán băng keo màu vàng, bẫy chai bình thường làm đối chứng * Khảo sát ảnh hưởng độ cao đặt bẫy lên khả hấp dẫn pheromone giới tính tổng hợp SKL đồng Nhằm xác định độ cao đặt bẫy thích hợp cho hiệu hấp dẫn sùng đực vào bẫy nhiều nhất, làm sở ứng dụng đặt bẫy pheromone ngồi đồng Thí nghiệm gồm nghiệm thức, lần lặp lại, Đặt bẫy đứng, cửa bẫy ngang tán khoai, độ cao cửa bẫy tăng dần lên tương ứng với NT khảo sát b) Khảo sát diễn biến mật số quần thể SKL pheromone giới tính tổng hợp ngồi đồng tỉnh Vĩnh Long, năm 2010 Nhằm khảo sát diễn biến quần thể sùng suốt 12 tháng qui luật phát sinh sùng, thời gian cao điểm góp phần quản lý SKL có hiệu Địa điểm: thực địa điểm tương ứng với ruộng khoai lang - Địa điểm 2: bố trí từ ngày 21/7/2009 đến ngày 20/8/2010 - Địa điểm 4: bố trí từ ngày 20/8/2009 đến ngày 20/8/2010 - Địa điểm 1: xã Đơng Bình, huyện Bình Minh, Vĩnh Long, giống khoai Trắng Sữa, diện tích 4.000 m2 - Địa điểm 2, 3, 4: xã Thành Lợi, Tân Qi, Tân Hưng, huyện Bình Tân, Vĩnh Long, giống khoai Tím Nhật, diện tích 4.000-12.000 m2 Chỉ tiêu ghi nhận: số lượng sùng đực vào bẫy định kỳ tuần/lần c) Khảo sát hiệu phòng trị sùng khoai lang bẫy tập hợp pheromone giới tính tổng hợp ngồi đồng huyện Bình Tân, Vĩnh Long, năm 2010 Nhằm đánh giá hiệu phòng trị SKL pheromone giới tính tổng hợp ngồi đồng, làm sở quản lý SKL thay dần thuốc trừ sâu hóa học Thời gian: thực thí nghiệm tương ứng với vụ khoai lang - Vụ (mùa thuận) từ tháng 01 đến tháng năm 2010 - Vụ (mùa nghịch) từ tháng đến tháng 12 năm 2010 Địa điểm: khu vực chuyên canh khoai lang Tím Nhật Mỗi thí nghiệm gồm NT bố trí ruộng khoai Các khâu kỹ thuật canh tác, chăm sóc, bón phân, tưới nước ruộng giống nhau, khác sử dụng thuốc trừ sâu phòng trị sùng NT A bẫy/1.000 m2, NT B 12 bẫy/ 1.000 m2 NT C đối chứng (theo tập quán nông dân) Các tiêu ghi nhận: điều tra thành phần côn trùng thiên địch, số lượng sùng đực vào bẫy, định kỳ tuần/lần suốt vụ từ 15 NSKT đến thu hóa học chiếm 94,1%, thường sử dụng thuốc hóa học có tính độc cao, phòng trị sùng định kỳ suốt vụ, nên tỉ lệ thiệt hại sùng tương đối thấp Họ cho bệnh phổ biến thối dây chiếm 60%, nơng dân có biết pheromone giới tính chiếm 52%, nơng dân sử dụng mồi pheromone giới tính SKL 4.1.2 Khảo sát ngồi đồng tình hình trùng gây hại thiên địch ruộng khoai lang 4.1.2.1 Thành phần côn trùng gây hại ruộng khoai lang Kết khảo sát ngồi đồng ghi nhận thành phần trùng gây hại diện ruộng khoai lang huyện Bình Tân, Vĩnh Long gồm có 20 lồi trùng nhện hại Trong đó, cánh vảy chiếm đa số (7 loài), cánh cứng (5 loài), cánh (4 loài), cánh tơ (1 loài), cánh thẳng (1 loài), hai cánh (1 loài) nhện hại (1 lồi) Trong đó, sâu ăn tạp, ruồi đục lòn, rầy phấn trắng bọ dưa loài gây hại xuất phổ biến (+++) tần suất xuất cao (100%) ruộng khoai lang 4.1.2.2 Thành phần thiên địch ruộng khoai lang Thành phần thiên địch ruộng khoai lang huyện Bình Tân, Vĩnh Long có 10 lồi thiên địch diện Bao gồm nhện ăn thịt thuộc nhện lớn chiếm đa số, loài (nhện lùn, nhện chân dài, nhện lưới, nhện linh miêu, nhện sói, nhện nhảy) Bộ cánh cứng loài (kiến ba khoang, bọ rùa) Bộ cánh cứng lồi (bọ xít mù xanh) cánh da lồi (bọ kìm) Trong đó, kiến ba khoang nhện lùn loài thiên địch phổ biến (+++) tần suất xuất cao (100%) ruộng khoai lang 4.2 Nghiên cứu pheromone giới tính tổng hợp sùng khoai lang 4.2.1 Tổng hợp hợp chất (Z)-3-dodecenyl (E)-2-butenoate (Z3-12:E2) pheromone giới tính sùng khoai lang phòng thí nghiệm Con đường tổng hợp thành hợp chất (Z)-3-dodecenyl (E)-2-butenoate (Z3-12:E2) trình bày sơ đồ bên (Hình 4.1) gồm bước sau: a HO c b OH HO Br MOMO (3) (2) (1) Br d MOMO HO (4) e (5) O O (6) Hình 4.1: Con đường tổng hợp hợp chất (Z)-3-dodecenyl (E)-2-butenoate, pheromone giới tính sùng khoai lang a = HBr/Toluene; b = DMM/LiBr/p-TsOH; c = PPh3/Sodium Bis(trimethylsilyl)amide/Heptanal/THF; d = 0,5 N HCl/MeOH; e = Crotonyl chloride/Pyridine/CH2Cl2 10 Bước 1: Brom hóa nhóm -OH hợp chất 1,3-propanediol (1) hợp chất HBr môi trường dung môi Toluene thu hợp chất (2) Bước 2: Bảo vệ nhóm -OH lại Ether Dimethoxy-methane (-OMOM) (2) Đun hợp chất (2) với Triphenylphosphine dung môi Benzen 1100C 48 thu muối Phosphorane, hợp chất (3) Bước 3: Sử dụng phản ứng Wittig liên kết hợp chất (3) với 1-nonanal Sodium Bis(trimethylsilyl)amide sử dụng làm môi trường bazơ dung môi THF thu MOM-Ether hợp chất (Z)-3-dodecenyl-1-ol (4) Bước 4: Loại bỏ bảo vệ nhóm -OH MOM-Ether cách khuấy hợp chất (4) với dung dịch HCl liên tục 24 thu hợp chất (5) Bước 5: Hợp chất (Z)-3-dodecenyl-1-ol (Z3-12:OH) (5) kết hợp với hợp chất Crotonyl Chloride phản ứng ester hóa dung mơi CH2Cl2 mơi trường kiềm Pyridine tạo thành hợp chất (Z)-3-dodecenyl (E)-2-butenoate (Z3-12:E2) (6) Con đường tổng hợp thông qua phản ứng Wittig với hợp chất ban đầu hợp chất 1,3-propanediol 1-nonanal Trong quy trình này, điều chỉnh phản ứng Wittig để chọn lọc cấu hình Z (cis) nối đôi phân tử theo Lê Văn Vàng ctv (2006) Vì vậy, cần thay đổi điều kiện phản ứng thay đổi chất phản ứng n-Butyllithium hợp chất Sodium Bis(trimethylsilyl) amide, thu sản phẩm Z3-12:OH có cấu hình Z (cis) mơ tả Le Van Vang et al (2008) Để khắc phục nhược điểm phản ứng Wittig, chọn hợp chất phản ứng ban đầu độc hại hợp chất 1,3-propanediol 1-nonanal với nhóm chức OH bảo vệ OMOM ether sử dụng hợp chất Sodiumbis(trimethylsilyl)amide tạo môi trường kiềm cho phản ứng Wittig, thu sản phẩm Z3-12:OH có cấu hình Z (cis), thêm công đoạn phân tách tinh lọc sản phẩm Z312:OH để chọn lọc cấu hình Z Hiệu suất tổng hợp tồn quy trình thơng qua bước thực 62% Quy trình rút ngắn cơng đọan tổng hợp, bước (con đường tổng hợp Mithran Subbaraman (1999) có bước), tốn chi phí hóa chất, dung mơi, độ tinh khiết sản phẩm cuối kiểm định Sắc ký khí khối phổ (GC-MS) đạt 99% Như vậy, đường tổng hợp thành hợp chất (Z)-3-dodecenyl-(E)2-butenoate (Z3-12:E2) thành công thông qua phản ứng Wittig khắc phục nhược điểm trình bày Thẩm định cấu trúc hợp chất (Z)-3-dodecenyl (E)-2-butenoate Sử dụng cột thủy tinh phân tích DB-23 chương trình nhiệt độ sau: bắt đầu 800C (trong phút), tiếp tục tăng lên 2100C với tốc độ 80C/phút giữ 2100C 10 phút hợp chất Z3-12:E2 tổng hợp có thời gian lưu 14,14 phút với độ tinh khiết hợp chất biểu 100% Phổ khối lượng với ion phân tử lượng M+ m/z 252 ion phân rã m/z 166 (M-butenoic acid), 54, 69, 82, 96, 109, 124 136 (hình thành 11 phân tách nhóm CH3 -CH2) chứng tỏ hợp chất ester mạch thẳng 16 carbon chứa nối đôi phân tử Điều chế mồi pheromone giới tính sùng khoai lang Điều chế mồi pheromone giới tính tổng hợp SKL điều kiện phòng thí nghiệm mơ tả theo bước sau: Bước 1: Pha loãng hợp chất (Z)-3-dodecenyl-(E)-2-butenoate dung môi n-Hexane tinh khiết nồng độ 10 mg/ml Bước 2: Dùng microsyringe hút 30 μl dung dịch pha loãng (Bước 1), tương ứng với 0,3 mg hợp chất (Z)-3-dodecenyl-(E)-2-butenoate, bơm vào túyp cao su để làm mồi pheromone giới tính Bước 3: Cho tuýp cao su (Bước 2) bơm hợp chất (Z3-12:E2) (mồi pheromone giới tính tổng hợp) vào bao giấy nhơm hàn kín lại, bảo quản điều kiện lạnh tủ lạnh sử dụng 4.2.2 Ứng dụng pheromone giới tính sùng khoai lang ngồi đồng 4.2.2.1 Khảo sát khả hấp dẫn pheromone giới tính tổng hợp SKL điều kiện đồng huyện Bình Tân, tỉnh Vĩnh Long a) Khảo sát hiệu hấp dẫn pheromone giới tính tổng hợp khối lượng sản phẩm khác SKL đồng Kết cho thấy NT có mồi pheromone dãy khối lượng sản phẩm (0,1, 0,3, 0,5, 0,7 1,0 mg/bẫy) cho hiệu lực hấp dẫn sùng cao ruộng khoai Số lượng sùng đực vào bẫy NT dao động từ 21,7-44 con/bẫy/tuần tương đương nhau, khối lượng sản phẩm/bẫy cao có số lượng sùng đực vào bẫy cao hơn, nhiên chưa có khác biệt rõ rệt NT pheromone b) Khảo sát ảnh hưởng kiểu tuýp mồi lên hiệu hấp dẫn pheromone giới tính SKL đồng Khi so sánh khối lượng SP 0,3 mg/mồi cho thấy kiểu tuýp mồi Aldrich kiểu tuýp mồi Việt Nam (ống cao su non) cho hiệu hấp dẫn sùng đực tương đương (TB 109 146,5 con/bẫy/tuần) Chứng tỏ ống cao su non vật liệu có tác dụng kìm giử phóng thích pheromone giới tính tổng hợp cho hiệu hấp dẫn sùng đực cao đồng c) Khảo sát ảnh hưởng kiểu bẫy lên khả hấp dẫn pheromone giới tính tổng hợp SKL đồng Kết cho thấy hiệu hấp dẫn sùng đực bẫy nước bẫy dính (109 68 con/bẫy/tuần) tương đương Tuy nhiên, số lượng sùng đực vào bẫy thực tế bẫy nước cao gấp 1,6 lần so với bẫy dính Kết phù hợp với nghiên cứu Smit et al (1997) cho thấy bẫy nước dạng chai tròn cao cho hiệu hấp dẫn sùng cao d) Khảo sát ảnh hưởng màu sắc bẫy lên khả hấp dẫn pheromone giới tính tổng hợp SKL đồng 12 Kết cho thấy số lượng sùng đực vào bẫy bình thường, bẫy dán keo màu xanh bẫy dán keo màu vàng tương đương nhau, dao động từ 115,5172,3 con/bẫy/tuần Chứng tỏ màu xanh màu vàng không ảnh hưởng lên hiệu lực hấp dẫn sùng đực pheromone giới tính tổng hợp e) Khảo sát ảnh hưởng độ cao đặt bẫy lên khả hấp dẫn pheromone giới tính tổng hợp SKL ngồi đồng Khảo sát cho thấy số lượng sùng đực vào bẫy NT có độ cao đặt bẫy từ m (cửa bẫy ngang tán lá) đến 30 cm, 50 cm m (cửa bẫy cao tán lá) tương đương nhau, dao động từ 22,9-39,6 con/bẫy/tuần Chiều cao đặt bẫy ruộng khoai khơng có ảnh hưởng tới khả hấp dẫn sùng đực bẫy pheromone, chọn đặt bẫy độ cao cm (ngang tán khoai) tốt 4.2.2.2 Khảo sát diễn biến mật số quần thể sùng khoai lang pheromone giới tính tổng hợp ngồi đồng tỉnh Vĩnh Long 4.2: Diễn biến mật số quần thể SKL địa điểm khảo sát từ 05/8/2009 đến 03/9/2010 phức tạp, không giống nhau, mật số sùng đực vào bẫy dao động từ 300-2.000 con/bẫy/2 tuần Riêng địa điểm xã Thành Lợi tạo cao điểm lớn lên đến 8.013 con/bẫy/2 tuần vào đầu tháng 4/2010 cao điểm khác thấp vào đầu tháng 10 cuối tháng 12/2009 với số lượng sùng đực vào bẫy từ 2.021-2.303 con/bẫy/2 tuần Còn địa điểm xã Đơng Bình, Tân Hưng Tân Quới chủ yếu có cao điểm từ đầu tháng đến tháng 10/2009 với số lượng 13 sùng đực vào bẫy dao động từ 1.601-2.770 con/bẫy/2 tuần Nhìn chung, diễn biến mật số SKL thời gian 12 tháng theo dõi xã thuộc tỉnh Vĩnh Long không phụ thuộc vào lượng mưa nhiệt độ môi trường mà chủ yếu phụ thuộc vào thời vụ khoai lang đồng ruộng mật số sùng thường tăng nhanh gần thu hoạch ruộng khoai lân cận thu hoạch Mật số sùng giảm xuống nông dân chuyển đổi cấu trồng, luân canh với lúa 4.2.2.3 Khảo sát hiệu phòng trị sùng khoai lang bẫy tập hợp pheromone giới tính tổng hợp ngồi đồng huyện Bình Tân, Vĩnh Long Ở vụ 1, số lượng sùng đực vào bẫy NT 12 bẫy/1.000 m2 cao so với NT bẫy/1.000 m2 Ở vụ 2, số lượng sùng vào bẫy NT bẫy/1.000 m2 cao so với NT 12 bẫy/1.000 m2, giai đọan đầu vụ mật số sùng tương đối thấp gia tăng nhanh gần thu hoạch, diễn biến mật số sùng qui luật phát sinh suốt vụ khoai Cho thấy giai đoạn đầu khoai phát triển thân, sùng xuất ruộng với mật số thấp, đến 2,5 tháng (75 NSKT) khoai bắt đầu tạo củ lớn dần lên mật số sùng gia tăng nhanh Do sùng thích gây hại củ dây khoai, giai đoạn củ lớn gần thu hoạch mật số sùng tăng lên nhanh tạo áp lực sùng cao vào thời điểm cuối vụ Thành phần côn trùng gây hại diện ruộng vụ có 16 lồi, đối chứng có số lồi so với NT bẫy 12 bẫy/1.000 m2 (tương ứng 10 loài so với 15 loài 12 loài), có lồi sâu ăn tạp rầy phấn trắng xuất phổ biến NT, sùng xuất tập quán cư trú sùng Ở vụ có 18 lồi, đó, NT bẫy có 14 lồi, NT 12 bẫy có 16 lồi đối chứng có 13 lồi, có lồi sâu ăn tạp, rầy phấn trắng dòi đục lòn xuất nhiều phổ biến Thành phần thiên địch ăn thịt diện vụ lòai vụ 10 lòai, nhện lùn kiến ba khoang lòai có mức độ phổ biến cao nhất, diện NT, lòai thiên địch quan trọng ruộng khoai huyện Bình Tân Số lồi thiên địch NT đặt bẫy cao so với đối chứng Kết khảo sát vụ cho thấy tỉ lệ củ bị sùng gây hại NT bẫy 12 bẫy thấp 1%, tương đương với đối chứng, khơng đáng kể Ở vụ có tỉ lệ củ bị sùng hại NT bẫy 12 bẫy chênh lệch nhiều so với đối chứng, NT 12 bẫy có tỉ lệ củ bị hại tương đương với đối chứng thu hoạch Do sùng thích gây hại củ hơn, nên tập trung phòng trị sùng vào giai đoạn cuối quan trọng Việc áp dụng biện pháp đặt bẫy giúp giảm chi phí sử dụng thuốc trừ sâu hóa học Chứng tỏ bẫy pheromone có khả thay dần thuốc trừ sâu hóa học để quản lý gây hại SKL Có thể khuyến cáo áp dụng 6-12 bẫy/1.000 m2 tùy theo áp lực sùng đồng ruộng 4.3 Nghiên cứu nấm ký sinh sùng khoai lang PTN 4.3.1 Phân lập định danh loài từ chi nấm Metarhizium ký sinh côn trùng theo phƣơng pháp phân loại truyền thống 14 Trên môi trường PDA, khuẩn lạc ban đầu có sợi nấm màu trắng, hình thành bào tử chuyển sang màu xanh lục tối Khuẩn lạc xốp, mịn, phân bố tỏa tròn theo vòng đồng tâm bề mặt môi trường nuôi cấy Sợi nấm Metarhizium phát triển bề mặt trùng có màu trắng đến xanh lục Bào tử đính đơn bào, hình trụ,hạt đậu Khi trùng chết thấy lớp bào tử tạo thể lớp bột màu xanh Sau quan sát bào tử cành bào đài qua SEM cho thấy MPL có bào tử dạng hình trụ cành bào đài, có phân nhánh dạng thể bình gắn bào tử Dựa vào khóa phân loại Barnett Barry (1998) kết luận ban đầu MPL nấm Metarhizium loài M anisopliae Kết phù hợp với nghiên cứu Phạm Thị Thùy (2004); Luangsa-ard et al (2006) Samson (1981) Kết phân loại cho thấy quần thể nấm Metarhizium tự nhiên có lồi nấm M anisopliae diện phổ biến địa điểm thu mẫu Houping et al (2003) cho biết mô tả đặc điểm hình thái nấm Metarhizium nhận thấy yếu tố nhiệt độ, thành phần môi trường nuôi cấy lần cấy truyền ảnh hưởng đến hình dạng, màu sắc khuẩn lạc Do vậy, cần phải có phương pháp khác để xác định tính xác phương pháp phân loại truyền thống 4.3.2 Phân loại, xác định lồi Metarhizium dựa vào trình tự vùng ITS-rDNA theo phƣơng pháp sinh học phân tử Trình tự vùng ITS -rDNA MPL Metarhizium phân tích so sánh với trình tự lồi Metarhizium từ sở liệu ngân hàng gen để xác định loài MPL Phản ứng PCR với primer ITS1 ITS4 khuyếch đại vùng ITS-rDNA MPL cho thấy vùng ITS-rDNA có chiều dài 500 bp phân tích điện di Agarose 1% Sản phẩm PCR giải trình tự trực tiếp với primer ITS1 ITS4 ghi nhận có khác biệt vùng ITS MPL Mức độ tương đồng MPL VN so với mẫu giới, dao động từ 83,1-99,3% Nhận thấy mẫu Metarhizium phân lập vùng ĐBSCL có tương đồng trình tự DNA cao so với mẫu nấm giới, xác định lồi nấm M anisopliae Qua đó, minh chứng thêm cho xác định MPL Metarhizium nghiên cứu thuộc loài nấm M anisopliae phù hợp với ngân hàng gen chủng nấm giới Tóm lại, kết định danh theo phương pháp phân loại truyền thống dựa vào đặc điểm hình thái học nấm kết sinh học phân tử xác định lồi nấm dựa vào trình tự vùng ITS-rDNA xác định MPL Metarhizium nghiên cứu nhóm với lồi nấm M anisopliae, chưa có diện loài nấm khác khẳng định kết phân loại truyền thống xác Đây sở khoa học để kết luận loài M anisopliae loài nấm phân bố rộng rãi số tỉnh vùng ĐBSCL 4.3.3 Khảo sát hiệu lực mẫu phân lập nấm Metarhizium sùng khoai lang điều kiện phòng thí nghiệm 15 Kết cho thấy MPL Metarhizium ĐBSCL (108 bào tử/ml) cho hiệu lực gây chết SKL cao tương đương qua thời điểm quan sát Các MPL Metarhizium có hiệu lực cao đạt 96% sau ngày xử lý (Bảng 4.1) Bảng 4.1: Hiệu lực gây chết mẫu phân lập Metarhizium thành trùng sùng khoai lang điều kiện phòng thí nghiệm, năm 2011 Độ hữu hiệu (%) MPL vào NSKXL Ma_SAT-CT 7,5 39,0c 97,3 100 Ma_RN-ST 11,7 64,0a 95,4 97,2 Ma_SXL-TV 5,8 54,3ab 97,3 98,3 Ma_RĐV-ST 5,0 20,0d 92,8 98,2 Ma_BD-KG 3,2 51,6b 97,1 98,1 Ma_SKL-VL 6,7 27,3d 95,4 97,2 Ma_RB-CT 7,5 42,9bc 95,7 96,5 CV (%) 34,6 9,6 2,0 1,7 Mức ý nghĩa ns ** ns ns Trong cột, số có chữ theo sau giống khơng khác biệt qua thống kê kiểm định Duncan **: khác biệt mức ý nghĩa 1%; ns: không khác biệt thống kê; MPL: mẫu phân lập nấm xanh; NSKXL: ngày sau xử lý nấm STT Nghiệm thức 4.3.4 Khảo sát hiệu lực gây chết chủng nấm xanh (Ma) mật số bào tử khác sùng khoai lang PTN Khảo sát điều kiện nhiệt độ 250C 300C PTN cho thấy hiệu lực gây chết sùng gần giống nhau, NT Ma-108 Ma-109 cho hiệu lực cao nhanh so với NT lại, nấm xanh phát triển thích hợp khoảng nhiệt độ này, nên cho hiệu lực ký sinh gây chết sùng cao Nhiệt độ yếu tố quan trọng cho sinh trưởng phát triển nấm xanh M anisopliae, nhiệt độ tối ưu thích hợp cho nấm phát triển 25-300C (Phạm Thị Thùy, 2004; Trần Văn Mão, 2002) Với khả thích nghi việc ứng dụng nấm xanh (Ma) phòng trừ sinh học vùng ĐBSCL thuận lợi, có điều kiện thời tiết nóng ẩm, tạo điều kiện thuận lợi cho nấm xanh (Ma) phát triển tốt lưu tồn đồng ruộng, giảm bớt côn trùng gây hại tiếp xúc với bào tử nấm Việc sản xuất nấm xanh có mật số 108 bào tử/ml dễ dàng đơn giản 4.3.5 Khảo sát khả ký sinh nấm xanh (Ma) quần thể sùng khoai lang qua hình thức xử lý khác phòng thí nghiệm Kết cho thấy nấm xanh dạng nấm tươi có khả ký sinh gây chết SKL cao nhanh so với dạng bột khô, tỉ lệ sùng chết gia tăng nhanh đạt 100% từ 12 NSKXL Còn dạng bột khơ có tỉ lệ sùng chết tăng chậm tới 24 NSKXL đạt 100% Nấm xanh với hình thức xử lý rãi nấm có ưu nhanh so với phun nấm, có tỉ lệ chết cao nhanh thấy rõ khác biệt giai đoạn đầu Có thể hình thức rãi nấm, cá thể SKL dễ dàng tiếp xúc với bào tử nấm bề mặt giá thể lớp mụn sơ dừa; với hình thức phun nấm, bào tử nấm 16 hòa vào nước thấm vào lớp mụn sơ dừa nên khó tiếp xúc với cá thể SKL Khảo sát cho thấy dạng nấm tươi có hoạt lực sinh học cao dạng bột khô, phù hợp với nghiên cứu Trần Nam Dương (2010), nhà lưới phun nấm xanh dạng nấm tươi cho hiệu lực gây chết rầy đầu vàng hại mía đạt 73,3% cao so với dạng bột khô đạt 55,9% thời điểm 12 NSKXL Bảng 4.2: Khả ký sinh nấm xanh (Ma) sùng khoai lang qua hình thức xử lý khác điều kiện phòng thí nghiệm, năm 2012 Tỉ lệ (%) sùng chết vào NSKXL Nghiệm thức 12 15 Dạng nấm tươi + rãi 10,67a 79,11a 98,67a 100a 100a Dạng nấm tươi + phun 4,44ab 49,56b 87,56b 97,33a 100a ab c c b Nấm bột khô + rãi 4,89 8,44 17,78 42,67 72,44b b cd c c Nấm bột khô + phun 2,67 5,78 15,78 32,44 57,11c b d d d Đối chứng 0,89 2,67 3,78 4,67 6,67d CV (%) 6,58 5,55 2,69 2,91 5,96 Mức ý nghĩa ** ** ** ** ** Các số cột có chữ theo sau giống khơng khác biệt qua phân tích thống kê 1% kiểm định Duncan; NSKXL:Ngày sau xử lý nấm xanh 4.4 Khảo sát hiệu kết hợp pheromone giới tính tổng hợp với nấm xanh (M anisopliae) phòng trị sùng khoai lang PTN đồng 4.4.1 Khảo sát khả lây lan bệnh sùng đực sau tiếp xúc với pheromone giới tính nấm xanh điều kiện phòng thí nghiệm Kết cho thấy NT dạng nấm tươi dung dịch bào tử nấm có tỉ lệ sùng chết nhanh cao hơn, khác biệt ý nghĩa so với dạng bột khô từ thời điểm NSKT sùng đực vào hộp nhựa Ở thời điểm 6, 9, 12 NSKT, tỉ lệ sùng chết tăng dần theo thời gian có khác biệt ý nghĩa NT Từ thời điểm 15 NSKT sau, tỉ lệ sùng chết NT nấm tươi dung dịch tăng lên nhanh, cao tương đương nhau, đạt 94% Tóm lại, sử dụng pheromone giới tính hấp dẫn sùng đực vào bẫy lây nhiễm nấm xanh theo dạng khác cho hiệu lực gây chết sùng PTN Có thể quần thể sùng chọn ngẫu nhiên từ củ khoai bị nhiễm sùng khơng phân biệt giới tính nên khả nấm xanh lây nhiễm quần thể sùng theo kiểu bắt cầu xảy bắt cặp hay va chạm với hoạt động hàng ngày chúng bên hộp nhựa 4.4.2 Khảo sát ảnh hƣởng pheromone giới tính tổng hợp nấm xanh (Ma) lên khả sinh sản sùng khoai lang bố mẹ PTN Kết khảo sát NT PTN ghi nhận Bảng 4.3 cho thấy: NT A, sùng bố mẹ bình thường có thời gian sống lâu nhất, sùng bố (98,97 ngày), sùng mẹ (97,03 ngày) Do sùng bố mẹ sống lâu, khỏe mạnh nên sinh hệ nhiều (9.915 con/30 cặp) NT B, sùng bố tiếp xúc pheromone sùng mẹ bình thường có thời gian sống ngắn đối chứng (A), sùng bố (87,37 ngày), 17 sùng mẹ (90,03 ngày) gần tương đương Do sùng bố mẹ có thời gian sống ngắn số lượng sùng sinh đợt hơn, hệ sinh thấp (7.636 con/30 cặp), tỉ lệ sức sinh sản sùng bố mẹ giảm so với NT A 22,98% NT C D, sùng bố tiếp xúc pheromone nấm xanh (dung dịch nấm tươi) sùng mẹ bình thường có thời gian sống ngắn, khác biệt so với NT A B, sùng bố (10,8 10,2 ngày), sùng mẹ (18,7 17,1 ngày) gần tương đương, thời gian sống giảm xuống nhiều so với NT A, đáng kể Do sùng bố mẹ có thời gian sống ngắn số lượng sùng sinh chủ yếu đợt (15 ngày đầu tiên), hệ sinh thấp (996 742 con/30 cặp) khả sinh sản sùng bố mẹ giảm nhiều so với NT A (tỉ lệ giảm 89,95% 92,51%) NT E F, sùng bố tiếp xúc với nấm xanh (dung dịch nấm tươi) sùng mẹ bình thường có thời gian sống ngắn khác biệt so với NT A B, NT F khơng khác biệt so với NT C D, nhiên khác biệt so với NT E cao hơn, chênh lệch không nhiều Thời gian sống sùng bố (11,7 10,1 ngày) sùng mẹ (21,3 17,2 ngày) có khác biệt NT này, thời gian sống giảm xuống thấp so với NT A, đáng kể Do sùng bố mẹ có thời gian sống ngắn hệ sinh thấp (1.532 729 con/30 cặp) khả sinh sản sùng bố mẹ giảm nhiều so với NT A (tỉ lệ 84,54% 92,64%) Bảng 4.3: Ảnh hưởng pheromone giới tính nấm xanh lên số lượng sùng thời gian sống sùng bố mẹ điều kiện phòng thí nghiệm, năm 2013 Tổng số sùng Tỉ lệ sức sinh Thời gian sống sùng bố mẹ (ngày) Nghiệm thoát sản giảm so thức Sùng bố Sùng mẹ (con/30 cặp) với ĐC (%) a a A 9.915 98,9 3,7 97,0 3,3a b b B 7.636 22,98 87,3 3,0 90,0 3,9b d d C 996 89,95 10,8 2,6 18,7 4,6d d d D 742 92,51 10,2 1,3 17,1 4,8d c c E 1.532 84,54 11,7 2,9 21,3 5,0c d d F 729 92,64 10,1 1,4 17,2 4,8d CV (%) 6,96 1,40 3,11 Mức ý nghĩa ** ** ** Trong cột, số có chữ theo sau giống khơng khác biệt thống kê mức ý nghĩa 1% qua kiểm định Duncan A: Đối chứng chứa củ khoai + TT đực TT bình thường (TT: thành trùng) B: củ khoai + TT TT đực tiếp xúc pheromone C: củ khoai + TT TT đực tiếp xúc pheromone nấm xanh dạng dung dịch D: củ khoai + TT TT đực tiếp xúc pheromone nấm xanh dạng nấm tươi E: củ khoai + TT TT đực tiếp xúc nấm xanh dạng dung dịch F: củ khoai + TT TT đực tiếp xúc nấm xanh dạng nấm tươi Tóm lại, sùng đực tiếp xúc với pheromone giới tính (NT B) có thời gian sống sùng bố mẹ ngắn số lượng sùng sinh so với 18 bình thường, lợi pheromone giới tính giúp làm giảm hệ sùng sinh Nếu mật số sùng đơng sụt giảm hệ sinh ý nghĩa làm giảm bớt quần thể sùng tự nhiên 4.4.3 Khảo sát hiệu ứng dụng kết hợp pheromone giới tính tổng hợp với nấm xanh (Ma) phòng trị sùng khoai lang ngồi đồng a) Tại huyện Bình Tân, tỉnh Vĩnh Long, năm 2011 Hình 4.3 cho thấy số lượng sùng đực vào bẫy NT pheromone (A) cao so với NT pheromone nấm xanh (B) qua thời điểm quan sát, diễn biến qui luật số lượng sùng vào bẫy thấp giai đoạn đầu tăng cao đến cuối vụ Số lượng sùng vào bẫy tăng lên 369 con/bẫy/2 tuần NT pheromone nấm xanh, NT pheromone 573 con/bẫy/2 tuần Diễn biến số lượng sùng vào bẫy NT pheromone cao so với NT pheromone nấm xanh suốt vụ Nhận thấy việc sử dụng nấm xanh kết hợp rãi vào đầu vụ (3 NSKT) phun nấm lần vào thời điểm 50, 70 90 NSKT có hiệu giảm mật số sùng có ưu trội so với NT đặt bẫy pheromone Hình 4.3: Diễn biến mật số sùng khoai lang ruộng thí nghiệm huyện Bình Tân, tỉnh Vĩnh Long, năm 2011 Kết tỉ lệ củ bị sùng gây hại qua đợt quan sát nhận thấy thiệt hại sùng củ, NT A B có tỉ lệ củ bị sùng gây hại thấp (dưới 1%) NT đối chứng (C) nông dân sử dụng thuốc trừ sâu hóa học thường xuyên (định kỳ ngày/lần suốt vụ) Đến thời điểm thu hoạch, không thấy củ khoai bị sùng gây hại NT A, B, C, cho thấy hiệu phòng trị sùng tương đương Điều chứng tỏ áp dụng bẫy pheromone giới tính đơn kết hợp với nấm xanh có khả thay dần cho việc sử dụng thuốc trừ sâu hóa học để quản lý gây hại SKL đồng b) Tại huyện Duyên Hải, tỉnh Trà Vinh, năm 2011 Kết Bảng 4.4 cho thấy ruộng khoai canh tác tổng số sùng đực vào bẫy suốt vụ NT D-1 5.234 con/1.700 m2 (TB 3.380 con/1.000 19 m2) tương đương với NT D-2 4.582 con/1.400 m2 (TB 3.323 con/1.000 m2) Trung bình số lượng sùng đực vào bẫy NT tương đương, không khác biệt ý nghĩa, 7,51 6,84 con/bẫy/đêm Trên ruộng khoai canh tác lâu năm tổng số sùng đực vào bẫy suốt vụ NT E-1 24.719 con/1.800 m2 (TB 13.733 con/1.000 m2) cao tương đương với NT E-2 16.632 con/1.200 m2 (TB 13.860 con/1.000 m2) Nhận thấy số lượng sùng vào bẫy NT E-1 E-2 cao nhiều so với NT ruộng khoai canh tác, chênh lệch cao từ 4,06-4,17 lần Trung bình số lượng sùng đực vào bẫy NT E-1 E-2 cao, tương đương nhau, 43,37 41,68 con/bẫy/đêm, cao nhiều so với NT ruộng khoai canh tác, chênh lệch cao từ 5,77-6,09 lần Chứng tỏ áp lực quần thể SKL khu vực canh tác lâu năm nhiều so với khu vực canh tác NT xử lý nấm xanh qua hình thức rãi phun nấm chưa thể rõ ảnh hưởng đến số lượng sùng đực vào bẫy Nhìn chung, diễn biến số sùng đực vào bẫy khu vực qui luật, tăng nhanh giai đoạn tạo củ, xuất cao điểm trước thu hoạch tháng Bảng 4.4: Số lượng sùng khoai lang vào bẫy pheromone ruộng khoai lang canh tác lâu năm thuộc huyện Duyên Hải, tỉnh Trà Vinh Nghiệm thức Ruộng thí nghiệm TB số lƣợng sùng vào bẫy (con/bẫy/đêm) Diện tích (m2) Ruộng khoai lang canh tác D-1 Pheromone 1.700 7,51 D-2 Pheromone + Ma 1.400 6,84 Giá trị T-tính 0,44 ns Ruộng khoai lang canh tác lâu năm E-1 Pheromone 1.800 43,37 E-2 Pheromone + Ma 1.200 41,68 Giá trị T-tính 0,16ns ns: khơng khác biệt mức ý nghĩa 5% qua kiểm định T-test Tổng số sùng vào bẫy (con/1.000m2) 3.380 3.323 13.733 13.860 Khi thu hoạch, tỉ lệ củ bị sùng gây hại tăng lên cao so với giai đoạn đầu tạo củ (Bảng 4.5) Ruộng khoai canh tác, NT D-1 có tỉ lệ bị hại vỏ 5,8%, NT D-2 7,2% D-3 cao 10,6%; tỉ lệ sùng gây hại củ D-1 thấp 0,4%, D-2 3,6% gần tương đương với đối chứng (2,6%) Ruộng khoai canh tác lâu năm, NT E-1 E-2 có tỉ lệ củ bị sùng gây hại thấp nhiều so với E-3 vỏ (9%) củ (4,5%), NT E-3 có tỉ lệ củ bị hại vỏ cao gấp lần củ cao gấp đôi so với NT E-2 Cho thấy hiệu phòng trị sùng biện pháp đặt bẫy pheromone (6 bẫy/1.000 m2) bẫy pheromone kết hợp nấm xanh so với phòng trị sùng 20 thuốc hóa học theo nơng dân Tuy nhiên, chưa thấy rõ hiệu cộng hưởng nấm xanh với pheromone giới tính thí nghiệm Bảng 4.5: Tỉ lệ củ bị sùng gây hại ruộng khoai lang canh tác lâu năm huyện Duyên Hải, tỉnh Trà Vinh, năm 2011 Tỉ lệ củ bị hại (%) Tổng số củ Trọng lƣợng củ Nghiệm thức quan sát trung bình (g) Ngồi vỏ Trong củ 60 ngày sau trồng (E-1) Pheromone 197 35,5 4,1 2,0 (E-2) Pheromone + Ma 156 40,4 3,8 1,9 (E-3) Đối chứng 97 22,7 4,1 2,1 Thời điểm thu hoạch (E-1) Pheromone 155 89 0,6 0,6 (E-2) Pheromone + Ma 170 70 2,9 2,4 (E-3) Đối chứng 88 101 9,0 4,5 c) Tại huyện Cù Lao Dung, tỉnh Sóc Trăng, năm 2012 Bảng 4.6: Tỉ lệ gây hại sùng khoai lang củ khoai thu từ ruộng thí nghiệm Số củ Tỉ lệ (%) củ bị hại Trọng lƣợng quan Ngoài vỏ Trong củ củ (g) sát A 274 18,46 0 B 254 20,34 0 tháng C 192 10,87 0 D 146 10,0 0 A 266 55,21 2,25 0,75 B 241 49,03 2,07 2,5 tháng C 178 44,64 2,24 D 166 41,73 5,42 3,61 A 269 69,24 5,57 2,97 B 196 72,37 8,67 5,10 Thu hoạch C 184 73,86 4,34 2,71 D 170 77,60 11,76 7,05 Nghiệm thức A: Pheromone; Nghiệm thức B: Pheromone + nấm xanh (Ma) Nghiệm thức C: Nấm xanh; Nghiệm thức D: Đối chứng (nông dân) Thời điểm quan sát Nghiệm thức Kết Bảng 4.6 cho thấy số lượng sùng đực vào bẫy tăng dần theo thời gian, quy luật, NT B (pheromone nấm xanh) chênh lệch nhiều so với NT A (pheromone), cuối vụ Nhìn chung, gia tăng số lượng sùng vào bẫy theo quy luật chung có thức ăn, nơi điều kiện thuận lợi sùng gia tăng mật số Nhận thấy lúc đầu vụ nguồn thức ăn dây khoai phát triển thân nên số lượng sùng vào bẫy thấp Khi gần thu hoạch có nguồn thức ăn dồi sùng thích cơng củ, nên mật số tăng lên nhanh Kết phù hợp với thí nghiệm 21 khác áp dụng bẫy pheromone ruộng khoai theo quy luật chung số lượng sùng vào bẫy gia tăng lên nhanh cuối vụ khoai Kết ghi nhận tỉ lệ củ bị sùng gây hại tương đối thấp NT nên chưa thấy có chênh lệch thiệt hại nhiều NT tỉ lệ củ bị hại thấp so với đối chứng, chứng tỏ NT thí nghiệm có khả quản lý sùng tốt, thay dần cho biện pháp áp dụng thuốc trừ sâu hóa học để quản lý SKL đồng Mặt khác, nhận thấy NT A C có tỉ lệ củ bị hại ngồi vỏ củ tương đương nhau, NT B chưa thấy rõ hiệu cộng hưởng pheromone nấm xanh quản lý sùng, tương tự kết thí nghiệm trước Tóm lại, qua đợt khảo sát tỉ lệ củ bị hại cho thấy sùng bắt đầu gây hại củ từ 2,5 tháng SKT tỉ lệ gây hại tăng dần đến thu hoạch Trong giai đoạn phát triển củ sùng di chuyển tới ruộng nhiều làm gia tăng mật số gây hại củ khoai nhiều hơn, phù hợp với thực tế sản xuất khoai lang d) Tại huyện Tri Tôn, tỉnh An Giang, năm 2012 Kết Bảng 4.7 cho thấy ruộng đặt bẫy pheromone kết hợp phun nấm xanh có số lượng sùng đực vào bẫy khu vực ngoại vi cao so với trung tâm Tổng số sùng vào bẫy ngoại vi 30.332 con/vụ, cao gấp lần khác biệt ý nghĩa so với trung tâm 9.015 con/vụ Số lượng sùng vào bẫy khu vực ngoại vi 44,04 con/bẫy/đêm, cao gấp đôi so với trung tâm 18,21 con/bẫy/đêm Cho thấy đặt bẫy khu vực ngoại vi có khả hạn chế xâm nhiễm sùng vào trung tâm từ ruộng lân cận xung quanh ruộng khảo sát Bảng 4.7: Số lượng sùng đực vào bẫy hai khu vực ruộng khảo sát huyện Tri Tôn, tỉnh An Giang, năm 2012 Số lƣợng sùng (con/bẫy/đêm) Ngoại vi 16 44,04 Trung tâm 18,21 Giá trị T-tính 5,23* *: Khác biệt thống kê mức ý nghĩa 5% qua kiểm định T-test Khu vực Số bẫy Tổng số sùng (con/vụ) 30.332 9.015 Diễn biến số lượng sùng vào bẫy khu vực ngoại vi trung tâm ruộng khảo sát giảm dần từ 40-60 NSKT tăng trở lại từ 70-85 NSKT Ở giai đoạn đầu, số lượng sùng vào bẫy tương đối cao giảm dần sùng diện sẳn ruộng khảo sát Cho thấy bẫy pheromone kết hợp với phun nấm xanh làm mật số sùng giảm xuống thấp ruộng khảo sát, tạo thấp điểm 60 NSKT Sau đó, số lượng sùng vào bẫy tăng lên đến thu hoạch, khu vực ngoại vi tăng lên nhanh so với trung tâm ruộng khảo sát, qui luật thí nghiệm khác Khảo sát thiệt hại củ khu vực ngoại vi cho thấy tỉ lệ củ bị sùng gây hại vỏ thời điểm 60 75 NSKT 1,3% 7,8% 22 thấp, khác biệt ý nghĩa so với ruộng đối chứng (nông dân) với tỉ lệ gây hại vỏ 29,7% 52,7% Tỉ lệ củ bị sùng gây hại củ ruộng khảo sát thời điểm 1,3% 1,6%, thấp nhiều so với ruộng đối chứng, 20,4% 31,9% Do nông dân không phun thuốc trừ sâu giai đoạn nuôi củ áp lực sùng cao ruộng đối chứng 75 NSKT, nên họ thu hoạch sớm thời điểm 80 NSKT nhằm tránh thiệt hại nặng hơn, sớm dự kiến thu hoạch 15 ngày Đến thời điểm 93 NSKT, ghi nhận thiệt hại ruộng khảo sát với tỉ lệ sùng gây hại vỏ (25,8%) củ (16,9%), tăng lên cao so với thời điểm trước, áp lực sùng cao gần thu hoạch làm tăng nhanh thiệt hại củ Số lượng sùng thoát từ củ khoai bị nhiễm ruộng khảo sát 60, 75 93 NSKT (lần lượt 0, 69 76 con, trung bình số sùng /củ bị hại 0, 11 0,15 con/củ) thấp nhiều so với ruộng đối chứng 60 75 NSKT (tương ứng 894 2.923 con, trung bình số sùng/củ bị hại 45,6 63 con/củ) Như vậy, ruộng khảo sát có tỉ lệ củ bị sùng gây hại thấp hơn, số lượng sùng thoát từ củ bị nhiễm sùng thấp hơn, dẫn đến trung bình số lượng số sùng gây hại củ thấp so với ruộng đối chứng Khảo sát thiệt hại củ khu vực trung tâm cho thấy tỉ lệ củ bị sùng hại vỏ thời điểm 60, 75 93 NSKT 2,1%; 0% 1,6%, thấp, không đáng kể, khác biệt ý nghĩa so với ruộng đối chứng có tỉ lệ 39,3% (60 NSKT) 83,6% (75 NSKT) Tỉ lệ sùng gây hại bên củ thời điểm 60, 75 93 NSKT 2,1%; 0% 1,6%, thấp nhiều so với ruộng đối chứng có tỉ lệ 29,6% (60 NSKT) 67,9% (75 NSKT) Ruộng khảo sát khu vực trung tâm cho hiệu cao với tỉ lệ củ bị hại thấp, trì từ 1,6-2,1% ngồi vỏ, củ Trong đó, ruộng đối chứng có tỉ lệ củ bị hại cao từ 29,6-67,9% (trong củ) từ 39,383,6% (ngoài vỏ) Cho thấy ruộng đối chứng bị thiệt hại nặng, nhiều củ bị nhiễm sùng bên trong, thời điểm gần thu hoạch Hiệu thể số lượng sùng từ củ bị nhiễm ruộng Cho thấy ruộng khảo sát (bẫy pheromone kết hợp phun nấm xanh lần/vụ) làm giảm khả gây hại đẻ trứng SKL, nên số lượng sùng thoát từ củ khoai bị nhiễm thấp, dao động từ 0-4 con/củ bị hại Ruộng đối chứng có số lượng sùng cao từ củ bị nhiễm sùng, thời điểm 60 75 NSKT (tương ứng 1.512 1.621 con, trung bình số sùng/củ bị hại 26 28 con/củ), chênh lệch nhiều so với ruộng khảo sát Tóm lại, biện pháp đặt bẫy pheromone kết hợp phun nấm xanh lần có hiệu làm giảm bớt thiệt hại sùng nhiều so với đối chứng, hạn chế xâm nhiễm sùng vào khu vực trung tâm, giúp phòng trị SKL có hiệu cao Có thể triển khai diện rộng phổ biến cho nông dân áp dụng biện pháp phòng trị sùng nhằm hạn chế tối đa việc sử dụng thuốc trừ sâu hóa học 23 Chƣơng 5: KẾT LUẬN VÀ ĐỀ XUẤT 5.1 Kết luận Xây dựng qui trình tổng hợp Z3-12:E2 pheromone giới tính thơng qua phản ứng Wittig có khả hấp dẫn sùng cao phù hợp với điều kiện PTN, bước điều chế mồi pheromone qui trình áp dụng bẫy pheromone giới tính tổng hợp phòng trị SKL đồng phù hợp với điều kiện vùng ĐBSCL Diễn biến mật số sùng Vĩnh Long không phụ thuộc vào lượng mưa nhiệt độ mà liên quan thời vụ khoai ruộng mật số sùng tăng nhanh gần thu hoạch, giảm nông dân chuyển đổi cấu trồng, luân canh với lúa Kết định danh theo phương pháp truyền thống xác định MPL loài nấm Metarhizium anisopliae Theo phương pháp sinh học phân tử, sử dụng kỹ thuật PCR, giải trình tự DNA vùng ITS-rDNA ngân hàng gen khẳng định MPL loài M anisopliae, có độ tương đồng cao (97,5-99,7%) Trong PTN, MPL có hiệu lực gây chết sùng cao, đạt 96,5-100% sau NXL Trong PTN, nấm xanh có mật số 108, 109 bào tử/ml cho hiệu lực gây chết sùng cao, đạt 100% sau ngày Sùng đực nhiễm nấm xanh có khả lây lan gây chết quần thể sùng với hiệu lực 90% sau ngày Nấm xanh dạng nấm tươi cho hiệu gây chết sùng nhanh cao dạng bột khơ, hình thức phun nấm cho hiệu cao rãi nấm, đạt 100% sau 12 ngày Sùng đực tiếp xúc với pheromone giới tính nhiễm nấm xanh dạng nấm tươi có hiệu gây chết quần thể sùng cao nhất, đạt 100% sau 18 ngày Sùng bắt cặp với sùng đực tiếp xúc với pheromone giới tính nhiễm nấm xanh có thời gian sống số lượng sùng sinh giảm thấp có ý nghĩa so với cặp sùng bình thường (đối chứng) điều kiện PTN Khảo sát đồng, sùng đực vào bẫy thấp giai đoạn đầu tăng nhanh thu hoạch, qui luật diễn biến mật số sùng suốt vụ khoai, áp dụng 6-12 bẫy/1.000 m2 tùy theo áp lực sùng, cho hiệu quản lý sùng tương đương so với đối chứng (nông dân) Biện pháp đặt bẫy pheromone pheromone kết hợp nấm xanh cho hiệu phòng trị sùng tương đương với đối chứng (nơng dân) giống khoai Tím Nhật, Trắng sữa, Tàu Nghẹn huyện Bình Tân, Cù Lao Dung, Duyên Hải Nấm xanh chưa thể rõ hiệu cộng hưởng với pheromone giới tính khảo sát dẫn đến không khác biệt biện pháp 5.2 Đề xuất Dựa vào nhu cầu thực tế nông dân để sản xuất số lượng lớn mồi pheromone giới tính tổng hợp SKL với chi phí hợp lý nhằm cung cấp người dân sử dụng Tập huấn chuyển giao kỹ thuật cho nông dân trồng khoai lang biết cách áp dụng bẫy pheromone giới tính tổng hợp để quản lý SKL diện rộng Nghiên cứu kỹ thuật áp dụng bẫy pheromone giới tính kết hợp nấm xanh để phát huy hiệu cộng hưởng giúp tăng hiệu lực phòng trị SKL ngồi đồng 24 ... nghiệm - Đánh giá hiệu phòng trị pheromone giới tính tổng hợp nấm ký sinh SKL điều kiện đồng 1.3 Đối tƣợng phạm vi nghiên cứu * Đối tượng nghiên cứu - Côn trùng gây hại: Sùng khoai lang (Cylas formicarius. .. ruộng khoai lang 4.2 Nghiên cứu pheromone giới tính tổng hợp sùng khoai lang 4.2.1 Tổng hợp hợp chất (Z)-3-dodecenyl (E)-2-butenoate (Z3-12:E2) pheromone giới tính sùng khoai lang phòng thí nghiệm... lượng sùng đực vào bẫy định kỳ tuần/lần c) Khảo sát hiệu phòng trị sùng khoai lang bẫy tập hợp pheromone giới tính tổng hợp ngồi đồng huyện Bình Tân, Vĩnh Long, năm 2010 Nhằm đánh giá hiệu phòng trị