Nghiên cứu ảnh hưởng của thời gian và nhiệt độ bảo quản bệnh phẩm trên xét nghiệm định lượng PAPP-A và βhCG tự do huyết thanh trong sàng lọc hội chứng Down

Bài viết trình bày xác định ảnh hưởng của thời gian và nhiệt độ bảo quản mẫu thử trên nồng độ PAPP- A và βhCG tự do (fβhCG) huyết thanh.

Y Học TP Hồ Chí Minh * Phụ Bản Tập 19 * Số * 2015 Nghiên cứu Y học NGHIÊN CỨU ẢNH HƯỞNG CỦA THỜI GIAN VÀ NHIỆT ĐỘ BẢO QUẢN BỆNH PHẨM TRÊN XÉT NGHIỆM ĐỊNH LƯỢNG PAPP-A VÀ βhCG TỰ DO HUYẾT THANH TRONG SÀNG LỌC HỘI CHỨNG DOWN Văn Hy Triết*, Phạm Thị Mai** TÓM TẮT Mục tiêu: Xác định ảnh hưởng thời gian nhiệt độ bảo quản mẫu thử nồng độ PAPP- A βhCG tự (fβhCG) huyết Phương pháp: Nghiên cứu tiền cứu so sánh cặp, theo dõi nồng độ PAPP-A fβhCG huyết 33 mẫu huyết thai phụ thời điểm giờ, giờ, 24 giờ, 48 nhiệt độ phòng thí nghiệm thời điểm giờ, 24 giờ, 48 giờ, 72 nhiệt độ 2ᵒC- 8ᵒC Quản lý phân tích số liệu phân mềm Stata 11 Kết quả: Nồng độ PAPP-A không thay đổi để mẫu đến 48 nhiệt độ phòng xét nghiệm (PXN) (t =23,80C) đến 72 tủ lạnh (t0tb=30C), nồng độ fβhCG tăng lên sau để nhiệt độ PXN không đổi đến 72 tủ lạnh Cùng thời gian 24 48 giờ, nồng độ PAPP-A không thay đổi, nồng độ f βhCG bảo quản PXN cao 10% 17,5% so với bảo quản tủ lạnh 0tb Kết luận: Khi để mẫu đến 48 PXN: nồng độ PAPP-A không thay đổi, nồng độ fβhCG tăng theo thời gian Khi để mẫu đến 72 tủ lạnh: nồng độ PAPP-A fβhCG không thay đổi Từ khóa: PAPP-A, fβhCG, sàng lọc trước sinh, hội chứng Down ABSTRACT RESEARCH EFFECTS OF TIME AND TEMPERATURE ON SAMPLE STORAGE IN PAPP-A AND FREE βhCG QUANTITATIVE IN DOWN’S SYNDROME SCREENING Van Hy Triet, Pham Thi Mai * Y Hoc TP Ho Chi Minh * Supplement of Vol 19 - No - 2015: 215 - 220 Objective: To determine the effects of time and temperature on serum PAPP-A and free βhCG concentration Methods: Prospective study comparing each pair, monitor concentrations PAPP-A and free βhCG of 33 serum samples at giờ, giờ, 24 giờ, 48 in laboratory temperature and at , 24 giờ, 48 giờ, 72 in 2ᵒC8ᵒC temperature Manage and analyze data using STATA 11 Results: The PAPP-A concentration unchanged when samples are stored to 48 giờours at lab temperature (t tb = 23,80C) and to 72 giờours in refrigerator (t0tb = 30C), free βhCG concentrations rise when samples are stored after at lab temperature and no change to 72 in the refrigerator Along 24 and 48 in time, the PAPPA concentration does not change, free βhCG concentration stored at lab temperature is respectively higher 10% and 17.5% than storage in the refrigerator Key word: PAPP-A, free βhCG, prenatal screening, Down syndrome thường nhiễm sắc thể khác nhà nước ta ĐẶT VẤN ĐỀ quan tâm đặc biệt thể định Hiện xét nghiệm tầm soát trước sinh hội 573/QĐ-BYT Bộ Y tế ban hành năm 2010 chứng (HC) Down (trisomy 21) bất * Đại học Y Dược Tp Hồ Chí Minh Tác giả liên lạc: Ths Văn Hy Triết **Trường Đại Học Quốc Tế Hồng Bàng ĐT: 0984 881 440 Email: vanhytriet@gmail.com Chuyên Đề Điều Dưỡng Kỹ Thuật Y Học 215 Nghiên cứu Y học Y Học TP Hồ Chí Minh * Phụ Bản Tập 19 * Số * 2015 nhằm nâng cao chất lượng dân số đáp ứng mong ước cặp vợ chồng có đứa khỏe mạnh, thơng minh Tầm sốt trước sinh dựa thơng số sinh học mẹ tuổi, cân nặng, thông số hóa sinh ( PAPP-A, βhCG tự do(FβhCG), DIA, AFP, uE3, hCG…) thông số sinh học thai nhi tuổi thai, thông số siêu âm (khoảng mờ sau gáy, nhịp tim thai, xương mũi, dòng máu qua van lá, động mạch gan)(8) Có nhiều chương trình tầm soát trước sinh dựa kết hợp thông số sinh học mẹ thai nhi tam cá nguyệt đầu thứ hai thai kỳ Ở Việt Nam hai chương trình phổ biến - Ở quí thai kỳ (11 tuần đến 13 tuần ngày) có xét nghiệm (XN) kết hợp thông số siêu âm thai nhi khoảng mờ sau gáy, nhịp tim thai thông số sinh học mẹ tuổi, nồng độ PAPP-A FβhCG huyết Sự kết hợp gọi ngắn gọn test kết hợp (combined test) Test kết hợp phát 90% trisomy 21 với tỉ lệ dương tính giả (FPR) 5%(7, 8, 10) - Ở quí hai thai kỳ (15 tuần đến 20 tuần) có XN kết hợp tuổi mẹ với thông số sinh học huyết mẹ FβhCG ( hCG toàn phần), AFP, uE3 gọi XN triple test phát 69% trisomy 21 với FPR 5%(11) Mục đích sàng lọc trước sinh nhằm xác định thai phụ có nguy cao mang bào thai bị HC Down, khuyến cáo họ làm XN chẩn đoán sinh thiết gai (Chorionic villus sampling – CVS) chọc dò màng ối (Amniocentesis) Nếu XN chẩn đốn dương tính tư vấn thai phụ dừng thai Việc dừng thai sớm có lợi cho thai phụ sức khỏe tinh thần Vì khuynh hướng sàng lọc tháng đầu thai kỳ sử dụng test kết hợp Trong XN kết hợp độ tin cậy XN: PAPP-A FβhCG giữ vai trò quan trọng 216 Nhưng độ tin cậy XN lại chịu ảnh hưởng nhiều yếu tố gây biến thiên trình làm XN, từ khâu lấy mẫu, vận chuyển bệnh phẩm, làm XN đến khâu xác định nguy trả kết quả(4) Do đặc thù XN sàng lọc đòi hỏi máy móc đại phần mềm xác định nguy chuyên biệt nên XN sàng lọc hội chứng Down phép triển khai tồn quốc khơng phải tất phòng khám, trung tâm chăm sóc sức khỏe sinh sản thực XN mà có số bệnh viện chuyên khoa sản, viện, trường thực Vì lý trên, có nhiều phòng khám, trung tâm chăm sóc sức khỏe sinh sản phải gởi mẫu XN sàng lọc hội chứng Down đến bệnh viện, trung tâm lớn Trước tình hình thực tế trên, vấn đề hướng dẫn qui trình lấy mẫu, bảo quản vận chuyển mẫu trở thành yêu cầu thiết XN sàng lọc trước sinh Các nhà sản xuất thuốc thử có hướng dẫn vấn đề điều kiện lấy máu làm phòng XN Việc lấy mẫu từ nơi làm xét nghiệm nơi khác qui trình lấy mẫu khơng thay đổi qui trình bảo quản vận chuyển mẫu có thay đổi Thời gian từ lúc lấy mẫu đến lúc làm XN kéo dài Do cần thiết phải có qui định thời gian nhiệt độ bảo quản cho kết XN mẫu vận chuyển từ nơi khác đến không thay đổi nhiều so với điều kiện làm phòng XN Sự thay đổi phải nhỏ đến mức không ảnh hưởng tới việc đánh giá mức độ nguy bị HC Down từ khơng có nguy tư vấn sai cho thai phụ việc dừng hay tiếp tục thai kỳ Để xây dựng qui trình chuẩn bảo quản vận chuyển bệnh phẩm cho XN FβhCG PAPP-A phù hợp với điều kiện thực tế phòng XN bệnh viện Đại học Y Dược TP.HCM sở 2, tiến hành đề tài nghiên cứu: “Nghiên cứu ảnh hưởng thời gian nhiệt độ bảo quản bệnh phẩm xét nghiệm định lượng PAPPA βhCG tự huyết sàng lọc hội chứng Down” Chuyên Đề Điều Dưỡng Kỹ Thuật Y Học Y Học TP Hồ Chí Minh * Phụ Bản Tập 19 * Số * 2015 PHƯƠNGPHÁP-ĐỐI TƯỢNGNGHIÊNCỨU Phương pháp nghiên cứu Nghiên cứu tiền cứu so sánh cặp Đối tượng nghiên cứu Mẫu huyết thai phụ có thai từ 11 tuần 13 tuần ngày đến khám Bệnh viện Đại Học Y Dược sở Cỡ mẫu Cỡ mẫu tính theo cơng thức(6) Nghiên cứu Y học Tiêu chuẩn lựa chọn mẫu huyết - Mẫu lấy phòng XN Bệnh viện ĐHYDTPHCM sở - Tách 1,4 mL huyết Tiêu chuẩn loại trừ mẫu huyết Tiêu huyết, đục Qui trình nghiên cứu Nghiên cứu thực theo bước sau - Bước 1: Để ống 1,2,3,4 nhiệt độ phòng XN (tᵒ khoảng 25ᵒC) ống 5,6,7 ngăn mát tủ lạnh ( tᵒ khoảng 2-8ᵒC) Trong - n = cỡ mẫu R hệ số nhân (multiplying factor) tính theo cơng thức - Bước 2: Định lượng PAPP-A FβhCG Ống (0 giờ): sau tách huyết Ống (4 giờ): sau tách huyết Ống 5(24 giờ): 24 sau tách huyết Ống 6(48 giờ): 48 sau tách huyết Chọn ∆ (hệ số dự đốn kích thước tiêu chuẩn hóa) = 0,6 Chọn α sai lầm loại 0,05 suy z1-α/2 = 1,96 β sai lầm loại 0,2 nên power = 0,8 suy z1-β = 0,8416 w số lần chạy lặp lại w = ρ tương quan dự đoán lần quan sát tiếp chọn ρ = 0,7 Thế giá trị vào cơng thức ta có: R = 0,75 n = 33 Tiêu chuẩn chọn mẫu thai phụ - Có thai từ 11 tuần đến 13 tuần ngày - Đơn thai - Đã siêu âm khoảng mờ sau gáy - Tại thời điểm khám thai khơng có bệnh cấp tính, khơng có động thai Tiêu chuẩn loại trừ thai phụ - Hút thuốc - Thụ tinh ống nghiệm - Hiện có tiền sử có ĐTĐ - Không phải người Việt Nam Chuyên Đề Điều Dưỡng Kỹ Thuật Y Học Ống 7(72 giờ): 72 sau tách huyết - Bước 3: Nhập số liệu thai phụ kết định lượng PAPP-A FβhCG ống vào phần mềm tính nguy HC Down tương ứng cho ống (sử dụng phần mềm Prisca 5.0) - Bước 4: So sánh nồng độ PAPP-A FβhCG ống 2-7 với ống - Bước 5: So sánh tỷ lệ nguy HC Down ống 2-7 với ống Thiết bị thuốc thử Máy miễn dịch Immulite 2000Xpi, thuốc thử PAPP-A free βhCG, hóa chất nội kiểm PAPPA, free βhCG, phần mềm tính nguy Prisca 5.0 Tất Siemens cung cấp KẾT QUẢ Nhiệt độ PXN tủ lạnh thời gian nghiên cứu: nhiệt độ PXN trung bình 23,8ᵒC (từ 21ᵒC đến 26,5ᵒC), nhiệt độ tủ lạnh trung bình 3ᵒC (từ 1,5ᵒC đến 4,5ᵒC) 217 Nghiên cứu Y học Y Học TP Hồ Chí Minh * Phụ Bản Tập 19 * Số * 2015 Kết hiệu chuẩn nội kiểm tra đạt tiêu chuẩn nhà sản xuất cung cấp Thay đổi nồng độ PAPP-A FβhCG theo thời gian bảo quản Bảng 1: Thay đổi nồng độ PAPP-A FβhCG theo thời gian bảo quản mẫu PXN (t0 tb=23,8ᵒC) STT n Thời gian Nồng độ PAPP-A Nồng độ FβhCG bảo quản SD SD 33 33 33 33 giờ 24 48 3,84 3,82 3,86 3,84 0,37 0,37 0,37 0,37 72,86 75,39 80,14 85,82 6,90 7,14 7,42 7,68 STT n P Thời gian Nồng độ PAPP-A Nồng độ FβhCG bảo quản SD SD 1-2 1-3 1-4 KYN KYN KYN 0,00 0,00 0,00 Nhận xét: Khi bảo quản mẫu PXN (tᵒ=23,8ᵒC) thời gian giờ, 24 giờ, 48 nồng độ trung bình PAPP-A thời điểm giờ, 24 giờ, 48 không thay đổi so với nồng độ PAPP-A mẫu giờ, nồng độ trung bình FβhCG tăng dần theo thời gian bảo quản với p