Đặc điểm kiểu gen của siêu vi viêm gan B ở bệnh nhân viêm gan siêu vi B mạn tính

Tám kiểu gen của siêu vi viêm gan B (HBV) đã được xác định (A-H), tuy vậy sự liên hệ giữa kiểu gen và sinh bệnh học của viêm gan B chưa được sáng tỏ. Nghiên cứu này xác định đặc điểm kiểu gen và liên quan với các yếu tố lâm sàng và cận lâm sàng. Phương pháp: Ứng dụng kỹ thuật realtime-PCR đa mồi, kiểu gen HBV được phân tích trên 62 bệnh nhân viêm gan siêu vi B mạn tính.

Nghiên cứu Y học Y Học TP Hồ Chí Minh * Phụ Bản Tập 20 * Số * 2016 ĐẶC ĐIỂM KIỂU GEN CỦA SIÊU VI VIÊM GAN B Ở BỆNH NHÂN VIÊM GAN SIÊU VI B MẠN TÍNH Bùi Hữu Hoàng*, Lê Thị Đỗ Quyên**, Huỳnh Thanh Tuấn*** TÓM TẮT Mở đầu mục tiêu: Tám kiểu gen siêu vi viêm gan B (HBV) xác định (A-H), liên hệ kiểu gen sinh bệnh học viêm gan B chưa sáng tỏ Nghiên cứu xác định đặc điểm kiểu gen liên quan với yếu tố lâm sàng cận lân sàng Phương pháp: Ứng dụng kỹ thuật realtime-PCR đa mồi, kiểu gen HBV phân tích 62 bệnh nhân viêm gan siêu vi B mạn tính Kết quả: 43 bệnh nhân nam (69,4%), 19 bệnh nhân nữ (30,6%), độ tuổi trung bình: 37,42 ± 12,69 Trong số 62 bệnh nhân viêm gan B mạn có trường hợp xơ gan trường hợp K gan 25 trường hợp HBeAg [+] 37 trường hợp HBeAg[-] Xác định kiểu gen, có 42 trường hợp kiểu gen B (67,7%), 18 trường hợp kiểu gen C (29%) trường hợp kiểu gen B-C Nam giới chiếm đa số kiểu gen B C với tỉ lệ 69,1% 72,2% Men gan ALT kiểu gen B C tương ứng 247,41 ± 156,31 189,82 ± 151,36 HBeAg[+] kiểu gen B C 48,8% 38,8%; HBV-DNA >105 copy/ml kiểu gen B C 47,6% 50% Kết luận: Kết nghiên cứu cho thấy tỉ lệ kiểu gen B C chiếm đa số bệnh nhân viêm gan siêu vi B mạn tính (96,7%) Tuy nhiên chưa ghi nhận khác biệt có ý nghĩa thống kê kiểu gen với đặc điểm lâm sàng - cận lâm sàng Từ khóa: Kiểu gen, Viêm gan siêu vi B mạn tính, HBeAg, HBV-DNA ABSTRACT CHARACTERS OF GENOTYPES OF HEPATITIS B VIRUS IN CHRONIC HEPATITIS B PATIENTS Bui Huu Hoang, Le Thi Đo Quyen, Huynh Thanh Tuan *Y Hoc TP Ho Chi Minh * Supplement of Vol 20 - No – 2016: 292 - 296 Background & Aims: Eight genotypes (A–H) of hepatitis B virus (HBV) have been identified; however, the genotype-related differences in the pathogenicity of HBV remain unknown Therefore, we investigated the prevalence of HBV genotypes and the association between distinct genotypes and clinical relevance - laboratory data in a cross-sectional study Methods: Using multiplex-realtime PCR method, HBV genotypes were determined in 62 patients verified chronic hepatitis B disease Results: 43 cases are males (69.4%) and 19 cases are females (30.6%), medium age: 37.42 ± 12.69 Among 62 chronic HBV-infected patients were found case associated cirrhosis and case associated liver cancer 25 cases are HBeAg [+] and 37 cases are HBeAg[-].There are three genotypes of HBV in which 42 cases are genotypes B (67.7%), 18 cases are genotype C (29%) and case genotype B-C Male is still dominant in genotypes B and C with 69.1% and 72.2% and the level of ALT in genotypes B and C with 247.41  156.31 and 189.82  151.36 HBeAg[+] in genotypes B and C is 48.8% and 38.8%; HBV-DNA >105 copy/ml in genotypes B and C is 47.6% and 50%, respectively ** Khoa Nghiên cứu Điều trị viêm gan, Bệnh viện Chợ Rẫy Bộ môn Nội, Đại học Y Dược TpHCM Trung tâm Y sinh học phân tử, Đại học Y Dược Tp HCM Tác giả liên lạc: TS BS Huỳnh Thanh Tuấn ĐT: 0938 489 640 Email: drtuan@ump.edu.vn * *** 292 Chuyên Đề Nội Khoa II Y Học TP Hồ Chí Minh * Phụ Bản Tập 20 * Số * 2016 Nghiên cứu Y học Conclusion: Our data suggest that HBV genotype B and C were predominant in Vietnamese patients (96.7%) The correlation between HBV genotypes with clinical manifestation and laboratory data was not statically significant difference Key works: Genotype, Chronic Hepatitis B, HBeAg, HBV-DNA ĐẶT VẤN ĐỀ ĐỐITƯỢNG-PHƯƠNGPHÁPNGHIÊNCỨU Viêm gan siêu vi B (VGSVB) bệnh truyền nhiễm phổ biến Trên giới có khoảng tỷ người bị nhiễm vi rút viêm gan B, có 360 – 400 triệu người mang siêu vi mạn Theo báo cáo Tổ chức Y tế giới (WHO), năm có khoảng triệu người nhiễm vi rút viêm gan B mạn tử vong xơ gan ung thư gan nguyên phát(9) Nguy tương đối bị ung thư gan nguyên phát người nhiễm vi rút viêm gan B cao gấp 100 lần so với người không nhiễm vi rút viêm gan B(1,14) Đối tượng nghiên cứu Việt Nam nằm khu vực có tần suất nhiễm vi rút viêm gan B cao Theo kết nghiên cứu Phạm Hồng Phiệt cơng bố năm 2004, tần suất người có HBsAg (+) thành phố Hồ Chí Minh 14,8% Tần suất Hà Nội theo Đào Đình Đức cộng năm 1997 14%(7,14) Trong năm gần đây, nhờ tiến lĩnh vực sinh học phân tử, nhà khoa học giới tìm kiểu gen khác vi rút viêm gan B ký hiệu chữ từ A đến H Nghiên cứu trước cho thấy kiểu gen có liên quan đến diễn tiến tiên lượng bệnh Tần suất xuất biến chứng xơ gan ung thư gan khác rõ rệt kiểu gen khác Các kiểu gen yếu tố dự báo khả có đáp ứng với điều trị thuốc kháng vi rút bệnh viêm gan vi rút B(2,6) Mục tiêu nghiên cứu là: - Xác định tỷ lệ kiểu gen vi rút viêm gan B bệnh nhân viêm gan siêu vi B mạn - So sánh số đặc điểm lâm sàng, cận lâm sàng bệnh viêm gan siêu vi B mạn nhóm kiểu gen khác Tiêu chuẩn nhận vào nghiên cứu Bệnh nhân chẩn đoán viêm gan siêu vi B mạn theo Guideline AASLD 2007 (American Association for the Study of Liver Diseases)(12) Viêm gan B mạn tính: HBsAg (+) > tháng HBV DNA huyết > 20.000 IU/ml (100.000 sao/ml), mức 2.000 – 20.000 IU/ml (10.000 – 100.000 sao/ml) thường gặp viêm gan B mạn HBeAg (-) ALT/AST tăng đợt liên tục Sinh thiết gan thấy hình ảnh viêm gan mạn tính với hoại tử mức turng bình nặng * Tiêu chuẩn loại trừ - Nghiện rượu bia nặng - Đồng nhiễm HCV, HDV - Bệnh nhân không đồng ý tham gia nghiên cứu Phương pháp thực Kỹ thuật Realtime-PCR đa mồi Phương pháp nghiên cứu Nghiên cứu mô tả cắt ngang: dấu ấn huyết kiểu gen viêm gan siêu vi B khảo sát thời điểm Thống kê Số liệu xử lý phần mềm thống kê SPSS 15.0, phép kiểm thống kê thích hợp, p < 0,05 xem có ý nghĩa thống kê KẾTQUẢVÀBÀNLUẬN Tuổi giới Tổng cộng có 62 bệnh nhân, tuổi nhỏ nhất: 17 tuổi, lớn nhất: 66 tuổi, trung bình: 37,42  12,69 Bệnh Nhiễm 293 Y Học TP Hồ Chí Minh * Phụ Bản Tập 20 * Số * 2016 Nghiên cứu Y học tuổi, độ tuổi 21-30 chiếm đa số với tỷ lệ 33,9% Bệnh nhân nam chiếm đa số với 43 trường hợp (69,4%), so với nữ 19 trường hợp (30,6%) Trong nghiên cứu chúng tôi, số bệnh nhân nam chiếm đa số, tỷ lệ nam: nữ 2,26 : Kết ghi nhận tương tự nghiên cứu Đơng Thị Hồi An(8) Trần Thiện Tuấn Huy(11) tỷ lệ 3,4/1 Tình trạng HBV DNA (định lượng) Bảng Tỷ lệ HBV DNA định lượng HBV DNA (copies/ml) < 10 10 – 10 > 10 HBV DNA trung bình (log copies/ml) Số lượng Tỷ lệ % 11 17,7 22 35,5 29 46,8 5,52 ± 1,68 Tỷ lệ kiểu gen Chẩn đốn lâm sàng Chúng tơi có 62 bệnh nhân, tỷ lệ viêm gan mạn 96,8%, có bệnh nhân xơ gan với báng bụng hội chứng suy tế bào gan rõ, bệnh nhân ung thư gan chẩn đoán sinh thiết gan Tỷ lệ chúng tơi có khác biệt so với tác giả khác, tiêu chuẩn chọn bệnh khác trung tâm thực nghiên cứu có đặc thù riêng Chẳng hạn You Alavian(1,4) chọn bệnh nhân có HBsAg (+) tháng chưa qua điều trị, nghiên cứu phải thỏa mãn tiêu chuẩn viêm gan mạn ban đầu, điều giải thích chúng tơi khơng có nhóm bệnh nhân mang virus không triệu chứng Nghiên cứu Chattopadhyay(5) thực New Delhi Ấn Độ nơi có tỷ lệ xơ gan K gan liên quan tới VGSVB mạn cao Bảng So sánh tỷ lệ chẩn đoán lâm sàng với tác giả Tác giả Carrier Viêm gan mạn Xơ gan You 20,6% 64,4% 9,5% (n = 126) Alavian 2,7% 87,1% 9,2% (n = 109) Chattopadhyay 40% 47% (n = 100) Chúng 96,8% 1,6% (n = 62) Tình trạng HBeAg Bảng Phân bố bệnh nhân theo HBeAg HBeAg Dương Âm 294 Số lượng 25 37 Tỷ lệ % 40,3 59,7 K gan 5,5% 13% 1,6% Biểu đồ Phân bố theo kiểu gen Khi so sánh với kết tác giả nước, kết kiểu gen mẫu nghiên cứu tương tự nghiên cứu trước nước, với kiểu gen B chiếm đa số 67,7%; tỷ lệ nghiên cứu Hồ Tấn Đạt 62,3%; Đơng Thị Hồi An 77,8% Bùi Hữu Hoàng nghiên cứu dấu ấn huyết kiểu gen SVVGB bệnh nhân xơ gan ung thư biểu mô tế bào gan ghi nhận tỷ lệ kiểu gen B chiếm tỷ lệ cao 55,5% Tỷ lệ kiểu gen C 29%, so với Hồ Tấn Đạt 37,3%; Đơng Thị Hồi An 21,3%; Bùi Hữu Hồng 40,3% Sự trội kiểu gen B C so với kiểu gen khác có ý nghĩa thống kê rõ rệt (p < 0,001) Ngoài chúng tơi ghi nhận trường hợp kiểu gen hỗn hợp B-C (3,3%) Chúng không ghi nhận diện kiểu gen khác kể A mà theo nghiên cứu Đơng Thị Hồi An 0,9%; Bùi Hữu Hoàng 2,8%(3,8,10) Ưu điểm phương pháp qui trình tự động hóa nên thời gian thực nhanh chóng, kết có tính ổn định cao lúc định lượng nồng độ HBV-DNA tiết kiệm chi phí thêm cho bệnh nhân so với phương pháp giải trình tự Chuyên Đề Nội Khoa II Y Học TP Hồ Chí Minh * Phụ Bản Tập 20 * Số * 2016 Nghiên cứu Y học Bảng Tỷ lệ kiểu gen so sánh với kết tác giả nước có mức ALT trở bình thường hay gần bình thường(4) Tác giả A Hồ Tấn Đạt (n = 122) Đơng T Hồi An (n = 108) 0,9 Bùi Hữu Hồng (n = 72) 2,8 Chúng tơi (n = 62) Liên quan kiểu gen B C với HbeAg Bảng Tỷ lệ HBeAg (+) so sánh với kết tác giả khác B 62,3 77,8 55,5 67,7 C B-C A-C 37,7 21,3 40,3 1,4 29,0 3,3 Liên quan kiểu gen với số đặc điểm lâm sàng cận lâm sàng Phần lớn bệnh nhân VGSVB thuộc kiểu gen B C chiếm 96,8% nên chọn kiểu gen để phân tích mối liên quan với lâm sàng cận lâm sàng Liên quan kiểu gen B C với tuổi giới Trong kiểu gen B C, tỷ lệ nam giới chiếm đa số với tỷ lệ 69,1% 72,2% Sự chiếm đa số giới nam kiểu gen ghi nhận nghiên cứu Đơng Thị Hồi An với tỷ lệ B C 70,2% 69,5% Trong nghiên cứu nước với số lượng lớn ghi nhận kết tương tự, tỷ lệ nghiên cứu Matsuura 62,6% 59,4%; Sumi 90% 73,6%(8,13,15) Liên quan kiểu gen B C với men gan Bảng Liên quan kiểu gen với men gan Bilirubin Men gan UI/L Bilirubin TP ALT AST Type B Type C 5,42  8,77 247,41  156,31 178,26  126,87 7,97  4,03 189,82  151,36 167,37  145,76 P 0,083 0,317 0,448 Mức men gan ALT trung bình nghiên cứu chúng tơi khơng có khác biệt có ý nghĩa thống kê kiểu gen B 247,41  156,31 kiểu gen C 189,82  151,36 Kết tương tự với nghiên cứu Sumi với mức ALT trung bình kiểu gen B C tương ứng 140,7  123,4 146,9  145,1 Tác giả Sumi theo dõi mức ALT sau chuyển đổi huyết HBeAg thành HBeAb 78 trường hợp có kiểu gen B C nhận thấy 1/3 bệnh nhân sau chuyển đổi huyết Bệnh Nhiễm Tác giả You Sumi H T Đạt Đ T H An Chúng B N 48 30 86 84 42 C % 72,9 43,3 84,2 69,0 42,8 N 69 224 46 23 18 % 69,5 71,0 78,3 66,7 38,8 Tỷ lệ HBeAg (+) kiểu gen B C so với HBeAg (-) giống tỷ lệ chung VGSVB mạn Tỷ lệ 42,8% 38,8% (p>0,05) Tỷ lệ HBeAg (+) kiểu gen B C chúng tơi khơng có ý nghĩa thống kê có lẽ hạn chế số lượng mẫu, theo Sumi, nghiên cứu với số lượng lớn hơn, tổng số bệnh nhân có kiểu gen B C (n = 254), tỷ lệ HBeAg (+) kiểu gen B thấp có ý nghĩa thống kê so với kiểu gen C (43,3% so với 71,0%, p 105 copies/ml kiểu gen B C chiếm đa số với tỷ lệ 47,6% 50% Tỷ lệ theo nghiên cứu You 83,3% 86,9% 295 Nghiên cứu Y học Y Học TP Hồ Chí Minh * Phụ Bản Tập 20 * Số * 2016 Nồng độ HBV DNA trung bình kiểu gen B C 4,89  1,23 5,72  1,51 (p>0,05) Kết tương tự với kết Sumi, tương ứng cho kiểu gen B C 5,67  1,83 6,35  1,57 Sự khác biệt nồng độ HBV DNA kiểu gen B C nghiên cứu tác giả Sumi khơng có ý nghĩa thống kê (p > 0,05) Theo Kao, nhiều nghiên cứu ông cho thấy nồng độ HBV DNA kiểu gen C thường cao B nhiên khác biệt chưa có ý nghĩa thống kê(13,15) Khi phân tích kiểu gen C chúng tơi nhận thấy khác biệt nhóm có nồng độ HBV DNA >105 so với nhóm có HBV DNA 103-105