Khóa luận tốt nghiệp: Nghiên cứu tác nhân gây bệnh chết thân, cành sầu riêng

Nội dung nghiên cứu của đề tài này gồm: Điều tra, khảo sát tình hình bệnh; giám định tác nhân gây bệnh bằng phương pháp nuôi cấy, phân lập, định danh; kiểm chứng tác nhân gây bệnh trên cây sầu riêng; mô tả các đặc điểm hình thái, sinh học và triệu chứng gây hại của loài mọt đục thân, cành sầu riêng. Mời tham khảo.

Bộ Giáo Dục Và Đào Tạo

Trường Đại Học Nông Lâm TP HCM

✓Sầu riêng là loại cây ăn quảđặc sản, giàu chất dinhdưỡng và mang lại hiệu quảkinh tế của vùng ĐBSCL.

✓Trong những năm gần đâydiện tích trồng sầu riêngđang dần gia tăng ở vùngkinh tế này

*

Chính vì vậy nên chúng tôi quyết định thực hiện đề tài:

“ Nghiên cứu tác nhân gây bệnh chết thân, cành

sầu riêng”

*

✓ Điều tra, khảo sát tình hình bệnh.

✓ Giám định tác nhân gây bệnh bằng phương pháp nuôi

cấy, phân lập, định danh

✓ Kiểm chứng tác nhân gây bệnh trên cây sầu riêng.

✓ Mô tả các đặc điểm hình thái, sinh học và triệu chứng

gây hại của loài mọt đục thân, cành sầu riêng.

*

✓Khảo sát tình hình bệnh chết thân, cành sầu riêng tại huyện Cai Lậy – Tiền Giang.

✓Xác định tác nhân gây bệnh và nghiên cứu một số đặc điểm

sinh học như nhiệt độ, pH

✓Bước đầu tìm hiểu đặc điểm hình thái và sinh học của loài mọt đục thân cành xuất hiện trong vết bệnh nhằm tìm hiểu mối liên quan giữa mọt đục thân, cành và tác nhân gây bệnh

*

Thời gian và địa điểm thực hiện:

✓Thời gian thực hiện: đề tài được thực hiện từ tháng

2/2011 đến tháng 7/2011.

✓Địa điểm thực hiện: đề tài được thực hiện tại huyện

Cai Lậy tỉnh Tiền Giang và phòng thí nghiệm bộ môn Bảo Vệ Thực Vật – Viện Cây Ăn Quả Miền Nam thuộc

xã Long Định, huyện Châu Thành, tỉnh Tiền Giang.

*

Vật liệu nghiên cứu

✓ Túi nilon, bút lông, dao

✓ Phiếu điều tra theo mẫu, sổ ghi chép, máy chụp hình.

✓ Tủ cấy, tủ sấy triệt trùng, nồi hấp triệt trùng, cân phân tích, máy

đo pH, tủ điều chỉnh nhiệt độ, kính hiển vi, máy xay sinh tố, lò viba v.v

✓ Các môi trường PDA, PCA

✓ Thuốc hóa học và sinh học phòng trừ bệnh cây như: Norshield 86,2 WP, Aliette 80 WP, Ridomil Gold 68 WP, Funomyl 50

WP, Acti No Vate 1SP, Vôi.

*

Phân lập, giám định tác nhân gây bệnh chết thân, cành sầu riêng

Điều tra, khảo sát tình

hình bệnh chết nhánh

sầu riêng tại huyện Cai

Lậy, tỉnh Tiền Giang

Kiểm chứng tác nhân gây bệnh chết thân, cành sầu riêng

Nghiên cứu đặc tính sinh học của 2 loài

Phytophthora sp và Fusarium sp.

Phương pháp điều tra

✓Thực hiện điều tra theo phương pháp của Teresa Mc Maugh(2005), Đặng Vũ Thị Thanh, Hà Minh Trung (1997) điều tra ngẫunhiên 5 – 10 cây hoặc theo hình zic zac tùy điều kiện cụ thể, tạimỗi vườn tiến hành điều tra một lần

✓Các chỉ tiêu theo dõi: Mô tả, ghi nhận triệu chứng ngoài đồngcủa bệnh, tỉ lệ bệnh (%), chỉ số bệnh (%)

1 Điều tra, khảo sát tình hình bệnh chết nhánh sầu

riêng tại huyện Cai Lậy, tỉnh Tiền Giang

✓Công thức tính toán:

✓TLB (%) = (Số cây bệnh / Tổng số cây điều tra) * 100

✓CSB (%) = ((N1 * 1 + N2 * 2 + … + Nn * n) / (N * n)) * 100Trong đó:

✓N1, N2, , Nn: Số cây bệnh tương ứng ở cấp 1 , 2, …, n(cây)

✓N: Tổng số cây điều tra (cây)

✓n: Cấp bệnh cao nhất

✓Bảng phân cấp bệnh theo thang đánh giá của Đặng Vũ ThịThanh, Hà Minh Trung , 1997 và Burgess và ctv, 2008.

✓Cấp 1: 1 - 25% diện tích thân cây biểu hiện triệu chứng

✓Cấp 2: >25 - ≤ 50% diện tích thân cây biểu hiện triệu chứng

✓Cấp 3: >50 - ≤ 75% diện tích thân cây biểu hiện triệu chứng

✓Cấp 4: > 75% diện tích thân cây biểu hiện triệu chứng

*

Phương pháp thu mẫu (thân, cành bệnh)

Mẫu bệnh được thu thập từ những cây bệnh, có triệu chứng điển hình, mẫu được chọn là những mẫu có

1 phần mô cây thể hiện triệu chứng nâu, tiếp xúc với phần mô cây còn khỏe, mỗi cây bệnh lấy từ 3 - 4 mẫu, cho vào túi nylon, ghi địa chỉ, ký hiệu rõ ràng của mẫu bệnh, chuyển về phòng lab và tiến hành phân lập ngay.

✓Sau đó tiến hành cấy mẫu vào các môi trường PCA, PDA

Phương pháp giám định tác nhân gây bệnh chết thân, cành sầu riêng

Quan sát sợi nấm, hạch nấm, bào tử …trên kính hiển

vi hay kính hiển vi huỳnh quang theo phương pháp của Nguyễn Văn Tuất (1997) và bảng phân loại của Burgess

(1994) cho tác nhân là nấm Fusarium và bảng phân loại

của Donalt và Olaf (2005) cho tác nhân là nấm

Phytophthora, Pythium.

*

Phương pháp giám định loài mọt đục thân, cành sầu riêng

✓Mô tả triệu chứng gây hại và ghi nhận ngay tại vườn bệnh

✓Quan sát đặc điểm hình thái bằng mắt thường và quan sát dưới kính lúp

✓Nuôi chúng trong môi trường nhân tạo quan sát các đặc điểm sinh học của mọt

*

Phương pháp nuôi mọt đục thân, cành sầu riêng

✓Nuôi loài bọ cánh cứng trong các khay nhựa cung cấp thức ăn nhân tạo hằng ngày cho chúng, thức ăn nhân tạo là mía hoặc táo.

✓Đặt các khay này ở nhiệt độ phòng.

✓Mỗi khay nuôi khoảng từ 30 - 50 cá thể bọ cánh cứng

và tiến hành quan sát các khay này mỗi ngày 2 lần.

*

Mọt đục thân, cành sầu riêng trong

môi trường nhân tạo

Đối với những cá thể mọt đục thân, cành sầu riêng bị chết có thểtiến hành một trong 2 phương pháp sau:

• Phương pháp 1: Khử trùng thân bọ cánh cứng trong dung

dịch nước cất vô trùng sau đó làm khô các cá thể này với giấythấm và cấy các cá thể này vào môi trường PDA có khángsinh

• Phương pháp 2: Thu 50 cá thể bọ cánh cứng đã chết vào 10

ml nước cất vô trùng sau đó lắc đều bằng máy lắc Dùngpipep hút khoảng 20 µm dung dịch nước này cho vào các đĩapetri có môi trường PDA có kháng sinh đã chuẩn bị sẵn

*

3 Kiểm chứng tác nhân gây bệnh chết thân, cành sầu riêng

*

Đối tượng thực hiện

Cây sầu riêng giống Chuồng bò

4 - 6 tháng tuổi

Mọt đục thân, cành sầu riêng

Nấm Fusarium sp Nấm Phytophthora sp.

Các bước thưc hiện

4 Nghiên cứu đặc tính sinh học của 2 loài Phytophthora

*

Các bước thưc hiện

✓ Đổ khoảng 10 ml môi trường PCA vào đĩa petri có đường kính 8 cm.

✓ Sau thời gian từ 4- 8 giờ cấy khoanh nấm có đường kính 5 mm vào các đĩa môi trường và áp bề mặt nấm vào phần agar trong đĩa.

✓ Dùng thước kẻ 2 đường vuông góc ở mặt dưới đĩa petri.

✓ Đặt các đĩa petri này vào các điều kiện nhiệt độ nêu trên.

Các chỉ tiêu theo dõi: Đường kính khuẩn lạc (cm) ở các thời điểm.

Thời gian theo dõi: 48 giờ, 96 giờ, 144 giờ, 192 giờ sau cấy.

*

4.2 Xác định khoảng nhiệt độ thích hợp đối với nấm

Fusarium sp.

✓Phương pháp thực hiện, các bước thực hiện và chỉ tiêu theo dõi tương tự như ở mục 4.1 nhưng sử dụng môi trường PDA thay vì sử dung môi trường PCA

✓Thời gian theo dõi: 24 giờ, 48 giờ, 72 giờ, 96 giờ, 120 giờ sau cấy.

*

4.3 Xác định khoảng pH thích hợp đối với Phytophthora sp.

Thí nghiệm được bố trí theo kiểu hoàn toàn ngẫu nhiên 7 LLL (mỗi LLL là một đĩa petri) và với 7 nghiệm thức tương ứng với 7 mức

pH Các nghiệm thức được mã hóa như sau:

Các bước thực hiện

✓ Chuẩn bị môi trường PCA sau đó tiến hành chuẩn pH

✓ Đổ khoảng 10 ml môi trường PCA vào đĩa petri có đường kính 8 cm.

✓ Sau thời gian từ 4- 8 giờ cấy khoanh nấm có đường kính 5 mm vào các đĩa môi trường và áp bề mặt nấm vào phần agar trong đĩa.

✓ Dùng thước kẻ 2 đường vuông góc ở mặt dưới đĩa petri.

✓ Đặt các đĩa petri này vào các điều kiện nhiệt độ phòng.

Các chỉ tiêu theo dõi: Đường kính khuẩn lạc (cm) ở các thời điểm Thời gian theo dõi: 48 giờ, 96 giờ, 144 giờ, 192 giờ sau cấy

*

4.4 Xác định khoảng pH thích hợp đối với Fusarium sp.

✓Phương pháp thực hiện, các bước thực hiện và chỉ tiêu theodõi tương tự như ở mục 4.3 nhưng sử dụng môi trườngPDA thay vì sử dung môi trường PCA

✓Thời gian theo dõi: 24 giờ, 48 giờ, 72 giờ, 96 giờ, 120 giờsau cấy

*

4.5 Đánh giá khả năng phòng trừ nấm Fusarium sp của các

loại thuốc hóa học và sinh học trong phòng thí nghiệm.

Thí nghiệm được bố trí theo kiểu hoàn toàn ngẫu nhiên với 7 LLL và 7 nghiệm thức ứng với 6 loại thuốc và 1 nghiệm thức đối chứng không sử dụng thuốc Các nghiệm thức được mã hóa như sau:

Vôi nông nghiệp 10 g / lít 10000 ppm

Bảng 2.1: Liều lượng và nồng độ của các thuốc hóa học và sinh

học được sử dụng

Các bước thực hiện

✓ Cho nước cất vô trùng vào efpendof sau đó cho thuốc vào và lắc đều đợi đến khi môi trường thấp hơn 60 0C cho thuốc vào môi trường, sau đó đổ ra các đĩa petri có đường kính 8cm.

✓ Sau thời gian từ 4- 8 giờ cấy khoanh nấm có đường kính 5 mm vào các đĩa môi trường và áp bề mặt nấm vào phần agar trong đĩa.

✓ Dùng thước kẻ vạch 2 đường vuông góc trên mặt đĩa.

Các chỉ tiêu theo dõi: Đường kính khuẩn lạc (cm) ở các thời điểm Thời gian theo dõi: 48 giờ, 96 giờ, 144 giờ và 192 giờ sau cấy.

*

Phương pháp thống kê số liệu

Số liệu sau khi thu thập sẽ được thống kê bằng phần mềm Excel sau đó được xử lý thống kê ANOVA 1.0 và trắc nghiệm LSD hoặc Ducan bằng phần mềm Mstatc.

*

3.1 Kết quả điều tra tình hình bệnh chết nhánh sầu

riêng tại huyện Cai Lậy, tỉnh Tiền Giang.

*

Địa bàn Diện tích các vườn

điều tra (m 2 )

Tỉ lệ bệnh (%)

Bảng 3.2: Thành phần côn trùng, nhện gây hại phổ biến ở các

vườn điều tra

Rầy phấn Đọt non, lá non 15 75

3.2 Kết quả phân lập, giám định tác nhân gây

bệnh chết thân, cành sầu riêng

Từ 65 mẫu thu thập từ 13 vườn bệnh chúng tôi

đã phân lập được 2 tác nhân gây bệnh có đặc điểm

của nấm Fusarium sp và Phytophthora sp dựa trên

một số đặc điểm hình thái như sau:

*

Mẫu phân lập có đặc điểm của nấm Fusarium sp

*

Hình 3.1: Một số đặc điểm hình thái của nấm Fusarium sp.

A – Khuẩn lạc Fusarium sp ở thời điểm 144 giờ

B - Bào tử hình elip có một vách ngăn, bào tử hình trứng không có vách ngăn

C – Sợi nấm Fusarium sp.

Mẫu phân lập có đặc điểm của nấm Phytophthora sp.

*

Hình 3.2 : Một số đặc tính hình thái của Phytopthora sp.

A - Khuẩn lạc Phytopthora sp.ở 192h sau cấy

B - Túi bào tử.

C - Noãn bào tử dạng tròn

D – Khuẩn ty

Bảng 3.3: Tỷ lệ (%) các nấm phân lập từ mẫu bệnh.

*

Nấm phân lập Số mẫu phân lập Tỉ lệ (%)

Ngũ Hiệp Tam Bình Ngũ Hiệp Tam Bình

Phytophthora

Đặc điểm hình thái và sinh học của loài mọt đục thân, cành sầu riêng

*

Hình 3.3: Một số đặc điểm hình thái của loài mọt đục thân, cành sầu riêng

A -Trứng B - Ấu trùng tuổi 1 C - Ấu trùng tuổi 2

F - Thành trùng E - Nhộng D - Ấu trùng tuổi 3

Mới đẻ có hình bầu dục, màu trắng đục.

Trứng được đẻ thành từng cụm 5 - 10 trứng trong đường đục ở lớp

vỏ cây.

Thời gian ủ trứng 5 - 7 ngày.

Ấu trùng Không chân, màu trắng, có lông tơ bao phủ, hơi cong

Nhộng Có màu trắng sữa, dạng trần, làm trong đường đục của thành trùng.

Bảng 3.5: Đặc điểm hình thái và sinh học của mọt đục thân,

cành sầu riêng

Hình 3.4: Đặc điểm hình thái và sinh học của mọt đục thân, cành sầu riêng

Bảng 3.6: Kích thước trung bình ở các gian đoạn phát triển của

loài mọt đục thân, cành sầu riêng

Chiều dài 0,325 ± 0,025 Chiều rộng 0,15 ± 0,02

Ấu trùng tuổi cuối

Chiều rộng 0,375 ± 0,075 Nhộng

Chiều dài 2,35 ± 0,15 Chiều rộng 0,45 ± 0,05

(Ghi chú: Số lượng cá thể quan sát = 10)

Hình 3.5: Triệu chứng gây hại của loài mọt đục thân, cành sầu riêng.

A - Đường đục trong thân gỗ

B - Triệu chứng ở bên ngoài

C - Đường đục ở vỏ cây.

Từ những đặc điểm hình thái, sinh học và triệu chứng gây hại nêu trên chúng tôi thu được kết quả loài mọt đục thân cành sầu riêng là loài

Xyleborus sp.

3.3 Kiểm chứng tác nhân gây bệnh chết thân, cành sầu riêng

Fu + Xy 32,0c 38,7cd 1,8bc 4,637d Đen, khô, lá bình thường ở giai đoạn từ 1 - 7 NSXL, sau đó lá bắt

đầu vàng và rụng dần, có vết đục của Xyleborus, sáng sớm có mũ

ướt vết bệnh.

Phy + Xy 59,7ab 89,7a 3,4ab 10,7a Dài, màu nâu đen, khô, chỉ nâu dọc theo thân, lá vàng và rụng từ

từ, có vết đục của Xyleborus, sáng sớm có mũ ướt vết bệnh.

Phy + Fu+ Xy 33,3b 69,7b 1,9bc 8,4ab Dài, màu nâu đen, khô, chỉ nâu dọc theo thân, lá vàng và rụng

trong thời gian ngắn, có vết đục của Xyleborus, sáng sớm có mũ

Hình 3.6: Sự phát triển của

nấm Phytophthora sp ở các

mức nhiệt độ khác nhau tại thời

điểm 72 giờ sau cấy.

Thời gian (giờ)

Đồ thị 2: Sự phát triển của nấm Fusarium sp ở các mức nhiệt độ

khác nhau.

Thời gian (giờ)

Đồ thị 3: Sự phát triển của nấm Phytophthora sp ở các mức pH

khác nhau

Hình 3.7: Sự phát triển của

nấm Phytophthora sp ở các

mức pH khác nhau tại thời

điểm 96 giờ sau cấy.

Thời gian (giờ)

Đồ thị 3: Sự phát triển của nấm Fusarium sp ở các mức pH khác nhau.

Hình 3.7: Sự phát triển của nấm Fusarium sp ở các mức pH khác

nhau tại thời điểm 144 giờ sau cấy.

Thời gian (giờ)

Đồ thị 5: Sự phát triển của Fusarium sp trong môi trường nhiễm độc thuốc

hóa học và sinh học.

*

✓ Trong thời gian thực hiện đề tài chúng tôi điều tra được 20 vườn ở 2 xã Ngũ Hiệp và Tam Bình của huyện Cai Lậy với 13 vườn xuất hiện triệu chứng bệnh chết thân, cành sầu riêng.

✓ Bệnh chết thân, cành sầu riêng là một bệnh hại xuất hiện khá phổ biến tại vùng trồng sầu riêng ở Cai Lậy, Tiền Giang Theo kết quả phân lập,

giám định thì nấm Phytophthora sp., Fusarium sp và Phytophthora

palmivora là tác nhân gây bệnh chết thân, cành ở sầu riêng Cùng với

tác nhân gây bệnh là nấm thì loài mọt đục thân cành Xyleborus sp cũng

xuất hiện ở tất cả các cây bệnh chết thân, cành này.

*

4.1 Kết luận

✓ Các nghiệm thức Xy + Phy, Xy + Phy + Fu cho triệu chứng bệnh

gần giống thực tế nhất đồng thời cũng có CSB và chiều dài vết bệnh khác biệt có ý nghĩa về mặt thống kê so với các nghiệm thức còn lại.

✓ Nấm Phytophthora sp và Fusarium sp đều phát triển tốt ở

khoảng nhiệt độ từ 20 – 35 0C và ở khoảng pH 4.5 – 7.5

✓ Riêng đối với nấm Fusarium sp thuốc phòng trừ có hiệu quả

nấm này trong phòng thí nghiệm là Norshield 86, 2 WP và

Ridomil Gold 68 WP.

*

4.2 Đề nghị

✓Do số lượng vườn điều tra còn hạn chế nên không phảnánh được một cách cụ thể tình hình bệnh chết thân, cànhsầu riêng cần tiến hành điều tra bệnh này ở diện rộng hơn

✓Loài Xyleborus sp xuất hiện khá phổ biến tại vùng sầu

riêng ở Tiền Giang nhưng hiện nay những hiểu biết vềloài này còn hạn chế cần có những nghiên cứu sâu hơn vềloài này

*

Các Thầy Cô trong khoa Nông Học

TS Võ Thị Thu Oanh và ThS Đặng Thị Kim Uyên

Các Thầy Cô trong Ban Hội Đồng

NT Fu.

*