Thông nước (Glyptostrobus pensilis) là loài cây có tên trong Sách Đỏ Việt Nam và Danh lục Đỏ IUCN với cấp độ CR (rất nguy cấp). Ở Việt Nam, có khoảng 300 cá thể thông nước, phân bố chủ yếu ở rừng đặc dụng Earal thuộc huyện EaH’Leo và khu bảo tồn thiên nhiên Trấp Ksor, Krông Năng. Thông nước không những có giá trị về mặt khoa học mà nó còn có giá trị về mặt kinh tế. Vì thế, việc nghiên cứu bảo tồn và phát triển loài cây này là hết sức cấp bách. Những nỗ lực nghiên cứu tái sinh loài cây này bằng hạt đều không có kết quả. Vì vậy, nhân giống vô tính (giâm cành, ghép, cấy mô) có thể là giải pháp cho nhân nhanh cây thông nước. Mặc dù đã có một số công bố về nhân giống thông nước bằng cấy mô tế bào nhưng kết quả vẫn còn hạn chế, đặc biệt là việc tạo cây hoàn chỉnh. Trong bài này, chúng tôi công bố kết quả nhân và tạo cây thông nước hoàn chỉnh trong điều kiện in vitro và đưa ra môi trường đất. Môi trường WP với 0,5 mg/l BAP; 0,2 mg/l NAA; 0,2 g/l myo-inositol; 20 g/l đường sucrose; 2 g/l than hoạt tính và 8 g/l thạch là môi trường phù hợp cho nhân chồi thông nước in vitro. Môi trường WP với 0,2 mg/l IBA hoặc NAA cho cảm ứng ra rễ từ chồi thông nước in vitro. Tuy nhiên, tỷ lệ ra rễ còn thấp. Tiền xử lý chồi thông nước in vitro với hàm lượng IBA cao đã gia tăng tỷ lệ ra rễ ở các chồi, tỷ lệ đạt 5,55%. Những kết quả nhận được sẽ đóng góp vào nghiên cứu bảo tồn và phát triển loài cây quý hiếm và đang bị đe dọa này.
TẠP CHÍ SINH HỌC, 2012, 34(2): 228-234 TẠO CÂY THƠNG NƯỚC - Glyptostrobus pensilis (Staunton ex D Don) K Koch HOÀN CHỈNH TỪ CHỒI NHÂN IN VITRO Nguyễn Đức Thành*, Đặng Thị Minh Lụa, Quách Thị Liên Viện Công nghệ sinh học, (*)nguyenducthanh_pcg@ibt.ac.vn TĨM TẮT: Thơng nước (Glyptostrobus pensilis) lồi có tên Sách Đỏ Việt Nam Danh lục Đỏ IUCN với cấp ñộ CR (rất nguy cấp) Ở Việt Nam, có khoảng 300 cá thể thơng nước, phân bố chủ yếu rừng ñặc rụng Earal thuộc huyện EaH’Leo khu bảo tồn thiên nhiên Trấp Ksor, Krơng Năng Thơng nước khơng có giá trị mặt khoa học mà có giá trị mặt kinh tế Vì thế, việc nghiên cứu bảo tồn phát triển loài cấp bách Những nỗ lực nghiên cứu tái sinh loài hạt khơng có kết Vì vậy, nhân giống vơ tính (giâm cành, ghép, cấy mơ) giải pháp cho nhân nhanh thơng nước Mặc dù có số cơng bố nhân giống thông nước cấy mô tế bào kết hạn chế, đặc biệt việc tạo hồn chỉnh Trong này, chúng tơi cơng bố kết nhân tạo thơng nước hồn chỉnh điều kiện in vitro đưa mơi trường đất Mơi trường WP với 0,5 mg/l BAP; 0,2 mg/l NAA; 0,2 g/l myo-inositol; 20 g/l ñường sucrose; g/l than hoạt tính g/l thạch mơi trường phù hợp cho nhân chồi thông nước in vitro Môi trường WP với 0,2 mg/l IBA NAA cho cảm ứng rễ từ chồi thông nước in vitro Tuy nhiên, tỷ lệ rễ thấp Tiền xử lý chồi thông nước in vitro với hàm lượng IBA cao ñã gia tăng tỷ lệ rễ chồi, tỷ lệ ñạt 5,55% Những kết nhận ñược đóng góp vào nghiên cứu bảo tồn phát triển lồi q bị đe dọa Từ khóa: Glyptostrobus pensilis, hồn chỉnh, chồi in vitro, thông nước, tiền xử lý, tạo rễ MỞ ĐẦU Thơng nước (thủy tùng) lồi xuất thời với bách xanh cổ, cách ñây khoảng 10 triệu năm, loài gỗ lớn, cao tới 25 m, đường kính thân từ 60-80 cm Thơng nước có tên Sách Đỏ Việt Nam 2007 [2] Danh lục Đỏ IUCN [15], ñược ñánh giá với cấp ñộ CR (rất nguy cấp) xem hóa thạch sống ngành hạt trần Việt Nam Trước đây, thơng nước ñược phát phân bố Trung Quốc, Việt Nam [3, 4] Hiện nay, Trung Quốc khơng cá thể thơng nước tự nhiên; Lào, có khoảng 100 cá thể tìm thấy cao ngun Nakai Ở Việt Nam, có khoảng 300 cá thể thơng nước, phân bố chủ yếu rừng ñặc rụng Earal thuộc huyện EaH’Leo khu bảo tồn thiên nhiên Trấp Ksor, Krơng Năng Ngồi ra, vài cá thể Cư Né, Quảng Hà Trường Hà [13] Tuy nhiên, cá thể thông nước ngày già cỗi thối hóa nghiêm trọng, khi, 20 năm qua khơng thu hạt từ [1] Thơng nước khơng có giá trị mặt khoa học mà có giá trị mặt kinh tế Từ vỏ chiết xuất ñược số dược liệu quý chữa bệnh ung thư, bệnh 228 phong, thuốc giảm ñau Gỗ thơng nước chắc, vân đẹp, khơng bị mối mọt, có màu nâu đỏ viền vàng nên ưa chuộm ñể xây dựng ñền ñài, nhà cửa, ñồ mỹ nghệ, ñồ dùng cao cấp Với giá trị trên, thông nước lồi q bị săn lùng riết Nhiều năm qua, nhà khoa học ñã tiến hành nghiên cứu nhằm phục hồi loài cấy quý Những nỗ lực nghiên cứu tái sinh loài hạt khơng có kết Vì vậy, nhân giống vơ tính (giâm cành, cấy mơ, ghép) giải pháp cho nhân nhanh thông nước Các tác giả Trung Quốc cơng bố thành cơng bước ñầu nhân giống giâm cành tái sinh từ chồi nách [7] tái sinh thông qua đường phân hóa quan [5, 6] Ở Việt Nam, có thơng tin nhân Thơng nước giâm cành, cấy mô ghép chồi gốc lồi xong kết hạn chế [12, 14] Trong này, công bố kết nhân tạo thơng nước hồn chỉnh điều kiện in vitro đưa mơi trường đất Những kết đạt đóng góp vào nghiên cứu bảo tồn phát triển loài quý ñang bị ñe dọa PHƯƠNG PHÁP NGHIÊN CỨU Nguyen Duc Thanh, Dang Thi Minh Lua, Quach Thi Lien Vật liệu Mẫu cành thơng nước lấy từ cá thể thông nước cổ thụ Trấp Ksor, Krông Năng, Đắk Lắk Môi trường nuôi cấy sử dụng môi trường Smith [10], WP [8] MS [9] thành ñoạn mang 2-3 chồi cấy vào loại môi trường nhân chồi môi trường Smith WP cộng thêm 0,5 mg/l BAP; 0,2 mg/l NAA; 0,2 g/l myo-inositol; 20 g/l ñường sucrose; g/l thạch; g/l than hoạt tính; pH 5,65,8 nhằm khảo sát hệ số nhân chồi loại môi trường Phương pháp Phương pháp khử trùng mẫu: mẫu ñược rửa với xà phòng qua vòi nước chảy liên tục, tiến hành khử trùng theo bước sau: rửa nước cất vô trùng lần, rửa cồn 70% phút sau rửa lại với nước cất vô trùng lần, ngâm mẫu dung dịch HgCl2 0,2% khoảng thời gian ñịnh phút lắc lần Cuối rửa mẫu với nước cất vô trùng 35 lần ngâm mẫu nước cất khoảng 15 phút trước cấy Trong nghiên cứu sử dụng phương pháp khử trùng kép với HgCl2 0,2% với khoảng thời gian khác Phương pháp tạo chồi từ mắt ngủ: sau khử trùng, mẫu ñược cắt thành ñoạn dài 5-8 cm cấy vào ống nghiệm nhỏ kích thước × 20 cm chứa môi trường tạo chồi bao gồm môi trường Smith cộng thêm mg/l BAP; 0,1 mg/l NAA; 30 mg/l ñường sucrose; g/l agar; pH 5,6-5,8 Phương pháp tạo rễ từ chồi nuôi cấy in vitro: chồi tạo nhân môi trường nhân chồi hồn tồn khơng rễ Để tạo rễ, chồi đưa lên mơi trường tạo rễ gây cảm ứng tạo rễ sau đưa lên mơi trường tạo rễ Phân tích số liệu: giá trị trung bình sai số chuẩn tính tốn theo phần mềm Excel Phương pháp nhân chồi: sau tháng nuôi cấy mơi trường tạo chồi, chồi bắt đầu nhú từ mắt ngủ cành Mẫu ñược cắt nhỏ KẾT QUẢ VÀ THẢO LUẬN Khử trùng tạo chồi từ mắt ngủ Do mẫu cành chồi thơng nước có lớp vỏ ngồi khơng phẳng mẫu ñược lấy từ lâu năm nên lớp vỏ ngồi có nhiều vi khuẩn nấm Để tạo ñược mẫu cấy vô trùng, ñã sử dụng dung dịch HgCl2 0,2% phương pháp khử trùng kép với thời gian khác Sau khử trùng, cấy mẫu vào môi trường tạo chồi, sau tháng nuôi cấy môi trường tạo chồi, chúng tơi xác định tỷ lệ mẫu nhiễm, tỷ lệ mẫu chết, tỷ lệ mẫu tạo chồi ñể nghiên cứu ảnh hưởng thời gian khử trùng lên sức sống tạo chồi mẫu Kết ñược bảng Bảng Ảnh hưởng thời gian khử trùng kép lên tỷ lệ nhiễm tạo chồi mẫu chồi Thông nước Thời gian khử trùng kép (phút) 10 10 10 15 10 Số mẫu cấy 52 67 69 Kết bảng cho thấy, thời gian khử trùng dài tỷ lệ mẫu nhiễm giảm tỷ lệ mẫu chết lại tăng HgCl2 gây ñộc cho mẫu Tỷ lệ mẫu tạo chồi giảm dần thời gian xử lý tăng đần Với ba cơng thức có thời gian khử trùng khác nhau, cơng thức khử phút sau rửa tiếp tục khử 10 phút cho tỷ lệ mẫu cho chồi cao Tỷ lệ mẫu nhiễm (%) 28,8 20,9 13,1 Tỷ lệ mẫu chết (%) 3,8 19,4 26,1 Tỷ lệ mẫu tạo chồi (%) 50 34,3 17,3 (tới 50%) Vì vậy, chúng tơi sử dụng phương pháp khử trùng kép HgCl2 0,2% (khử trùng lần phút, lần hai 10 phút) để khử trùng mẫu thơng nước nghiên cứu Nhân chồi chồi ban ñầu Sau thời gian nhân chồi - tuần hai 229 TẠP CHÍ SINH HỌC, 2012, 34(2): 228-234 loại môi trường môi trường Smith WP với 0,5 mg/l BAP; 0,2 mg/l NAA; 0,2 g/l myo-inositol; 20 g/l ñường sucrose; g/l thạch; g/l than hoạt tính Hệ số nhân chồi xác định cách ñếm số chồi tạo từ 10 mẫu loại môi trường Kết ñược bảng Bảng Ảnh hưởng môi trường lên hệ số nhân chồi Thông nước in vitro Mồi trường Smith WP Hệ số nhân chồi 15,7 ± 4,6 12,1 ± 3,1 Kết cho thấy, hệ số nhân chồi hai loại mơi trường cao, hệ số nhân chồi môi trường Smith cao môi trường WP Tuy nhiên, môi trường WP, chồi phát triển tốt hơn, phần lớn ñạt chiều cao cm có nhiều chồi đạt chiều cao cm (hình 1) Vì vậy, chọn môi trường WP làm môi trường ñể nhân chồi cho thí nghiệm rễ Nhân nhanh tạo nguồn nguyên liệu Thông nước in vitro Ba cơng thức mơi trường sử dụng cho nhân nhanh tạo nguồn nguyên liệu thông nước in vitro (bảng 3) Kết cho thấy, môi trường WP cho từ 1-3 chồi, mẫu thông nước phát triển nhanh chiều cao, hệ số nhân chồi thấp, trung bình 2,2 chồi Trên mơi trường WP có bổ sung thành phần vitamin WP, từ mẫu cấy ban ñầu thường cho từ ñến chồi, hệ số nhân chồi trung bình 4,18 chồi Bảng Ảnh hưởng mơi trường ni cấy đến hệ số nhân chồi thông nước in vitro Công thức Môi trường WP WP + vit WP WP + vit WP Casein (mg/l) 100 Đối với công thức môi trường WP + vitWP bổ sung them 100 mg/l casein, hệ số nhân chồi cao nhất, ñạt từ 6-8 chồi Quan sát mắt thường cho thấy, mẫu sau 45 ngày nuôi cấy thường phát triển thành cụm chồi, phần tạo đế, chồi khơng phát triển chiều cao (hình 2) Nguyên nhân phát triển thành cụm chồi công thức mơi trường mơi trường có bổ sung casein, casein kích thích tạo phân hóa mạnh mẽ phát triển thành cụm chồi Số lượng chồi nhiều nên có cạnh tranh dinh dưỡng, vậy, cụm chồi không phát triển chiều cao Kết phù hợp với kết luận Đỗ Tiến Phát nnk (2009) [11] nghiên cứu bổ sung casein vào môi trường ni cấy tạo đa chồi Pinus merkusii Jungh & de Vies Tác giả có kết luận, bổ sung casein kích thích phân chia, tạo ña chồi; nhiên nuôi cấy thời gian định, sau cấy chuyển sang mơi trường kéo dài chồi Như vậy, công thức môi trường WP + vitWP + 100 mg/l casein cho hệ số nhân chồi cao nhất, hệ số trung bình 230 Số mẫu Số chồi Hệ số nhân chồi 50 50 50 110 209 431 2,20 4,18 8,62 8,62 chồi Hệ số cao kết công bố Li et al (2008) [6], tác giả nhận hệ số nhân chồi 4,19 môi trường MS Hệ số tạo chồi chồi in vitro (bảng 3) thấp hệ số tạo chồi ban ñầu (bảng 2) có lẽ thời gian nuôi cấy, chồi in vitro thường thời gian hình thành mơ sẹo phần đế sau tái sinh cụm chồi Phụ thuộc vào thành phần mơi trường số chồi tạo khác cơng thức Trong thời gian tuần đầu, số chồi thường chưa nhiều, tiếp tục nuôi, cấy số chồi tăng lên ñáng kể Các nhân tố ảnh hưởng đến hình thành rễ thơng nước in vitro Ảnh hưởng chất điều hòa sinh trưởng đến khả rễ thông nước in vitro Trong q trình ni cấy, chồi hình thành phát sinh rễ tự nhiên, nhiên thông nước khả tạo rễ từ chồi nuôi cấy Do đó, việc nghiên cứu tạo rễ cần nghiên cứu Để tạo rễ, mơi trường Nguyen Duc Thanh, Dang Thi Minh Lua, Quach Thi Lien WP có bổ sung hàm luợng auxin khác nhau, cụ thể IBA NAA với hàm lượng lần luợt 0,2 mg/l, 0,5 mg/l, mg/l ñược sử dụng Kết thu ñược thể bảng Từ kết thu ñược bảng thấy rằng, bổ sung 0,2 IBA mg/l vào môi trường nghiên cứu, hầu hết mẫu thông nước sinh trưởng phát triển bình thường tỷ lệ lên tới 78,2% Ở số mẫu thông nước nuôi cấy có tượng phình to phần chân mẫu tiếp xúc với mơi trường ni cấy (tạo đế), tỷ lệ chiếm đến 20%, đó, tỷ lệ rễ ñạt 1,28% Bảng Ảnh hưởng chất ñiều hòa sinh trưởng đến khả rễ thơng nước Cơng thức WPI1 WPI2 WPI3 WPN1 WPN2 WPN3 Hóa chất IBA NAA Hàm lượng (mg/l) 0,2 0,5 0,2 0,5 Số mẫu cấy 55 60 50 55 54 60 Khi tăng nồng độ IBA bổ sung vào mơi trường nuôi cấy lên 0,5 mg/l, thấy tỷ lệ mẫu phình to phần chân tiếp xúc (tạo đế) lên đến 53%; tỷ lệ mơ sẹo hóa 35%; số sinh trưởng bình thường 12% Khơng có mẫu tạo rễ Tiếp tục tăng nồng độ IBA bổ sung vào mơi trường ni cấy lên đến mg/l tồn số mẫu thơng nước sau 60 ngày ni cấy mơ sẹo hóa Như vậy, bước đầu chúng tơi có nhận xét, hàm lượng chất điều hòa sinh trưởng IBA cao khả mơ sẹo hóa mẫu thơng nước lớn; với hàm lượng IBA nhỏ 0,2 mg/l ñã có tạo rễ thơng nước Tuy nhiên, tỷ lệ thấp Đối với trường hợp NAA, bổ sung 0,2 mg/l vào môi trường nghiên cứu, số lượng tương đối lớn mẫu thơng nước phình to phần chân mẫu (tạo đế) tiếp xúc với mơi trường (tỷ lệ 34,5%) 49% số mẫu thơng nước sinh trưởng phát triển bình thường Tỷ lệ tạo rễ ñạt 2,04% Khi tăng nồng ñộ NAA bổ sung vào môi trường nuôi cấy lên 0,5 mg/l mg/l, chúng tơi thu tồn số mẫu thơng nước mơ sẹo hóa sau 60 ngày ni cấy Cũng giống nghiên cứu bổ sung IBA vào môi trường nuôi cấy, nghiên cứu bổ sung chất điều hòa sinh trưởng NAA vào Cây bình thường (%) 78,2 12 49 - Số mẫu tạo rễ (%) 1,28 2,04 - Số mẫu mơ sẹo hóa (%) 35 100 12,7 100 100 Số mẫu tạo ñế (%) 20 53 34,5 - môi trường nuôi cấy, bước đầu chúng tơi có nhận xét, hàm lượng NAA cao khả mơ sẹo hóa mẫu thơng nước lớn; với hàm lượng NAA nhỏ 0,2 mg/l có tượng tạo rễ thơng nước Như vậy, với nồng độ chất điều hòa sinh trưởng (IBA, NAA) ≤ 0,2 mg/l ñã xuất rễ thơng nước Tuy nhiên, số mẫu rễ ít, nên vấn đề tạo rễ thơng nước cần tiếp tục nghiên cứu Ảnh hưởng xử lý auxin nồng ñộ cao ñến khả rễ chồi thông nước nuôi cấy in vitro Kết nghiên cứu ảnh hưởng chất sinh trưởng ñưa vào môi trường nuôi cấy lên khả tạo rễ chồi thông nước cho thấy tỷ lệ tạo rễ thấp Khi tăng nồng độ lên cao mơi trường ni cấy lại ảnh hưởng xấu đến tạo rễ thiên tạo mơ sẹo Vì vậy, nghiên cứu việc xử lý chồi in vitro với nồng độ auxin cao trước ni cấy mơi trường có nồng độ auxin thấp (tiền xử lý) Dựa kinh nghiệm nghiên cứu giâm cành, IBA thường dùng để xử lý rễ Vì vậy, nghiên cứu IBA với nồng ñộ cao (10 mg/l, 20 mg/l 40 mg/l) ñã ñược sử dụng cho việc tiền xử lý chồi in vitro trước đưa lên mơi trường rễ có nồng ñộ IBA 0,2 mg/l Kết ñược bảng 231 TẠP CHÍ SINH HỌC, 2012, 34(2): 228-234 Bảng Ảnh hưởng tiền xử lý IBA nồng ñộ cao đến khả rễ chồi thơng nước nuôi cấy in vitro Công thức TXL1 TXL2 TXL3 Nồng ñộ (mg/l) 10 20 40 Số chồi 75 80 90 Tỷ lệ chồi bình thường (%) 100 96,2 91 Kết bảng cho thấy, xử lý IBA nồng ñộ cao ñã gia tăng khả rễ chồi thông nước nuôi cấy in vitro Như vậy, chúng tơi tạo thơng Hình Chồi thông nước phát triển môi trường WP Số chồi tạo rễ Số chồi mô sẹo hóa (%) 0 Số chồi tạo đế (%) 2,5 5,55 nước hoàn chỉnh từ chồi nhân in vitro (hình 3A) thơng nước với rễ phát triển ñược ñưa trồng vào chậu với giá thể trấu hun đất (tỷ lệ 1:1) (hình 3B) Hình Cụm chồi thông nước phát triển môi trường WP + vitWP bổ sung thêm 100 mg/l casein A B Hình Cây thơng nước với rễ phát triển (A) trồng chậu ñất (B) KẾT LUẬN Từ kết nhận chúng tơi rút số kết luận sau: Phương pháp khử trùng kép HgCl2 0,2% (khử trùng lần phút, lần hai 10 phút) cho hiệu chồi cao 232 Môi trường WP với 0,5 mg/l BAP; 0,2 mg/l NAA; 0,2 g/l myo-inositol; 20 g/l ñường sucrose; g/l thạch; g/l than hoạt tính mơi trường phù hợp cho nhân chồi thông nước in vitro Môi trường WP với 0,2 mg/l IBA Nguyen Duc Thanh, Dang Thi Minh Lua, Quach Thi Lien NAA cho cảm ứng rễ từ chồi thông nước in vitro Tuy nhiên, tỷ lệ rễ thấp Tiền xử lý chồi thơng nước in vitro với hàm lượng IBA cao ñã gia tăng tỷ lệ rễ chồi, tỷ lệ ñạt 5,55% Lời cảm ơn: Các tác giả xin cảm ơn tiến sĩ Nguyễn Tiến Hiệp ñã hỗ trợ việc tiếp cận số quần thể thu mẫu thơng nước tỉnh Đắk Lắk Cơng trình hồn thành với kinh phí đề tài cấp sở Viện Cơng nghệ sinh học “Nghiên cứu nhân giống thông nước” TÀI LIỆU THAM KHẢO Averyanov L V., Phan K L., Nguyen T H., Nguyen S K., Nguyen T V., Pham T D., 2009 Preliminary observation of native Glyptostrobus pensilis (Taxodiaceae stands in Vietnam, Taiwania, 54(3): 191-212 Bộ Khoa học Công nghệ, Viện Khoa học Công nghệ Việt Nam, 2007 Sách Đỏ Việt Nam Phần II - Thực vật Nxb Khoa học tự nhiên Công nghệ Trang 524-525 Farjon A., C N Page, 1999 Conifers Status survey and conservation action plan IUCNISSC Conifer Specialist Group IUCN, Gland, Switzerland and Cambridge, UK Li F G., N H Xia, 2004 The geographical distribution and cause of threat to Glyptostrobus pensilis (Taxodiaceae) J Trop Subtrop Bot., 12: 13-20 Li B., Li H G., Wang G P., 2006 Tissue Culture and Plantlet Regeneration of Glyptostrobus pensilis (Lamb.) K Koch Plant Physiol Comm., 42(6): 1136 Li B., Li H G., Wang G P., 2008 Plantlet Regeneration of Glyptostrobus pensilis (Lamb.) K Koch from seedling stem, http://www.paper.edu.cn/index.php/default/r eleasepaper/content/200806-390 Li B., Li H., 2008 Studies on the Vegetative Propagation Techniques of Glyptostrobus pensilis (Lamb.) K Koch Guilin J Teacher Colleges, 22(3): 72-79 McCown B H., Lloyd G., 1981 Woody plant medium (WPM) A revised mineral nutrient formulation for microculture of woody plant species Hort Sci., 16: 453 Murashige T., Skoog F., 1962 A revised medium for rapid growth and bioassay with tobacco tissue cultures Physiol Plant, 15: 475-497 10 Smith D R., Horgan K R., Aitken-Christie J., 1982 Micropropagation of Pinus radiata for forestation In: Fujiwara A (Ed) Plant Tissue Culture Proc 5th Intern Cong Plant Tissue and Cell Culture, Maruzen, Tokyo, 1982, pp: 723-724 11 Đỗ Tiến Phát, Đinh Thị Phòng, Nguyễn Văn Phượng, Chu Hồng Hà, Vương Đình Tuấn, 2009 Nghiên cứu tái sinh thông nhựa (Pinus merkussi Jungh & de Vries) thông qua phơi hạt chín Tạp chí Cơng nghệ sinh học, 7(1): 59-65 12 Nguyễn Thanh Sum, Phạm Ngọc Tuân, Nguyễn Văn Kết, 2007 Ứng dụng phương pháp vi nhân giống bảo tồn giống thông nước Glyptostrobus Pensilis (Staunton ex D Don) K Koch Tạp chí Khoa học kỹ thuật Nơng Lâm nghiệp, Đại học Nơng Lâm Hồ Chí Minh, 1+2: 75-81 13 Nguyễn Minh Tâm, 2011 Bảo tồn sử dụng bền vững số lồi thơng q có giá trị kinh tế cao bị đe dọa tuyệt chủng khu hệ nấm cộng sinh có ích loài nghiên cứu Báo cáo Tổng kết dự án Khoa học công nghệ bảo vệ môi trường Hà Nội, 2011 14 Trần Vinh, 2010 Nghiên cứu ñặc ñiểm sinh học, sinh thái nhân giống, bảo tồn thông nước Việt Nam http://agriviet.com/nd/3745-nhan-giong-votinh-cay-thuy-tung/ 15 Thomas P., Yang Y., Farjon A., Nguyen D., Liao W., 2011 Glyptostrobus pensilis In: IUCN 2011 IUCN Red List of Threatened Species Version 2011.2 Downloaded on 16 April 2012 233 TẠP CHÍ SINH HỌC, 2012, 34(2): 228-234 REGENERATION OF COMPLETE Glyptostrobus pensilis (Staunton ex D Don) K Koch PLANTS FROM IN VITRO DERIVED SHOOTS Nguyen Duc Thanh, Dang Thi Minh Lua, Quach Thi Lien Institute of Biotechnology, VAST SUMMARY Glyptostrobus pensilis (Staunton ex D Don.) K Koch is an endangered species that cited in Vietnam and World’s Red Books In Vietnam, Glyptostrobus pensilis is distributed in two locations of Dak Lak province: about 200 individuals in special use forest of Earal, EaH’Leo district and 30 individuals in Trap Ksor’s special use forest of Krong Nang district Glyptostrobus pensilis is not only important for botanical science as a living fossil of gymnosperm, but for economic value as well Therefore, the study on conservation and development of this tree species is a very urgent task Many attempts to regenerate the tree from the seeds have been failed So, the vegetative propagation (cutting, grafting and tissue culture) could be a good alternative solution for rapid propagation of Glyptostrobus pensilis Although, there were some reports on propagation of Glyptostrobus pensilis by tissue culture, but the generation of whole plants in in vitro condition was still limited In this paper, the regeneration of complete Glyptostrobus pensilis plants from in vitro derived shoots and successful transfer of the plants to the soil are presented The WP medium with 0.5 mg/l BAP, 0.2 mg/l NAA, 0.2 g/l myo-inositol, 20 g/l sucrose, g/l active charcoal and g/l agar was suitable for shoot propagation The WP medium supplemented with 0.2 mg/l IBA or NAA did the promotion of root formation, but the root production rate was still low The pretreatment of in vitro shoots by high concentration of IBA has enhanced the root production rate from in vitro derived shoots up to 5.55% The results obtained in this study will contribute to the conservation and development of this rare, valuable and endangered tree species Keywords: Glyptostrobus pensilis, complete plant, in vitro shoot, pretreatment, root formation Ngày nhận bài: 10-1-2012 234 ... cấy in vitro Như vậy, chúng tơi tạo thơng Hình Chồi thơng nước phát triển mơi trường WP Số chồi tạo rễ Số chồi mơ sẹo hóa (%) 0 Số chồi tạo ñế (%) 2,5 5,55 nước hoàn chỉnh từ chồi nhân in vitro. .. 5, 6-5 ,8 Phương pháp tạo rễ từ chồi nuôi cấy in vitro: chồi tạo nhân môi trường nhân chồi hồn tồn khơng rễ Để tạo rễ, chồi đưa lên mơi trường tạo rễ gây cảm ứng tạo rễ sau đưa lên mơi trường tạo. .. môi trường để nhân chồi cho thí nghiệm rễ Nhân nhanh tạo nguồn nguyên liệu Thông nước in vitro Ba cơng thức mơi trường sử dụng cho nhân nhanh tạo nguồn nguyên liệu thông nước in vitro (bảng 3)