Nghiên cứu nhân giống cây tục đoạn (dipsacus japonicus), Phương pháp nuôi cấy mô

Nhân giống Tục đoạn (Dipsacus japonicus Miq) bằng phương pháp nuôi cấy mô đã được nghiên cứu thành công, kết quả cho thấy: Khử trùng hạt bằng HgCl2 0,1% trong thời gian 1 phút và Javel 5% trong thời gian 20 phút cho kết quả 60% hạt sạch nảy mầm. Khử trùng chồi bằng HgCl2 0,1% trong thời gian 2,5 phút, đạt kết quả 22,2% mẫu sạch nảy chồi. Môi trường dinh dưỡng cơ bản MS bổ sung 0,4 mg/l BAP; 0,4 mg/l TDZ thích hợp để nhân nhanh chồi, với 100% mẫu tạo cụm chồi, 5,2 chồi/cụm, chiều cao chồi đạt 3,4 cm.

Công nghệ sinh học & Giống trồng NGHIÊN CỨU NHÂN GIỐNG CÂY TỤC ĐOẠN (Dipsacus japonicus) BẰNG PHƯƠNG PHÁP NUÔI CẤY MÔ Khuất Thị Hải Ninh1, Phan Thị Trang1, Nguyễn Thị Thơ1, Bùi Văn Thắng1, Vũ Văn Hiếu2 Trường Đại học Lâm nghiệp Trung tâm Nghiên cứu giống trồng Đạo Đức – Hà Giang TÓM TẮT Nhân giống Tục đoạn (Dipsacus japonicus Miq) phương pháp nuôi cấy mô nghiên cứu thành công, kết cho thấy: Khử trùng hạt HgCl2 0,1% thời gian phút Javel 5% thời gian 20 phút cho kết 60% hạt nảy mầm Khử trùng chồi HgCl2 0,1% thời gian 2,5 phút, đạt kết 22,2% mẫu nảy chồi Môi trường dinh dưỡng MS bổ sung 0,4 mg/l BAP; 0,4 mg/l TDZ thích hợp để nhân nhanh chồi, với 100% mẫu tạo cụm chồi, 5,2 chồi/cụm, chiều cao chồi đạt 3,4 cm Tăng trưởng chồi môi trường dinh dưỡng MS bổ sung 0,4 mg/l BAP; 0,2 mg/lKinetin; 0,1 mg/l NAA, chiều cao chồi đạt 7,5 cm Môi trường dinh dưỡng MS bổ sung 0,4 mg/l NAA phù hợp để tạo hoàn chỉnh,với tỉ lệ chồi rễ đạt 100%, chất lượng rễ tốt Cây mô trồng giá thể phối trộn 50% đất tầng B với 25% cát 25% trấu hun, cho tỷ lệ sống 60% sau tuần ngơi Từ khố: Cụm chồi, nhân giống, ni cấy mô, Tục đoạn ĐẶT VẤN ĐỀ Cây Tục đoạn gọi Sâm nam, Đầu vù, Rễ kế, Mèo xiêng khoảng, có tên khoa học Dipsacus japonicus, thuộc họ Tục đoạn (Dipsacaceae) Tục nối, đoạn đứt người xưa cho vị thuốc có tác dụng nối gân xương đứt Theo đông y, Tục đoạn có vị đắng cay, tính ơn, có tác dụng bổ can ích thận, nối liền gân cốt, thơng huyết mạch, cầm máu, giảm đau Chủ trị can thận hư, lưng đau, chân yếu, gẫy xương, bong gân, dọa sảy thai, an thai, huyết, chữa băng lậu đới hạ (Đỗ Tất Lợi, 2015) Ngoài ra, tinh dầu Tục đoạn có tác dụng chống lại trùng gây hại Mọt bột đỏ (Tribolium castaneum) thường công sản phẩm ngũ cốc Mọt hại ngô (Sitophilus zeamais) (Zhi Long Liuet et al., 2013) Tục đoạn loài dược liệu qui hoạch trồng vùng núi cao vùng núi trung bình có khí hậu Á nhiệt đới (Theo Quyết định số 1976/QĐ-TTg ngày 30/10/2013 Thủ tướng phủ Quyết định số 179/QĐ-BYT ngày 20/1/2015 Bộ Y tế) Vì vậy, việc nhân giống gây trồng Tục đoạntại khu phân bố chúng cần thiết Hiện nay, nhu cầu nước Tục đoạn lớn, việc khai thác mọc hoang không đáp ứng nguồn cung Mặc dù nhân giống Tục đoạn phương pháp sinh dưỡng hữu tính mẹ đẻ nhánh kém, hạt thường thu hoạch vào mùa đông giá rét (tháng 11, 12) vùng núi cao gặp nhiều khó khăn (Đỗ Huy Bích, 2006; Xu liand Wang Wei, 2002) Mặt khác, phận dùng làm thuốc Tục đoạn rễ, nên khai thác tự nhiên người dân đào không hội tái sinh Vì vậy, nhân giống Tục đoạn phương pháp nuôi cấy mô giúp tạo số lượng lớn thời gian ngắn, đáp ứng nguồn giống cho vùng sản xuất dược liệu, nhằm nâng cao thu nhập cho người dân phục vụ công tác bảo tồn nguồn gen thuốc PHƯƠNG PHÁP NGHIÊN CỨU 2.1 Vật liệu Vật liệu: Chồi hạt Tục đoạn Trung tâm Nghiên cứu Giống trồng Đạo Đức – Hà Giang cung cấp 2.2 Phương pháp nghiên cứu Nghiên cứu tiến hành theo bước khử trùng mẫu, nhân chồi, tạo hoàn chỉnh, trồng ngồi vườn ươm Mỗi cơng thức thí nghiệm bố trí lần lặp, lặp 30 mẫu 2.2.1 Phương pháp bố trí thí nghiệm Tạo mẫu ni cấy khởi động: TẠP CHÍ KHOA HỌC VÀ CƠNG NGHỆ LÂM NGHIỆP SỐ - 2019 11 Công nghệ sinh học & Giống trồng 1) Tạo mẫu từ hạt Hạt lựa chọn trước khử trùng (gồm hạt chắc, mẩy, hạt mặt nước bị loại bỏ) Sau đó, hạt rửa nước, ngâm lắc nước xà phòng loãng - phút, tráng lại nhiều lần nước Mẫu tiếp tục rửa nước cất vô trùng - lần (mỗi lần lắc - phút), sau khử trùng HgCl2 0,1% Javel 5% với thời gian khác Sau lần khử trùng hóa chất, mẫu cần tráng rửa nước cất vô trùng - lần, lần từ - phút 2) Tạo mẫu từ chồi Mẫu nuôi cấy chọn Tục đoạn năm tuổi, thân mập phát triển tốt, khơng sâu bệnh Sau cắt hết lá, để lại cuống dài khoảng 0,5 cm cắt bỏ rễ, rửa mẫu vòi nước chảy, dùng chổi lơng rửa mẫu nước xà phòng lỗng, rửa lại nước Mẫu tiếp tục đưa vào box cấy rửa nước cất vô trùng - lần (mỗi lần lắc - phút), sau khử trùng HgCl2 0,1% thời gian 2,5; 3; 3,5 phút Sau xử lý mẫu, cần tráng nước cất vô trùng - lần, lần từ - phút 3) Nuôi cấy khởi động Sau khử trùng, mẫu hạt chồi cấy trênmôi trường dinh dưỡng MS bổ sung 30 g/l sucrose; g/l agar Mẫu cấy nuôi tối - tuần, mẫu bắt đầu nảy mầm tái sinh chồi chuyển sang ni sáng Trong q trình ni mẫu, thường xuyên kiểm tra loại bỏ mẫu nhiễm khỏi phòng ni, tránh lây nhiễm cho mẫu khác Chỉ tiêu theo dõi: Số mẫu sạch, số mẫu nảy chồi, số mẫu bị chết sau tuần vào mẫu Hình Hạt Tục đoạn (hình trái) (hình phải) lựa chọn để vào mẫu Nhân nhanh chồi: Mẫu tạo thí nghiệm (gồm chồi mầm) cấy chuyển sang mơi trường dinh dưỡng MS có bổ sung loại chất điều hòa sinh trưởng (BAP, Kinetin, NAA TDZ) nồng độ khác nhau, 30g/l sucrose, g/l agar Chỉ tiêu theo dõi: Số mẫu tạo cụm chồi, số chồi/cụm chiều cao chồi sau tuần ni cấy Kích thích rễ tạo hồn chỉnh: Những chồi khỏe mạnh, xanh, mập có chiều dài từ - cm cấy chuyển sang mơi trường tạo rễ mơi trường khống MS bổ sung 30 g/l sucrose, g/l agar, IBA NAA có nồng độ 0,2 - 0,5 mg/l 12 Chỉ tiêu theo dõi: Số chồi rễ, số rễ/cây chiều dài rễ sau tuần nuôi cấy Ảnh hưởng loại giá thể đến khả sống sinh trưởng in vitro vườn ươm Các bình mơ huấn luyện sánh sáng tán xạ thời gian tuần (cây có chiều cao ≥ cm, có rễ phát triển, cứng cáp) Dùng panh gắp bình ngồi, sau rửa rễ nước để loại bỏ agar, để nước cấy loại giá thể khác nhau: phối trộn đất đồi tầng B, cát vàng trấu hun để nghiên cứu khả sống sinh trưởng giai đoạn vườn ươm TẠP CHÍ KHOA HỌC VÀ CƠNG NGHỆ LÂM NGHIỆP SỐ - 2019 Công nghệ sinh học & Giống trồng Chỉ tiêu theo dõi: Tỷ lệ sống, chiều cao chất lượng sau tuần 2.2.2 Phương pháp xử lý số liệu So sánh cơng thức thí nghiệm tỉ lệ mẫu sạch, tỉ lệ mẫu tạo cụm chồi, tỉ lệ chồi rễ tiêu chuẩn bình phương (2) So sánh kết cơng thức thí nghiệm số lượng chồi/cụm, chiều cao chồi, chiều dài rễ số lượng rễ/cây phân tích phương sai nhân tố Số liệu thu thập xử lý phần mềm SPSS (Nguyễn Hải Tuất Nguyễn Trọng Bình, 2005) phần mềm Excel 2.3 Địa điểm nghiên cứu Thí nghiệm tiến hành phòng ni cấy mơ - tế bào thực vật Viện Công nghệ Sinh học Lâm nghiệp, Trường Đại học Lâm nghiệp Các môi trường nuôi cấy điều chỉnh pH = 5,8, chiếu sáng 10h/ngày, với cường độ ánh sáng 2000 - 3000 lux, nhiệt độ phòng ni 25 ± 20C KẾT QUẢ VÀ THẢO LUẬN 3.1 Tạo mẫu 3.1.1 Tạo mẫu từ hạt Tạo mẫu Tục đoạn từ hạt việc sử dụng hóa chất HgCl2 0,1% Javel 5% với thời gian khác để khử trùng Kết thu sau tuần nuôi cấy thể bảng Bảng Ảnh hưởng thời gian khử trùng đến khả tạo mẫu nảy mầm từ hạt Thời gian Mẫu Mẫu Mẫu xử lý (phút) nảy mầm chết STT HgCl2 Javel N % N % N % 0,1% 5% 3 - 10 22 34 11,1 24,4 37,8 18 13 10,0 20,0 14,4 21 1,1 4,4 23,3 1 15 20 25 42 62 72 46,7 68,9 80,0 28 54 25 31,1 60,0 27,8 14 47 15,6 8,9 52,2 2 Sig 15 20 25 66 72 79 73,3 80,0 87,8 24 27 21 26,7 30,0 23,3 42 45 58 46,7 50,0 64,4 Số liệu bảng cho thấy sử dụng HgCl2 0,1% Javel 5% để khử trùng mẫu hạt với thời gian khác có ảnh hưởng rõ rệt đến tỉ lệ mẫu nảy mầm (sig < 0,05) Khi khử trùng hạt HgCl2 0,1% thời gian – phút cho tỉ lệ mẫu nảy mầm thấp (5,6 - 8,9%) Kết hợp HgCl2 0,1% Javel 5% tỉ lệ mẫu nảy mầm tăng lên đáng kể (23,3 - 60%) Trong đó, xử lý hạt HgCl2 0,1% thời gian phút kết hợp Javel 5% từ 15 25 phút cho tỉ lệ mẫu cao (73,3 87,8%), nhiên mẫu mảy mầm đạt từ 23,3 - 30% Giảm thời gian xử lý mẫu 0,0001 HgCl2 0,1% xuống phút kết hợp Javel 5% từ 15 - 25 phút cho tỉ lệ mẫu nảy mầm cao (27,8 - 60%) Như vậy, thời gian khử trùng hạt HgCl2 0,1% lâu gây độc làm chết hạt, để giảm mức độ nhiễm độc hạt cần xử lý HgCl2 0,1% vòng phút kết hợp javel 5% thời gian 20 phút cho hiệu tốt (60% hạt nảy mầm) (hình 2a) 3.1.2 Tạo mẫu từ chồi Kết tạo mẫu từ chồi xử lý HgCl2 0,1% với thời gian khác thể bảng TẠP CHÍ KHOA HỌC VÀ CÔNG NGHỆ LÂM NGHIỆP SỐ - 2019 13 Công nghệ sinh học & Giống trồng Bảng2 Ảnh hưởng thời gian khử trùng đến khả tạo mẫu tái sinh chồi STT Thời gian xử lý HgCl2 0,1% (phút) N % Mẫu tái sinh chồi N % 2,0 8,9 2,5 30 33,3 3,0 21 3,5 28 Mẫu Mẫu chết N % 8,9 0,0 20 22,2 10 11,1 23,3 16 17,8 5,6 31,1 7,8 21 23,3 Sig 0,013 Số liệu bảng cho thấy sử dụng HgCl2 0,1% để khử trùng mẫu với thời gian khử có ảnh hưởng rõ rệt đến khả tạo mẫu (sig < 0,05) Khi tăng thời gian khử trùng mẫu HgCl2 0,1% từ - 3,5 phút tỉ lệ mẫu tăng lên (8,9 31,1%), nhiên tỉ lệ mẫu nảy chồi lại không tỉ lệ thuận Khử trùng phút cho tỉ lệ mẫu tái sinh chồi thấp (8,9%) không xuất mẫu bị chết Khi tăng thời gian khử trùng mẫu lên 2,5 - phút tỉ lệ mẫu nảy chồi tăng lên đáng kể (17,8 22,2%) Nhưng tăng thời gian khử trùng lên 3,5 phút mẫu tái sinh chồi giảm đáng kể (7,8%), tỉ lệ mẫu chết cao (23,3%) Dễ dàng nhận thấy khả chịu thuỷ ngân mẫu chồi Tục đoạn Vì vậy, tạo mẫu từ chồi nên xử lý HgCl2 0,1% thời gian 2,5 phút thích hợp (với tỉ lệ mẫu nảy chồi đạt 22,2%) (hình 2b) 3.2 Ảnh hưởng chất điều hòa sinh trưởng đến khả tạo cụm chồi Những mẫu sống khoẻ mạnh, không nhiễm nấm khuẩn cấy chuyển sang môi trường dinh dưỡng MS bổ sung chất điều hoà sinh trưởng BAP, Kinetin, NAA TDZ nồng độ khác để nghiên cứu khả tạo cụm chồi Kết thu sau tuần cấy chuyển thể bảng Bảng Ảnh hưởng chất điều hòa sinh trưởng đến khả tạo cụm chồi Mẫu tạo cụm Chất ĐHST (mg/l) Số lượng Chiều cao chồi STT chồi/cụm chồi (cm) BAP Kinetin NAA TDZ N % 0,3 28 31,1 1,8 6,8 0,1 0,4 43 47,8 2,2 7,1 0,5 34 37,8 1,6 6,4 Trung bình 35,0 38,89 1,87 6,77 0,2 0,1 0,3 45 50,0 2,7 7,6 0,2 0,1 0,4 55 61,1 3,2 7,5 0,2 0,1 0,5 47 52,2 2,5 6,9 0,4 0,4 0,4 Trung bình - - 0,3 0,4 0,5 Trung bình Sig Số liệu bảng cho thấy, kết hợp chất điều hoà sinh trưởng với nồng độ khác có ảnh hưởng rõ rệt đến tỉ lệ mẫu tạo 14 49,0 90 90 90 90 54,44 100 100 100 100 0,0001 2,80 4,1 5,2 4,5 7,33 3,5 3,4 3,2 4,60 0,0001 3,37 0,0001 cụm chồi, số chồi/cụm chiều cao chồi Trong môi trường nuôi cấy bổ sung BAP (0,3 - 0,5 mg/l) 0,2 mg/l NAA tỉ lệ mẫu tạo TẠP CHÍ KHOA HỌC VÀ CƠNG NGHỆ LÂM NGHIỆP SỐ - 2019 Công nghệ sinh học & Giống trồng cụm chồi trung bình đạt 38,89%, số chồi/cụm trung bình đạt 1,87 Khi kết hợp BAP (0,3 0,5 mg/l), 0,2 mg/l NAA 0,2 mg/l Kinetin tỉ lệ mẫu tạo cụm chồi tăng lên đáng kể (trung bình 54,44%), số chồi/cụm tăng (trung bình đạt 2,80 chồi), nhiên mức thấp Mặc dù vậy, kết hợp BAP, Kinetin NAA cho chồi phát triển tốt chiều cao (từ 6,4 - 7,5 cm) Mơi trường có kết hợp TDZ (0,3 - 0,5 mg/l) 0,4 mg/l BAP cho 100% chồi tạo cụm chồi, số chồi/cụm tăng lên (trung bình đạt 4,6 chồi/cụm), chiều cao chồi hạn chế (trung bình đạt 3,4 cm) Như vậy, lựa chọn mơi trường MS bổ sung 0,4 mg/lBAP; 0,4 mg/l TDZ cho nhân nhanh chồi môi trường MS bổ sung 0,4 mg/lBAP; 0,2 mg/l Kinetin; 0,1 mg/l NAA để nâng cao chất lượng chồi (hình 2c) 3.3 Ảnh hưởng chất điều hoà sinh trưởng đến khả rễ Nghiên cứu khả rễ in vitro Tục đoạn việc sử dụng môi trường dinh dưỡng MS bổ sung riêng rẽ NAA, IBA đối chứng (không bổ sung IBA NAA) Kết tạo rễ in vitro thể bảng Bảng Ảnh hưởng nồng độ chất điều hòa sinh trưởng đến khả rễ Chất ĐHST Thời gian Tỉ lệ rễ Số lượng Chiều dài Chất (mg/l) CTTN rễ (%) rễ (cái) rễ (cm) lượng rễ (ngày) NAA IBA N1 0,2 100 2,8 1,8 14 TB 0,3 - N2 100 3,2 2,5 13 Tốt N3 0,4 - 100 4,2 2,8 10 Tốt N4 0,5 - 100 3,5 2,2 16 TB 100 3,4 2,3 13,3 0,0001 0,0001 Trung bình I1 Sig - 0,2 100 1,4 1,3 13 TB I2 - 0,3 100 1,6 1,7 12 TB I3 - 0,4 100 1,8 1,5 15 TB I4 - 0,5 100 2,2 1,3 17 TB Trung bình 100 1,8 1,5 14,3 ĐC 83,3 1,3 1,2 19 xấu Sig 0,068 0,003 Ghi chú: Rễ tốt: mập trắng; Rễ trung bình: mập vàng; Rễ xấu: rễ mảnh đen Số liệu bảng cho thấy sử dụng chất điều hòa sinh trưởng mơi trường nuôi cấy cho kết tốt so với cơng thức đối chứng (khơng có chất điều hòa sinh trưởng) Điều thể rõ thời gian rễ sớm (từ 10 đến 17 ngày), tỉ lệ chồi rễ tốt (100%) khơng thấy xuất rễ xấu có loại rễ có chất lượng từ trung bình trở lên, cơng thức đối chứng thời gian rễ 19 ngày, tỉ lệ chồi rễ đạt 83,3% Khi sử dụng NAA, IBA nồng độ khác bổ sung vào mơi trường tạo hồn chỉnh cho kết tốt Trong đó, tất cơng thức mơi trường nuôi cấy cho tỷ lệ rễ đạt 100% (khơng có sai khác), số lượng rễ, chiều dài rễ, chất lượng rễ thời gian rễ có khác Bổ sung NAA vào mơi trường nuôi cấy tạo 3,4 rễ/cây, chiều dài rễ trung bình 2,3 cm, thời gian rễ trung bình 13,3 ngày Bổ sung IBA vào mơi trường tạo hoàn chỉnh tạo 1,3 rễ/cây, chiều dài rễ trung bình 1,2 cm, thời gian rễ trung bình 13,3 ngày Như vậy, nhận thấy bổ sung 0,4 mg/l NAA vào môi trường nuôi cấy tạo rễ phù hợp nghiên cứu (hình 2d) TẠP CHÍ KHOA HỌC VÀ CƠNG NGHỆ LÂM NGHIỆP SỐ - 2019 15 Công nghệ sinh học & Giống trồng trọng giúp có khả hút nước chất dinh dưỡng tốt, đồng thời không làm thối rễ vô cần thiết Thành phần giá thể ruột bầu tình hình sinh trưởng sau tuần thể bảng 3.5 Ảnh hưởng loại giá thể đến khả sống sinh trưởng in vitro vườn ươm Ở giai đoạn đầu đưa trồng, thành phần giá thể ruột bầu có vai trò quan Bảng Ảnh hưởng loại giá thể đến khả sống sinh trưởng in vitro Loại giá thể Thu thập số liệu sau tuần Công thức Đất tầng B (%) Cát vàng (%) Trấu hun (%) Tỉ lệ sống (%) Chiều cao (cm) GT1 100 0 10 4,1 GT2 50 25 25 60 6,3 GT3 75 25 16 5,1 GT4 75 Sig 25 23 0,0001 4,9 0,0001 STT Số liệu bảng cho thấy, loại giá thể khác có ảnh hưởng rõ rệt đến tỉ lệ sống sinh trưởng chiều cao Trồng giá thể 100% đất tầng B tỉ lệ sống thấp (10%), sinh trưởng phát triển a Chất lượng Cây cao 3,6 - 4,2 cm, nhỏ, mỏng xanh non Tốt, cao 5,8 - 6,5 cm, mập; dày, xanh non Tốt, cao 4,5 - 5,6 cm, mập, xanh non Tốt, cao 4,5 - 5,4 cm, mập, xanh non (cây cao trung bình 3,6 – 4,2 cm) Trên giá thể thể trộn 50% đất tầng B; 25% cát vàng 25% trấu hun tỉ lệ sống cao (đạt 60%), sinh trưởng phát triển tốt (cây trung bình cao 5,8 – 6,5 cm) (hình 2e) b d Hình Một số hình ảnh Tục đoạn giai đoạn nhân giống in vitro a: Hạt nảy mầm; b: Mẫu nảy chồi; c: Cụm chồi; d: Cây hoàn chỉnh; e: Cây trồng vườn ươm 16 TẠP CHÍ KHOA HỌC VÀ CƠNG NGHỆ LÂM NGHIỆP SỐ - 2019 c e Công nghệ sinh học & Giống trồng KẾT LUẬN Khử trùng tạo mẫu Tục đoạn từ hạt sử dụng dung dịch HgCl2 0,1% vòng phút Javel 5% thời gian 20 phút đạt 60% hạt nảy mầm Khử trùng chồi dung dịch HgCl2 0,1% thời gian 2,5 phút cho tỉ lệ mẫu tái sinh chồi đạt 22,2% Nhân nhanh chồi môi trường dinh dưỡng MS bổ sung 0,4 mg/l BAP; 0,4 mg/l TDZ, kết đạt 100% mẫu tạo cụm chồi, 5,2 chồi/cụm, chiều cao chồi đạt 3,4 cm Tăng trưởng chồi mơi trường khống MS bổ sung 0,4 mg/l BAP; 0,2 mg/l Kinetin; 0,1 mg/l NAA, chiều cao chồi đạt 7,5 cm Ra rễ tạo hoàn chỉnh môi trường dinh dưỡng MS bổ sung 0,4 mg/l NAA, kết đạt 100% chồi rễ, thời gian rễ sau 10 ngày, chất lượng rễ tốt Cây mô trồng giá thể 50% đất tầng phối trộn với 25% cát 25% trấu hun, cho tỷ lệ sống 60% sau tuần ngơi TÀI LIỆU THAM KHẢO Đỗ Huy Bích, Đặng Quang Chung, Bùi Xuân Chương, Nguyễn Thượng Dong, Đỗ Trung Đàm, Phạm Văn Hiển, Vũ Ngọc Lộ, Phạm Huy Mai, Phạm Kim Mãn, Đoàn Thị Nhu, Nguyễn Tập, Trần Toàn (2006) Cây Thuốc động vật làm thuốc Việt Nam NXB Khoa học Kĩ thuật, Hà Nội Đỗ Tất Lợi (2015) Những thuốc vị thuốc Việt Nam NXB Thời đại Nguyễn Hải Tuất, Nguyễn Trọng Bình (2005) Khai thác sử dụng SPSS để xử lý số liệu lâm nghiệp NXB Nông nghiệp Xu li, Wang Wei (2002) Chinese material medica combination $ applications Donica publishing Ltd, Waddington Road, St Albans, Herts AL35EX Zhi Long Liu, Guo Hua Jiang, Ligang Zhou, and Qi Zhi Liu (2013) Analysis of the Essential Oil of Dipsacus japonicus Flowering Aerial Parts and its Insecticidal Activity against Sitophilus zeamais and Tribolium castaneum Verlag der Zeitschrift für Naturforschung, Tübingen, pp.13-18 RESEARCH ON PROPAGATION OF Dipsacus japonicus BY TISSUE CULTURE Khuat Thi Hai Ninh1, Phan Thi Trang1, Nguyen Thi Tho1, Bui Van Thang1, Vu Van Hieu2 Vietnam National University of Forestry Research Center for plant breeding Dao Duc - Ha Giang SUMMARY Research on the propagation of Dipsacus japonicus by tissue culture, belonging to Vietnam National University of Forestry, showed that in HgCl2 0.1% for minute and have 5% for 20 minutes the portion of clean sprouted seeds is 70 - 83.3%, HgCl2 0.1% for minutes the portion of clean sprouted expands is 22.2% In the shoot regeneration most appropriate medium is Murashige and Skoog (MS) medium supplemented with 6Benzylaminopurine (BAP) 0.4 mg/l; Thidiazuron (TDZ) 0.4 mg/l (the portion of shoot regeneration expands is 100% with 5.2 shots per explants, length of the shoot is 3.4 centimeter) Then improve shoot quality is MS medium supplemented with BAP 0.4 mg/l; Kinetin 0.2 mg/l; α-Naphthaleneacetic acid (NAA) 0.1 mg/l (with shoot height of 7.5 cm), The best medium for shoot rooting is MS with supplement 0.4 mg/l NAA (roots have appeared after 10 days, rate of rooted shoots is 100%, and roots having good quality) The plantlets are planted in mixes 50% of the soil with 25% sand and 25% of the husk at the nursery (with a survival rate of 60% after four weeks) Keywords: Dipsacus japonicus, in vitro, multi-shoot, propagation Ngày nhận Ngày phản biện Ngày định đăng : 14/8/2018 : 15/1/2019 : 20/3/2019 TẠP CHÍ KHOA HỌC VÀ CƠNG NGHỆ LÂM NGHIỆP SỐ - 2019 17 ... triển tốt (cây trung bình cao 5,8 – 6,5 cm) (hình 2e) b d Hình Một số hình ảnh Tục đoạn giai đoạn nhân giống in vitro a: Hạt nảy mầm; b: Mẫu nảy chồi; c: Cụm chồi; d: Cây hoàn chỉnh; e: Cây trồng... cơng thức môi trường nuôi cấy cho tỷ lệ rễ đạt 100% (khơng có sai khác), số lượng rễ, chiều dài rễ, chất lượng rễ thời gian rễ có khác Bổ sung NAA vào môi trường nuôi cấy tạo 3,4 rễ /cây, chiều... chỉnh tạo 1,3 rễ /cây, chiều dài rễ trung bình 1,2 cm, thời gian rễ trung bình 13,3 ngày Như vậy, nhận thấy bổ sung 0,4 mg/l NAA vào môi trường nuôi cấy tạo rễ phù hợp nghiên cứu (hình 2d) TẠP