Nghiên cứu thành phần và hàm lượng các lớp chất lipid, phospholipid, axit béo, và phosphatidylcholine loài san hô mềm Capnella sp.

Hàm lượng lipid tổng của mẫu san hô mềm Capnella sp. chiếm 1,44 ± 0,10% so với trọng lượng mẫu tươi. Trong thành phần axit béo có mặt các axit béo tetracosapolyenoic 24:5n-6 và 24:6n-3 là axit béo đánh dấu điển hình cho san hô mềm (san hô tám ngăn) và các axit béo đánh dấu cho vi sinh vật cộng sinh như 18:5n-3, 18:2n-6, 18:3n-6, 18:4n-3, 20:4n-3.

Tạp chí Khoa học Cơng nghệ Biển; Tập 16, Số 3; 2016: 306-314 DOI: 10.15625/1859-3097/16/3/8657 http://www.vjs.ac.vn/index.php/jmst NGHIÊN CỨU THÀNH PHẦN VÀ HÀM LƯỢNG CÁC LỚP CHẤT LIPID, PHOSPHOLIPID, AXIT BÉO, VÀ PHOSPHATIDYLCHOLINE LỒI SAN HƠ MỀM CAPNELLA SP Đặng Thị Phương Ly1*, Trần Quang Đệ3, Phạm Minh Quân1, Đinh Thị Kim Hoa5, Nguyễn Thị Thêu1, Lưu Thị Hải Linh4, Phạm Quốc Long1, Andrey Imbs Borisovich2 Viện Hóa học Các hợp chất Thiên nhiên-Viện Hàn lâm Khoa học Công nghệ Việt Nam Viện Sinh vật biển Zhirmunsky, phân viện Viễn Đông, Vladivostok, LB Nga Đại học Cần Thơ Đại học Sư phạm Hà Nội Đại học Nông Lâm Thái Nguyên * E-mail: phuongly1412@gmail.com Ngày nhận bài: 29-6-2016 TÓM TẮT: Hàm lượng lipid tổng mẫu san hô mềm Capnella sp chiếm 1,44 ± 0,10% so với trọng lượng mẫu tươi Trong thành phần axit béo có mặt axit béo tetracosapolyenoic 24:5n-6 24:6n-3 axit béo đánh dấu điển hình cho san hô mềm (san hô tám ngăn) axit béo đánh dấu cho vi sinh vật cộng sinh 18:5n-3, 18:2n-6, 18:3n-6, 18:4n-3, 20:4n-3 Kết phân tích lớp chất lipid cho thấy lipid tổng có mặt lớp chất lipid lipid phân cực, sterol, axit béo tự do, triacylglycerol, monoalkyldiacylglycerol, hydrocacbon sáp, lipid phân cực chiếm hàm lượng cao (21,14 ± 1,17% hàm lượng lipid tổng) Thành phần phospholipid san hô mềm Capnella sp có mặt phân lớp phospholipid đặc trưng động vật ngành Cnidarian phosphatidylethanolamine, phosphatidylcholine, phosphatidylserine, phosphatidylinositol, phosphonolipid ceramide aminoethylphosphonate, phosphatidylcholine chiếm hàm lượng cao (35,53 ± 1,46% tổng phospholipid) Đây lần Việt Nam, thành phần hàm lượng dạng phân tử lớp chất phosphatidylcholine từ lồi san hơ mềm Việt Nam nghiên cứu công bố, kết xác định có mặt 13 dạng phân tử phương pháp phổ khối đại LC-MS IT TOF với độ xác cao Hai dạng phân tử chiếm hàm lượng cao PC 18:0e/20:4 PC 16:0e/20:4 Từ khóa: Lipid tổng (TL), lipid phân cực (PoL), lipid không phân cực (NL), axit béo tự (FFA), sterol (ST), triacylglycerol (TAG), monoankyl diacylglycerol (MADAG), hidrocacbon + sáp (WE), phosphatidylcholine (PC) MỞ ĐẦU Rạn san hô tài sản biển vô quý giá quốc gia có biển nói chung Việt Nam nói riêng, chúng góp phần trì cân sinh thái biển tạo hội để phát triển nhanh số lĩnh vực kinh tế đất nước Trong đó, lipid thành phần hóa học quan trọng, chiếm tới 40% sinh khối khô 306 san hô, sở cấu trúc màng tế bào polip, có chức dự trữ lượng cho san hô thời gian dài Tại Việt Nam, nghiên cứu trước lipid từ san hô dừng mức độ nghiên cứu đa dạng sinh thái, đánh giá trạng rạn san hơ, nghiên cứu hóa sinh bước đầu thu số liệu hàm lượng lipid tổng, Nghiên cứu thành phần hàm lượng lớp … thành phần axit béo, thành phần lớp chất, số nghiên cứu có sâu vào nghiên cứu thành phần lớp chất lipid không phân cực [1] Cho tới chưa có nhiều thơng tin thành phần dạng phân tử lớp chất phospholipid - lớp chất chứa đựng nhiều thơng tin q trình sinh tổng hợp lipid san hô, Việt Nam giới Trong nghiên cứu này, phân tích thành phần hàm lượng lớp chất lipid, phospholipid, axit béo, nhóm tác giả sâu vào nghiên cứu dạng phân tử lớp chất phosphatidylcholine (PC) mẫu san hô mềm Capnella sp thu thập vùng biển Việt Nam Đây kết công bố Việt Nam dạng phân tử lớp chất phospholipid từ san hô Phương pháp phân tích thành phần hàm lượng lớp chất phospholipid NGUYÊN LIỆU VÀ PHƯƠNG PHÁP NGHIÊN CỨU Thành phần hàm lượng phospholipid xác định theo phương pháp Kostetsky [6] Nguyên liệu Mẫu san hô mềm Capnella sp (Anthozoa, Octocorallia, Alcyonacea, Nephtheidae) thu thập vịnh Nha Trang vùng biển lân cận Mẫu định tên PGS TS Đỗ Công Thung cộng Viện Tài nguyên Môi trường biển, Viện Hàn lâm Khoa học Công nghệ Việt Nam Phương pháp nghiên cứu Phương pháp chiết lipid tổng Lipid tổng (TL) chiết theo phương pháp Folch, J F., [2] Phương pháp xác định thành phần hàm lượng lớp chất lipid Lipid tổng chấm lên mỏng silica gel (6 × cm) vệt với nồng độ 5, 10, 15 μl, sau khai triển hệ dung mơi n-Hexan: Et2O:CH3COOH (70:30:2, v/v/v), hình 10% H2SO4 MeOH Bản mỏng sau đem sấy nhiệt độ 1800C thời gian 10 phút trước scan máy Epson Perfection 2400 PHOTO (Nagano, Nhật Bản) với độ phân giải kích thước tiêu chuẩn Phần trăm lớp chất lipid tổng xác định dựa đo diện tích cường độ màu chương trình phân tích hình ảnh Sorbfil TLC Videodensitometer DV (Krasnodar, LB Nga) [3, 4] Phân tích định tính sử dụng phương pháp sắc ký lớp mỏng chiều Mẫu lipid tổng (5 L) hòa tan lượng nhỏ CHCl3, chấm lên mỏng silica gel SiO2 (6  cm) triển khai với hệ thứ A: CHCl3:MeOH:28%NH4OH (70:30:5, v:v:v), chạy xong sấy khô, tiếp tục chạy hệ dung môi B: CHCl3:MeOH:(CH3)2CO:CH3COOH:H2O (70:30:5:5:2) Sấy khô sử dụng thuốc thử ninhydrin 0,2% BuOH xác định lớp chất PS, PE, CAEP, LPE, lớp chất PC, PI, LPC, LPI xác định thuốc thử molybdate [5] Phân tích định lượng TL (5 μL) chấm lên mỏng silica gel SiO2 (6 × cm), sau khai triển hệ dung môi Hiện màu dung dịch 10% H2SO4 MeOH hơ nóng bếp sấy Xác định vị trí lớp chất cạo cho vào ống nghiệm đánh dấu tương ứng, thêm 50 μL HClO4 đun bếp nhiệt độ 180 - 1900C thời gian 20 phút Lấy ống nghiệm để nguội, thêm tiếp vào ống nghiệm 450 μL amonium molybdate, lắc kĩ, đun cách thủy nhiệt độ sôi nước 15 phút Lấy ra, để nguội tiến hành đo máy quang phổ kế UV 1800 (Shimardzu, Nhật Bản) Tiến hành đo lần lấy giá trị trung bình hàm lượng lớp chất, tính hàm lượng phần trăm Phương pháp xác định thành phần hàm lượng axit béo Axit béo methyl hóa sang dạng methyl ester tác nhân H2SO4/MeOH 2%, nhiệt độ cho trình chuyển hóa 800C, thời gian h Sau đó, hỗn hợp phân tích máy GC-MS hãng Shimadzu QP2010 với cột sắc kí LBX (30 m ì 0,25 àm ì 0,25 àm), s dng th viện phổ chuẩn NIST để so sánh Phương pháp phân lập, xác định dạng phân tử lớp chất PC Sau phân tích định tính, định lượng phân lớp phospholipid mẫu san hô mềm, 307 Đặng Thị Phương Ly, Trần Quang Đệ, … phân lớp phosphatidylcholine phân lập sắc kí cột (CC) với hệ dung mơi CHCl3/MeOH/NH3 = 90/10/5 (v/v/v), sau tinh chế lại sắc kí mỏng với hệ dung mơi CH3COOC2H5 : 1-propanol : CHCl3 : MeOH (25 : 35 : 10 : 10 theo thể tích) Phân đoạn thu được hòa tan MeOH phân tích thiết bị LCMS IT-TOF hãng Shimadzu để nhận biết dạng phân tử lớp chất PC Các phân tích HPLCHRMS thực với hệ thống sắc ký lỏng Shimadzu Prominence với bơm áp suất cao, lò CTO-20A, bơm mẫu tự động, thiết bị truyền dẫn CBM-20A, thiết bị khử khí DGU-20A3, cột Shim-Pack diol (50 mm × 4,6 mm ID, μm) (Zhimadzu, Kyoto, Japan), sử dụng hai hỗn hợp dung mơi A hexane:2propanol:CH3COOH:N(CH3)3 82:17:1:0,08 (theo thể tích) hỗn hợp dung môi B (propanol-2): H2O:CH3COOH:N(CH3)3 85:14:1:0,08 (theo thể tích) Lipid phát phận phân tích khối kết hợp song song hai kỹ thuật IT TOF phận thiết bị Shimadzu LCMS-IT-TOF (Kyoto, Japan), hoạt động đồng thời hai chế độ ion âm ion dương phân tích điều kiện ion hóa ESI APCI Các dạng phân tử phân lớp phospholipid phát HRMS xác định việc so sánh với phổ chất chuẩn hãng Shimadzu Solution với phần mềm xử lý v.3.60.361 Quá trình định lượng loại phân tử lớp chất lipid phân cực tính tốn theo diện tích pic chất thu phổ ion âm ion dương [7] KẾT QUẢ VÀ THẢO LUẬN Thành phần hàm lượng axit béo Hàm lượng lipid tổng (bảng 1) mẫu san hô mềm Capnella sp chiếm 1,44 ± 0,10% trọng lượng tươi chiếm tới 8,15 ± 0,90% trọng lượng mẫu khơ Trước đó, 12 lồi san hơ mềm Imbs, A B., cộng Việt Nam nghiên cứu có hàm lượng lipid tổng dao động khoảng từ 2,8% đến 22,9% trọng lượng mẫu khô [8] Theo nghiên cứu tác giả Lưu Văn Huyền [9] san hơ Việt Nam, hàm lượng 46 lồi san hô mềm Việt Nam dao động từ 0,46% đến 2,2% trọng lượng mẫu tươi Như vậy, số liệu thu 308 nghiên cứu thống với kết nghiên cứu trước hàm lượng lipid tổng lồi san hơ mềm Việt Nam khác Bảng Hàm lượng lipid tổng mẫu san hô mềm nghiên cứu (n=3) Hàm lượng lipid tổng Tên loài % trọng lượng mẫu tươi % trọng lượng mẫu khô Capnella sp 1,44 ± 0,10 8,15 ± 0,90 Ghi chú: n: độ lặp lại thí nghiệm Thành phần hàm lượng lớp chất lipid lipid tổng So với tài liệu nghiên cứu trước [1], thành phần hàm lượng lớp chất lipid tổng lồi san hơ nghiên cứu bao gồm hầu hết lớp chất biết lipid phân cực (PoL), sterol (ST), axit béo tự (FFA), triacylglycerol (TAG), monoankyl diacylglycerol (MADAG), hidrocacbon + sáp (WE) Kết nghiên cứu cho thấy lớp chất lipid phân cực PoL (24,91%) monoalkyl diacylglycerol MADAG (26,15%) chiếm hàm lượng cao lipid tổng Trong số lớp chất lipid san hô, lớp chất nhà nghiên cứu quan tâm đa dạng thành phần hóa học hoạt tính sinh học thú vị đặc biệt lớp chất PoL Hàm lượng lớp chất lipid phân cực lipid tổng loài san hô mềm Việt Nam theo nghiên cứu tác giả Lưu Văn Huyền (2010) dao động khoảng từ 13,6% đến 58,8% hàm lượng lipid tổng [9] Ở loài san hô mềm thu thập vùng biển Okinawa, Nhật Bản [10], hay lồi san hơ mềm thu thập vùng nước sâu Newfoundland Labrador, Đại Tây Dương [11], lớp chất lipid phân cực chiếm hàm lượng cao, lên tới 40% hàm lượng lipid tổng Lớp chất hydrocacbon sáp (HW) mẫu san hô mềm nghiên cứu chiếm hàm lượng lớn, sau hàm lượng hai lớp chất lipid phân cực (PoL) monoalkyldiacylglycerol (MADAG), chúng chiếm khoảng 19% hàm lượng lipid tổng Hai lớp chất setrol (ST) triacylglycerol (TAG) có tỉ lệ đồng đều, chiếm 11,32% 12,31% Hàm lượng lớp chất axit béo tự lipid tổng ba mẫu san hô Nghiên cứu thành phần hàm lượng lớp … dao động khoảng 3-5% Ngoài ra, lipid tổng mẫu san hơ nghiên cứu xuất thêm số lớp chất chưa xác định, chiếm tỉ lệ không cao (3,16 ± 0,15%) (bảng 2, hình 1) Bảng Thành phần hàm lượng lớp chất lipid mẫu san hô mềm nghiên cứu (n=3) STT Lớp chất Hàm lượng (%) PoL ST FFA TAG MADAG HW Khác 24,91 ± 2,55 11,32 ± 0,10 3,37 ± 0,15 12,31 ± 0,70 26,15 ± 2,71 18,78 ± 0,80 3,16 ± 0,15 Hình Hình ảnh TLC lipid tổng mẫu san hơ mềm nghiên cứu Thành phần hàm lượng axit béo Bảng Thành phần hàm lượng axit béo lipid tổng mẫu san hô mềm Capnella sp TT Axit béo % tổng axit béo TT Axit béo % tổng axit béo TT Axit béo % tổng axit béo 10 14:0 16:2n-7 16:1n-9 16:1n-7 16:0 18:5n 18:5n-3 18:4n-3 18:2n-6 18:2n-7 2,16 13,52 0,59 2,59 32,53 0,27 1,44 3,14 6,65 1,35 11 12 13 14 15 16 17 18 19 20 18:1n-9 18:1n-7 18:0 20:4n-6 AA 20:5n-3 EPA 20:3n-6 20:4n-3 20:2n-6 20:0 22:6n-3 DHA 2,5 0,36 6,81 9,37 1,71 0,3 1,09 0,45 0,58 4,46 21 22 23 24 25 26 27 28 29 30 22:4n-6 24:5n-6 24:6n-3 DMA Khác* AXB n-3 AXB n-6 AXB no AXB nối đôi AXB đa nối đôi 0,24 3,18 0,91 3,31 0,49 12,75 20,19 42,08 6,04 48,08 Ở lồi Capnella sp axit béo có hàm lượng cao lipid tổng 16:2n-7 (13,52%), 16:0 (32,53%), 18:2n-6 (6,65%), 20:4n-6 (9,37%), 22:6n-3 (4,46%), 24:5n-6 (3,18%) Kết phân tích cho thấy, lipid tổng lồi san hơ nghiên cứu có mặt axit béo tetracosapolyenoic 24:5n-6 24:6n-3 (tổng hàm lượng 4,09% tổng axit béo) axit béo đánh dấu điển hình cho san hơ mềm (san hô tám ngăn) khác biệt so sánh với san hô tạo rạn (san hô sáu ngăn) hydrocoral Hầu hết loài thuộc Alcyonacea có mặt axit béo 24:5n-6 với hàm lượng cao 24:6n-3, 24:6n-3 biết đến axit tetracosapolyenoic C24 số lồi thuộc Gorgonacea, Pennatulacea Sứa [12] Bên cạnh xuất axit béo đánh dấu cho vi sinh vật cộng sinh có mặt với hàm lượng đáng kể 18:5n-3, 18:2n-6, 18:3n-6, 18:4n-3, 20:4n-3 [13] Thành phần hàm lượng phân lớp chất phospholipid lipid tổng Dịch chiết lipid tổng mẫu san hô mềm Capnella sp tiến hành định tính mỏng chiều chiều, kết hợp sử dụng chất chuẩn phospholipid thuốc thử đặc hiệu molybdate ninhydrin Phương pháp xác định định tính phospholipid có mặt lipid tổng mẫu san hô dựa vào chất chuẩn phương pháp công bố [4-6] So sánh với chất chuẩn TLC chiều chiều với nhiều hệ dung môi khác kết hợp với tài liệu tham khảo công bố lớp chất phospholipid san hô, chúng tơi xác định, lipid lồi san hơ 309 Đặng Thị Phương Ly, Trần Quang Đệ, … Capnella sp có mặt phân lớp phospholipid đặc trưng động vật ngành Cnidarian phosphatidylethanolamine (PE), phosphatidylcholine (PC), phosphatidylserine (PS), phosphatidylinositol (PI), phosphonolipid (ceramide aminoethylphosphonate (CAEP)) Sau định tính phospholipid lipid mẫu san hơ mềm, chúng tơi tiến hành phân tích định lượng theo phương pháp Kostetsky [6] Kết thu được trình bày bảng Bảng Thành phần hàm lượng phân lớp phospholipid mẫu san hô mềm Capnella sp TT Các phân lớp phospholipid Capnella sp Choline glycerophospholipid (PC) Ethanolamine glycerophospholipid (PE) Serine glycerophospholipid (PS) Ceramide aminoethylphosphonate (CAEP) Phosphatidylinositol (PI) Khác** 35,53 ±1,46 23,62 ± 2,05 21,13 ± 2,43 10,20 ± 1,67 2,08 ± 0,70 7,45 ± 3,40 Ghi chú: **: Các lysophospholipid, phospholipid dạng oxy hóa … Trong số phân lớp phospholipid mẫu san hô mềm nghiên cứu, chiếm hàm lượng cao phân lớp phosphatidylcholine (PC) 35,53% tổng phospholipid Tiếp theo hai lớp chất PE PS, chiếm hàm lượng cao tổng phospholipid, khoảng 20% cho phân lớp Phân lớp CAEP chiếm hàm lượng 10,20% tổng phospholipid PI chiếm 2,08% Ngoài phân lớp lysophospholipid số lớp chât phospholipid khác có hàm lượng nhỏ nên đơi phân tích định tính, thực cộng gộp lớp chất gần để tính tốn Như vậy, kết phân tích định tính định lượng thành phần phospholipid mẫu san hô mềm Capnella sp tương đồng với cơng trình nghiên cứu trước thành phần phospholipid lipid lồi san hơ mềm có chứa vi sinh vật cộng sinh với phospholipid PC, PE, PS, PI phosphonolipid chủ yếu CAEP [14] Khả sinh tổng hợp phosphonolipid nghiên cứu cơng bố lồi sứa hải quỳ biển [15, 16], đặc trưng quan trọng chuyển hóa lipid Cnidarian Kết phân tích dạng phân tử lớp chất PC Phân lớp phosphatidylcholine (PC) phân lớp chiếm hàm lượng cao tổng phospholipid Chúng tiến hành phân lập 310 nhận dạng dạng phân tử có mặt phân lớp phổ khối phân giải cao LCMS IT TOF với độ xác cao Kết tín hiệu đặc trưng MS2, MS3, thành phần hàm lượng dạng phân tử PC trình bày bảng Cơng thức phân tử chung thể hình Hình Cấu trúc hóa học phân tử phosphatidylcholine (PC) Trên phổ ion dương-MS1 PC quan sát thấy tín hiệu ion dương [M+H]+ phổ ion âm tín hiệu ion [M+CH3COO]- Ion [M+CH3COO]- lựa chọn để thực EIS-HRMS/MS (gọi tắt MS2) Trên phổ ion âm-MS2 ion [M+CH3COO]- ln xuất tín hiệu có cường độ mạnh ion mảnh [M+CH3COO-X]-, với X = CH3COOCH3 (C3H6O2), hình thành [M+CH3COO]mất mảnh trung hòa C3H6O2 Ion [M+CH3COO-C3H6O2]- tiếp tục lựa chọn để thực phân tích MS3, thu mảnh ion nhỏ mang lại thông tin cấu trúc phân tử hợp chất PC cần xác định [7] Nghiên cứu thành phần hàm lượng lớp … Bảng Kết phân tích dạng phân tử phân lớp phosphatidylcholine (PC) mẫu san hô Capnella sp ESI-HRMS MS [M+CH3COO] m/z % PC Khối lượng phân tử M Công thức phân tử 774,5555 4,81 715,5533 798,5555 4,81 800,5711 MS * ** ion mảnh [M+CH3COOC3H6O2] m/z m/z Thành phần C40H78NO7P 700,5187 251,1986 C16H28O2 (C16:2n) 739,5539 C42H78NO7P 724,5187 275,2011 C18H28O2 (C18:4n) 4,75 741,5688 C42H80NO7P 726,5440 277,2232 C18H30O2 (C18:3n) 802,5868 6,76 743,5845 C42H82NO7P 728,5500 279,2274 251,2078 C18H32O2 (C18:2n) C16H28O2 (C16:2n) 826,5868 22,03 767,5853 C44H82NO7P 752,5500 303,2278 C20H32O2 (C20:4n) 828,6024 5,49 769,5961 C44H84NO7P 754,5656 277,2145 C18H30O2 (C18:0) 830,6181 1,74 771,6137 C44H86NO7P 756,5813 279,233 C18H32O2 (C18:1n) 854,6181 36,73 795,6001 C46H86NO7P 780,5906 303,2238 C20H32O2 (C20:4n) 840,5661 0,51 840,5614 C44H80NO8P 766,5340 255,2018 303,2291 C16H32O2 (C16:0) C20H32O2 (C20:4n) C16H32O2 (C16:0) C18H32O2 (C18:2n) C20H32O2 (C20:4n) C22H32O2 (C22:6n) - ion mảnh 864,5661 0,78 864,5694 C46H80NO8P 790,5286 255,2033 279,2299 303,2330 327,2376 866,6181 5,70 808,6068 C47H86NO7P 792,6003 303,2319 C20H32O2 (C20:4n) 868,5974 0,75 868,5999 C46H84NO8P 794,5558 283,2641 303,2305 C18H36O2 (C18:0) C20H32O2 (C20:4n) Trên phổ ion âm-MS1 tín hiệu ion âm [M+CH3COO]- có cường độ mạnh giá trị m/z 854,6181 m/z 826,5868, tương ứng với hai dạng phân tử chiếm hàm lượng cao phân lớp Với tín hiệu ion m/z 854,6181 cho công thức phân tử tương ứng C46H86NO7P (khối lượng phân tử tính tốn 795,6001, độ sai lệch 0,00677 so với giá trị đo đạc, số liên kết đôi 6) Từ công thức phân tử cho thấy, với nguyên tử O phân tử hợp chất PC dạng O-alkyl acylphosphatidylcholine chứa phân tử axit béo mạch dài Trên phổ ion âm-MS2 ion [M+CH3COO]- có xuất tín hiệu m/z 780,5906 tương ứng với ion [M+CH3COOC3H6O2]- Trên phổ MS3, mảnh ion thu cho tín hiệu m/z 303,2238 tương ứng với anion axit béo C20H32O2 (C20:4n) Từ liệu thu cho thấy, dạng phân tử PC với ion cho tín hiệu phổ ion âm-MS1 Dạng phân tử PC 16:0e/16:2 PC 16:0e/18:4 PC 16:0e/18:3 PC 16:0e/18:2 PC 16:0e/20:4 PC 18:0e/18:3 PC 18:0e/18:2 PC 18:0e/20:4 Diacyl PC 16:0/20:4 Diacyl PC 18:2/20:4 Diacyl PC 16:0/22:6 PC 19:1e/20:4 Diacyl PC 18:0/20:4 m/z 854,6181 phosphatidylcholine PC 18:0e/20:4 (e: ether, thể có mặt mạch alkyl C18) Các tín hiệu thu phổ khối tương đương với tín hiệu tìm thấy chất chuẩn phân lớp PC [8] Tương tự vậy, dạng phân tử chiếm hàm lượng cao thứ phân lớp PC mẫu san hơ Capnella sp có tín hiệu ion âm [M+CH3COO]- m/z 826,5868, cho công thức phân tử tương ứng C44H82NO7P (khối lượng phân tử tính tốn 767,5853, độ sai lệch 0,00167 so với giá trị đo đạc, số liên kết đơi 6) Các tín hiệu ion âm phổ MS2 -MS3 m/z 752,5500 303,2278 Với nguyên tử O phân tử, PC dạng O-alkyl acylphosphatidylcholine với axit béo 20:4n, theo tính tốn, mạch alkyl lại 16:0 Dạng phân tử thành phần phosphatidylcholine xác định PC 16:0e/20:4 311 Đặng Thị Phương Ly, Trần Quang Đệ, … Các thành phần lại phân lớp PC xác định tương tự Kết bảng Cần lưu ý dạng phân tử PC với ion âm có tín hiệu m/z 802,5868 phổ ion âmMS1: công thức phân tử tương ứng C42H82NO7P với nguyên tử O phân tử, dạng phân tử chứa mạch acyl phân tử, mạch lại alkyl alkeny Trên phổ ion âm MS2 thu ion [M+CH3COO-C3H6O2]- có tín hiệu 728,5500 Khi thực MS3, phổ ion âmMS3 ion [M+CH3COO-C3H6O2]- có chứa tín hiệu m/z 279,2274 251,2078, tương ứng với anion hai axit béo 18:2n 16:2n, kiểm tra cho thấy ion ion mảnh xuất phát từ ion MS2 m/z 728,5500 Điều cho thấy có hai dạng phân tử PC khác có số khối m/z 802,5978, PC 16:0e/18:2 PC 18:0e/16:2 Tương tự vậy, tín hiệu có m/z 864,5661 có dạng phân tử PC 18:2/20:4 PC 16:0/22:6 Như vậy, phân lớp PC mẫu san hô mềm Capnella sp xác định 13 dạng phân tử, có mặt dạng phân tử dạng diacyl phosphotidylcholine PC 16:0/20:4, PC 18:2/20:4, PC 16:0/22:6, PC 18:0/20:4 Trên phổ MS3 dạng phân tử dạng diacyl thu tín hiệu ứng với anion axit béo có mặt dạng phân tử dạng phân tử O-alkyl phosphatidylcholine lại có mặt PC 16:0e/16:2, PC 16:0e/18:4, PC 16:0e/18:3, PC 16:0e/18:2, PC 16:0e/20:4, PC 18:0e/18:3, PC 18:0e/18:2, PC 18:0e/20:4 KẾT LUẬN Trong nghiên cứu này, xác định hàm lượng lipid tổng mẫu san hô mềm Capnella sp., thực phân tích thành phần, hàm lượng axit béo lớp chất lipid, lớp chất phospholipid lipid tổng mẫu san hô mềm Capnella sp Kết cho thấy lipid tổng có 20 axit béo chính, có mặt axit béo tetracosapolyenoic 24:5n-6 24:6n-3 axit béo đánh dấu điển hình cho san hơ mềm (san hơ tám ngăn) axit béo đánh dấu cho vi sinh vật cộng sinh 18:5n-3, 18:2n-6, 18:3n-6, 18:4n-3, 20:4n-3; lớp chất lipid lipid phân cực (PoL), sterol (ST), axit béo tự (FFA), triacylglyxerol 312 (TAG), monoalkyldiacylglycerol (MADAG), hydrocacbon sáp (HW) Lớp chất PoL chiếm hàm lượng cao Các phân lớp phospholipid phosphatidylethanolamine (PE), phosphatidylcholine (PC), phosphatidylserine (PS), phosphatidylinositol (PI), phosphonolipid ceramide aminoethylphosphonate (CAEP), phân lớp PC chiếm hàm lượng cao Lần Việt Nam, thành phần hàm lượng dạng phân tử lớp chất phosphatidylcholine (PC) từ lồi san hơ mềm Việt Nam nghiên cứu công bố, kết xác định có mặt 13 dạng phân tử phương pháp phổ khối đại LC-MS IT TOF với độ xác cao Hai dạng phân tử chiếm hàm lượng cao PC 18:0e/20:4 PC 16:0e/20:4 Ở Việt Nam cơng trình cơng bố chi tiết lipid lồi san hơ mềm Capnella sp dạng phân tử phospholipid nói chung phân lớp phosphatidylcholine nói riêng san hơ mềm Với kết đạt định hướng cho việc phân tích dạng phân tử lớp chất phospholipid khác từ lồi san hơ Việt Nam, nhằm bổ sung thông tin khoa học lipid san hơ Lời cảm ơn: Cơng trình thực hỗ trợ kinh phí từ Hợp phần số 05 mã số VAST.TĐ.DLB.05/16-18 thuộc dự án KHCN Trọng điểm cấp Viện HLKH&CN Việt Nam Đề tài VANT16-003, Viện Hàn lâm Khoa học LB Nga (Russian Academy of Sciences, grant VANT16-003) TÀI LIỆU THAM KHẢO Phạm Quốc Long, Imbs Andrey Borisovich, 2012 Lipit, axit béo oxylipin san hô Nxb Khoa học Tự nhiên Công nghệ Tr 125-184 Folch, J., Lees, M., and Stanley, G S., 1957 A simple method for the isolation and purification of total lipides from animal tissues Journal of Biological Chemistry, 226(1): 497-509 Phattanawasin, P., Sotanaphun, U., Sriphong, L., Kanchanphibool, I., and Nghiên cứu thành phần hàm lượng lớp … 10 Piyapolrungroj, N., 2011 A comparison of image analysis software for quantitative TLC of ceftriaxone sodium Silpakorn University Science & Technology Journal, 5(1): 7-13 Svetashev, V T., and Vaskovsky, V E., 1972 A simplified technique for thin-layer microchromatography of lipids Journal of Chromatography A, 67(2): 376-378 Vaskovsky, V E., and Terekhova, T A., 1979 HPTLC of phospholipid mixtures containing phosphatidylglycerol Journal of High Resolution Chromatography, 2(11): 671-672 Kostetsky, E Y., 1984 The phospholipidcomposition of Spongia, Coelenterata, Plathelminthes, Nemertini, Annelida, Sipunculida and Echiurida Biologiya Morya-Marine Biology, (5), 46-53 Imbs, A B., Dang, L P., Rybin, V G., and Svetashev, V I., 2015 Fatty acid, lipid class, and phospholipid molecular species composition of the soft coral Xenia sp (Nha Trang bay, the South China Sea, Vietnam) Lipids, 50(6): 575-589 Imbs, A B., Maliotin, A N., Lưu Văn Huyền, Phạm Quốc Long, 2005 Nghiên cứu thành phần axit béo 17 lồi san hơ Việt Nam Tạp chí Khoa học Cơng nghệ, 43, 84-91 Lưu Văn Huyền, 2010 Nghiên cứu lipid axit béo số lồi san hơ biển Việt Nam Luận án Tiến sỹ Viện Hóa học Các hợp chất thiên nhiên Tr 63-64 Yamashiro, H., Oku, H., Higa, H., Chinen, I., and Sakai, K., 1999 Composition of lipids, fatty acids and sterols in Okinawan corals Comparative Biochemistry and Physiology Part B: Biochemistry and Molecular Biology, 122(4): 397-407 11 Hamoutene, D., Puestow, T., MillerBanoub, J., and Wareham, V., 2008 Main lipid classes in some species of deep-sea corals in the Newfoundland and Labrador region (Northwest Atlantic Ocean) Coral reefs, 27(1): 237-246 12 Nichols, P D., Danaher, K T., and Koslow, J A., 2003 Occurrence of high levels of tetracosahexaenoic acid in the jellyfish Aurelia sp Lipids, 38(11): 1207-1210 13 Imbs, A B., Demidkova, D A., Dautova, T N., and Latyshev, N A., 2009 Fatty acid biomarkers of symbionts and unusual inhibition of tetracosapolyenoic acid biosynthesis in corals (Octocorallia) Lipids, 44(4): 325-335 14 Latyshev, N A., Nguen, K H., To, T N., and Svetashev, V I., 1986 Composition and seasonal fluctuations of alcyonarian phospholipids Russian Journal of Marine Biology, 12, 178-182 15 de Souza, L M., Iacomini, M., Gorin, P A., Sari, R S., Haddad, M A., and Sassaki, G L., 2007 Glyco-and sphingophosphonolipids from the medusa Phyllorhiza punctata: NMR and ESIMS/MS fingerprints Chemistry and physics of lipids, 145(2): 85-96 16 Mukhamedova, K S., and Glushenkova, A I., 2000 Natural phosphonolipids Chemistry of Natural Compounds, 36(4): 329-341 313 Đặng Thị Phương Ly, Trần Quang Đệ, … INVESTIGATION OF THE LIPID, PHOSPHOLIPID, FATTY ACID AND PHOSPHATIDYLCHOLINE CONTENT AND COMPOSITION OF THE VIETNAMESE SOFT CORAL CAPNELLA SP Dang Thi Phuong Ly1, Tran Quang De3, Pham Minh Quan1, Dinh Thi Kim Hoa5, Nguyen Thi Theu1, Luu Thi Hai Linh4, Pham Quoc Long1, Andrey Imbs Borisovich2 Institute of Natural Products Chemistry-VAST A.V Zhirmunsky Institute of Marine Biology, Far-Eastern Branch of the Russian Academy of Sciences, Vladivostok, Russian Federation Can Tho University Hanoi Pedagogy University Thai Nguyen University of Agriculture and Forestry ABSTRACT: The total lipid content of the soft coral Capnella sp contained 1.44 ± 0.10% of the fresh weight In the fatty acid content, the tetracosapolyenoic fatty acids 24:5n-6 and 24:6n-3, which were the typical markers for the soft corals (the eight compartment coral), and the fatty acids that marked for symbiotic microorganism including 18:5n-3, 18:2n-6, 18:3n-6, 18:4n-3, 20:4n-3 were presented The result of the lipid composition analysis showed that the total lipid contained polar lipid, sterol, free fatty acid, triacylglycerol, monoalkyldiacylglycerol, hydrocarbon and wax Of these, the polar lipid displayed the highest content with 21.14 ± 1.17% of the total lipid The phospholipid composition of the soft coral Capnella sp contained the characteristic phospholipid subclasses of the animals of the phylum Cnidaria, including phosphatidylethanolamine, phosphatidylcholine, phosphatidylserine, phosphatidylinositol, and ceramide aminoethylphosphonate (phosphonolipid, CAEP) Of these, phosphatidylcholine exhibited the highest content with 35.53 ± 1.46% of the total phospholipid This is the first time that the content and composition of the molecular types of the phosphatidylcholine from a Vietnamese soft coral species have been investigated and reported By using modern mass spectrometry IT TOF LC-MS, the presence of 13 molecular types have been precisely identified, which PC 18:0e/20:4 and PC 16:0e/20:4 were the two ingredients displaying the highest content Keywords: Total lipid (TL), polar lipid (PoL), non-polar lipid (NL), free fatty acid (FFA), sterol (ST), triacylglycerol (TAG), monoankyldiacylglycerol (MADAG), hydrocarbon - wax (WE), phosphatidylcholine (PC) 314 .. .Nghiên cứu thành phần hàm lượng lớp … thành phần axit béo, thành phần lớp chất, số nghiên cứu có sâu vào nghiên cứu thành phần lớp chất lipid không phân cực [1] Cho tới... mẫu san hơ mềm nghiên cứu Thành phần hàm lượng axit béo Bảng Thành phần hàm lượng axit béo lipid tổng mẫu san hô mềm Capnella sp TT Axit béo % tổng axit béo TT Axit béo % tổng axit béo TT Axit. .. Trong nghiên cứu này, xác định hàm lượng lipid tổng mẫu san hô mềm Capnella sp., thực phân tích thành phần, hàm lượng axit béo lớp chất lipid, lớp chất phospholipid lipid tổng mẫu san hô mềm Capnella