Nghiên cứu khả năng giải phóng thuốc berberin của màng cellulose vi khuẩn lên men từ một số môi trường (2017)

TRƯỜNG ĐẠI HỌC SƯ PHẠM HÀ NỘI KHOA SINH - KTNN ===o0o=== LÝ THỊ HUỆ NGHIÊN CỨU SO SÁNH KHẢ NĂNG GIẢI PHÓNG THUỐC BERBERIN CỦA MÀNG CELLULOSE VI KHUẨN LÊN MEN TỪ MỘT SỐ MƠI TRƯỜNG KHĨA LUẬN TỐT NGHIỆP ĐẠI HỌC Chuyên ngành: Sinh lý học người động vật Người hướng dẫn khoa học ThS Cao Bá Cường HÀ NỘI, 2017 LỜI CẢM ƠN Em xin gửi lời cảm ơn chân thành tới ThS Cao Bá Cường hướng dẫn, bảo tận tình, giúp đỡ tạo điều kiện cho em thực hoàn thành tốt khóa luận Em xin chân thành cảm ơn Ban Giám hiệu trường ĐHSP Hà Nội 2, khoa Sinh - KTNN, Viện NCKH & ƯD Trường ĐHSP Hà Nội 2, phòng thí nghiệm Sinh lý người động vật, thầy cô tổ môn Động vật, ban bảo vệ tạo điều kiện giúp đỡ em Em xin chân thành cảm ơn giúp đỡ quan tâm động viên bạn bè, gia đình suốt q trình hồn thành khóa luận Em xin chân thành cảm ơn! Hà Nội, ngày 20 tháng 04 năm 2017 Sinh viên Lý Thị Huệ LỜI CAM ĐOAN Để đảm bảo tính trung thực đề tài, tơi xin cam đoan: Đề tài không chép tài liệu có sẵn Đề tài không trùng lặp với đề tài khác Kết thu đề tài tự thân tơi nghiên cứu thực tiễn đảm bảo tính xác trung thực Hà Nội, ngày 20 tháng 04 năm 2017 Sinh viên Lý Thị Huệ DANH MỤC CÁC TỪ VIẾT TẮT Từ viết tẳt A xylinum Từ đầy đủ Acetobacter xylinum CNM Cao nấm men CVK Cellulose vi khuẩn ĐHSP Đại học Sư phạm MT1 Môi trường MT2 Môi trường MT3 Môi trường NCKH & ƯD Nghiên cứu Khoa học Ứng dụng OD Optical density UV - vis Ultraviolet visible MỤC LỤC MỞ ĐẦU 1 Lí chọn đề tài Mục đích nghiên cứu 3 Đối tượng phạm vi nghiên cứu Ý nghĩa khoa học ý nghĩa thực tiễn 4.1 Ý nghĩa khoa học 4.2 Ý nghĩa thực tiễn CHƯƠNG TỔNG QUAN TÀI LIỆU 1.1 Đặc điểm, tính chất ứng dụng màng CVK 1.1.1 Đặc điểm cấu trúc 1.1.2 Tính chất độc đáo màng CVK 1.1.3 Ứng dụng màng CVK 1.2 Giới thiệu thuốc berberin 1.2.1 Nguồn gốc 1.2.2 Cấu trúc 1.2.3 Tác dụng dược lý ứng dụng 1.2.4 Chỉ định chống định thuốc berberin 1.3 Tình hình nghiên cứu giới Việt Nam 1.3.1 Tình hình nghiên cứu thuốc 1.3.2 Tình hình nghiên cứu màng CVK Chương VẬT LIỆU VÀ PHƯƠNG PHÁP NGHIÊN CỨU 11 2.1 Vật liệu nghiên cứu 11 2.1.1 Đối tượng nghiên cứu 11 2.1.2 Nội dung nghiên cứu 11 2.1.3 Thiết bị dụng cụ 11 2.1.4 Nguyên liệu hóa chất 12 2.1.5 Môi trường lên men thu màng CVK 12 2.2 Phương pháp nghiên cứu 13 2.2.1 Phương pháp lên men thu màng CVK từ số môi trường 13 2.2.2 Phương pháp xử lý màng CVK trước hấp thụ thuốc 13 2.2.3 Đánh giá độ tinh khiết màng 14 2.2.4 Phương pháp xác định đường chuẩn 15 2.2.5 Phương pháp xác định lượng thuốc hấp thụ vào màng CVK 16 2.2.6 Phương pháp pha môi trường đệm PBS 17 2.2.7 Phương pháp xác định lượng thuốc giải phóng thơng qua hệ thống thiết kế 18 2.2.8 Phương pháp đánh giá động học giải phóng thuốc berberin từ màng CVK 19 2.2.9 Phương pháp xử lý thống kê 19 2.2.10 Địa điểm nghiên cứu 19 Chương KẾT QUẢ NGHIÊN CỨU VÀ THẢO LUẬN 20 3.1 Kết tạo màng xử lý màng CVK từ môi trường khác 20 3.1.1 Thu màng CVK từ môi trường lên men 20 3.1.2 Quá trính xử lý màng CVK trước hấp thu thuốc 21 3.1.3 Xác định điều kiện ni cấy để có độ dày màng CVK thích hợp 22 3.1.4 Kiểm tra độ tinh khiết màng CVK 23 3.2 Khả hấp thụ thuốc berberin màng CVK môi trường khác 24 3.3 Tỷ lệ giải phóng thuốc màng CVK 25 3.3.1 Tỉ lệ giải phóng thuốc màng cao nấm men 25 3.2.2 Tỉ lệ giải phóng thuốc màng nước dừa già 27 3.2.3 Tỉ lệ giải phóng thuốc màng nước vo gạo 29 3.2.4 So sánh tỷ lệ giải phóng thuốc màng CVK độ dày khác 24h pH = 30 3.2.5 So sánh tỷ lệ giải phóng thuốc màng CVK độ dày khác 24h pH = 12 32 3.4 Đánh giá động dược học giải phóng thuốc berberin từ màng CVK 33 KẾT LUẬN VÀ KIẾN NGHỊ 38 KẾT LUẬN 38 KIẾN NGHỊ 38 TÀI LIỆU THAM KHẢO 39 DANH MỤC BẢNG Bảng 2.1 Môi trường lên men tạo màng CVK 12 Bảng 2.2 Giá trị mật độ quang (OD) dung dịch Berberin nồng độ (mg/ml) khác (n = 3) 15 Bảng 2.3 Môi trường đệm PBS 17 Bảng 3.1 Kết thu màng CVK tươi độ dày khác 23 Bảng 3.2 Lượng thuốc hấp thụ vào màng CVK với độ dày khác thời điểm 25 Bảng 3.3 Hiệu suất thuốc hấp thụ vào màng CVK khác với độ dày màng khác 25 Bảng 3.4 Tỷ lệ giải phóng thuốc berberin (%) từ màng CVK lên men từ môi trường cao nấm men (màng CNM) (n=3) 26 Bảng 3.5 Tỉ lệ giải phóng thuốc berberin (%) từ màng CVK lên men từ môi trường nước dừa già (n=3) 27 Bảng 3.6 Tỉ lệ giải phóng thuốc berberin (%) từ màng CVK lên men từ môi trường nước vo gạo (n=3) 29 Bảng 3.7 Tỷ lệ giải phóng thuốc màng CVK độ dày khác 24 pH = 31 Bảng 3.8 Tỷ lệ giải phóng thuốc màng CVK độ dày khác 24 pH = 12 32 Bảng 3.9 Hệ số tương quan (R2), tốc độ giải phóng thuốc (k) trị số mũ giải phóng (n) môi trường pH khác màng CNM (n = 3) 34 Bảng 3.10 Hệ số tương quan (R ), tốc độ giải phóng thuốc (k) trị số mũ giải phóng (n) mơi trường pH khác màng nước dừa già (n = 3) 35 Bảng 3.11 Hệ số tương quan (R ), tốc độ giải phóng thuốc (k) trị số mũ giải phóng (n) môi trường pH khác màng nước vo gạo (n = 3) 36 DANH MỤC HÌNH Hình 1.1 Cơng thức cấu tạo berberin Hình 2.1 Quy trình tinh chế màng CVK 14 Hình 2.2 Đồ thị biểu diễn đường chuẩn berberin 16 Hình 3.1 Hình ảnh màng CVK lên men từ mơi trường CNM 20 Hình 3.2 Hình ảnh màng CVK lên men từ môi trường nước dừa già 20 Hình 3.3 Hình ảnh màng CVK lên men từ mơi trường nước vo gạo 21 Hình 3.4 Các quy trình xử lý màng CVK 21 Hình 3.5 Kết thử diện đường glucose 24 Hình 3.6 Tỷ lệ giải phóng thuốc từ màng CNM với độ dày 0.3cm 0.7cm26 Hình 3.7 Tỷ lệ giải phóng thuốc từ màng dừa với độ dày 0.3cm 0.7cm 28 Hình 3.8 Tỷ lệ giải phóng thuốc từ màng gạo với độ dày 0.3cm 0.7cm 30 Hình 3.9 Tỷ lệ giải phóng thuốc màng CVK độ dày khác 24 pH = 31 Hình 3.10 Tỷ lệ giải phóng thuốc màng CVK độ dày khác 24 pH = 12 32 MỞ ĐẦU Lí chọn đề tài Trong thời kì cơng nghiệp hóa, đại hóa người trở nên bận rộn với cơng việc khơng có nhiều thời gian nấu nướng bếp núc nên nhiều loại thức ăn nhanh, đồ ăn đóng hộp đời kèm theo chứng tiêu chảy, viêm đường tiêu hóa ngày xuất nhiều Các bệnh rối loạn đường tiêu hóa khơng ăn uống mà nhiều nguyên nhân khác căng thẳng, stress, hay thức khuya khơng ngủ đủ giấc, sử dụng chất kích thích rượu, cà phê, Với phát triển ngành y học có nhiều loại thuốc nhằm chữa trị, hạn chế bệnh rối loạn đường tiêu hóa, có thuốc berberin [1] Berberin biết đến chất kháng khuẩn tự nhiên việc điều trị bệnh lý liên quan đến rối loạn đường tiêu hóa vi khuẩn tả, E coli, amip đường ruột [20] Theo vài nghiên cứu gần đây, berberin có tác dụng tốt việc điều trị số bệnh mãn tính tiểu đường, viêm khớp, hạ lipid, cholesterol máu, đặc biệt bệnh viêm đại tràng Berberin sở hữu tính chất dược khác bao gồm tác dụng chống ung thư [20] Trong trình dùng thuốc berberin chữ trị bệnh nhiễm trùng đường ruột, tiêu chảy, viêm đường tiêu hóa người dùng cần lưu ý số tác dụng phụ thuốc gây cho người dùng như: bị dị ứng, bị táo bón, … Màng cellulose vi khuẩn (CVK) cấu tạo chuỗi polymer 1,4 glucopyranose mạch thẳng tổng hợp từ số loài vi khuẩn, chủ yếu Acetobacter xylinum (A xylinum) Màng CVK A xylinum tạo có cấu trúc hóa học đồng với cellulose thực vật lại có số tính chất hóa lí như: độ bền học khả thấm hút nước cao, đường kính sợi nhỏ, độ tinh khiết cao, khả polymer hóa lớn [2], [6], Hiện màng CVK xem nguồn nguyên liệu có tiềm ứng dụng nhiều lĩnh vực Qua kiểm định thống kê công cụ Microsoft Office Excel 2010 thu p < 0.05 có nghĩa sai khác tỉ lệ giải phóng thuốc màng có ý nghĩa thống kê Với pH = tỉ lệ giải phóng cao màng 0.3cm 0.7cm 59.89% 39.5% Với pH =12 tỉ lệ giải phóng cao màng 0.3cm 0.7cm 46.29% 33.2% Như kết luận môi trường pH = 12, pH = màng CVK mỏng (0.3cm) có khả giải phóng thuốc berberin tốt màng CVK dày (0.7cm) 3.2.2 Tỉ lệ giải phóng thuốc màng nước dừa già Tỷ lệ thuốc berberin giải phóng khỏi màng CNM dày 0.3cm 0.7cm khoảng thời gian khác pH khác thể bảng 3.5 hình 3.7 Bảng 3.5 Tỉ lệ giải phóng thuốc berberin (%) từ màng CVK lên men từ môi trường nước dừa già (n=3) Độ pH dày màng pH =12 pH= 0.3cm 0.7cm 0.3cm 0.7cm Tỉ lệ thuốc berberin giải phóng (%) 0.5 giờ giờ giờ 12 24 14.7 ± 20.47± 34.72± 24.1 ± 11.4± 10.61 ± 9.73± 9.21± 0.269 1.34 0.2 0,26 0.95 0.99 6.73 ± 9.08± 15.2± 14.4± 11.5± 10.27 ± 8.87± 7.60± 0.79 0.93 0.54 0.76 0.82 0.74 0.34 0.45 18.27± 42.98± 45.90± 50.32± 42.7± 36.84± 36.18± 35.37± 0.65 0.78 0.68 0.32 0.228 0.132 1.5 12.35± 15.08± 29.18± 36.70± 22.1± 21.42± 20.55± 21.36± 1.02 1.075 0.54 1.08 0.234 1.23 0.93 0.89 0.37 0.86 1.81 Tỉ lệ giải phóng thuốc berberin từ màng dừa (%) 60 50 40 pH2 0.3cm 30 pH2 0.7cm 20 pH12 0.3cm 10 pH12 0.7cm Thời gian (giờ) Hình 3.7 Tỷ lệ giải phóng thuốc từ màng dừa với độ dày 0.3cm 0.7cm Qua bảng 3.5 hình 3.7 ta nhận thấy tỷ lệ thuốc berberin giải phóng khỏi màng tăng nhanh dần từ 0.5 đến sau lượng thuốc giải phóng khơng đáng kể khối lượng thuốc khơng tiếp tục giải phóng Qua kiểm định thống kê công cụ Microsoft Office Excel 2010 thu p < 0.05 có nghĩa sai khác tỉ lệ giải phóng thuốc màng có ý nghĩa thống kê Trong mơi trường khảo sát mơi trường đệm pH = màng có khả giải phóng thuốc tốt pH = 12 Ở pH = tỉ lệ giải phóng thuốc màng CVK đạt cực đại giờ, màng 0.3cm đạt tỉ lệ 50.32% ± 0.68, màng 0.7cm đạt tỉ lệ 36.70% ± 0.54 Ở pH = 12 tỉ lệ giải phóng thuốc đạt cực đại giải phóng thuốc, màng 0,3cm đạt tỉ lệ 34.72% ± 1.34 , màng 0.7cm đạt tỉ lệ 15.2% ± 0.54 Như kết luận môi trường pH = 12, pH = màng CVK mỏng (0.3cm) có khả giải phóng thuốc berberin tốt màng CVK dày (0.7cm) 3.2.3 Tỉ lệ giải phóng thuốc màng nước vo gạo Tỷ lệ thuốc berberin giải phóng khỏi màng CNM dày 0.3cm 0.7cm khoảng thời gian khác pH khác thể bảng 3.6 hình 3.8 Bảng 3.6 Tỉ lệ giải phóng thuốc berberin (%) từ màng CVK lên men từ môi trường nước vo gạo (n=3) Tỉ lệ thuốc berberin giải phóng (%) Độ pH dày màng 0.5 pH = pH = 12 0.3cm 0.7cm 0.3cm 0.7cm giờ giờ 12 24 18.06± 31.60± 34.32± 43.98± 49.29± 43.38± 35.9± 30.54± 1.004 2.067 1.871 19.31± 28.03± 33.99± 39.41± 37.70 27.53± 22.2± 19.5± 2.623 2.76 1.086 27.68± 33.73± 40.90± 47.59± 56.22± 52.07± 49.8± 48.97± 2.426 2.746 1.002 2.541 20.09± 22.42± 22.03± 22.4± 26.51± 19.61± 18.6± 18.75± 1.334 0.958 2.429 983 1.867 845 1.064 1.056 1.739 1.271 1.120 1.743 2.895 2.267 1.214 ±3.791 1.956 1.542 3.064 2.643 1.934 1.542 Tỉ lệ giải phóng thuốc berberin từ màng gạo (%) 60.00 50.00 40.00 pH2 0.3cm 30.00 pH2 0.7cm pH12 0.3cm 20.00 pH12 0.7cm 10.00 0.00 10 20 30 Thời gian (giờ) Hình 3.8 Tỷ lệ giải phóng thuốc từ màng gạo với độ dày 0.3cm 0.7cm Theo số liệu bảng 3.6 hình 3.8, thấy lượng thuốc berberin giải phóng chủ yếu đầu tiên, sau lượng thuốc giải phóng Tỉ lệ thuốc giải phóng giảm dần Qua kiểm định thống kê công cụ Microsoft Office Excel 2010 thu p < 0,05 có nghĩa sai khác tỉ lệ giải phóng thuốc màng có ý nghĩa thống kê Trong mơi trường khảo sát mơi trường đệm pH = 12 màng có khả giải phóng thuốc tốt pH = Ở pH = tỷ lệ giải phóng thuốc màng CVK dày 0.3cm đạt cực đại giờ, đạt 49.29% ± 1.214 màng dày 0.7cm đạt cực đại giờ, đạt 39.41% ± 1.743 Ở pH = 12 tỉ lệ giải phóng thuốc đạt cực đại giải phóng thuốc, màng 0.3cm đạt tỉ lệ 56.22% ± 1.002, màng CVK dày 0.7cm đạt tỉ lệ 26.51% ± 2.429 3.2.4 So sánh tỷ lệ giải phóng thuốc màng CVK độ dày khác 24 pH = Tỷ lệ giải phóng thuốc màng CVK độ dày khác thể bảng 3.7 hình 3.9 Bảng 3.7 Tỷ lệ giải phóng thuốc màng CVK độ dày khác 24 pH = Thời Giải phóng thuốc Giải phóng thuốc Giải phóng thuốc gian màng CNM (%) màng dừa (%) màng gạo (%) (giờ) 0.3cm 0.3cm 0.3cm 24 53.63 ± 23.72 ± 35.37 ± 21.36 30.54 ± 19.54 ± 1.89 1.542 Tỉ lệ giải phóng thuốc loại màng CVKK (%) 60 0.7cm 3.3 1.5 0.7cm ± 0.93 0.7cm 2.643 53.63 50 40 30 35.37 30.54 23.72 21.36 20 0.3cm 19.54 0.7cm 10 Màng CNM Màng Dừa Loại màng Màng Gạo Hình 3.9 Tỷ lệ giải phóng thuốc màng CVK độ dày khác 24 pH = Nhận xét: qua bảng 3.7 hình 3.9 chúng tơi nhận thấy tỷ lệ giải phóng thuốc màng 0.3cm nhiều màng 0.7cm Cụ thể: pH = 2, độ dày màng 0.3cm tỷ lệ giải phóng thuốc màng CNM đạt 53.63% cao so với màng dừa 35.37% cao so với màng gạo đạt 30.54% Ở độ dày 0.7cm tỷ lệ giải phóng thuốc màng CNM đạt 23.72% cao so với màng dừa 21.36% cao so với màng gạo 19.54% Như vậy, tỷ lệ giải phóng ba loại màng độ dày khác màng CNM giải phóng thuốc nhiều Điều chứng tỏ rằng, độ dày màng khác nhau, đặc tính khác khả giải phóng thuốc khác 3.2.5 So sánh tỷ lệ giải phóng thuốc màng CVK độ dày khác 24 pH = 12 Tỷ lệ giải phóng thuốc màng CVK độ dày khác thể bảng 3.8 hình 3.10 Bảng 3.8 Tỷ lệ giải phóng thuốc màng CVK độ dày khác 24 pH = 12 Thời Giải phóng thuốc Giải phóng thuốc Giải phóng thuốc gian màng CNM (%) màng dừa (%) màng gạo (%) (giờ) 0.3cm 0.7cm 0.3cm 0.7cm 0.3cm 32.13 17.53 9.21 7.60 48.97 18.75 ± 1.30 ± 0.93 ± 0.99 ± 0.45 ±1.542 ± 1.845 24 0.7cm Tỉ lệ giải phóng (%) 60 48.97 50 40 32.13 30 20 18.75 17.53 0.3cm 0.7cm 9.21 7.6 10 Màng CNM Màng Dừa Loại màng Màng Gạo Hình 3.10 Tỷ lệ giải phóng thuốc màng CVK độ dày khác 24 pH = 12 Nhận xét: qua bảng 3.6 hình 3.10 chúng tơi nhận thấy tỷ lệ giải phóng thuốc màng 0.3cm nhiều màng 0.7cm Cụ thể: pH = 12, độ dày màng 0.3cm tỷ lệ giải phóng thuốc màng gạo đạt 48.97% cao so với màng CNM 32.13% cao so với màng dừa đạt 9.21% Ở độ dày 0.7cm tỷ lệ giải phóng thuốc màng gạo đạt 18.75% cao so với màng CNM 17.53% cao so với màng dừa 7.6% Như vậy, tỷ lệ giải phóng ba loại màng độ dày khác màng gạo giải phóng thuốc nhiều Điều chứng tỏ rằng, độ dày màng khác nhau, đặc tính khác khả giải phóng thuốc khác Từ bảng 3.4 đến bảng 3.8 hình 3.6 đến 3.10 ta thấy: Đối với pH = tỉ lệ giải phóng thuốc màng 0.3cm nhiều màng 0.7cm màng cao nấm men giải phóng nhiều Đối với pH = 12 tỉ lệ giải phóng thuốc màng 0.3cm nhiều màng 0.7cm màng vo gạo giải phóng nhiều Như kết luận mơi trường pH = 12, pH = màng CVK mỏng (0.3cm) có khả giải phóng thuốc BH tốt màng CVK dày (0.7cm) 3.4 Đánh giá động dược học giải phóng thuốc berberin từ màng CVK Bảng 3.9, 3.10, 3.11 bảng phân tích chế giải phóng thuốc động lực học khuếch tán [20] Phương trình First order đại diện cho hệ thống nơi mà tỉ lệ giải phóng thuốc phụ thuộc vào nồng độ thuốc hệ thống, mơ hình Higuchi giả định việc phát hành thuốc gây chủ yếu chế khuếch tán, mơ hình Korsmeyer - Peppas cung cấp nhìn bên sâu sắc cho loại chế khác Q trình giải phóng thuốc berberin khỏi màng CNM, dừa, gạo theo mơ hình giải phóng thuốc pH khác thể thông qua bảng 3.9, 3.10, 3.11 Bảng 3.9 Hệ số tương quan (R ), tốc độ giải phóng thuốc (k) trị số mũ giải phóng (n) mơi trường pH khác màng CNM (n = 3) pH pH = Mẫu CVK 0.3cm pH =12 0.7cm 0.3cm 0.7cm 0.145 0.027 0.04 0.02 ± 0.0012 ± 0.009 ± 0.007 ± 0.005 -6.7837 -16.7038 -16.015 -10 ± 0.0024 ± 0.017 ± 0.018 ± 0.009 17.716 9.246 11.455 7.366 ± 0.014 ± 0.002 ± 0.098 ± 0.018 -4.6694 -9.3022 -8.7154 -5.3341 ± 0.007 ± 0.015 ± 0.01 ± 0.008 Hixon - kHC 0.042 0.008 0.011 0.006 Crowel ± 0.002 ± 0.001 ± 0.0012 ± 0.001 -8.1198 -17.3566 -17.1069 10.5587 ± 0.005 ± 0.0291 ± 0.0135 ± 0.0124 45.58 30.977 34.896 23.466 ± 0.0012 ± 0.0032 ± 0.003 ± 0.0019 0.385 0.0567 0.0091 0.0012 ± 0.0038 ± 0.0033 ± 0.0038 ± 0.0049 0.091 0.033 0.013 0.0006 ± 0.0076 ± 0.0064 ± 0.0053 ± 0.0060 k1 First order R kH Higuchi R R Korsyer 2 kKP Peppas R n Qua bảng 3.9 phân tích q trình giải phóng thuốc khỏi màng CNM theo mơ hình là: First order, Higuchi, Hixson - Crowel Korsmeyer - Peppas ta thấy R lớn mơ hình Korsmeyer - Peppas Như mơ hình phù hợp với q trình giải phóng thuốc khỏi màng CNM Bảng 3.10 Hệ số tương quan (R ), tốc độ giải phóng thuốc (k) trị số mũ giải phóng (n) môi trường pH khác màng nước dừa già (n = 3) pH pH = 12 Mẫu CVK First order k1 R Higuchi kH R Hixon - kHC Crowell R Korsme yer Peppas kKP R n pH =2 0.3cm 0.7cm 0.3cm 0.7cm 0.009 0.008 0.005 0.02 ± 0.0012 ± 0.009 ± 0.0042 ± 0.0531 -2.8499 -8.2882 -7.5321 -4.4862 ± 0.0023 ± 0,0116 ± 0.0023 ± 0.0016 4.471 7.309 12.673 3.434 ± 0.0142 ±0.0023 ±0.0036 ±0.0045 -1.8092 -2.0231 -4.0384 -3.9122 ± 0.0071 ± 0.0045 ± 0.0087 ± 0.0095 0.003 0.006 0.005 0.008 ± 0.0023 ± 0.0035 ± 0.0024 ± 0.0025 -2.8703 -4.6517 -7.5321 -8.2882 ± 0.0045 ± 0.0292 ± 0.0124 ± 0.0065 20.968 20.396 36.316 10.418 ± 0.0012 ± 0.0032 ± 0.003 ± 0.0019 0.2187 0.0563 0.0578 0.0086 ± 0.0038 ± 0.0033 ± 0.0038 ± 0.0049 0.171 0.058 0.043 0.018 ± 0.0076 ± 0.0064 ± 0.0053 ± 0.0060 Qua bảng 3.10 ta thấy mơ hình Korsmeyer - Peppas phù hợp với q trình giải phóng thuốc khỏi màng dừa Bảng 3.11 Hệ số tương quan (R ), tốc độ giải phóng thuốc (k) trị số mũ giải phóng (n) mơi trường pH khác màng nước vo gạo (n = 3) pH Độ dày màng (cm) First k₁ order Higuchi Hixson - Crowel Korsmeyer - Peppas n 0.3cm 12 0.7cm 0.3cm 0.7cm -3.2226 -0.2535 -0.2545 -27 ± 0.0016 ± 0.0012 ± 0.0023 ± 0.0176 0.2 1.492 0.575 0.109 ± 0.0041 ± 0.0123 ± 0.0016 ± 0.0065 -2.7235 -4.5812 -2.5908 -18.3779 ± 0.0012 ± 0.0041 ± 0.0074 ± 0.0045 17.912 29.907 24.67 16.153 ± 0.0034 ± 0.0118 ± 0.0127 ± 0.0012 -3.9676 -4.4525 -2.3608 -30.1873 ± 0.026 ± 0.0062 ± 0.0034 ± 0.0253 0.048 0.062 0.06 0.027 ± 0.0146 ± 0.0012 ± 0.0045 ± 0.0005 0.2167 0.0001 0.6813 0.0973 ± 0.0083 ± 0.014 ± 0.0017 ± 0.0023 46.588 79.154 57.534 53.398 ± 0.0034 ± 0.0023 ± 0.0215 ± 0.0154 0.9 0.002 0.135 0.031 ± 0.0065 ± 0.0001 ± 0.0043 ± 0.0012 Qua bảng 3.11 ta thấy R > 60% nên mơ hình Korsmeyer - Peppas phù hợp với trình giải phóng thuốc khỏi màng gạo Tóm lại: Qua bảng 3.9, 3.10, 3.11 ta thấy thuốc berberin giải phóng dung dịch đệm pH = 2, pH = 12 phù hợp với mơ hình Korsmeyer - Peppas Mơ hình Korsmeyer - Peppas mơ hình cung cấp nhìn tồn diện vào loại hình nơi thuốc giải phóng theo chế chủ yếu khuếch tán tỷ lệ với trương nở vật liệu mang thuốc trương vật liệu cao tỷ lệ giải phóng thuốc cao ngược lại Qua bảng 3.9, 3.10, 3.11 ta thấy n < 0.43, mơ hình vận chuyển khuếch tán qua trung gian giải phóng thuốc Có thể giá trị n nhỏ liên quan đến khuếch tán thuốc hay khuếch tán liên quan đến trương nở màng tính chất bên vật liệu CVK phần độ tan hay nhiều thuốc Việc giải phóng thuốc màng 0.3cm lớn màng 0.7cm giải thích trương nở màng CVK môi trường pH khác Qua bảng 3.9, 3.10, 3.11 cho ta thấy tốc độ giải phóng thuốc berberin qua màng CVK phụ thuộc vào độ dày màng, màng có độ dày cao tốc độ giải phóng chậm ngược lại màng có độ dày mỏng tốc độ giải phóng nhanh Ở mơi trường pH = có trương nở nhiều dẫn đến tạo khe hở nhiều hơn, liên kết màng trở nên lỏng lẻo hơn, lượng berberin giải phóng qua sợi cellulose nhiều nhanh Màng CVK cấu tạo polime cao phân tử bền nên khơng có ăn mòn xảy q trình giải phóng thuốc KẾT LUẬN VÀ KIẾN NGHỊ Kết luận Từ trình nghiên cứu, thu kết sau: - Thu màng CVK tinh khiết với độ dày 0.3cm 0.7cm Lượng thuốc giải phóng từ loại màng CVK môi trường pH =2 pH = 12 mơi trường pH = màng CNM màng dừa có tỉ lệ giải phóng thuốc cao Mơi trường pH = 12 màng gạo có tỉ lệ giải phóng thuốc cao Màng có độ dày 0.3cm có khả giải phóng thuốc lớn màng có độ dày 0.7cm Kiểm tra động học chế giải phóng berberin từ màng CVK theo mơ hình động học: First order, Higuchi, Hixson - Crowell Korsmeyer - Peppas cho thấy chế giải phóng thuốc phù hợp với mơ hình Korsmeyer - Peppas, thuốc giải phóng theo chế khuếch tán Kiến nghị Cần tiếp tục khảo sát thêm khả hấp thu giải phóng thuốc màng CVK tạo chủng A xylinum từ loại môi trường tự nhiên khác như: dịch hoa quả, nước chè xanh, nước mía, nước dứa,… để mở rộng nguồn nguyên liệu TÀI LIỆU THAM KHẢO Tài liệu tiếng việt Bộ Y tế (2002), Dược điển Việt Nam III, Nhà xuất Y học Hà Nội, tr 33 - 35, 178 - 179 phụ lục (PL - 75, 76) Đặng Thị Hồng Phân lập, tuyển chọn nghiên cứu số đặc tính Sinh học vi khuẩn Acetobacter xylinum chế tạp màng sinh học (CVK) Luận án thạc sỹ Sinh học Đại học Sư phạm Hà Nội, 2007 Trần Công Khánh - vàng đắng - Tạp chí Dược học - số - 1983, BYT xuất bản, tr Phan Quốc Kinh - Nghiên cứu Alcaloid chiết xuất từ thuốc Việt Nam - ĐH Dược khoa Hà Nội, 1971, tr 10, tr 42 Phạm Thanh Kỳ cộng (1998), “Bài giảng dược liệu”, tập II, Trường đại học Dược Hà Nội Huỳnh Thị Ngọc Lan, Nguyễn Văn Thanh Nghiên cứu đặc tính màng cellulose vi khuẩn từ Acetobacter xylinum sử dụng làm màng trị bỏng Tạp chí Dược học số 361/2006, trang 18 - 20 Nguyễn Liêm - Chiết xuất Berberin áp lực nóng - Tạp chí Dượchọc, 1980, Bộ Y tế xuất bản, tr 10 Đỗ Tất Lợi (1999), Những thuốc vị thuốc Việt Nam, Xuất lần thứ VIII, Nhà xuất Y học, tr 195 Nguyễn Đức Lương (2000), Công nghệ Vi sinh vật tập - - 3, Nhà xuất Đại học Quốc gia TP Hồ Chí Minh 10 Chu Văn Mẫn Ứng dụng tin học sinh học Nhà xuất Đại học Quốc gia Hà Nội, 2003 11 Nguyễn Văn Mã, La Việt Hồng, phương pháp nghiên cứu sinh lý học Thực vật - NXB ĐHQG Hà Nội 12 Đinh Thị Kim Nhung Nghiên cứu số đặc điểm sinh học vi khuẩn Acetobacter ứng dụng chúng lên men axetic theo phương pháp chìm Luận án phó tiến sỹ khoa học sinh học, 1996 13 Nguyễn Thị Nguyệt Nghiên cứu vi khuẩn Acetobacter xylinum cho màng Bacterial Cellulose làm mặt nạ dưỡng da Luận án thạc sỹ sinh học Đại học Sư phạm Hà Nội, 2008 14 Ngô Văn Thu (2011), “Bài giảng dược liệu”, tập I, Trường đại học Dược Hà Nội 15 Hồ Đắc Trinh, Viện dược liệu, chiết Berberin clorid vàng đắng dung dịch acid sulfuric lỗng, Tạp chí Dược học, 1983 - Bộ Y tế xuất bản, tr 19 16 Viện dược liệu (2004), “Cây thuốc động vật làm thuốc Việt Nam”, tập I, tập II, Nhà xuất khoa học kỹ thuật Tài liệu tiếng anh 17 Almeida, I.F., et al Màng cellulose vi khuẩn hệ thống phân phối thuốc, 2013 18 Amin MCIM, Ahmad N, et al (2012), “Bacterial cellulose film coating as drug delivery system: physicochemical, thermal and drug release properties”, Sain Malaysiana, 41 (5), 561 - 19 Brown E Bacterial cellulose Themoplastic polymer nanocomposites, Master of sience in chemical engineering Washington state university, 2007 20 Lin Huang, Xiuli Chen, Thanh Nguyen Xuan, Huiru Tang, Liming Zhang and Yang Nano- cellulose 3D - networks as controlled- release drug carriers, 2013 21 Lina Fu, Yue Zhang, Chao Li, Zhihong Wu, Qi Zhuo, Xia Huang, Guixing Qui, Ping Zhou and Guang Yang skin tissue repair materials from bacterial cellulose by a multilayer fermantation method, 2012 22 Martindal 34 (2005), volume II, p 1659 23 Jun Yin, Huili Xing, and Jianping Ye, Efficacy of Berberine in Patients with Type Diabetes, May 2009 24 Jun Yin, Jianping Ye, Weiping Jia Effects and mechanisms of Berberine in diabetes treatment, August 2012 25 Ryan Bradley, ND, MPH and Bill Walter, ND, Berberine in Diabetes, April 2012 26 Thesis Homles, Bacterial cellulose, Department of Chemical and process Engineering University of Canterbury Christchurch, New Zealand, 2004, p - 65 27 Trovatti E et al (2011), “Biocellulose membranes as supports for dermal release of lidocaine”, Biomacromolecules, 12, 4162 - 4168 28 Trovatti E et al (2012), “Bacterial cellulose membranes applied in topical and transdermal delivery of lidocaine hydrochloride and ibuprofen: in vitro diffusion studies”, Int J Pharm, 435 (1), 83 - 87 29 White, K K, et al (1989), "Changes in equine carpal joint synovial fluid in response to the injection of two local anesthetic agents " The Cornell veterinarian 79 1, pp 25 - 38 30 Young Kook Yang, Sang Hoon Park, Jung Wook Hwang, Yu Ryang Pyun, and Yu Sam Kim Cellulose production by Acetobacter xylinum BRC5 under agitated condition Journal Bioengineering, 85 (3), 312 - 317 (1998) of Fermentation and ... tượng phạm vi nghiên cứu - Đối tượng nghiên cứu: so sánh khả giải phóng thuốc berberin màng cellulose vi khuẩn lên men từ số môi trường - Vật liệu nghiên cứu: màng CVK làm từ môi trường nước... PHÁP NGHIÊN CỨU 2.1 Vật liệu nghiên cứu 2.1.1 Đối tượng nghiên cứu Nghiên cứu so sánh khả giải phóng thuốc berberin màng cellulose vi khuẩn lên men từ số môi trường 2.1.2 Nội dung nghiên cứu -... 3.4 Tỷ lệ giải phóng thuốc berberin (%) từ màng CVK lên men từ môi trường cao nấm men (màng CNM) (n=3) 26 Bảng 3.5 Tỉ lệ giải phóng thuốc berberin (%) từ màng CVK lên men từ môi trường nước