Mục đích của luận án nhằm đánh giá được thực trạng và các yếu tố ảnh hưởng đến tình trạng nhiễm nấm mốc và AF trên lạc tại một số tỉnh miền Trung và Bắc Việt Nam. Đề xuất được giải pháp công nghệ bảo quản lạc có hiệu quả ngăn ngừa nguy cơ nhiễm AF trong lạc.
BỘ GIÁO DỤC VÀ ĐÀO TẠO TRƯỜNG ĐẠI HỌC BÁCH KHOA HÀ NỘI LÊ THỊ PHƯƠNG THẢO NGHIÊN CỨU MỨC ĐỘ NHIỄM AFLATOXIN VÀ ĐỀ XUẤT MỘT SỐ GIẢI PHÁP CÔNG NGHỆ BẢO QUẢN LẠC SAU THU HOẠCH Ở CÁC TỈNH MIỀN TRUNG VÀ BẮC VIỆT NAM Ngành: Công nghệ sau thu hoạch Mã số: 9540104 TÓM TẮT LUẬN ÁN TIẾN SĨ CÔNG NGHỆ SAU THU HOẠCH Hà Nội – 2018 Cơng trình hồn thành tại: Trường Đại học Bách khoa Hà Nội Người hướng dẫn khoa học: GS TS HÀ DUYÊN TƯ PGS.TS PHẠM XUÂN ĐÀ Phản biện 1: GS TS Đặng Thị Thu Phản biện 2: GS TS Nguyễn Thị Hiền Phản biện 3: PGS TS Nguyễn Thị Thanh Thủy Luận án bảo vệ trước Hội đồng đánh giá luận án tiến sĩ cấp Trường họp tại Trường Đại học Bách khoa Hà Nội Vào hồi …… giờ, ngày … tháng … năm ……… Có thể tìm hiểu luận án tại thư viện: Thư viện Tạ Quang Bửu - Trường ĐHBK Hà Nội Thư viện Quốc gia Việt Nam PHẦN MỞ ĐẦU Tính cấp thiết Aflatoxin (AF) tổ chức nghiên cứu ung thư giới xếp vào nhóm chất có độc tính gây ung thư loại 1, là nguyên nhân gây ung thư gan, giảm miễn dịch và tình trạng còi cọc ở trẻ AF nhiễm lương thực thực phẩm ảnh hưởng đến kinh tế và thương mại thị trường tiêu thụ xuất khẩu Lạc là chất thích hợp cho nấm mốc phát triển sinh AF Lạc cơng nghiệp có giá trị kinh tế cao chiếm vị trí quan trọng kinh tế giới Lạc dùng chế biến thực phẩm, nông nghiệp, công nghiệp nguồn nguyên liệu cho ngành phụ trợ khác Lạc trồng rộng rãi giới ở 119 nước, Việt nam là nước có sản lượng lạc xuất khẩu đứng thứ 10 giới Cơ cấu giống lạc sử dụng sản xuất Việt Nam chiếm tỉ lệ nhiều nhất là L14 và MD7, đó L14 là giống có ưu điểm tính kháng bệnh, chống đổ tốt và suất cao Lạc sau thu hoạch bảo quản và tích trữ để phục vụ cho sản xuất các sản phẩm công nghiệp, nông nghiệp và chế biến thực phẩm quanh năm Việt Nam có khí hậu nhiệt đới gió mùa điều kiện thuận lợi cho nấm mốc phát triển Lạc có thể bị nhiễm nấm mốc và sinh độc tố xuất phát từ nhiễm quá trình trồng trọt, sơ chế và bảo quản Các điều kiện ảnh hưởng đến phát triển và sinh độc tố của nấm mốc bao gồm: nhiệt độ, độ ẩm, điều kiện mơi trường khơng khí, mức độ nhiễm nấm mốc loài nấm mốc bị nhiễm lạc Trên giới đã có nhiều nghiên cứu, khảo sát tình trạng nhiễm nấm mốc và AF lạc vùng có khả nhiễm những chủng nấm mốc khác Nghiên cứu thực phân lập định danh chủng nấm mốc sinh độc tố lạc địa bàn nghiên cứu, sau đó tiến hành nghiên cứu các yếu tố ảnh hưởng đến phát triển và sinh AF của nấm mốc phân lập được, từ đó đề xuất quy trình bảo quản lạc sau thu hoạch cách hiệu quả Xuất phát từ những phân tích trên, chúng tơi đã tiến hành thực đề tài “Nghiên cứu mức độ nhiễm aflatoxin đề xuất một số giải pháp công nghệ bảo quản lạc sau thu hoạch tỉnh miền Trung miền Bắc Việt Nam" Mục tiêu nghiên cứu - Đánh giá thực trạng và các yếu tố ảnh hưởng đến tình trạng nhiễm nấm mốc và AF lạc số tỉnh miền Trung Bắc Việt Nam - Đề xuất giải pháp công nghệ bảo quản lạc có hiệu quả ngăn ngừa nguy nhiễm AF lạc Nội dung nghiên cứu Để thực mục tiêu nghiên cứu sinh đã nghiên cứu các vấn đề liên quan có nội dung sau: - Nghiên cứu mức độ nhiễm nấm mốc, AF lạc số yếu tố liên quan miền Bắc (Bắc Giang) miền Trung (Thanh Hóa, Nghệ An) Phân lập chủng sinh độc tố AF từ lạc - Nghiên cứu các yếu tố ảnh hưởng đến phát triển và sinh AF lạc của chủng nấm mốc phân lập - Khảo nghiệm và đề x́t quy trình bảo quản lạc có hiệu quả ngăn nhiễm nấm mốc sinh AF Ý nghĩa khoa học thực tiễn luận án 4.1 Ý nghĩa khoa học - Qua các số liệu khảo sát và phân tích, đề tài đã đánh giá thực trạng nhiễm nấm mốc và AF lạc ở vùng trồng lạc: Nghệ An, Thanh Hóa và Bắc Giang góp phần cảnh báo nguy nhiễm AF lạc; đã xác định các yếu tố nguy tạo điều kiện thuận lợi cho nấm mốc phát triển và sinh AF lạc Đây là sở khoa học để có hướng bảo quản lạc sau thu hoạch có chất lượng ổn định Đề tài cũng phân lập và định danh số chủng A flavus từ lạc, đánh giá khả sinh AF của các chủng này, từ đó lựa chọn chủng có khả sinh AF mạnh nhất để phục vụ cho nghiên cứu - Từ kết quả nghiên cứu ảnh hưởng của nhiệt độ, độ ẩm, mức nhiễm nấm mốc sinh độc tố đến phát triển và sinh độc tố của A flavus đã đưa mô hình dự đoán mối liên quan của các yếu tố này đến mức độ nhiễm AF lạc theo thời gian - Việc áp dụng có hiệu quả tinh dầu hồi và quế gợi ý cho các nhà khoa học mở rộng phạm vi sử dụng các hợp chất có hoạt tính sinh học để hạn chế phát triển và sinh AF lạc nhân 4.2 Ý nghĩa thực tiễn - Đã nghiên cứu ảnh hưởng của nhiệt độ, độ ẩm, mức nhiễm nấm mốc sinh độc tố, điều kiện đóng gói hút chân không, nồng độ tinh dầu hồi (quế), bao bì đóng kín bảo quản là sở để đề xuất giải pháp công nghệ có tính khả thi điều kiện ứng dụng ở quy mơ hộ gia đình Việt Nam - Góp phần giải khó khăn của người dân việc nấm mốc phát triển sinh AF trình bảo quản lạc nhân, giảm tổn thất sau thu hoạch, gia tăng giá trị sức cạnh tranh của lạc nhân Việt Nam 4.3 Những điểm luận án - Đã phân lập và định danh số chủng nấm mốc có khả sinh AF từ lạc, đó xác định A flavus BG1 sinh lượng AF cao nhất - Nghiên cứu đã tìm mối liên quan giữa các yếu tố chất lượng và tình trạng nhiễm AF lạc, tìm các yếu tố bất lợi là nguyên nhân nhiễm AF lạc nhân và lạc củ - Đã nghiên cứu đưa mối quan hệ tuyến tính của các yếu tố (độ ẩm và mức nhiễm A flavus BG1) ảnh hưởng tới mức nhiễm AF theo thời gian - Đề xuất giải pháp công nghệ bảo quản lạc nhân kiểm soát chất lượng trước bảo quản, đóng gói hút chân không bảo quản sử dụng tinh dầu hồi, quế với quy mộ hộ gia đình đảm bảo hiệu quả kinh tế - Bảo quản lạc sử dụng tinh dầu hồi (quế) mở hướng giải pháp bảo quản thực phẩm an toàn thân thiện với môi trường Bố cục luận án Luận án gồm 143 trang, chương, 32 bảng số liệu, 56 hình 130 tài liệu tham khảo CHƯƠNG TỔNG QUAN Cây lạc (Arachis hypogaea Linn.) là công nghiệp ngắn ngày có giá trị kinh tế cao Trong nơng nghiệp lạc có vai trị quan trọng vì có tác dụng cải tạo đất tốt giúp luân canh trồng đạt hiệu quả cao, công nghiệp lạc dùng chế biến thực phẩm, dầu lạc dùng ngành thực phẩm và các ngành công nghiệp khác (sản xuất chất dẻo, xi mực, dầu diesel, dung môi hóa chất bảo vệ thực vật), các phụ phẩm từ ép dầu dùng ngành thức ăn chăn nuôi Lạc dùng chế biến thực phẩm có giá trị dinh dưỡng cao và tốt cho sức khỏe Do đó lạc có vị trí quan trọng kinh tế giới nói chung và của Việt Nam nói riêng Việt nam là nước có khí hậu nóng ẩm thích hợp cho nấm mốc phát triển, đó có số loài sinh AF là độc tố vi nấm xảy nhiều thực phẩm, AF gồm nhóm chất có độc tính gây ung thư loại Lạc là chất thích hợp cho nấm mốc sinh AF phát triển Do đó nghiên cứu tình hình nhiễm AF lạc đề xuất các giải pháp bảo quản lạc nhằm giảm nguy nhiễm AF lạc là cần thiết Tại miền Bắc (Bắc Giang), miền Trung (Nghệ An Thanh Hóa) là những tỉnh có sản lượng lạc lớn nhất, đó mẫu phục vụ cho nghiên cứu tình hình nhiễm nấm mốc và AF lạc thu thập các tỉnh này L14 là giống lạc có những đặc tính ưu việt (Dự án Khoa học và Công nghệ nông nghiệp No 2283-VIE(SF), 2014) và trồng nhiều ở nước ta (Nguyễn Văn Thắng và cs., 2017), đó nghiên cứu này tập trung nghiên cứu các giải pháp bảo quản lạc sau thu hoạch của giống này Các kết quả nghiên cứu tình hình nhiễm nấm mốc và AF lạc cho thấy nấm mốc nhiễm và sinh độc tố lạc chủ yếu là Aspergillus, đó nhiều nhất là A flavus Trong nghiên cứu này phân lập nấm sinh AF loài A flavus để nghiên cứu các giải pháp bảo quản lạc Độ ẩm là yếu tố quan trọng để nấm mốc phát triển và sinh độc tố Lạc nhân có độ ẩm ban đầu 10, 12, 14 và 16 % bảo quản 10 tháng cho thấy lạc nhiễm A flavus cao nhất có độ ẩm 16 % thấp nhất ở độ ẩm 10 % (Nguyễn Văn Thắng và cs., 2011), lúa mạch nhiễm A parasiticus sinh AF ở độ ẩm hạt từ 16,5 % trở lên (H.G Chang & P.Markakis, 1981), ngô hạt có độ ẩm 11 % có thể ngăn phát triển và sinh độc tố của A flavus A parasiticus tỉ lệ (50:50) (G.H.C.M Hettiarachchi và cs., 2001) Như vậy, kiểm soát độ ẩm của lạc là yếu tố quan trọng trước đưa vào bảo quản lạc Cần nghiên cứu độ ẩm đưa vào bảo quản để giảm khả nhiễm AF lạc Mỗi loại nấm mốc có khoảng nhiệt độ tối ưu cho phát triển và sinh độc tố AF thường phát triển lạc ở nhiệt độ môi trường 35 oC (Enjie Diao và cs., 2015), các chủng Aspergillus phát triển cao ở 30 oC và 35 oC môi trường kết hợp với hạt kê (K Shehu và M.T Bello, 2011), chuyên khảo của Urban Diener và Norman D Davis (1997) cho thấy A flavus phát triển tối ưu ở 30 oC, sau đó đến 25oC, 20 oC và bị ức chế ở 45 oC, A flavus môi trường cuống ngô phát triển tối ưu ở 20-25 oC còn môi trường CZA phát triển tối ưu ở 30-35 oC (Paola Giomi và cs., 2008) Qua các kết quả nghiên cứu ảnh hưởng của nhiệt độ cho thấy A flavus phát triển và sinh AF ở nhiệt độ < 45 oC, ở nhiệt độ từ 45 oC có thể ức chế phát triển và sinh AF của A flavus Các chủng này có thể phát triển tối ưu ở khoảng nhiệt độ 20-35 oC tùy theo môi trường chất Luận án nghiên cứu tìm nhiệt độ tối ưu để A flavus sinh AF chất là lạc để phòng tránh nhiễm AF bảo quản Giống Aspergillus có khoảng 180 loài Chi Flavi chia thành hai nhóm loài, nhóm gồm các loài sinh AF A flavus, A parasiticus và A nomius; nhóm khác gồm các loài không có gen sinh độc tố AF A oryzae, A sojae và A tamarii dùng sản xuất các sản phẩm thực phẩm lên men ở các nước châu Á Các loài A parasiticus và A nomius sinh cả AFB và AFG không phát Cyclopiazonic acid; A flavus phát sinh AFB1, AFB2 và Cyclopiazonic acid (P Rodrigues và cs., 2007) Nấm sinh AF lạc chủ yếu là A flavus, nhiên mức độ nhiễm AF còn tùy thuộc vào chủng đã nhiễm lạc Luận án thực nghiên cứu ảnh hưởng của mức nhiễm A flavus đến khả sinh AF Các nghiên cứu trước cho thấy điều kiện bảo quản ảnh hưởng đến phát triển sinh AF lạc như: Độ ẩm của lạc 12 % giúp ngăn ngừa nhiễm A flavus sinh AF lạc; Bảo quản ở nhiệt độ thấp cũng là phương pháp hiệu quả (Nguyễn Văn Thắng cs., 2010) Các loại bao bì khác ở các điều kiện môi trường khác cho kết quả thời gian lạc trì chất lượng khác (Nguyễn Văn Thắng cs., 2010; Mutegi C.K cs., 2013) Điều biến khí mơi trường đóng gói biện pháp giảm lượng ôxy môi trường khơng khí, từ đó giảm quá trình ơxy hóa chất béo có lạc và giảm khả hô hấp của nấm mốc để hạn chế quá trình phát triển và sinh độc tố Nghiên cứu nông sản đóng gói kín với % ơxy và nồng độ khí CO2 từ 90 % trở lên ngăn nhiễm côn trùng và AF (Philippe Villers, 2017) Đóng gói hút chân không với áp suất chân không 200 mmHg nồng độ ôxy thấp cũng có tác dụng diệt côn trùng (George N Mbata cs., 2001), hạn chế nguy côn trùng gây hại tác nhân ảnh hưởng đến chất lượng bảo quản Bao bì PE PVC vật liệu thơng dụng đóng gói hút chân khơng (Leon G M Và cs., 2007) Luận án thực nghiên cứu các điều kiện đóng gói hút chân không: 50, 100, 150, 200 250 mmHg với bao bì PVC bảo quản lạc nhân Ngồi ra, hóa chất hydrogen peroxide, methanol, dimethylamine hydrochloride, perchloric acid (Philippe Villers, 2017), hoặc calcium hydroxide khí amoniac (Nguyễn Văn Thắng cs., 2010) cũng giảm đáng kể hàm lượng AF ngũ cốc thức ăn chăn nuôi, nhiên theo báo cáo của FAO, hóa chất hoặc chất phụ gia không chấp nhận thực phẩm Trong số nhiều giải pháp bảo quản thực phẩm giải pháp ức chế phát triển của vi sinh vật ứng dụng nhiều nhất Trong tự nhiên tinh dầu đóng vai trò quan trọng bảo vệ thực vật Tinh dầu có chứa các hoạt chất có thể ức chế, làm chậm phát triển của vi khuẩn, nấm men và nấm mốc Các hoạt chất của tinh dầu tác dụng đến màng tế bào, nguyên sinh chất và thậm chí làm biến dạng hình thái tế bào (Filomena Nazzaro và cs., 2013) Cộng đồng châu Âu chấp nhận những chất tạo hương có nguồn gốc từ tinh dầu tự nhiên xem không có tác hại đến sức khỏe người tiêu dùng Cục Dược và thực phẩm (FDA) của Hoa Kỳ phân loại là những chất là an toàn (generally recognized as safe - GRAS) Tinh dầu xạ hương có khả chống mốc hiệu quả hạt lúa mạch (Sabina Anžlovar và cs., 2016) Tinh dầu quế, bạc hà, sả, gừng và tinh dầu chanh có khả ức chế phát triển của số vi khuẩn gây bệnh (Lê Thanh Mai cs., 2014; Trịnh Thị Thanh Nga cs., 2015; Trịnh Thị Thanh Nga cs., 2013) Tinh dầu quế có nguồn gốc Thái Lan có thể ức chế tối đa phát triển của A flavus IMI 242684 môi trường PDA ở nồng độ 50 %(v/v) (Dusanee Thanaboripat và cs., 2007), tinh dầu quế (nguồn: Sigma Aldrich, USA) ức chế phát triển của sợi nấm A parasiticus (phân lập từ lạc Georgia - USA) môi trường PDA ở nồng độ 0,1 % (Mina M Yooussef và cs., 2016) Nghiên cứu khả ức chế phát triển của nấm sinh độc tố A flavus và A parasiticus quy mơ phòng thí nhiệm cho thấy tinh dầu hồi có thể ức chế phát triển và sinh độc tố của hai loài nấm mốc này hoàn toàn ở nồng độ 0,02 % (Soher E Aly và cs., 2014) Quế và hồi là nhiệt đới trồng rộng rãi các vùng núi của Việt Nam, quế và hồi cũng dùng làm gia vị chế biến nhiều loại thực phẩm Lạc rang húng lìu là sản phẩm truyền thống sử dụng gia vị có nguồn gốc từ quế và hồi để tạo hương vị đặc trưng Luận án thực hiện nghiên cứu khả ức chế tinh dầu hồi và quế đến phát triển và sinh độc tố A flavus lạc Mặc dù với nỗ lực của các nhà nông học để giảm thiểu nguy sinh AF quá trình trước thu hoạch các sản phẩm sau thu hoạch có nguy nhiễm AF, đó việc nghiên cứu giải pháp bảo quản lạc sau thu hoạch nhằm giảm nguy nhiễm AF lạc cần thiết Vì vậy, Nghiên cứu mức độ nhiễm AF đề xuất một số giải pháp công nghệ bảo quản lạc sau thu hoạch tỉnh miền Trung Bắc Việt Nam” có ý nghĩa CHƯƠNG NGUYÊN VẬT LIỆU VÀ PHƯƠNG PHÁP NGHIÊN CỨU 2.1 Nguyên vật liệu nghiên cứu 2.1.1 Nguyên vật liệu - Lạc nhân lạc củ giống L14, giống trồng phổ biến tỉnh miền Bắc miền Trung; và lạc rang húng lìu thu thập vào năm 2013 - Chủng chuẩn đối chứng: A flavus ATCC 204304 cung cấp từ thư viện chủng quốc gia Mỹ - Tinh dầu hồi/ quế mua của Công ty TNHH chế biến và xuất khẩu nông lâm sản Lạng Sơn 2.1.2 Hóa chất, thiết bị và dụng cụ thí nghiệm - Hóa chất tinh khiết phân tích sử dụng cho nghiên cứu - Thiết bị đáp ứng độ nhạy và đảm bảo yêu cầu phục vụ phân tích để đánh giá kết quả: hàm lượng AF, mức nhiễm nấm men-mốc, phân lập nấm sinh độc tố AF - Các dụng cụ và thiết bị thơng thường của phòng thí nghiệm 2.2 Phương pháp lấy mẫu - Cỡ mẫu tính theo cơng thức nghiên cứu mô tả: 30 mẫu/lần lấy mẫu/loại lạc - Trong nghiên cứu mức độ nhiễm nấm men-mốc AF: lạc củ lấy kg/mẫu, lạc nhân lấy kg/mẫu; lạc rang húng lìu lấy nguyên túi, lượng tối thiểu 500 g/mẫu, trường hợp đóng túi nhỏ thì lấy nhiều túi - Trong nghiên cứu ảnh hưởng của bao bì thay đổi độ ẩm của lạc, nghiên cứu khảo nghiệm giải pháp bảo quản lạc, lượng mẫu lấy tối thiểu 25 kg tổng lượng mẫu đảm bảo đủ cho thiết kế thí nghiệm 2.3 Phương pháp phân tích hóa lý - Xác định độ ẩm: phương pháp sấy đến khối lượng không đổi theo TCVN 2384-1993 - Xác định hàm lượng AF lạc sắc ký lỏng khối phổ hai lần (LC-MS/MS) theo phương pháp đã chuẩn hóa Viện Kiểm nghiệm an toàn vệ sinh thực phẩm quốc gia Sắc đồ chuẩn và đường của các aflatoxin các hình 2.3, 2.4, 2.5 2.6 2.7 Xử lý số liệu - So sánh khác biệt giữa độ ẩm lạc thu thập hộ gia đình và hộ kinh doanh ta sử dụng hàm t-test, so sánh độ ẩm với tình trạng cảm quan của mẫu lạc thời điểm lấy mẫu - So sánh khác biệt giữa tỉ lệ nhiễm nấm mốc AF lạc tỉnh khác ta sử dụng hàm prop.test phân tích phần mềm R, kiểm định 2 để biết phương diện thống kê tỉ lệ có khác khơng; - Phân tích mối liên quan giữa tình trạng mẫu và mức nhiễm AF lạc thông qua phân tích tỉ số nguy - RR - Xử lý số liệu: Phân tích phần mềm R 3.4.1 CHƯƠNG KẾT QUẢ VÀ BÀN LUẬN 3.1 Đánh giá mức độ nhiễm nấm men-mốc AF lạc Nghệ An, Thanh Hóa Bắc Giang 3.1.1 Đánh giá lạc nhân, lạc củ lạc rang húng lìu thu thập vào mùa hè - Mức nhiễm nấm men-mốc AF lạc nhân thu thập tại Nghệ An, Thanh Hóa Bắc Giang có kết quả tương ứng: + Tổng số bào tử nấm men-mốc phát lạc nhân khoảng 1,0×102 đến 1,1×105 CFU/g, với tỉ lệ mẫu phát nhiễm nấm men-mốc tỉnh là: 46,7; 53,3 60,0 % Trong đó, vượt ngưỡng (102 CFU/g) chiếm tỉ lệ: 30; 30 40 % Kiểm định 2 cho biết phương diện thống kê tỉ lệ nhiễm nấm men-mốc giữa tỉnh khơng khác nhau, p=0,5853 + Mức nhiễm AF lạc nhân khoảng 0,34 đến 10.498 µg/kg, với tỉ lệ mẫu nhiễm AF tương ứng là: 40,0; 30,3 53,3 % Trong đó, vượt ngưỡng (8 µg/kg) chiếm tỉ lệ 16,7; 10,0 16,7 % Kiểm định 2 cho biết phương diện thống kê tỉ lệ nhiễm AF giữa tỉnh khơng khác nhau, p=0,183 11 - Mức nhiễm nấm men-mốc AF lạc củ thu thập tại Nghệ An, Thanh Hóa Bắc Giang có kết quả sau: + Tổng số bào tử nấm men-mốc phát lạc củ khoảng 1,3×101 đến 7,5×108 CFU/g, với tỉ lệ số mẫu phát tỉnh là: 53,3; 43,3 56,7 % Trong đó, vượt ngưỡng (102CFU/g) chiếm tỉ lệ: 33,3; 30 36,7 % Kiểm định 2 cho biết phương diện thống kê tỉ lệ nhiễm nấm men-mốc giữa tỉnh khơng khác nhau, p=0,561 + Mức nhiễm AF lạc củ khoảng 0,64 đến 215 µg/kg, với tỉ lệ số mẫu nhiễm AF tương ứng là: 30,0; 26,7 40,0 % Trong đó, vượt ngưỡng (8 µg/kg) chiếm tỉ lệ 10,0; 10,0 13,3 % Kiểm định 2 cho biết phương diện thống kê tỉ lệ nhiễm AF giữa tỉnh khơng khác nhau, p=0,516 - Mức nhiễm nấm men-mốc AF lạc rang húng lìu thu thập tại Nghệ An, Thanh Hóa Bắc Giang có kết quả sau: + Tỉ lệ số mẫu phát nhiễm tổng số bào tử nấm men-mốc tỉnh là: 30,0; 23,3 36,7 % với mức nhiêm khoảng 1,1×101 - 1,0×103 CFU/g Trong đó, tỉ lệ số mẫu vượt ngưỡng cho phép (102 CFU/g) tương ứng 10,0; 13,3 13,3 % Kiểm định 2 cho biết phương diện thống kê tỉ lệ nhiễm nấm men-mốc giữa tỉnh khơng khác nhau, p=0,53 + Tỉ lệ số mẫu lạc rang húng lìu nhiễm AF tỉnh tương ứng là: 6,67; 3,33 13,3 % với mc nhiờm AF trong khoang 0,65 ữ 2,3 àg/kg Khơng có mẫu lạc rang húng lìu nào vượt ngưỡng cho phép (4µg/kg) Kiểm định 2 cho biết phương diện thống kê tỉ lệ nhiễm AF giữa tỉnh khơng khác nhau, p=0,338 Kết quả nhiễm nấm men - mốc lạc tỉnh, hình 3.1 12 Hình Tỉ lệ nhiễm nấm men-mốc lạc thu thập Nghệ An, Thanh Hóa Bắc Giang Kết quả nhiễm AF lạc tỉnh, hình 3.2 Hình Tỉ lệ nhiễm AF lạc thu thập Nghệ An, Thanh Hóa Bắc Giang Như vậy, tỉ lệ nhiễm nấm men-mốc AF mẫu lạc nhân thu thập tỉnh cao nhất, sau đó đến lạc củ thấp nhất lạc rang húng lìu Tỉ lệ mẫu nhiễm nấm men-mốc AF vượt ngưỡng cho phép cao nhất lạc nhân, sau đến lạc củ, thấp nhất lạc rang húng lìu Lạc rang húng lìu khơng có mẫu nhiễm AF vượt ngưỡng cho phép 13 3.1.2 Đánh giá mức độ nhiễm nấm mốc AF thu thập địa bàn huyện Lục Nam, tỉnh Bắc Giang vào mùa thu Kết quả khảo sát thực trạng bảo quản lạc, phân tích nấm mốc AF 30 mẫu lạc nhân 30 mẫu lạc củ thu thập hộ gia đình và hộ kinh doanh lạc cho thấy: - Đa số hộ dân dùng bao tải hai lớp để bảo quản lạc (46,7 % dùng cho lạc nhân 73,3 % dùng cho lạc củ), sau đó đến bao tải lớp (33,3 % dùng cho lạc nhân 26,7 % dùng cho lạc củ), lạc nhân còn chứa đựng bao nilon, chậu, rổ tre và đổ sàn nhà - Độ ẩm của mẫu lạc nhân lạc củ thu thập tương ứng là: 5,1-12,8 % 5,94-10,19 % Các mẫu lạc nhân lạc củ phát AF có độ ẩm từ 9,2 % 8,70 % trở lên Các mẫu dóc vỏ lụa có độ ẩm từ 5,1-7,2 % - Tỉ lệ số mẫu nhiễm tổng số bào tử nấm men-mốc lạc nhân lạc củ tương ứng 50 % 26,7 %, mức nhiễm khoảng 1,0×101-7,0×103 CFU/g 1,0×101-3,0×102 CFU/g - Tỉ lệ số mẫu nhiễm AF lạc nhân lạc củ tương ứng 46,7 % 26,7 %, mức nhiễm khoảng 0,66-115 µg/kg 0,462,5 µg/kg Khơng phát AF mẫu lạc nhân có tình trạng: ngun hạt, hạt mẩy, hạt dóc vỏ lụa lạc củ có tình trạng: sạch, khơng có hạt mốc Như vậy, mẫu lạc nhân lạc củ thu thập vào mùa thu tại hộ gia đình có mức nhiễm nấm mốc AF thấp các mẫu thu thập mùa hè chợ địa bàn Nguyên nhân thời tiết mùa hè nóng ẩm thuận lợi cho nấm mớc phát triển, đồng thời lạc bảo quản tại hộ gia đình tớt lạc bày bán bên ngồi Lạc đưa vào bảo quản cần kiểm soát loại bỏ hạt mốc, nhăn, lép, màu khác thường loại tạp 3.1.3 Phân lập xác định chủng sinh AF lạc Các mẫu lạc phát nhiễm AF nghiên cứu 3.1.2 dùng để phân lập nấm sinh độc tố Các khuẩn lạc có đặc điểm màu sắc tương đồng với chủng chuẩn A flavus ATCC 204304 nuôi cấy ngày môi trường SDA ở 25oC → chọn lấy khuẩn lạc, 14 chấm điểm để làm → làm tiêu bản nhuộm Lactophenol Amann, soi tiêu bản kính hiển vi quang học có đặc điểm tương đồng với chủng đối chứng A flavus ATCC 204304 → Chụp ảnh hiển vi điện tử quét, bào tử đính của chủng nấm nghi ngờ là A flavus, chọn 11 chủng có bào tử đính điển hình của A flavus lựa chọn để tách chiết và làm DNA → khẳng định DNA thu sạch, không lẫn protein RNA → Các mẫu DNA tổng số dùng làm sợi khuôn cho phản ứng PCR đặc hiệu với cặp mồi ITS1 và ITS2→ điện di để kiểm tra kết quả phản ứng Kết quả điện di cho thấy mẫu băng lên rõ ràng, không có băng phụ, kích thước đoạn ITS 600 bp phù hợp với đặc tính của A flavus thích hợp để giải trình tự → chọn sản phẩm PCR từ chủng để giải trình tự Dựa vào mức độ tương đồng giữa chủng phân tích chủng đã cơng bố ngân hàng gen quốc tế NCBI để định danh và dùng phần mềm BLAST để so sánh độ tương đồng Kết quả tìm kiếm tương đồng của chủng phân lập với chủng ngân hàng gen (bảng 3.10) Trong chủng giải trình tự gen có chủng định danh A flavus cịn chủng có trình tự gen khơng tương thích với ngân hàng gen Mẫu nấm A1 A12 A15 A16 A28 Bảng 3.10 Kết quả tìm kiếm ngân hàng gen quốc tế Chủng, trình tự Phần trăm Mức đồng Đoạn ADN Lồi xác ngân hàng đoạn so nhất trình so sánh định gen quốc tế sánh (%) tự (%) TUHT115 ITS1, ITS2 A flavus 100 100 KP214054.1 ITS1, ITS2 A flavus 100 100 MTCC 8654 ITS1, ITS2 A flavus 100 100 ZJ4-A ITS1, ITS2 A flavus 99 100 Không có trình Không định ITS1, ITS2 tự tương đồng loài Các chủng A1, A12 và A15 chọn để đánh giá khả sinh AF cách nhiễm vào lạc nhân đã tiệt trùng 10 ngày với mức nhiễm 107 CFU/g, sau đó phân tích hàm lượng AF LCMS/MS, kết quả cho thấy chủng A1 sinh AF cao nhất (1.335,2µg/kg) sau đến A12 (998,7µg/kg) và thấp nhất là A15 (785,8µg/kg) Các chủng phân lập chỉ phát sinh AFB1 và AFB2 Chủng A1 phân lập nghiên cứu này đặt tên A flavus BG1 dùng cho nghiên cứu 15 3.2 Nghiên cứu yếu tố ảnh hưởng đến phát triển sinh AF lạc A flavus BG1 3.2.1 Sự thay đổi độ ẩm của của mẫu lạc loại bao bì khác Các mẫu lạc nhân lạc củ đóng bao các loại bao bì: PE, bao đay, bao tải hai lớp, bao PVC tháng Kết quả cho thấy: - Độ ẩm của lạc nhân sau tháng thay đổi nhiều, chênh độ ẩm của mẫu lạc đựng bao đay và bao PE tương ứng 19,0 8,8 %, chênh lệch độ ẩm với bao tải hai lớp và bao PVC 4,0 % - Độ ẩm của lạc củ sau tháng thay đổi nhiều, lạc đựng bao đay và bao PE chênh độ ẩm tương ứng 20,4 9,8 %, với bao tải hai lớp bao PVC chênh lệch độ ẩm tương ứng 2,9 2,2 % Qua kết quả ta thấy, lạc khô bảo quản bao bì kín độ ẩm thay đổi không đáng kể Sự thay đổi độ ẩm lạc bao PVC là thấp nhất PVC sử dụng làm bao bì nghiên cứu 3.2.2 Ảnh hưởng của độ ẩm Các mẫu theo dõi quan sát màu sắc lạc và soi UV hàng tuần tuần Kết quả cho thấy A flavus BG1 phát triển tốt lạc nhân có độ ẩm từ 10 % trở lên Các mẫu đối chứng và mẫu có độ ẩm 8% không phát nhiễm AF sau 16 tuần nghiên cứu Các mẫu có độ ẩm 10; 12 và 14% phát sinh AFB1 sau tuần và vượt ngưỡng cho phép sau tuần, AFB2 sinh sau tuần Các mẫu nghiên cứu chỉ phát nhiễm AFB1 và AFB2, khơng phát nhiễm AFG1 và AFG2 Phân tích hồi quy tuyến tính chương trình R 3.4.1 Trong đó hàm lượng AFB1 (Y1) AF tổng số (Y) có quan hệ tuyến tính với độ ẩm (x1) theo thời gian - tuần (x2) phương trình 13 14 Y1 = -78,19 + 7,56 x1 + 2,0 x2 (13) Phương trình trình (13) có nghĩa là độ ẩm tăng lên % thì hàm lượng AFB1 tăng lên 7,56 g/kg; thời gian tăng lên thêm tuần thì hàm lượng AFB1 tăng 2,0 g/kg 16 Y = -76,91 + 7,24 x1 + 2,6 x2 (14) Phương trình trình (14) có nghĩa là độ ẩm tăng lên % thì hàm lượng AF tổng số tăng lên 7,24 g/kg; thời gian tăng lên thêm tuần thì hàm lượng AFB1 tăng 2,6 g/kg Như ở nhiệt độ 25 oC, độ ẩm từ 10 % là điều kiện thuận lợi nhất cho phát triển và sinh độc tố AF A flavus, độ ẩm càng cao thì mức nhiễm AF càng cao tăng lên theo thời gian 3.2.3 Ảnh hưởng của nhiệt độ Nghiên cứu ảnh hưởng của nhiệt độ môi trường cho thấy A flavus BG1 phát triển tốt nhất ở nhiệt độ 25 oC, sau đó đến 30 oC, phát triển chậm ở 20 oC và 35 oC, và bị ức chế ở 40 oC Hàm lượng AF sinh nhiều nhất ở nhiệt độ 25 oC, sau đến 30 o C, phát triển chậm và sinh AF thấp ở 20 oC và 35 oC, bị ức chế phát triển và sinh AF ở nhiệt độ 40 oC Qua kết quả nghiên cứu tổng quan tài liệu cho thấy lạc nên bảo quản ở nhiệt độ thấp 25 oC để hạn chế phát triển sinh AF nấm mốc 3.2.4 Ảnh hưởng của mức nhiễm A flavus BG1 Nghiên cứu A flavus BG1 ở các mức nhiễm khác lạc nhiễm A flavus BG1 nhiều thì hàm lượng AF sinh lớn Kết quả phân tích mối quan hệ giữa mức nhiễm A flavus và sinh AF có ý nghĩa thống kê (p< 0,05) Ta có phương trình hồi quy tuyến tính quan hệ giữa mức nhiễm AFB1 (Y1) theo mức nhiễm A flavus BG1 (x3) và thời gian sau: Y1 = 0,93 + 5,99×10 -6 x3 + 2,0 x2 (15) Phương trình trình (15) có nghĩa là với độ ẩm từ 10 % trở lên, mức nhiễm A flavus BG1 tăng lên CFU thì hàm lượng AFB1 tăng lên 5,99×10-6 g/kg; thời gian tăng lên thêm tuần thì hàm lượng AFB1 tăng 2,0 g/kg 3.2.5 Ảnh hưởng của điều kiện hút chân không Các mẫu đóng gói hút chân không ở điều kiện 50, 100, 150 và 200mmHg quan sát thấy có A flavus BG1 phát triển sau tuần Còn các mẫu đóng gói hút chân không ở điều kiện 250mmHg không quan 17 sát thấy nấm phát triển sau 16 tuần Các mẫu đóng gói với điều kiện hút chân khơng 50mmHg có mức nhiễm AFB1 cao nhất, sau đó đến 100mmHg, 150mmHg và thấp nhất là 200mmHg Các mẫu đóng gói với điều kiện hút chân không 250mmHg không phát AF sau 16 tuần Như vậy, lạc nhân đóng gói với áp lực hút chân không 200 mmHg có thể hạn chế phát triển và sinh AF A flavus lạc Với áp lực hút chân không 250 mmHg có thể ức chế phát triển và sinh AF A flavus BG1 lạc 3.2.6 Phân tích mối quan hệ của các yếu tố ảnh hưởng đến phát triển sinh AF lạc của A flavus BG1 Qua kết quả quan sát thực nghiệm cho thấy: A flavus BG1 phát triển đến bào tử có màu xanh phát AF, mẫu nhiễm AF có phát ánh sáng xanh đèn UV 365 nm Mối tương quan giữa yếu tố ảnh hưởng: thời gian (Week), độ ẩm (Moi) mức nhiễm A flavus BG1 (Flavus) với hàm lượng AF hình 3.18 0e+00 60 Week 10 13 0.00 NA 0.00 0.59 0.62 NA -0.23 0.52 0.35 NA NA NA 0.03 0.00 12 10 13 Tem 15 30 Moi 50 0e+00 Flavus AFB1 60 0.95 AFTotal 12 15 30 40 Hình 3.18 Biểu đồ mối tương quan biến: Thời gian (Week), Độ ẩm (Moi), Nhiệt độ (Tem), Mức nhiễm A flavus BG1 (Flavus) với AFB1 AF tổng số (AFTotal) 18 Hình 3.18 cho thấy: mức nhiễm AFB1 AF tổng số có mối tương quan lớn nhất với chỉ số tương quan 0,95 và có mối quan hệ tuyến tính thể ở đường thẳng tuyến tính biểu diễn mối quan hệ của hai biến này Sau đó đến tỉ số tương quan giữa mức nhiễm AF tổng số AFB1 với thời gian (Week) tương ứng 0,62 0,59 Tiếp theo mối tương quan giữa mức nhiễm AFB1 và độ ẩm (Moi) với hệ số tương quan là 0,52 Phân tích mơ hình hồi quy tuyến tính mối quan hệ hàm lượng AF sinh các mẫu lạc nhân với yếu tố ảnh hưởng BMA ta có mơ hình chọn Các biến độc lập gồm: Thời gian (Tuần), Độ ẩm, Nhiệt độ và Mức nhiễm A flavus BG1 Trong đó: thời gian (Tuần) và mức nhiễm A flavus BG1 ảnh hưởng đến sinh AF có tính nhất quán cao nhất, các yếu tố này xuất cao nhất mô hình (100%); độ ẩm xuất mô hình 61,6%; nhiệt độ xuất mô hình 12,2% Điều đó chứng tỏ thời gian và mức nhiễm A flavus BG1 là yếu tố quan trọng nhất ảnh hưởng đến sinh AF lạc, sau đó đến độ ẩm và yếu tố nhiệt độ (hình 3.19) Hình 19 Các mơ hình BMA lựa chọn Mơ hình tối ưu, có xác xuất lớn nhất (53,5%) Công thức dự đoán hàm hồi quy tuyến tính đa biến cho biến phụ thuộc AFB1 (Y1) vào các yếu tố sau: Y1 = -80,36 + 2,0 x2 + 7,97 x1 + 1,13×10-5x3 (16) 19 Phương trình (16) cho biết thời gian tăng lên tuần thì hàm lượng AFB1 tăng lên 1,997 g/kg; độ ẩm tăng lên % thì hàm lượng AFB1 tăng lên 7,969 g/kg; mức nhiễm A flavus BG1 tăng lên CFU/g thì AFB1 tăng 1,135×10 -5 g/kg Phương trình hồi quy tuyến tính đa biến cho biến phụ thuộc AF tổng số (Y) vào yếu tố: độ ẩm (x1), mức nhiễm A flavus BG1 (x3) và thời gian - tuần (x2) sau: Y = -82,41 + 7,65x1 + 1,14×10-5x3 + 2,6x2 (17) Phương trình (17) có nghĩa là độ ẩm tăng % thì hàm lượng AF tổng số tăng lên 7,65 g/kg; mức nhiễm A flavus BG1 tăng lên CFU/g thì AF tổng số tăng lên 1,14×10 -5 g/kg; thời gian tăng lên thêm tuần thì AF tổng số tăng 2,6 g/kg Như vậy, với độ ẩm lạc từ 10 % trở lên, lạc nhiễm A flavus BG1 có hàm lượng AF tăng dần theo thời gian và độ ẩm tăng Đề tài tiếp tục nghiên cứu giải pháp ức chế khả phát triển sinh AF A flavus BG1 hoạt chất từ thiên nhiên đảm bảo an tồn thực phẩm, tinh dầu hời, q́ tính đến nghiên cứu tiếp theo 3.2.7 Ảnh hưởng của tinh dầu hồi (quế) Trên môi trường thạch:Tinh dầu quế ở nồng độ 0,05 %v/v ức chế A flavus BG1 không phát triển ở điều kiện nhiệt độ 25 o C; Tinh dầu hồi với hàm lượng từ 0,8 %v/v có khả ức chế phát triển của A flavus BG1 Từ kết quả trên, nghiên cứu khả ức chế phát triển của A flavus BG1 lạc thí nghiệm thực với các hàm lượng tinh dầu quế là: 0,0125; 0,025; 0,05 0,1 %; tinh dầu hồi thực với các hàm lượng là: 0,4; 0,8, 1,6 3,2 % Trên lạc nhân thí nghiệm: tinh dầu quế ở hàm lượng 0,05 %v/v tinh dầu hồi ở hàm lượng 0,8 %v/v ức chế phát triển của A flavus BG1, từ đó nghiên cứu khả ức chế phát triển của A flavus BG1 lạc nhóm nghiên cứu thực với dãy hàm lượng tinh dầu quế là: 0,0125; 0,025; 0,05 0,1 %v/v dãy hàm lượng tinh dầu hồi: 0,4; 0,8, 1,6 3,2 %v/v 20 3.3 Khảo nghiệm đề xuất quy trình bảo quản lạc nhằm tránh nguy nhiễm AF lạc 3.3.1 Khảo nghiệm quy trình bảo quản lạc kiểm soát chất lượng trước bảo quản Lạc trước bảo quản kiểm sốt chất lượng như: độ khơ (dóc vỏ lụa, hoặc độ ẩm ≤ %) Loại những hạt: nhăn, lép, mốc, hạt vỡ, có màu khác thường Kiểm tra không phát phát huỳnh quang đèn UV 365 nm Đóng bao 50 kg bao tải hai lớp, bảo quản ở nhiệt độ 20 oC tháng Kết quả khảo nghiệm cho thấy: Lạc nhân bảo quản theo quy trình khơng phát hiện nguy nhiễm AF sau tháng khảo nghiệm Lạc nhân trước đưa vào bảo quản phải đảm bảo đạt độ khô, loại tạp, loại hạt nhăn, lép, mớc biến màu Lạc đóng gói bao tải hai lớp, đóng gói kín, để điều kiện khô thống ở 20 oC và ngăn trùng xâm nhập 3.3.2 Khảo nghiệm quy trình bảo quản lạc đóng gói hút chân khơng Lạc kiểm sốt chất lượng 3.3.1 sau đó đóng gói hút chân không kg/túi PVC ở điều kiện 200 mmHg, bảo quản ở nhiệt độ phòng (25 oC) 12 tháng Kết quả khảo nghiệm cho thấy: Lạc nhân bảo quản theo quy trình không phát hiện AF sau 12 tháng khảo nghiệm Lạc nhân đưa vào bảo quản phải đảm bảo đạt độ khô, loại tạp, loại hạt nhăn, lép, mốc biến màu Lạc đóng gói hút chân không ở điều kiện 200 mmHg bảo quản ở nhiệt độ phòng 3.3.3 Bảo quản lạc nhân sử dụng tinh dầu Lạc kiểm soát chất lượng 3.3.1, sử dụng tinh dầu quế nồng độ 0,025 % hoặc tinh dầu hồi 0,8 % Đóng bao tải hai lớp kg/bao, bảo quản ở nhiệt độ phòng (25 oC) 12 tháng Kết quả cho thấy: Tinh dầu quế nồng đợ 0,025 % tinh dầu hời 0,8 % có khả bảo quản lạc nhân không nhiễm AF 12 tháng nghiên cứu 21 Từ kết quả khảo nghiệm trên, quy trình bảo quản lạc đề xuất sau: Hình 3.26 Quy trình bảo quản lạc đề xuất 22 KẾT LUẬN VÀ KIẾN NGHỊ Kết luận Qua trình nghiên cứu, Nghiên cứu sinh đã rút số kết luận sau: Đã xác định mức nhiễm nhiễm nấm men-mốc Aflatoxin lạc của tỉnh Nghệ An, Thanh Hóa Bắc Giang - Tỉ lệ nhiễm nấm men-mốc lạc nhân, lạc củ lạc rang húng lìu tương ứng 46,7 - 60 % (nhiễm ở mức 1,3×10 - 9,3×108 CFU/g); 26,7 - 56,7 % (1,1×10 - 7,5×108 CFU/g); 10 - 23,3 % (1,1×10 - 15×103 CFU/g) Tỉ lệ nhiễm nấm men -mốc vượt ngưỡng tương ứng 33,3 - 40,0 %; 30,0 - 36,7 % 10,0 - 13,3 % - Tỉ lệ nhiễm aflatoxin lạc nhân, lạc củ lạc rang húng lìu tương ứng 30 - 53,3 % (với hàm lượng 0,34 - 1.498 µg/kg); 26,7 40 % (với hàm lượng 0,64 - 215 µg/kg); 3,3 - 23,3 % (với hàm lượng 0,65 - 2,3 µg/kg) Tỉ lệ nhiễm aflatoxin vượt ngưỡng cho phép lạc nhân lạc củ tương ứng 10 - 16,7 %; 10 - 13,3 %; không phát aflatoxin vượt ngưỡng cho phép lạc rang húng lìu - Nghiên cứu đã phân lập 20 chủng nấm mốc từ lạc mốc của Bắc Giang, định danh khẳng định chủng A flavus, số đó có chủng A flavus BG1 có khả sinh AFB1 và AFB2 cao tương ứng 1.310 25,2 µg/kg sau 10 ngày nuôi cấy lạc tiệt trùng Đã xác định ảnh hưởng của yếu tố đến phát triển của A flavus BG1 mức sinh aflatoxin lạc: - Lạc nhân có độ ẩm từ 10 - 14 %, A flavus BG1 phát triển và AFB1 vượt ngưỡng cho phép sau tuần bảo quản ở nhiệt độ 25 oC Lạc có độ ẩm không vượt % không sinh aflatoxin sau tháng bảo quản ở nhiệt độ 25 oC Độ ẩm có quan hệ tuyến tính với mức nhiễm aflatoxin lạc theo thời gian - Nhiệt độ từ 40 oC có khả ức chế phát triển sinh AF của A flavus BG1 Ở điều kiện nhiệt độ 25, 30, 35 20oC, A flavus BG1 sinh AFB1 vượt ngưỡng cho phép sau thời gian tương ứng tuần, tuần, tuần 12 tuần Nhiệt độ khơng có quan hệ tuyến tính 23 với mức nhiễm AF lạc, A flavus BG1 phát triển và sinh aflatoxin ở khoảng nhiệt độ ≤ 35 oC - Đã xác định phương trình hồi quy tuyến tính của ba yếu tố: thời gian tăng lên tuần thì hàm lượng AFB1 tăng lên 1,997 µg/kg; độ ẩm tăng lên % thì hàm lượng AFB1 tăng lên 7,969 µg/kg; mức nhiễm A flavus tăng lờn CFU/g thi AFB1 tng lờn 1,135ì10-5 àg/kg - Với nồng độ tinh dầu quế 0,025 % v/w hoặc tinh dầu hồi 0,8 % v/w có khả ức chế nấm mốc phát triển không phát aflatoxin sau tháng nghiên cứu Đã đề xuất giải pháp bảo quản lạc nhằm tránh nguy nhiễm nấm mốc aflatoxin Đã đề xuất giải pháp bảo quản lạc hiệu quả ở quy mô hộ gia đình cách: kiểm soát chất lượng, sử dụng tinh dầu hồi (hoặc quế), đóng gói hút chân không với áp lực hút chân không 200 mmHg, bảo quản lạc nhất 12 tháng Kiến nghị: - Tiếp tục nghiên cứu ứng dụng giải pháp bảo quản lạc ở quy mơ lớn hơn, đặc biệt quy trình bảo quản lạc kiểm soát chất lượng để nâng cao thời hạn bảo quản - Nghiên cứu mở rộng việc áp dụng tinh dầu bảo quản và chế biến các sản phẩm của lạc để có công nghệ chế biến sản phẩm từ lạc không chỉ an toàn còn mang lại giá trị cảm quan tốt cho sản phẩm 24 DANH MỤC CÁC CƠNG TRÌNH ĐÃ CƠNG BỐ CỦA LUẬN ÁN Lê Thị Hồng Hảo, Lê Thị Phương Thảo, Nguyễn Hùng Long, Phạm Xuân Đà, Hà Duyên Tư (2014) Đánh giá mức độ ô nhiễm mycotoxin ngô, lạc ở một số xã tại huyện Lục Nam Bắc Giang năm 2013; Tạp chí Dinh dưỡng và Thực phẩm, Tập 10 - số - tháng năm 2014, tr 76-84 Lê Thị Phương Thảo, Lê Thị Hồng Hảo, Nguyễn Hùng Long, Phạm Xuân Đà, Hà Duyên Tư (2014) Kiến thức, thực hành người dân xử lý và bảo quản lạc sau thu hoạch tại một số xã huyện Lục Nam, tỉnh Bắc Giang năm 2013; Tạp chí Y học dự phòng, Tập XXIV, Số 10(159), tr 96-100 Nguyễn Thành Trung, Phạm Như Trọng, Lê Thị Hồng Hảo, Lê Thị Phương Thảo (2017) Xây dựng phương pháp phân lập, định danh nấm Aspergillus flavus Aspergillus parasiticus từ lạc; Tạp chí phân tích Hóa, Lý Sinh học, Tập 22, số 3/2017, tr 128-131 Le Thi Phuong Thao, Le Thi Hong Hao, Ta Thi Yen, Pham Xuan Da, Le Thanh Mai, Ha Duyen Tu (2017) Isolation and Selection of AF producing Aspergillus flavus from peanut; Viet Nam Journal of Science and Technology, Vol 55 (5A), pp 125-133 Le Thi Phuong Thao, Le Thi Hong Hao, Pham Xuan Da, Le Thanh Mai, Ha Duyen Tu (2017) Effect of Some Factors on AFs Production of Aspergillus flavus in Peanut of Vietnam; Hội thảo khoa học ASEAN lần thứ 15 (15th Asean Food Conference) tháng 11/2017 ISBN: 978-604-67-1007-3, pp 169-175 ... giải pháp bảo quản lạc sau thu hoạch nhằm giảm nguy nhiễm AF lạc cần thiết Vì vậy, Nghiên cứu mức độ nhiễm AF đề xuất một số giải pháp công nghệ bảo quản lạc sau thu hoạch tỉnh miền Trung. .. hoạch cách hiệu quả Xuất phát từ những phân tích trên, chúng tơi đã tiến hành thực đề tài ? ?Nghiên cứu mức độ nhiễm aflatoxin đề xuất một số giải pháp công nghệ bảo quản lạc sau thu hoạch tỉnh. .. quản lạc đề xuất 22 KẾT LUẬN VÀ KIẾN NGHỊ Kết luận Qua trình nghiên cứu, Nghiên cứu sinh đã rút số kết luận sau: Đã xác định mức nhiễm nhiễm nấm men-mốc Aflatoxin lạc của tỉnh Nghệ An,