Cá Chiên (Bagarius yarrelli) là 1 trong số 5 loài cá quý (Chiên, Lăng, Rầm xanh, Anh vũ và Bỗng), có giá trị kinh tế cao, đồng thời là đối tượng nuôi lồng chủ lực tại Tuyên Quang nói riêng, một số tỉnh phía Bắc nói chung. Tuyên Quang có lợi thế về mặt nước nuôi thủy sản, chủ động con giống, công nghệ, kỹ thuật nuôi, song còn hạn chế thông tin về bệnh ở cá Chiên. Mục đích của nghiên cứu này nhằm xác định tác nhân gây bệnh xuất hiện phổ biến ở cá Chiên nuôi lồng tại địa phương. Phương pháp nuôi cấy, phân lập và gây nhiễm nhân tạo đã được áp dụng trong nghiên cứu. Kết quả cho thấy, Aeromonas hydrophila là tác nhân gây bệnh ở cá Chiên với biểu hiện bệnh lý như: đốm đỏ, loét, xuất huyết ở thân, ruột không có thức ăn, gan sưng huyết, ổ bụng chứa nhiều dịch. A. hydrophila có độc lực cao, gây chết cá 100% trong 3 ngày ở nồng độ gây nhiễm 104 -106 cfu/ml. Ở nồng độ 103 cfu/ml, A. hydrophila gây chết cá thí nghiệm với biểu hiện loét phần bụng và gan thận sưng huyết, tỷ lệ chết cộng dồn tăng dần theo thời gian từ 47,6% ở ngày thứ 2, tăng lên 90,5% ở ngày thứ 4 và 100% ngày thứ 5.
Khoa học Nông nghiệp Tác nhân gây bệnh xuất huyết cá Chiên (Bagarius yarrelli) nuôi lồng Tuyên Quang đề xuất biện pháp phòng trị Trương Thị Mỹ Hạnh1*, Nguyễn Thị Hạnh1, Phạm Thị Yến1, Lê Thị Mây1, Nguyễn Quang Nghĩa2, Phan Thị Vân1, Phạm Thị Thanh1 Viện Nghiên cứu Nuôi trồng Thủy sản I Trung tâm Thủy sản Tuyên Quang Ngày nhận 23/4/2019; ngày chuyển phản biện 29/4/2019; ngày nhận phản biện 17/6/2019; ngày chấp nhận đăng 5/7/2019 Tóm tắt: Cá Chiên (Bagarius yarrelli) số loài cá quý (Chiên, Lăng, Rầm xanh, Anh vũ Bỗng), có giá trị kinh tế cao, đồng thời đối tượng nuôi lồng chủ lực Tun Quang nói riêng, số tỉnh phía Bắc nói chung Tuyên Quang có lợi mặt nước nuôi thủy sản, chủ động giống, công nghệ, kỹ thuật ni, song hạn chế thơng tin bệnh cá Chiên Mục đích nghiên cứu nhằm xác định tác nhân gây bệnh xuất phổ biến cá Chiên nuôi lồng địa phương Phương pháp nuôi cấy, phân lập gây nhiễm nhân tạo áp dụng nghiên cứu Kết cho thấy, Aeromonas hydrophila tác nhân gây bệnh cá Chiên với biểu bệnh lý như: đốm đỏ, loét, xuất huyết thân, ruột khơng có thức ăn, gan sưng huyết, ổ bụng chứa nhiều dịch A hydrophila có độc lực cao, gây chết cá 100% ngày nồng độ gây nhiễm 104-106 cfu/ml Ở nồng độ 103 cfu/ml, A hydrophila gây chết cá thí nghiệm với biểu loét phần bụng gan thận sưng huyết, tỷ lệ chết cộng dồn tăng dần theo thời gian từ 47,6% ngày thứ 2, tăng lên 90,5% ngày thứ 100% ngày thứ Từ khóa: Aeromonas hydrophila, cá Chiên (Bagarius yarrelli), Tuyên Quang Chỉ số phân loại: 4.5 Đặt vấn đề Tuyên Quang tỉnh miền núi phía Bắc có lợi mạnh ni thủy sản với diện tích mặt nước 12.000 ha, có 8.400 diện tích mặt nước hồ thủy điện, số lại diện tích mặt nước hồ thủy lợi mặt sơng có khả nuôi trồng thủy sản Với lợi này, tỉnh Tuyên Quang thông qua Nghị quy hoạch phát triển thủy sản giai đoạn 2016-2025, định hướng 2035 với mục đích phát triển thủy sản theo hướng sản xuất hàng hóa, tạo sản phẩm có suất, chất lượng, khả cạnh tranh cao, đáp ứng nhu cầu tiêu dùng tỉnh, đồng thời tiến tới xuất Cá Chiên số loài cá thuộc nhóm “ngũ quý” (cá Chiên, cá Lăng, cá Rầm xanh, cá Anh vũ cá Bỗng), loài có giá trị kinh tế cao, tỉnh Tuyên Quang chủ động nguồn giống cá sinh sản nhân tạo Năm 2018, Trung tâm Thủy sản Tuyên Quang sản xuất 17.800 cá Chiên giống, tăng gần 9.000 so với 2017 tăng 17.560 so với 2015 Tuyên Quang có lợi mặt nước nuôi thủy sản, chủ động giống, chủ động cơng nghệ, kỹ thuật ni, song hạn chế thơng tin bệnh quản lý phòng, trị bệnh cá Chiên suốt vụ nuôi Một số loài cá cá Tra, Basa, Lăng nghiên cứu xác định nguyên nhân gây bệnh gan thận mủ, trắng đuôi xuất huyết, lở loét [1], thiếu nghiên cứu bệnh cá Chiên Do đó, cán địa phương hộ ni lúng túng gặp nhiều khó khăn phòng trị bệnh, điều ảnh hưởng đến suất thu hoạch gây thiệt hại kinh tế cho hộ ni Chính vậy, mục tiêu nghiên cứu nhằm xác định tác nhân gây bệnh cho cá Chiên ni lồng có biểu bệnh lý xuất huyết, lở loét thân, làm sở khoa học để tiếp tục nghiên cứu giải pháp giảm thiểu thiệt hại bệnh gây Địa điểm, thời gian phương pháp nghiên cứu Địa điểm thời gian Cá Chiên thu lồng nuôi huyện Na Hang, Hàm Yên TP Tuyên Quang, tỉnh Tuyên Quang Mẫu cá phân tích Trung tâm Quan trắc môi trường bệnh thủy sản miền Bắc (CEDMA) thuộc Viện Nghiên cứu Nuôi trồng Thủy sản I Thời gian thực từ tháng 7-12 năm 2018 Thí nghiệm gây nhiễm vi khuẩn lên cá Chiên bố trí triển khai Phòng thí nghiệm ướt thuộc CEDMA Mẫu cắt kính hiển vi điện tử thực Phòng thí nghiệm siêu cấu trúc - Trung tâm Nghiên cứu y sinh, Viện Vệ sinh Dịch tễ Trung ương Tác giả liên hệ: Email: truongmyhanh@gmail.com * 61(9) 9.2019 55 Khoa học Nông nghiệp Thi My Hanh Truong1*, Thi Hanh Nguyen1, Thi Yen Pham1, Thi May Le1, Quang Nghia Nguyen2, Thi Van Phan1, Thi Thanh Pham1 Research Institute for Aquaculture No Tuyen Quang Seafood Center Received 23 April 2019; accepted July 2019 Abtract: Giant devil catfish (Bagarius yarrelli) is one of the five precious fish species which bring high economic values and are popularly cultured in cage in the northern mountainous provinces as well Tuyen Quang province has the advantages of water sources for aquaculture breed availability, technology, and farming techniques, but has limited information of pathogens in giant devil catfish Therefore, this study aims to determine common pathogens in giant devil catfish during cage culture in this province Bacterial culture, isolation, identification, and infection experiment were applied for this study The results showed that Aeromonas hydrophila was the causative agent of hemorrhagic disease in giant devil catfish with such clinical signs as red spots, ulcers, hemorrhage in skin and liver, empty stomach, and abdomen containing fluids A hydrophila had high virulence, causing mortality upto 100% in days at the dose of 104-106 cfu/ml At the concentration of 103 cfu/ml, A hydrophila can cause the death of experimental fish with signs of abdominal ulcer, liver and kidney hemorrhage The mortality increases gradually over time from 47.6% at day to 90.5% at day and reached 100% at day post challenge Phương pháp thu mẫu: mẫu cá Chiên ni lồng có biểu xuất huyết, lở loét thu để phân tích Cá thu phân tích giai đoạn ni thương phẩm có kích thước dao động từ 0,05-1,5 kg, phụ thuộc vào thời điểm thả cá chế độ chăm sóc cá chủ lồng nuôi Giải phẫu cá điểm thu cấy mẫu gan, thận, lách lên môi trường nuôi cấy Tryptic Soy Agar (TSA) môi trường chọn lọc Rimler Shotts agar (RS) Phương pháp phân tích vi khuẩn: đĩa môi trường nuôi cấy vi khuẩn từ mô gan, thận lách cá Chiên chuyển phòng thí nghiệm ủ điều kiện nhiệt độ 28-290C 24-36h Vi khuẩn phân lập định danh loài thông qua kết nhuộm gram, dãy phản ứng sinh hóa kít API 20E, kết tra phần mềm Apiweb TM-API 20E (https://apiweb biomerieux.com/servlet/Authenticate?action=prepareLogin) Phương pháp thử khả kháng khuẩn: kháng sinh đồ lập vi khuẩn thu từ mẫu cá Chiên phương pháp kháng sinh đồ khuyếch tán đĩa thạch Kirby-Bauer Đo đường kính vòng vơ khuẩn (mm): dựa vào chuẩn đường kính vòng vơ khuẩn theo tài liệu “The Clinical and Laboratory Standards Institute” [CLSI (former NCCLS M31-A2)] Anonymous (2006) nhằm xác định loại kháng sinh nhạy, nhạy trung bình kháng Trong đường kính vòng vơ khuẩn ≥16 mm nhạy: S (sensitive), 12-15 mm nhạy trung bình: M (medium) ≤11 mm kháng: R (resistant) Phương pháp kính hiển vi điện tử: mẫu cắt kính hiển vi điện tử cố định dung dịch glutanum-andehyt 2,5%, pha dung dịch đệm cacodylat 0,1 M (pH=7,2-7,4) bảo quản lạnh 40C trước chuyển đến phân tích Phòng thí nghiệm siêu cấu trúc, Trung tâm Nghiên cứu y sinh, Viện Vệ sinh Dịch tễ Trung ương Để khẳng định vi khuẩn thu từ mẫu cá Chiên bị bệnh tác nhân gây bệnh, tiến hành gây nhiễm vi khuẩn thu từ cá bệnh lên cá khỏe, sau tái phân lập lại vi khuẩn cá gây nhiễm từ lơ thí nghiệm Các bước gây nhiễm mô Để khẳng định vi khuẩn thu từ mẫu cá Chiên bị bệnh tác nhân gây bệnh, tảhành hình tiến gây1 nhiễm vi khuẩn thu từ cá bệnh lên cá khỏe, sau tái phân ậ l p lại vi khuẩn cá gây nhiễm từ lơ thí nghiệm Các bước gây nhiễm mơ tả hình Đối chứng Thí nghiệm Lặp lại lần The causative agent of hemorrhagic disease in giant devil catfish (Bagarius yarrelli) in cage culture at Tuyen Quang province and proposing preventive and treatment measures Phương pháp thu phân tích mẫu Keywords: Aeromonas hydrophila, giant devil catfish (Bagarius yarrelli), Tuyen Quang province 103 104 105 106 Chuyển vào nuôi lô khác tươngứng nồng độ Classification number: 4.5 Theo dõi ghi chép biểu bệnh lý, tỷ lệ chết cá thí nghiệm Thu mẫu, tái phân lập vi khuẩn Kết luận tác nhân gây bệnh Hình Sơ đ bước gây nhi ễm vi khuẩn lên cá Chiên Hình Sơ đồ bước gây nhiễm vi khuẩn lên cá Chiên 61(9) 9.2019 Cá mơ hình thí nghiêmđược ni ngày trước tiến hành gây nhiễm Ở lơ đối chứng, cá ni bình thường khơng có tác động vi khuẩn Ở lơ thí nghiệm, sau ngày ni thuần, cá ngâm 2h bể có mật độ vi khuẩn A hydrophila khác từ 103-106, nồng độ chứa cá thể Sau 2h, chúng chuyển vào bể thí nghiệm ni theo dõi bình thư ờng Thí nghiệm bố trí điều kiện nhiệt độ 25-270C, pH=7,3-7,5, có sục khí nước ln chảy tràn liên tục để tạo dòng chảy, khơng để xảy tượng nước đứng qtrình thí nghiệm 56 Theo dõi, ghi lại số cá có biểu bất thường, chết lơ thí nghiệm Song song với tiến hành thu mẫu cá tái phân lập vi khuẩn để xác định có hay khơng vi khuẩn thu Khoa học Nơng nghiệp Cá mơ hình thí nghiêm ni ngày trước tiến hành gây nhiễm Ở lơ đối chứng, cá ni bình thường khơng có tác động vi khuẩn Ở lơ thí nghiệm, sau ngày nuôi thuần, cá ngâm 2h bể có mật độ vi khuẩn A hydrophila khác từ 103-106, nồng độ chứa cá thể Sau 2h, chúng chuyển vào bể thí nghiệm ni theo dõi bình thường Thí nghiệm bố trí điều kiện nhiệt độ 25-270C, pH=7,3-7,5, có sục khí nước ln chảy tràn liên tục để tạo dòng chảy, không để xảy tượng nước đứng q trình thí nghiệm Theo dõi, ghi lại số cá có biểu bất thường, chết lơ thí nghiệm Song song với tiến hành thu mẫu cá tái phân lập vi khuẩn để xác định có hay không vi khuẩn thu trùng với vi khuẩn pha vào nước ngâm cá; kiểm tra kính hiển vi điện tử mẫu gan cá để xác định có hay không diện vi khuẩn Kết nghiên cứu thảo luận Đặc điểm bệnh lý cá nhiễm khuẩn A hydrophila Kết quan sát dấu hiệu bệnh lý cá bệnh cho thấy: cá giảm ăn, yếu, bơi lờ đờ tầng mặt Ở mẫu cá nhiễm bệnh nặng thân xuất tổn thương xuất huyết, loét đỏ với đốm to nhỏ khác Tổn thương chủ yếu tập trung vùng miệng, đầu gốc vây (hình 2) Biểu nội tạng giải phẫu nhận thấy ruột khơng có thức ăn, gan sưng huyết, ổ bụng chứa nhiều dịch Ghi nhận cá bệnh nghiên cứu trùng hợp với kết nghiên gốc vây biểu (hình 2) Biểubệnh nộilýtạng giải phẫu thức ăn,A gan cứu số nhận loàithấy cá ruột da khơng trơn có nhiễm sưng huyết, ổ bụng chứa nhiều dịch Ghi nhận cá bệnh nghiên cứu trùng hợp hydrophila cá Lăng (Ictalurus punctatus) [1-3], cá Tra với kết nghiên cứu biểu bệnh lý số loài cá da trơn nhiễm A hydrophila (Pangasianodon [4], Lươn [5] [4], Lươn [5] cá Lăng (Ictalurus punctatus) hypophthalmus) [1-3], cá Tra (Pangasianodon hypophthalmus) Bảng Số mẫu biểu bệnh lý điển hình mẫu phân tích nghiên cứu TT Dấu hiệu bệnh lý mẫu thu phân tích Số mẫu thu Kết phân lập Ruột khơng có thức ăn, gốc vây xuất huyết Aeromonas hydrophila Ruột khơng có thức ăn, thân xuất điểm xuất huyết, loét đốm đỏ thân, vùng đầu miệng 19 Aeromonas hydrophila Ruột khơng có thức ăn, khoang bụng chứa nhiều dịch, gan sưng huyết Aeromonas hydrophila Ruột thức ăn, màu sắc gan khơng đồng đều, vùng sưng huyết đỏ, vùng nhợt nhạt 12 Aeromonas hydrophila Cá khơng có biểu bất thường 36 - Tổng số mẫu thu phân tích 84 Ghi chú: “-” mẫu có kết âm tính với tiêu phân tích vi khuẩn Kết nuôi cấy, phân lập vi khuẩn gan thận mẫu cá có biểu mô tả bảng cho thấy, mẫu cá có dấu hiệu bất thường ruột khơng có thức ăn, gốc vây xuất huyết, xuất đốm loét đỏ hay xuất huyết thân, vùng đầu miệng, khoang bụng chứa nhiều dịch, gan sưng huyết hay màu sắc gan không đồng đều, phân lập loài vi khuẩn trùng khớp đến 99,9% với A hydrophila tra đặc điểm sinh hóa từ kít API 20E phần mềm Apiweb TM-API 20E Trong đó, mẫu khơng có dấu hiệu bất thường cho kết âm tính với vi khuẩn A hydrophila lồi vi khuẩn xuất phổ biến, thường trực môi trường nước ni thủy sản gây tổn thất lớn tác nhân gây bệnh cho cá [6] Cá nuôi bị bệnh A hydrophila gây ghi nhận có 2hóadạng biến: xuấtmềm huyết cấpTM-API tính đặc phù sinh từ kít phổ API 20E phần Apiweb 20E, trưng Trong mẫu khơng có dấu hiệu bấthuyết, thường cho tử kết tính với vi khuẩn hydrophila nề tồn thân, xuất hoại có âm chiều hướng lanA.rộng loài vi khuẩn xuất phổ biến, thường trực môi trường nước nuôi thủy bắtvàđầu từgây điểm nhỏ xuất huyết sản tổn thất lớnban làđầu tác nhân gây bệnh cho cánội [6] tạng Cá nuôi(gan, bị bệnh A hydrophila gây ghi nhận có dạng phổ biến bao gồm: xuất huyết cấp tính đặc lách, thận); hội chứng loét mãn tính đánh dấu trưng phù nề tồn thân, xuất huyết, hoại tử có chiều hướng lan rộng điểm nhỏ đầuthành xuấtcủa huyếtloét nội tạng (gan, từ lách, hội loét 8] mãn tính ban hình ăn sâu dathận); xuống cơchứng cá [7, đánh dấu hình thành loét ăn sâu từ da xuống cá [7, 8] (A) (B) Hình Hình Dấu hiệu bệnh lý cá Chiênlýnhiễm (A hydrophila) xuất Dấu hiệu bệnh củakhuẩn cá Chiên nhiễm(A) khuẩn (A.tổn thương xuất huyết, loét(A) vùng đầu,hiện miệng;tổn (B) thương xuất huyết,xuất loét ởhuyết, gốc vây.loét vùng hydrophila) xuất Phânmiệng; lập định khuẩn ởloét mẫuởcágốc Chiên bị bệnh đầu, (B)danh xuấtvihuyết, vây (A) (B) Tổng số 84 mẫu cá Chiên thu vào tháng 7, 8, 9, 11 12, có 48 mẫu cá có biểuPhân bất lập thường dấu hiệu ruột khơng có thức ăn, xuất loét bị đốm vàvớiđịnh danh vi khuẩn mẫu cá huyết, Chiên đỏ… 36 mẫu cá Chiên khơng có biểu bất thường (bảng 1) bệnh Bảng Số mẫu biểu bệnh lý điển hình mẫu phân tích nghiên cứu Tổng số 84 mẫu cá Chiên thu vào tháng 7, 8, 9, 11 Số mẫu thu Kết phân lập 12, có 48 mẫu cá có biểu bất thường với Ruột khơng có thức ăn, gốc vây xuất huyết Aeromonas hydrophila dấu hiệu ruột khơng có thức ăn, xuất huyết, lt đốm Ruột khơng có thức ăn, thân xuất điểm đỏ… vàlt36 cávùng Chiên khơng 19có biểu Aeromonas bấthydrophila thường xuất huyết, đốm mẫu đỏ thân, đầu miệng (bảng Ruột khơng1) có thức ăn, khoang bụng chứa nhiều dịch, TT Dấu hiệu bệnh lý mẫu thu phân tích gan sưng huyết Ruột khơng có thức ăn, màu sắc gan không đồng đều, vùng sưng huyết đỏ, vùng nhợt nhạt Cá khơng có biểu bất thường Tổng số mẫu thu phân tích Aeromonas hydrophila 12 Aeromonas hydrophila 36 61(9) 9.2019 84 Ghi chú: “-” mẫu có kết âm tính với tiêu phân tích vi khuẩn - (C) Hình Vi khuẩn Aeromonas A hydrophila phân lập từ cá Chiên bị bệnh (A) hình thái Hình Vi khuẩn A hydrophila phân lập từ cá Chiên bị bệnh (A) hình khuẩn lạc trênthu TSA; hình vi khuẩn Trong thái nghiên cứu này, A mọc hydrophila được(B) gan, thậnthái cá Chiên bệnh có đặc điểm chínhgram; sau: khuẩn môi 24h ủ nhiệt độ 28-290C với nhuộm (C) lạc đặcmọc điểm sinhtrường hóa TSA sau vi khuẩn khuẩn lạc mọc TSA; (B) hình thái vi khuẩn nhuộm gram; (C) đặc điểm sinh hóa vi khuẩn xuất khuẩn lạc tròn lồi, rìa nhẵn màu trắng sữa (hình 3A), mơi trường RS khuẩn lạc có hình dạng tròn, lồi, màu vàng Kết trùng hợp với nghiên cứu trước khuẩn lạc A hydrophila có dạng hình tròn, màu trắng sữa mơi trường dinh dưỡng TSA [9] có màu vàng mơi trường RS chúng có khả lên men loại đường sacrose mantol [10] Rõ ràng A hydrophila phân lập nghiên cứu có tính chất lên men loại đường sacrose mantol với kết phản ứng màu vàng kít API 20E (hình 3C) Bên cạnh đó, kỹ thuật nhuộm gram cho thấy hình thái vi khuẩn A hydrophila có dạng trực khuẩn, thuộc nhóm vi khuẩn gram âm, 57 Khoa học Nông nghiệp Trong nghiên cứu này, A hydrophila thu gan, thời gian từ ngày thứ đến ngày thứ sau gây nhiễm thận cá Chiên bệnh có đặc điểm sau: khuẩn lạc mọc (47,6-100%) Biểu bệnh lý không ghi nhận môi trường TSA sau 24h ủ nhiệt độ 28-290C với lô gây nhiễm 104-106 cfu/ml, điều lý giải vi xuất khuẩn lạc tròn lồi, rìa nhẵn màu trắng sữa khuẩn có độc lực mạnh, cá chết nhanh chưa kịp có biểu (hình 3A), mơi trường RS khuẩn lạc có hình bệnh lý, nhận định trùng hợp với nghiên cứu dạng tròn, lồi, màu vàng Kết trùng hợp với Sarker cs (2016) [12] Tuy nhiên, lơ thí nghiệm 103 cfu/ nghiên cứu trước khuẩn lạc A hydrophila ml cá có biểu loét phần bụng gan thận sưng huyết có dạng hình tròn, màu trắng sữa mơi trường dinh dưỡng (hình 4A), đồng thời kết tái phân lập A hydrophila TSA [9] có màu vàng mơi trường RS chúng có lơ gây nhiễm cho kết 100% A hydrophila khả lên men loại đường sacrose mantol [10] Rõ Trong đó, lơ đối chứng âm (khơng gây nhiễm vi khuẩn) ràng A hydrophila phân lập nghiên cứu có cá phát triển bình thường, phản xạ nhanh có tiếng động tính chất lên men loại đường sacrose mantol với kết suốt ngày thí nghiệm, kết phân lập vi khuẩn phản ứng màu vàng kít API 20E (hình 3C) Bên (bao gồm A hydrophila) ngày 3, âm tính cạnh đó, kỹ thuật nhuộm gram cho thấy hình thái vi khuẩn A.ngày thí (bảng 3).kết phân lập vi khuẩn (bao gồm A hydrophila) ngày 3, nghiệm, hydrophila có dạng trực khuẩn, thuộc nhóm vi khuẩn gramđều âm tính (bảng 23) âm, với khả bắt màu hồng thuốc nhuộm safranin (hình 3B), kết trùng khớp với nghiên cứu Nicky B Buller (2004) A hydrophila có dạng hình que ngắn, thẳng, bắt màu hồng sau nhuộm gram với loại thuốc 1-Crystal Violet, 2-Lugol, 3-Aceton 4-Safranin [11] Khi cá nuôi nhiễm tác nhân gây bệnh vi khuẩn, biện pháp trị bệnh thường áp dụng kháng sinh, nhiên để đưa loại thuốc có hiệu diệt khuẩn cao, cần áp dụng phương pháp lập kháng sinh đồ, tránh trường hợp sử dụng thuốc theo cảm tính, kinh nghiệm Vấn đề khắc phục thực nghiên cứu Kết cho thấy, 7/8 loại kháng sinh thử khơng có khả kháng khuẩn có mức trung bình yếu, có kháng sinh Doxycycline có hiệu diệt khuẩn cao vi khuẩn A hydrophila thu với đường kính vòng kháng khuẩn trung bình đạt 26,5±1,1 mm (bảng 2) (A) (B) (C) Bảng Khả kháng khuẩn kháng sinh vi khuẩn A hydrophila (D) TT Tên thuốc kháng sinh Đường kính vòng kháng khuẩn (mm) Khả kháng khuẩn Tetracyclin 12,6±2,9 M Ornithin R Ampicycline R Novobiocin 5,5±1,8 R TT Trimethoprin - sulfamethoxazol 15,6±1,4 M Doxycycline 26,5±1,1 S Neomycin 7,5±1,7 R Erythromycin 10,2±2,9 R Hình Kết gây nhiễm A hydrophila lên cá Chiên (A) biểu lở loét vùng thân, Hình Kếtcáquả nhiễm A.thái hydrophila lênRimler cá Chiên gan sưng huyết gây gây nhiễm; (B) hình khuẩn lạc Shotts (A) agar;biểu (C) hình ảnh vihiện khuẩnlởdưới hiểnthân, vi điện tử; sưng (D) đặchuyết điểm sinh vinhiễm; khuẩn (B) hình ltkính vùng gan hóa cá gây lạc Rimler agar; (C)quá hình vi khuẩn Bảng thái 23 Tỷkhuẩn lệ (%) mẫu tái phân lập A.Shotts hydrophila trìnhảnh thí nghiệm kính hiểnTỷvilệ A điện tử; (D) đặclậpđiểm sinhgây hóa hydrophila tái phân từ thí nghiệm nhiễm (%)vi - khuẩn Ngày thí nghiệm Mật vi khuẩn gây nhiễm (cfu/ml) # # 100 100 # # # 100(1) TT Kết nghiên cứu rõ, A hydrophila có độc lực cao cá Chiên Ở nồng độ gây nhiễm 104, 105 106 cfu/ml cá có tỷ lệ chết 100% ngày thứ sau gây nhiễm, đặc biệt nồng độ 106 cfu/ml cá chết 100% ngày thứ Ở nồng độ thấp (103 cfu/ml) tỷ lệ chết kéo dài theo Ngày thí nghiệm Tỷ lệ A hydrophila tái phân lập từ thí nghiệm gây # nhiễm (%) - Mật vi khuẩn gây nhiễm (cfu/ml) Kết thúc thí nghiệm ngày thứ 106 Gây nhiễm A hydrophila lên cá Chiên 61(9) 9.2019 Đối chứng Bảng Tỷ lệ10(%) mẫu10tái phân lập 104 A hydrophila 103 100 100 # # # trình thí nghiệm 105 104 Đối chứng 103 100 100 # # # # # 100 100 # # # 100(1) Kết thúc thí nghiệm ngày thứ # Ghi chú: #: không thu mẫu phân tích, số mẫu lần phân tích n=3; (1) : thu mẫu cắt kính hiển vi điện tử 58 Khoa học Nông nghiệp Trong nghiên cứu này, chúng tơi lựa chọn hình thức gây nhiễm ngâm - phương pháp xem mô tả cách hiệu gần với đường lây nhiễm tự nhiên vi khuẩn nói chung A hydrophila nói riêng lên cá Chiên ni, phương pháp nhiều tác giả ứng dụng [12, 13] Kết thí nghiệm gây nhiễm cho thấy, tổn thương quan sát cá Chiên thí nghiệm ngâm nước chứa A hydrophila tương tự biểu bệnh lý ghi nhận cá Chiên bị bệnh nuôi vùng nghiên cứu (tổn thương loét thân, sưng huyết gan thận) (hình 4A), bên cạnh cá có biểu bất thường thí nghiệm thu tái phân lập vi khuẩn cho kết 100% mẫu A hydrophila thơng qua hình ảnh khuẩn lạc mọc RS, hình thái vi khuẩn nhuộm gram phản ứng sinh hóa kít API 20E (bảng hình 4B, D) A hydrophila biết đến chủng vi khuẩn có độc lực cao cá ni nước ngọt, đặc biệt cá da trơn Các thí nghiệm gây nhiễm A hydrophila có độc lực gây chết cá Lăng với tỷ lệ cao (>90%) nồng độ gây nhiễm 2x107 cfu/ml thời gian 48h điều kiện nhiệt độ 27±10C, với tổn thương vùng thân dễ nhận thấy xuất huyết, đỏ da, gốc vây Hơn nữa, thí nghiệm ghi nhận có tỷ lệ cá chết khác (p